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    車(chē)前子多糖對(duì)人外周血來(lái)源的樹(shù)突狀細(xì)胞免疫活性的影響

    2016-10-27 03:47:34魯世絨
    生物技術(shù)世界 2016年2期
    關(guān)鍵詞:車(chē)前子樹(shù)突表型

    魯世絨

    (廣西醫(yī)科大學(xué) 廣西南寧 530000)

    車(chē)前子多糖對(duì)人外周血來(lái)源的樹(shù)突狀細(xì)胞免疫活性的影響

    魯世絨

    (廣西醫(yī)科大學(xué) 廣西南寧 530000)

    目的:探討車(chē)前子多糖對(duì)樹(shù)突狀細(xì)胞免疫活性的影響。方法:從健康人外周血獲得單個(gè)核細(xì)胞,貼壁后的單核細(xì)胞加入GM-CSF、IL-4誘導(dǎo)為成熟的樹(shù)突狀細(xì)胞,在誘導(dǎo)過(guò)程中加入不同濃度車(chē)前多糖(PSP)作比較,用倒置顯微鏡及流式檢測(cè)其細(xì)胞形態(tài)、表型變化。結(jié)果:各組經(jīng)不同濃度PSP作用后,細(xì)胞表面CD80、CD86表達(dá)升高,在PSP作用濃度為40ug/ml時(shí),表面分子表達(dá)量明顯高于其他對(duì)照組。結(jié)論:在體外培養(yǎng)時(shí),車(chē)前子多糖能促進(jìn)樹(shù)突狀細(xì)胞的成熟。

    車(chē)前子多糖 樹(shù)突狀細(xì)胞 免疫活性

    前言

    DC是生物體內(nèi)功能最強(qiáng)的一種抗原提呈細(xì)胞,在機(jī)體免疫調(diào)控中發(fā)揮重要作用[1]。有關(guān)DC的免疫治療已有大量報(bào)道,各種免疫療法對(duì)腫瘤患者產(chǎn)生一定影響。研究表明許多中藥有效成分具有一定的免疫調(diào)節(jié)活性,本文探究了車(chē)前子多糖在體外促進(jìn)DC成熟,為研究車(chē)前子多糖免疫調(diào)節(jié)機(jī)制提供了理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 主要試劑與藥物

    淋巴細(xì)胞分離液購(gòu)自北京索萊寶公司,rhGM-CSF 、rhIL-4, 購(gòu)自德國(guó)R&D 公司,F(xiàn)ITC標(biāo)記的鼠抗人CD80單抗、PE標(biāo)記的CD86單抗購(gòu)自BD-PharMingen,藥材取自江西。

    1.2 主要方法

    1.2.1 外周血單核細(xì)胞分離

    采取健康人外周血200ml,用同等比例PBS稀釋后加入淋巴細(xì)胞分離液,1500rpm,20min離心,分為四層:血清、白膜層、淋巴分離液、紅細(xì)胞[2]。取白膜層單個(gè)核細(xì)胞于離心管中,用PBS洗兩次,用無(wú)血清的RPM1640重懸細(xì)胞,貼壁1h,取貼壁的細(xì)胞即單核細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。

    1.2.2 DC的體外誘導(dǎo)分化及培養(yǎng)

    將單核細(xì)胞分為兩組,車(chē)前子多糖組和對(duì)照組,加入完全1640,同時(shí)加入GM-CSF 1000 u/ml 、IL-4 450u/ml ,鋪于六孔板中,PSP組分為五個(gè)作用濃度(10ug/ml、20ug/ml、40ug/ml、60ug/ ml)。

    2 DC的鑒定

    2.1 DC形態(tài)的觀察

    用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)。

    2.2 DC表型的鑒定

    采用流式細(xì)胞儀,在D C培養(yǎng)的第1 0天,收集細(xì)胞分別加入CD80,CD86單抗染色,室溫避光作用15min。加PBS洗兩次后用500ulPBS重懸細(xì)胞檢測(cè)。

    3 結(jié)果

    c o n t r o l  C D 8 0  C D 8 6 c o n t r o l  1 8  7 2 . 1  6 0 . 3 P S P 1 0 u g / m l  1 0  8 1 . 6  7 8 . 9 P S P 2 0 u g / m l  1 5  8 5 . 3  8 2 . 1 P S P 4 0 u g / m l  1 7  8 9 . 0  8 6 . 2 P S P 6 0 u g / m l  0 6  5 1 . 3  6 2 . 7

    3.1 DC形態(tài)的改變

    d1天細(xì)胞體積較小,d2天細(xì)胞開(kāi)始聚集,部分懸浮。d3天細(xì)胞體積變大,形狀變?yōu)闃?shù)突狀或放射狀等。d4天大量細(xì)胞懸浮且呈突刺狀。d7天可見(jiàn)大量突刺狀細(xì)胞,為典型的DC形態(tài)。

    3.2 DC的免疫表型分析

    各組細(xì)胞共培養(yǎng)7d,流式檢測(cè)其表型,結(jié)果見(jiàn)下表。

    組間表達(dá):各組DC分子表面CD80、CD86均有表達(dá),車(chē)前子多糖作用組均高于對(duì)照組。但當(dāng)PSP濃度高于40ug/ml時(shí),CD80、CD86的表達(dá)呈下降趨勢(shì)。

    組內(nèi)表達(dá):當(dāng)PSP濃度≤40ug/ml時(shí),隨著PSP的增加,DC表面分子表達(dá)增加。當(dāng)60ug/ml濃度時(shí),表面分子表達(dá)降低。

    各濃度PSP組及對(duì)照組流式檢測(cè)結(jié)果%

    4 討論

    車(chē)前子是我國(guó)傳統(tǒng)中藥之一, PSP由木糖、阿拉伯糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、半乳糖醛酸等組成,具有一定的防癌抗癌和調(diào)節(jié)免疫功能的作用[3]。

    DC作為抗原提呈免疫細(xì)胞,在抗腫瘤免疫中起重要作用[4]。成熟DC吞噬功能較弱,而共刺激分子和MHC-Ⅱ分子表達(dá)增加,從而獲得提呈抗原和活化T細(xì)胞的功能,啟動(dòng)特異性免疫應(yīng)答[5]。

    實(shí)驗(yàn)證明,DC經(jīng)PSP刺激后,CD80、CD86的表達(dá)均增強(qiáng),。研究發(fā)現(xiàn)PSP對(duì)免疫活性細(xì)胞無(wú)直接作用,DC表面存在多糖受體, PSP可與DC 表面存在的多糖受體結(jié)合,從而啟動(dòng)和活化DC使其分泌細(xì)胞活性因子,活化的DC及活性因子增強(qiáng)T細(xì)胞等免疫活性細(xì)胞的功能。

    本研究通過(guò)上述幾種實(shí)驗(yàn)證明車(chē)前子多糖能進(jìn)樹(shù)突狀細(xì)胞成熟。但其具體的分子生物學(xué)機(jī)制尚需進(jìn)一步的研究。

    [1]許峰,王彬,葉穎江,等.異源DC融合瘤苗在抗人結(jié)腸轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞免疫中的作用[J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志,2006,23(12):1497-1498.

    [2]李幼平. 樹(shù)突狀細(xì)胞與移植免疫耐受研究進(jìn)展.生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志,1997;14(4)∶383

    [3]魏吳普.神農(nóng)本草經(jīng)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1963:18.

    [4]Shimauchi, T. and V. Piguet, DC-T cell virological synapses and the skin: novel perspectives in dermatology. Exp Dermatol,2015.24(1):p.1-4.

    [5]陳蘊(yùn)穎,步宏.樹(shù)突狀細(xì)胞的表面標(biāo)志及其免疫學(xué)意義. 生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志,1998;15(4)∶409.

    Q2

    A

    1674-2060(2016)02-0168-01

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