趁鮮加工對(duì)鳳丹皮的適用性研究△

王軍，張雨鳳，方成武，*，李靜，吳計(jì)劃

(1.亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院 藥學(xué)院，安徽 亳州 236800；2.安徽省中醫(yī)藥科學(xué)院 亳州中醫(yī)藥研究所，安徽 亳州 236800；3.安徽中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，安徽 合肥 230031；4.亳州市食品藥品檢驗(yàn)所，安徽 亳州 236800；5.北京同仁堂安徽中藥材有限公司，安徽 銅陵 244000)

趁鮮加工對(duì)鳳丹皮的適用性研究△

王軍1，2，張雨鳳3，方成武1，2，3*，李靜4，吳計(jì)劃5

(1.亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院 藥學(xué)院，安徽 亳州 236800；2.安徽省中醫(yī)藥科學(xué)院 亳州中醫(yī)藥研究所，安徽 亳州 236800；3.安徽中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，安徽 合肥 230031；4.亳州市食品藥品檢驗(yàn)所，安徽 亳州 236800；5.北京同仁堂安徽中藥材有限公司，安徽 銅陵 244000)

目的比較鳳丹皮趁鮮切制與曬干后軟化切制兩種加工方法制得的飲片中芍藥苷和丹皮酚的含量，探討牡丹皮的最佳加工方法。方法收集亳州栽培的鳳丹皮根系，將根系中粗細(xì)相等的根一部分趁鮮切制，一部分曬干后軟化切制。采用HPLC同時(shí)測(cè)定兩種飲片中芍藥苷和丹皮酚的含量。結(jié)果趁鮮切制飲片中芍藥苷的含量高于曬干后軟化切制的飲片，而曬干后軟化切制的飲片中丹皮酚的含量高于趁鮮切制的飲片。結(jié)論丹皮采用趁鮮切制的加工方法較為適宜。

鳳丹皮；加工方法；鮮切；芍藥苷；丹皮酚

鳳丹皮為芍藥科多年生落葉小灌木鳳丹PaeoniaostiiT.Hong et J.X.Zhang的干燥根皮[1]，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，為歷代常用中藥之一，具有清熱涼血、活血化瘀的功能[2]。鳳丹在安徽、河南、山東等地區(qū)均有栽培，其中安徽銅陵的鳳丹皮是傳統(tǒng)的道地藥材，而安徽亳州栽培鳳丹面積近20萬(wàn)畝，所產(chǎn)鳳丹皮目前在市場(chǎng)上流通量最大[3]。

目前多數(shù)藥材在產(chǎn)地采收后直接干燥成藥材，飲片加工廠收購(gòu)后一般都要經(jīng)歷水洗、浸泡的過(guò)程，待藥材軟化后再進(jìn)行切片。這一過(guò)程會(huì)使藥材與水不同程度地接觸，使得一些有效成分流失或發(fā)生化學(xué)變化，且藥材易發(fā)霉變質(zhì)。因此有研究提出，如能在產(chǎn)地采收后就將這類藥材趁鮮切制，然后再進(jìn)行干燥，對(duì)于提高中藥飲片的質(zhì)量、改善中藥包裝、減少人力、物力及能源的消耗都具有十分重要的意義[4]。

2015版《中華人民共和國(guó)藥典》中收載丹皮的采收加工方法為：秋季采挖根部，除去細(xì)根和泥沙，剝?nèi)「?，曬干或刮去粗皮，除去木心，曬干[2]。牡丹皮藥材在加工成飲片前也要經(jīng)歷軟化過(guò)程，因此有研究對(duì)趁鮮切制及軟化后切制的牡丹皮中丹皮酚的含量進(jìn)行比較[5]。牡丹皮中的主要活性成分包括丹皮酚和芍藥苷類[6-7]，芍藥苷類是牡丹皮的一大類成分，具有多種生物活性[8-9]。目前文獻(xiàn)多以丹皮酚和芍藥苷為指標(biāo)來(lái)研究牡丹皮及相關(guān)制劑的質(zhì)量[5，10-11]。因此，本研究選擇同一根系中相同粗細(xì)的鳳丹皮，一部分趁鮮切制，曬干；另一部分曬干后再進(jìn)行軟化切制，然后再次曬干。在相同的條件下，比較兩種飲片加工方法所得的飲片中芍藥苷和丹皮酚的含量，探討鳳丹皮最佳加工方法，以期在加工過(guò)程中提高鳳丹皮的質(zhì)量，為其加工提供參考。

1 儀器與試藥

Agilent 1260高效液相色譜儀；AUW220D電子天平(SHIMADZU CORPORATION JAPAN公司)；高速萬(wàn)能粉碎機(jī)(天津市泰斯特儀器有限公司)；超聲波清洗儀(上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司)。

一級(jí)色譜甲醇(天津市四友科技有限公司)；分析甲醇(天津基準(zhǔn)化學(xué)試劑有限公司)；水為哇哈哈純凈水；丹皮酚、芍藥苷(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)分別為：110708-200506，110736-201438)。

2 樣品制備

鳳丹皮根系鮮品2014年10月采于安徽省亳州市十八里鎮(zhèn)，經(jīng)方成武教授鑒定為芍藥科鳳丹PaeoniaostiiT.Hong et J.X.Zhang的根系。將根系堆置發(fā)汗，抖凈泥土。選擇三株根系，編號(hào)分別為1、2、3，每一根系中，選擇粗細(xì)相近的根，除去木心。每一根系中的樣品，一部分參照2015版《中華人民共和國(guó)藥典》中牡丹皮的炮制方法[2]，直接自然晾曬10 d，成鳳丹皮藥材，然后用水將干藥材悶潤(rùn)，切成約2 mm厚度的飲片，再次自然曬5 d，即得軟化切制鳳丹皮樣品；另一部分樣品參考文獻(xiàn)中曾出現(xiàn)的牡丹皮鮮切方法[5]，切成約2 mm厚度飲片，自然晾曬7 d，即為趁鮮切制鳳丹皮樣品。將以上兩種樣品打粉分別過(guò)60目篩備用。

3 方法與結(jié)果

3.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取芍藥苷2.13 mg，置5 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得芍藥苷對(duì)照品溶液。精密稱取丹皮酚6.58 mg，置25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻即得丹皮酚對(duì)照品溶液。取以上兩種成分的對(duì)照品溶液各1 mL，混合均勻，得混合對(duì)照品溶液。其中芍藥苷和丹皮酚質(zhì)量濃度分別為0.213、0.132 mg·mL-1。對(duì)照品溶液進(jìn)樣前用0.45 μm的微孔濾膜過(guò)濾。

3.2 供試品溶液的制備

精密稱取鳳丹皮粉末(過(guò)60目篩)0.5 g，加甲醇50 mL，稱重，超聲提取30 min，放冷，用甲醇補(bǔ)足失重，取續(xù)濾液用0.45 μm的微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液即得供試品溶液。

3.3 色譜條件

Agilent HC-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱；流動(dòng)相甲醇(A)-水(B)梯度洗脫：0～10 min，34%A；10～12 min，34%～50%A；12～32 min，50%A；流速為1 mL·min-1；柱溫為30 °C；檢測(cè)波長(zhǎng)為0～20 min，230 nm；20～32 min，274 nm?；旌蠈?duì)照品溶液及供試品溶液的HPLC圖見(jiàn)圖1，兩種物質(zhì)與其他物質(zhì)的分離度均大于1.5。

注：A：對(duì)照品；B：供試品；1.芍藥苷；2.丹皮酚。圖1 對(duì)照品溶液和供試品溶液的HPLC圖

3.4 線性關(guān)系考察

精密吸取上述混合對(duì)照品溶液1、5、10、20、30 μL分別注入液相色譜儀，測(cè)得峰面積積分值。分別以進(jìn)樣量(X，μg)為橫坐標(biāo)，峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得芍藥苷回歸方程：Y=1 333.1X-12.198，r=0.999 8；丹皮酚回歸方程：Y=3 836.8X+34.515，r=1.000 0。結(jié)果表明，芍藥苷在0.213～6.390 μg，丹皮酚在0.132～3.948 μg均呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

3.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取表2中1號(hào)根系的鮮切樣品的供試品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定芍藥苷和丹皮酚的峰面積，并計(jì)算峰面積的RSD值，芍藥苷和丹皮酚的RSD值分別為1.60%、0.67%，表明儀器精密度良好。

3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取表2中1號(hào)根系的鮮切樣品的供試品溶液，分別在0、5、10、15、20 h檢測(cè)。結(jié)果芍藥苷和丹皮酚的峰面積RSD值分別為1.28%、1.08%，說(shuō)明供試品溶液在20 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取表2中1號(hào)根系的鮮切樣品粉末5份，按照樣品溶液制備方法制備，并按照上述色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定芍藥苷和丹皮酚的含量，RSD值分別為1.70%、1.86%，說(shuō)明重復(fù)性良好。

3.8 加樣回收試驗(yàn)

平行稱取已知含量的牡丹皮粉末約0.25 g，共5份，精密稱定，每份分別加入芍藥苷約4 mg、丹皮酚約4 mg，按3.2項(xiàng)下方法制備樣品溶液，再按照上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

3.9 樣品測(cè)定

按3.2項(xiàng)下樣品溶液的制備方法操作，分別制成樣品溶液。準(zhǔn)確吸取樣品溶液10 μL，按照3.3項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，計(jì)算各樣品中芍藥苷和丹皮酚的含量。樣品測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

4 討論

表1 加樣回收率試驗(yàn)(n=5)

表2 不同加工方法的牡丹皮飲片中芍藥苷和丹皮酚的含量(n=3)

從樣品的測(cè)定結(jié)果中可以看出，軟化后切制飲片中芍藥苷的含量比趁鮮切制后芍藥苷含量低約10%；而軟化后再切制的飲片中丹皮酚的含量均遠(yuǎn)高于趁鮮切制制得的飲片，趁鮮切制的飲片中丹皮酚含量約為軟化后切制的50%。

結(jié)合前人研究結(jié)果[12]以及前期研究發(fā)現(xiàn)，芍藥苷在周皮中的積累量較多。芍藥苷易溶于水，而在軟化的過(guò)程中，周皮是與水的接觸最多的部位。因此，經(jīng)過(guò)軟化后切制會(huì)使芍藥苷部分流失。在產(chǎn)地加工時(shí)采用趁鮮切制的方法既具有省工省時(shí)的優(yōu)點(diǎn)，又可避免芍藥苷在軟化過(guò)程中的流失。因此，本研究認(rèn)為，牡丹皮采用趁鮮切制的加工方法較為適宜。前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果推測(cè)，韌皮部中的丹皮酚含量較高。丹皮酚揮發(fā)性強(qiáng)[13]，穩(wěn)定性較差，如果趁鮮切制后牡丹皮的韌皮部與空氣長(zhǎng)時(shí)間接觸，不利于丹皮酚的保留，因此牡丹皮趁鮮切制后應(yīng)選擇適當(dāng)?shù)母稍锓椒ǎ詼p少丹皮酚的流失，如低溫干燥、避光、真空包裝等方法可考慮應(yīng)用到牡丹皮的加工過(guò)程中。

[1] 謝宗萬(wàn).中藥材正名詞典[M].北京：北京科學(xué)技術(shù)出版社，2012.

[2] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015.

[3] 劉信秋，方成武，張偉，等.亳州譙城區(qū)栽培牡丹現(xiàn)狀調(diào)查[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2013，27(6)：19-21.

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[10] 胡世林，劉岱，楊立新，等.不同產(chǎn)地白芍中芍藥苷和丹皮酚的含量測(cè)定及比較[J].中國(guó)中藥雜志，1994，19(6)：328-330.

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StudyonFresh-cutProcessingMethodforCortexMoutan

WANGJun1，2，ZhangYufeng3，F(xiàn)ANGChengwu1，2，3*，LiJing4，WuJihua5

(1.BozhouVocationalandTechnicalCollege，Bozhou236800，China；2.BozhouInstituteofChinesemedicineAnhuiAcademyofChinesemedicine，Bozhou236800，China；3.SchoolofPharmacy，AnhuiuniversityofChineseMedicineHefei230031，China；4.BozhouInstituteforFoodandDrugControlBozhou236800，China；5.BeijingTongrentangTraditionalChineseMedicinalMaterialsCo.，LtdinAnhui，Tongling244000，China)

Objective：To investigate the best processing method of Cortex Moutan by comparing the content of the paeoniflorin and paeonal in the Cortex Moutan processed in fresh-cut and dried-soften cut.MethodsThe root system of the cultivated Cortex Moutan in Bozhou city were collected.Parts of the same thickness roots in the root system were processed in fresh-cut，the others were processed in dried-soften cut.Then the content of paeoniflorin and paeonal in the two samples of Cortex Moutan were determined by HPLC method.ResultThe content of the paeoniflorin in fresh-cut was higher than that in dried-soften cut piece.However the content of the paeonal in fresh-cut was lower than that in dried-soften cut piece.ConclusionThe optimal method for Cortex Moutan is fresh-cut processing.

Cortex Moutan；processing method；fresh-cut；paeoniflorin；paeonal

2015-04-11)

國(guó)家“十二五”科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2011BAI04B05)；安徽省科技平臺(tái)建設(shè)項(xiàng)目(1206c0805005)；安徽省教育廳自然科學(xué)研究重點(diǎn)項(xiàng)目(KJ2015A388)

*

方成武，教授，研究方向：中藥資源與質(zhì)量；E-mail：cwfang1961@sina.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.8.022