IRS-2 siRNA對(duì)腎母細(xì)胞瘤G401細(xì)胞增殖的影響及其分子機(jī)制

楊 潔， 王寶西

(第四軍醫(yī)大學(xué)附屬唐都醫(yī)院兒科，西安 710038； *通訊作者，E-mail：ekwbx1960@163.com)

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IRS-2 siRNA對(duì)腎母細(xì)胞瘤G401細(xì)胞增殖的影響及其分子機(jī)制

楊 潔， 王寶西

(第四軍醫(yī)大學(xué)附屬唐都醫(yī)院兒科，西安 710038；*通訊作者，E-mail：ekwbx1960@163.com)

目的 觀察胰島素受體底物2(IRS-2)siRNA對(duì)腎母細(xì)胞瘤G401細(xì)胞增殖的影響，探討其分子機(jī)制。 方法 應(yīng)用siRNA干擾IRS-2表達(dá)，將G401細(xì)胞分為空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組和IRS-2 siRNA組，空白對(duì)照組不做處理，陰性對(duì)照組轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照siRNA，IRS-2 siRNA組轉(zhuǎn)染IRS-2特異性siRNA。MTT法檢測IRS-2對(duì)腎母細(xì)胞瘤G401細(xì)胞增殖的影響，流式細(xì)胞術(shù)分析IRS-2 siRNA對(duì)細(xì)胞周期和凋亡的影響，Western blot檢測IRS-2 siRNA對(duì)p-Akt、Akt、CDK2和Cyclin A2表達(dá)的影響。 結(jié)果 與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組相比，IRS-2 siRNA組G401細(xì)胞的IRS-2 mRNA和蛋白的表達(dá)均顯著下調(diào)(P<0.01)，IRS-2 siRNA抑制腎母細(xì)胞瘤G401細(xì)胞增殖；與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組相比，IRS-2 siRNA組G401 S期細(xì)胞數(shù)量顯著增加(P<0.01)，G2/M期細(xì)胞數(shù)量顯著減少(P<0.01)，IRS-2 siRNA組G401細(xì)胞的早期凋亡和晚期凋亡顯著增加(P<0.01)；與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組相比，IRS-2 siRNA組p-Akt、CDK2和Cyclin A2在蛋白水平的表達(dá)均下調(diào)(P<0.01)。 結(jié)論 IRS-2通過激活A(yù)kt信號(hào)通路，調(diào)控CDK2和Cyclin A2的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)腎母細(xì)胞瘤G401細(xì)胞增殖。

胰島素受體底物2； 腎母細(xì)胞瘤； 細(xì)胞增殖； 細(xì)胞周期； 細(xì)胞凋亡； Akt信號(hào)通路

腎母細(xì)胞瘤是兒童腎臟最常見惡性腫瘤，約占兒童腎臟腫瘤的95%[1,2]。其發(fā)生是多因素、多基因參與的生物學(xué)過程。目前尚未清楚腎母細(xì)胞瘤的發(fā)病機(jī)制，因而缺乏相應(yīng)的靶向治療手段。胰島素受體底物2(insulin receptor substrate 2，IRS-2)最初在IRS1-/-小鼠被胰島素刺激的細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)[3]。IRS-2是有絲分裂發(fā)生的主要介質(zhì)且調(diào)控葡萄糖代謝[4]。研究表明，IRS-2與乳腺癌、胰腺癌等腫瘤的細(xì)胞生存相關(guān)，參與腫瘤的發(fā)展過程[5,6]。然而IRS-2在腎母細(xì)胞瘤中的作用尚未見報(bào)道。本研究應(yīng)用siRNA沉默IRS-2基因表達(dá)，分析對(duì)人腎母細(xì)胞瘤G401細(xì)胞增殖的影響，觀察Akt信號(hào)通路，及細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白CDK2和Cyclin A2表達(dá)的變化，探討IRS-2影響腎母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖的分子機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞株

人腎母細(xì)胞瘤G401細(xì)胞由第四軍醫(yī)大學(xué)中心實(shí)驗(yàn)室提供，用含10%新生胎牛血清的Mc-Coy5A培養(yǎng)基，置于5%CO2，37 ℃孵箱中培養(yǎng)，取對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2 主要試劑與儀器

新生胎牛血清購自美國Gibico公司；Mc-Coy5A培養(yǎng)基購自美國Life Technologies公司；MTT、碘化丙啶(PI)、RnaseA、胰島素受體底物2(IRS-2)購于美國Sigma公司；Trizol和Lipofectamine2000購于美國Invitogen公司；Annexin Ⅴ-FITC凋亡試劑盒購自美國BD BioScience公司；qRT-PCR試劑盒和逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購自日本TaKaRa公司；兔抗人IRS-2單克隆抗體、兔抗人p-Akt單克隆抗體、兔抗人Akt多克隆抗體、兔抗人Cyclin A2單克隆抗體、兔抗人CDK2單克隆抗體、小鼠抗人β-Actin單克隆抗體均購自美國Cell Signaling公司；RIPA細(xì)胞裂解液購于上海碧云天公司；ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒購于美國Pierce公司。

二氧化碳培養(yǎng)箱Galaxy S(英國RS Biotech公司)；低速離心機(jī)TDL-5(上海安亭科學(xué)儀器廠)；高通量多功能微板測試系統(tǒng)(德國BMG Labtechnologies公司)；FASCalibar流式細(xì)胞儀(美國FALS CALIBAR BD公司)；垂直電泳系統(tǒng)SE260(美國Amersham公司)；濕法蛋白電轉(zhuǎn)印系統(tǒng)DYCZ-40D(北京六一儀器廠)；GBOX-HR全自動(dòng)凝膠成像分析系統(tǒng)(英國SYNGENE公司)；實(shí)時(shí)定量PCR儀iQ5 Multicolor(美國Bio-Rad公司)。

1.3 siRNA合成與轉(zhuǎn)染

IRS-2 siRNA sense:5′-GAUCUGUCUGGCUUUAUCATT-3′,antisense:5′-UGAUAAAGCCAGACAGAUCTT-3′；陰性對(duì)照siRNA(negative siRNA)sense：5′-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3′，antisense：5′-ACGUGACACGUUCGG AGAATT-3′；由上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司設(shè)計(jì)與合成。將G401細(xì)胞分為空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組與IRS-2 siRNA組，空白對(duì)照組不做干預(yù)，陰性對(duì)照組轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照siRNA，IRS-2 siRNA組轉(zhuǎn)染IRS-2特異性siRNA。將G401細(xì)胞用無抗生素含血清的Mc-Coy5A培養(yǎng)液重懸，接種于96或6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)24 h。按照LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染試劑說明書操作，將siRNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染G401細(xì)胞，轉(zhuǎn)染4-6 h，換新鮮的含10%血清的完全培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24,48,72 h分別檢測細(xì)胞增殖、周期及凋亡。

1.4 MTT比色法檢測IRS-2 siRNA對(duì)G401細(xì)胞增殖的影響

G401細(xì)胞以5 000個(gè)/孔接種于96孔板，每孔200 μl培養(yǎng)基。實(shí)驗(yàn)分組為空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組(70 nmol/L)和IRS-2 siRNA(70 nmol/L)組。每組5個(gè)復(fù)孔，轉(zhuǎn)染后再分別培養(yǎng)24,48,72 h，再每孔加入5 mg/ml MTT 溶液20 μl，繼續(xù)培養(yǎng)4 h，棄上清并加入150 μl DMSO，在POLARstar+OPTIMA微板測試儀上檢測光吸收值，檢測波長為490 nm。

1.5 流式細(xì)胞儀檢測IRS-2 siRNA對(duì)G401細(xì)胞周期的影響

轉(zhuǎn)染48 h時(shí)收集細(xì)胞，PBS洗滌2次，用75%乙醇過夜固定；再加入0.3 ml濃度為100 μg/ml PI染液，避光靜置20 min；使用流式細(xì)胞儀檢測，激發(fā)波長為488 nm，PI的紅色熒光通過630 nm的濾光片進(jìn)行收集，BD FACSort CellQuest軟件獲取數(shù)據(jù)，采用Modfit LT軟件分析DNA含量變化。

1.6 流式細(xì)胞儀檢測IRS-2 siRNA對(duì)G401細(xì)胞凋亡的影響

收集轉(zhuǎn)染48 h的細(xì)胞，PBS洗滌2次。用500 μl結(jié)合緩沖液懸浮細(xì)胞，再加入5 μ1 Annexin Ⅴ/FITC與5 μl 20 μg/ml的碘化丙錠，混合均勻，避光靜置20 min。用流式細(xì)胞儀檢測，F(xiàn)ITC受激發(fā)后發(fā)綠色熒光，PI發(fā)紅色熒光，結(jié)果用隨機(jī)軟件進(jìn)行分析。

1.7 Real time PCR檢測轉(zhuǎn)染IRS-2 siRNA時(shí)G401細(xì)胞中IRS-2 mRNA表達(dá)

G401細(xì)胞在轉(zhuǎn)染24 h時(shí)加入Trizol。用氯仿、異丙醇等提取總RNA。按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書加樣，37 ℃ 90 min，70 ℃ 10 min，終止反應(yīng)。Real time PCR反應(yīng)，按照人IRS-2序列，設(shè)計(jì)Real time PCR 引物。IRS-2上游引物：5′-TTGACTTCTTGTCCCACCACTTG-3′，IRS-2下游引物：5′-GCTGAGCGTCTTCTTTTAATGATACT-3′；β-actin上游引物：5′-TGGCACCCAGCACAATGAA-3′，β-actin下游引物：5′-CTAAGTCATAGTCCGCCTAGAAGCA-3′。擴(kuò)增條件：94 ℃變性2 min，按94 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 60 s進(jìn)行30個(gè)循環(huán)，于72 ℃延伸10 min。用2-ΔΔCt法對(duì)Real time PCR的結(jié)果相對(duì)定量分析。

1.8 免疫蛋白印跡分析IRS-2 siRNA對(duì)CDK2、Cyclin A2表達(dá)和Akt信號(hào)通路的影響

收集轉(zhuǎn)染48 h的細(xì)胞，應(yīng)用RIPA裂解液提取細(xì)胞總蛋白。變性后電泳，轉(zhuǎn)膜，用5%脫脂奶粉室溫封閉1 h，分別加入兔抗人IRS-2單克隆抗體(1∶1 000稀釋)、兔抗人p-Akt單克隆抗體(1∶1 000稀釋)、兔抗人Akt多克隆抗體(1∶1 000稀釋)、兔抗人Cyclin A2單克隆抗體(1∶1 000稀釋)、兔抗人CDK2單克隆抗體(1∶1 000稀釋)、小鼠抗人β-actin單克隆抗體(1∶3 000稀釋)，4 ℃孵育過夜，洗膜，用HRP標(biāo)記的羊抗兔/羊抗鼠二抗(1∶2 000稀釋)室溫孵育2 h，洗膜。加入免疫印跡化學(xué)發(fā)光液，應(yīng)用Syngene G Box凝膠成像儀拍照，GeneTools軟件分析。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 轉(zhuǎn)染IRS-2 siRNA后腎母細(xì)胞瘤G401細(xì)胞中IRS-2表達(dá)下調(diào)

在腎母細(xì)胞瘤G401細(xì)胞中穩(wěn)定轉(zhuǎn)染IRS-2 siRNA后，與空白對(duì)照組相比，陰性對(duì)照組無顯著性差異，siRNA組IRS-2 mRNA表達(dá)減少[(18.7±3.1)%]，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與陰性對(duì)照組相比，siRNA組IRS-2 mRNA表達(dá)也顯著減少[(19.2±3.0)%，P<0.01，見圖1A]；同時(shí)，siRNA組IRS-2蛋白表達(dá)與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組相比也均明顯下調(diào)(P<0.01，見圖1B)。表明siRNA有效地沉默了G401細(xì)胞中IRS-2表達(dá)。

2.2 沉默IRS-2對(duì)G401細(xì)胞增殖的影響

與空白對(duì)照組相比，IRS-2 siRNA組48，72 h時(shí)G401細(xì)胞的增殖能力顯著降低為(64.4±4.5)%和(58.2±5.8)%(P<0.01)；IRS-2 siRNA組24 h時(shí)無顯著變化。陰性對(duì)照組與空白對(duì)照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。與陰性對(duì)照組相比，IRS-2 siRNA組48，72 h時(shí)G401細(xì)胞的增殖能力也均顯著降低為(60.3±4.2)%和(61.9±4.6)%(P<0.01，見圖2)。說明沉默IRS-2表達(dá)可抑制腎母細(xì)胞瘤G401細(xì)胞增殖。

2.3 沉默IRS-2對(duì)G401細(xì)胞周期的影響

在G401細(xì)胞中轉(zhuǎn)染IRS-2 siRNA 48 h時(shí)，將其消化分散為單細(xì)胞懸液，通過流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期。IRS-2 siRNA組與空白對(duì)照組相比，G0/G1期細(xì)胞數(shù)量有所增加，S期細(xì)胞數(shù)量顯著增加(P<0.01)，而G2/M期細(xì)胞數(shù)量顯著減少(P<0.01)；陰性對(duì)照組與空白對(duì)照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；與陰性對(duì)照組相比，IRS-2 siRNA組G0/G1期細(xì)胞數(shù)量也有所增加，S期細(xì)胞數(shù)量也顯著增加(P<0.01)，而G2/M期細(xì)胞數(shù)量也顯著減少(P<0.01，見圖3)。證明沉默IRS-2使腎母細(xì)胞瘤G401細(xì)胞阻滯在S期，抑制細(xì)胞進(jìn)入G2/M期進(jìn)行分裂。

圖1 轉(zhuǎn)染IRS-2 siRNA后G401細(xì)胞中IRS-2表達(dá)的變化Figure 1 The changes of IRS-2 expression after transcription IRS-2 siRNA in G401 cells

與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組比較，*P<0.01圖2 沉默IRS-2對(duì)G401細(xì)胞增殖的影響(MTT比色分析)Figure 2 Effect of IRS-2 silencing on G401 cell proliferation by MTT assay

2.4 沉默IRS-2對(duì)G401細(xì)胞凋亡的影響

在腎母細(xì)胞瘤G401中轉(zhuǎn)染IRS-2 siRNA 48 h時(shí)，收獲細(xì)胞制備為單細(xì)胞懸液，采用Annexin Ⅴ+PI試劑盒染色，運(yùn)用流式細(xì)胞儀檢測。空白對(duì)照組早期凋亡細(xì)胞為(5.61±2.33)%；晚期凋亡細(xì)胞為(3.26±1.87)%。與空白對(duì)照組相比，siRNA組早期凋亡細(xì)胞顯著增加(P<0.01)，為(13.55±2.52)%，晚期凋亡細(xì)胞也增加(P<0.01)，為(17.09±2.83)%；而陰性對(duì)照組與空白對(duì)照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。與陰性對(duì)照組相比，siRNA組早期凋亡和晚期凋亡細(xì)胞均顯著增加(P<0.01，見圖4)。

與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組比較，*P<0.01圖3 沉默IRS-2對(duì)G401細(xì)胞周期的影響Figure 3 Effect of IRS-2 silencing on cell cycle of G401 cells

與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組比較，*P<0.01圖4 沉默IRS-2對(duì)G401細(xì)胞凋亡的影響Figure 4 Effect of IRS-2 silencing on apoptosis of G401 cells

2.5 沉默IRS-2抑制G401細(xì)胞Akt信號(hào)通路的激活

為進(jìn)一步分析IRS-2生物學(xué)作用的分子機(jī)制，采用Western blot分析沉默IRS-2對(duì)腎母細(xì)胞瘤G401細(xì)胞內(nèi)p-Akt、Akt、CDK2和Cyclin A2表達(dá)的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)，沉默IRS-2后與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組相比p-Akt、CDK2和Cyclin A2表達(dá)均下降，而Akt表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；陰性對(duì)照組與空白對(duì)照組相比各蛋白無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(見圖5)。

與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組比較，*P<0.01圖5 沉默IRS-2對(duì)p-Akt、Akt、CDK2、Cyclin A2表達(dá)的影響Figure 5 Effect of IRS-2 silencing on p-Akt, Akt, CDK2 and Cyclin A2 expression

3 討論

IRS-2屬于胰島素受體底物(IRS)家族成員，IRS是一類胞質(zhì)蛋白激酶，它們是在胰島素信號(hào)傳導(dǎo)中首次被發(fā)現(xiàn)。研究表明，在人類乳腺癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤和間皮瘤細(xì)胞中IRS-2傳導(dǎo)信號(hào)能夠促進(jìn)細(xì)胞的遷移與侵襲能力[5,7]。IRS-2促進(jìn)腫瘤惡化和侵襲能力的一個(gè)可能的機(jī)制是通過促進(jìn)腫瘤細(xì)胞表面的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)從而增強(qiáng)糖酵解引起的。IRS-2也被證實(shí)與促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生存相關(guān)，這很可能是由于其參與了腫瘤發(fā)展的進(jìn)程。IRS-2在胰腺癌細(xì)胞中能夠通過調(diào)控IGF1信號(hào)通路促進(jìn)腫瘤的發(fā)展過程[8]。近期的研究結(jié)果表明，IRS-2在腎癌和口腔癌中表達(dá)上調(diào)，并通過激活A(yù)kt信號(hào)通路促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖[9,10]。另外，IRS-2缺失型乳腺癌細(xì)胞更容易發(fā)生凋亡[11]。本研究結(jié)果顯示，應(yīng)用siRNA沉默IRS-2表達(dá)后，腎母細(xì)胞瘤G401細(xì)胞的增殖能力顯著下降，凋亡增加，證明IRS-2可促進(jìn)腎母細(xì)胞瘤G401細(xì)胞增殖并抑制凋亡。

細(xì)胞周期是細(xì)胞生命活動(dòng)的一項(xiàng)重要的過程，其進(jìn)展程度受很多分子的調(diào)控，其中細(xì)胞周期調(diào)節(jié)器(Cyclins)是細(xì)胞周期的主要調(diào)節(jié)因子，它們分別參與細(xì)胞周期的不同階段。細(xì)胞周期蛋白依賴性蛋白激酶(CDKs)也參與細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)。其中CDK2與Cyclin A2結(jié)合，促進(jìn)細(xì)胞由S進(jìn)入G2/M期進(jìn)行細(xì)胞分裂[9,10]。本研究結(jié)果顯示，當(dāng)IRS-2 siRNA處理腎母細(xì)胞瘤G401細(xì)胞后，S期細(xì)胞數(shù)量增加，而G2/M期細(xì)胞數(shù)量顯著減少；同時(shí)CDK2和Cyclin A2表達(dá)下調(diào)。這說明IRS-2能夠通過調(diào)控CDK2和Cyclin A2的表達(dá)，使細(xì)胞跨越S-G2/M期節(jié)點(diǎn)，進(jìn)而促進(jìn)腎母細(xì)胞瘤G401細(xì)胞進(jìn)行分裂、增殖。

磷酯酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B，PI3K/Akt)信號(hào)通路在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮非常重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)PI3K/Akt信號(hào)通路在卵巢癌、結(jié)直腸癌、淋巴瘤、胰腺癌、非小細(xì)胞肺癌、淋巴瘤及胃癌等多種腫瘤組織中過度表達(dá)和活化[12-16]。其中相關(guān)基因異常表達(dá)所致的功能獲得或者缺失可引起腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡、遷移及侵襲的異常?；罨腁kt可調(diào)節(jié)許多與細(xì)胞增殖相關(guān)的蛋白，如mTOR、c-myc和CREB等?；罨腜I3K-Akt可通過TSC1/2復(fù)合物激活其下游分子mTOR。mTOR可調(diào)控在翻譯過程中起重要作用的4E-BPl、p70S6K和eIF4GI等蛋白的表達(dá)[6]。c-myc是一種較強(qiáng)的細(xì)胞周期促進(jìn)因子，可使細(xì)胞逃離G0期，引起細(xì)胞增殖，Akt通過增加癌基因c-myc的轉(zhuǎn)錄、上調(diào)該基因的表達(dá)而影響細(xì)胞周期。近來的研究表明，在腎癌和口腔癌中激活PI3K-Akt信號(hào)通路可上調(diào)細(xì)胞周期調(diào)控因子CDK2和Cyclin A2的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞分裂增殖。本研究結(jié)果顯示，在腎母細(xì)胞瘤G401細(xì)胞中沉默IRS-2表達(dá)，則抑制PI3K-Akt信號(hào)通路激活，下調(diào)CDK2和Cyclin A2的表達(dá)。說明IRS-2可通過激活PI3K-Akt信號(hào)通路影響腎母細(xì)胞瘤增殖。

總之，siRNA干擾IRS-2表達(dá)后，通過抑制PI3K-Akt激活，調(diào)控CDK2和Cyclin A2的表達(dá)，進(jìn)而抑制了腎母細(xì)胞瘤G401細(xì)胞分裂、增殖。這將有助于進(jìn)一步了解腎母細(xì)胞瘤發(fā)病機(jī)制，為開辟腎母細(xì)胞瘤治療的新途徑提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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Effects of IRS-2 siRNA on proliferation of nephroblastoma G401 cells and its molecular mechanism

YANG Jie, WANG Baoxi*

(DepartmentofPediatrics,TangduHospital,FourthMilitaryMedicalUniversity,Xi’an710038,China；*Correspondingauthor,E-mail：ekwbx1960@163.com)

ObjectiveTo investigate the effects of IRS-2 on the proliferation of nephroblastoma G401 cells and its molecular mechanism.MethodsThe siRNA interference was used to knockdown IRS-2. G401 cells were divided into three groups: blank control group, negative control group and IRS-2 siRNA group. Control siRNA and IRS-2-targeted siRNA were transfected into G401 cells in negative control group and IRS-2 siRNA group, respectively. MTT assay was used to analyze the effects of IRS-2 on proliferation of nephroblastoma G401 cells. The effects of IRS-2 on the cell cycle and apoptosis of nephroblastoma G401 cells were observed by flow cytometer. The effects of IRS-2 siRNA on the expression of p-Akt, Akt, CDK2 and Cyclin A2 were analyzed by Western blot.ResultsIRS-2 mRNA and protein significantly decreased in IRS-2 siRNA group compared to blank control group and negative control group(P<0.01). IRS-2 siRNA inhibited proliferation of nephroblastoma G401 cells. The number of S phase cells significantly increased in IRS-2 siRNA group compared to blank control group and negative control group(P<0.01), meanwhile the number of G2/M phase cells remarkably decreased(P<0.01). The number of early apoptotic cells and late apoptotic cells remarkably increased in IRS-2 siRNA group compared to blank control group and negative control group(P<0.01).The levels of p-Akt, CDK2 and Cyclin A2 proteins decreased in IRS-2 siRNA group compared to blank control group and negative control group(P<0.01).ConclusionIRS-2 may promote the proliferation of nephroblastoma G401 cells through activating Akt signal pathway, regulating CDK2 and Cyclin A2 expression.

IRS-2； nephroblastoma； cell proliferation； cell cycle； apoptosis； Akt signal pathway

陜西省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(2014JM4023)

楊潔，女，1980-06生，本科，主治醫(yī)師，E-mail：13991103197@163.com

2016-06-14

R737.11

A

1007-6611(2016)09-0813-05

10.13753/j.issn.1007-6611.2016.09.007