蒙藥五味清濁散和十味黑冰片散抗幽門螺桿菌的實(shí)驗(yàn)研究

斯慶圖娜拉，李詠梅，劉　磊

(鄂爾多斯市中心醫(yī)院，內(nèi)蒙古 鄂爾多斯017000)

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蒙藥五味清濁散和十味黑冰片散抗幽門螺桿菌的實(shí)驗(yàn)研究

斯慶圖娜拉，李詠梅*，劉磊

(鄂爾多斯市中心醫(yī)院，內(nèi)蒙古 鄂爾多斯017000)

近年來人們已經(jīng)認(rèn)識(shí)到幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)感染與慢性胃炎、消化性潰瘍、胃MALT淋巴瘤、胃癌甚至還與多種胃腸外疾病的發(fā)生密切相關(guān)，所以根除Hp治療也就成為治療或預(yù)防上述疾病的重要手段。但隨著抗生素的廣泛使用，Hp對抗生素產(chǎn)生耐藥性，嚴(yán)重影響了根除效果[1]。因此希望能成功地推出既有治療、預(yù)防效能，又不增加人群耐藥性的治療方法，成為當(dāng)今國際范圍內(nèi)該研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)問題。

蒙醫(yī)對于胃腸疾病的診治有豐富的經(jīng)驗(yàn)和很好的療效。臨床上使用蒙藥五味清濁散和十味黑冰片散治療各種胃腸道疾病，其適應(yīng)癥與Hp感染相關(guān)性疾病基本一致。筆者通過體外抑菌實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)五味清濁散和十味黑冰片具有明顯的抑制Hp作用，現(xiàn)就有關(guān)實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果報(bào)道如下。

1　材料和方法

1.1材料幽門螺桿菌菌株(采集自吉林大學(xué)第一醫(yī)院)，小牛血清(北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司)，電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司)，微需氧罐(Oxid)，幽門螺桿菌培養(yǎng)基(青島海博生物科技有限公司)，五味清濁散和十味黑冰片散(由鄂爾多斯蒙醫(yī)研究所提供)。

1.2Hp菌株的分離培養(yǎng)將消化性胃潰瘍患者的胃部組織置于布氏肉湯培養(yǎng)基中，勻漿處理，用槍頭吸取混液置于培養(yǎng)皿上，L型玻璃棒均勻涂布后，加入微需氧袋，37℃培養(yǎng)5-7天[2，3]，擴(kuò)增培養(yǎng)。

1.3菌株的鑒定經(jīng)革蘭氏染色、尿素酶檢測、觸酶試驗(yàn)等標(biāo)準(zhǔn)檢測方法鑒定Hp菌株[4]。

1.4蒙藥水煎劑的制備分別取五味清濁散和十味黑冰片散各10 g，按比重加10倍的蒸餾水，浸泡30 min后，用文火煎熬30 min過濾。濾渣照上法同樣處理2次。將3次濾液混合，蒸發(fā)濃縮至1 g/ml，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5蒙藥對Hp的抑制作用檢測布氏肉湯培養(yǎng)基將Hp配置成菌懸液，調(diào)整OD值至OD600=0.1-0.2，菌落數(shù)為108cfu/ml。藥物按照要求制成水煎劑，原始濃度為1 mg/ml,稀釋10倍后為篩藥的初始濃度。菌液稀釋到106cfu/ml后，將藥物原始濃度做2倍倍比稀釋，共9個(gè)濃度梯度，分別為10、5、2.5、1.25、0.75、0.38、0.19、0.09、0.05(mg/100 ml)，將藥液與培養(yǎng)基混勻，倒入平板，取菌液30 μl涂板。設(shè)置陰性對照組，細(xì)菌計(jì)數(shù)。

1.6測定蒙藥對Hp的最低抑菌濃度(MIC) 將平板置于暗色、無反光物體表面上判斷試驗(yàn)終點(diǎn)，以抑制細(xì)菌生長的最低藥物濃度為MIC。

2　結(jié)果

圖1　蒙藥單菌落計(jì)數(shù)

2.2測定藥物MIC五味清濁散MIC50為0.05-0.1 mg/100 ml,十味黑冰片散MIC50為0.05-0.1 mg/100 ml。兩種藥物的水煎劑對Hp均有一定的抑菌活性，詳見圖2和圖3。藥物濃度在1 mg/10 ml時(shí)，對Hp的抑制作用最強(qiáng)。

圖3十味黑冰片散MIC50

圖3十味黑冰片散MIC50

3　討論

目前臨床上使用含兩種抗生素的三聯(lián)療法或加鉍劑的四聯(lián)療法根除Hp治療。但是大劑量抗生素聯(lián)合應(yīng)用不僅對人體有毒副作用，擾亂胃腸道的生態(tài)平衡，而且還可誘導(dǎo)新的耐藥菌株的出現(xiàn)，引發(fā)人群耐藥性增加等社會(huì)問題[5]。近幾年人們開始研究天然藥物對Hp的抑制作用，并取得了較好的成績[6-8]。但是到目前為止國內(nèi)外關(guān)于抗Hp的天然藥物的研究只局限于中成藥。尚未有人關(guān)注蒙藥對Hp的抑制作用。蒙醫(yī)認(rèn)為胃病是因?yàn)楹找?、希拉引起的胃火衰退或巴達(dá)干黏液阻郁脈道而精華不能正常轉(zhuǎn)化引起。長期以來使用五味清濁散和十味黑冰片散為主的蒙藥治療各種胃腸道疾病。五味清濁散由石榴、肉桂、豆蔻、蓽茇、紅花配合組成。具有溫胃益火、化滯除濕、溫通脈道、使精華得以正常轉(zhuǎn)化暢行、揭開隱熱掩蔽功效，主治精華不消化、巴達(dá)干黏液阻郁脈道、食物不能轉(zhuǎn)化精華、寒熱合并、胃火衰退等癥狀[9]。有報(bào)道五味清濁散與辛伐他汀聯(lián)用可有協(xié)同降血脂作用[10]。還有實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)五味清濁散可改善脾虛瀉小鼠的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)中惰性炭粒的吞噬能力和綿羊紅細(xì)胞致小鼠溶血素抗體生成能力[11]。十味黑冰片散由黑冰片、肉桂、石榴、豆蔻、金柯子、止瀉子、木鱉子、蓽茇、光明鹽、熊膽等配合而成。具有抑赫依、希拉、助消化功效，主治消化不良、痞、口苦、噯氣、胃脹痛等。本研究選用蒙醫(yī)臨床上最常用的兩種蒙藥，通過體外試驗(yàn)觀察蒙藥對Hp抑制效應(yīng)，對臨床應(yīng)用提供試驗(yàn)依據(jù)。

[1]劉文忠，謝勇，成虹，等.第四次全國幽門螺桿菌感染處理共識(shí)報(bào)告[J] .胃腸病學(xué),2012,17(10):618.

[2]李平,楚更五,馬鳳麗,等.幽門螺旋桿菌的激活培養(yǎng)與保存條件[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2007,09:1851.

[3]王放.清胃止痛微丸體外抑制幽門螺旋桿菌的實(shí)驗(yàn)研究[A].山東省醫(yī)學(xué)會(huì)消化病學(xué)分會(huì)、山東省醫(yī)學(xué)會(huì)消化內(nèi)鏡學(xué)分會(huì).2012山東省第十次消化病學(xué)會(huì)議暨第七次消化內(nèi)鏡學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C].山東省醫(yī)學(xué)會(huì)消化病學(xué)分會(huì)、山東省醫(yī)學(xué)會(huì)消化內(nèi)鏡學(xué)分會(huì),2012:3.

[4]斯慶圖娜拉，王江濱，李巖，等.嗜酸乳桿菌對甲硝唑耐藥幽門螺桿菌的抑制作用[J].世界華人消化雜志，2010,18(30):3231.

[5]歐碧云，劉代華.我國幽門螺旋桿菌抗生素耐藥我現(xiàn)狀[J].中國醫(yī)藥指南，2013,11(7):68.

[6]吳瓊，周寧，李琦.中醫(yī)藥治療幽門螺桿菌相關(guān)性胃病研究進(jìn)展[J].中華中醫(yī)藥雜志，2012,27(1):149.

[7]楊行堂，王志榮，王芝珺，等.黃連素對幽門螺桿菌抗菌作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].同濟(jì)大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2014,35(6):63.

[8]虞金寶，聶榮慶，吳東風(fēng)，等.中藥田基黃抗幽門螺桿菌的實(shí)驗(yàn)研究[J].中華中醫(yī)藥雜志，2009,24(6):821.

[9]宋娜麗，卻翎，唐志國，等.蒙藥方五味清濁散研究進(jìn)展[J].中國民族民間醫(yī)藥，2008,8(25):12.

[10]張青山，包布仁白乙拉，劉薩仁，等.蒙藥五味清濁散與辛伐他汀合用治療高脂血癥的臨床療效觀察[J].內(nèi)蒙古民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2011,26(1):76.

[11]郝海霞，任秋蘭，等.五味清濁散對脾虛瀉小鼠免疫功能的影響[J].吉林中醫(yī)藥，2013,33(9):929.

內(nèi)蒙古自治區(qū)自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2013MS1177)

1007-4287(2016)09-1546-02

斯慶圖娜拉(1979-),女，蒙古族，副主任醫(yī)師，博士研究生，主要從事消化內(nèi)科疾病的研究。

2015-10-19)