• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    基于轉(zhuǎn)錄組測序?qū)Σ铇銰ST基因表達(dá)的研究

    2016-10-27 05:24:09張亞真韋康王麗鴛成浩
    茶葉科學(xué) 2016年5期
    關(guān)鍵詞:龍井谷胱甘肽花青素

    張亞真,韋康,王麗鴛,成浩

    ?

    基于轉(zhuǎn)錄組測序?qū)Σ铇浠虮磉_(dá)的研究

    張亞真,韋康*,王麗鴛,成浩

    中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所國家茶樹改良中心農(nóng)業(yè)部茶樹生物學(xué)與資源利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,浙江杭州 310008

    谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(Glutathione-transferases,)在植物體內(nèi)普遍存在,是一類具有多種生物學(xué)功能的超家族蛋白酶。本研究通過對中黃2號、龍井43在正常光照和遮蔭處理下的轉(zhuǎn)錄組測序,篩選獲得了49個基因家族成員,并對其中19個在芽葉中表達(dá)量較高的基因進(jìn)行了序列分析和聚類分析。另外對表達(dá)量較高的8個候選基因進(jìn)行熒光定量表達(dá)分析,研究它們在龍井43不同葉位中的表達(dá)模式。結(jié)果表明這些基因在一芽一葉到第六葉中均有表達(dá),但各自呈現(xiàn)出不同的變化規(guī)律。在龍井43一芽一葉到第六葉中的表達(dá)量逐漸上升,可能與植物抗脅迫有關(guān),而的表達(dá)量則顯著下降,可能與花青素代謝有關(guān)。

    茶樹;轉(zhuǎn)錄組測序;谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶;表達(dá)分析

    谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶()是一類由多基因編碼、具有多種功能的超家族蛋白酶,普遍存在于動物、植物及微生物中。根據(jù)基因結(jié)構(gòu)及蛋白同源性可分為8類,即phi(F型)、tau(U型)、zeta(Z型)、theta(T型)、lambda(L型)、脫氫抗壞血酸還原酶(Dehydroascorbate reductase, DHAR)、四氯代氫醌脫鹵素酶(Tetrachlorohy droquione dehalogenase, TCHQD)和微粒體GST(Membrane-associated proteins in eicosanoid and glutathione metabolism, MAPEG),除微粒體GST外,其他7類均為可溶性GST,且GSTF和GSTU一般只存在于植物體內(nèi),含量較高,種類也最為豐富[1]。自20世紀(jì)70年代在玉米中首次發(fā)現(xiàn)GST以來[2],許多植物中的GST也都相繼被發(fā)掘。目前,基因已在17種植物中得到克隆和研究[3],如擬南芥中有54個基因,水稻59個,玉米42個,大豆26個[4]。

    雖然家族數(shù)量眾多,序列差異較大,但具有相似的三維結(jié)構(gòu),一般是由兩個亞基組成的同源或異源二聚體,且每個亞基都具有兩個基本的功能域:位于N端的谷胱甘肽結(jié)合位點(diǎn)(G-site)和位于C端的疏水性底物作用位點(diǎn)(H-site)[4]。不同種類基因的差異主要體現(xiàn)在G位點(diǎn)功能和H位點(diǎn)結(jié)合底物的不同,由此決定了基因具有解毒、調(diào)節(jié)植物次級代謝[5]和參與植物生長發(fā)育、細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及細(xì)胞凋亡等多種功能[6-9]。

    茶樹作為我國重要的經(jīng)濟(jì)作物,在生長發(fā)育的不同階段,往往會受到多種生物或非生物脅迫,如病原菌侵害、干旱、高溫等,由此造成茶葉產(chǎn)量和品質(zhì)的下降;另一方面,茶葉對人體具有多種營養(yǎng)價值和保健功效,而類黃酮物質(zhì)是其首要的生物活性成分,占鮮葉干重的18%~36%[10]。近年來,已有大量研究表明,在多種植物體內(nèi)與抗脅迫和類黃酮等次生代謝產(chǎn)物緊密相關(guān),而茶樹中有關(guān)基因家族只有少量研究,完整序列也僅有2條(登錄號分別為FJ014478、KF612020),在茶樹體內(nèi)的相關(guān)功能研究則更為缺乏。因此,本研究在對不同處理下龍井43和中黃2號進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序的基礎(chǔ)上,獲得基因,再經(jīng)過進(jìn)一步篩選、生物信息學(xué)分析和不同組織部位的表達(dá)分析,以明確候選基因的時空表達(dá)規(guī)律,為以后開展基因克隆及功能的研究提供理論基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    以種植于中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所的龍井43和中黃2號為轉(zhuǎn)錄組測序材料,一組經(jīng)遮蔭處理(20?m×20?m遮陽網(wǎng)覆蓋,遮光率為80%±5%),另一組不遮蔭(CK)。7?d后采一芽一葉,液氮速凍后于-80℃冰箱保存,用于轉(zhuǎn)錄組測序。

    用于熒光定量PCR的材料為種植于中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所的龍井43,選取生長勢相對一致的正常植株,于2015年8月7日采摘一芽一葉、第二葉、第三葉、第四葉、第五葉、第六葉,液氮速凍后于-80℃冰箱保存。

    1.2 CsGSTs的篩選及其差異表達(dá)分析

    根據(jù)Wei等[11]的方法對4組樣品(龍井43對照、龍井43遮蔭、中黃2號對照、中黃2號遮蔭)的測序結(jié)果進(jìn)行分析,主要是將序列重新組裝和進(jìn)行功能注釋,篩選得到基因。

    1.3 CsGSTs序列分析及聚類分析

    將得到的序列在NCBI網(wǎng)站上利用ORF Finder和BLASTX工具進(jìn)行保守結(jié)構(gòu)域分析;并與擬南芥基因家族成員進(jìn)行BLASTX比對;然后根據(jù)RPKM (Reads Per kb Million reads) 最大值大于10進(jìn)一步篩選,得到的序列,經(jīng)修飾后用MEGA6進(jìn)行多序列比對和聚類分析。

    1.4 總RNA提取及cDNA合成

    茶樹葉片總RNA提取方法參照天根公司提供的多糖多酚植物總RNA提取試劑盒進(jìn)行,然后以500?ng RNA為模板,根據(jù)天根Fast Quant RT Kit(with gDNase)提供的的方法反轉(zhuǎn)錄成cDNA,稀釋至統(tǒng)一濃度(40?ng·μL-1),作為熒光定量模板。

    1.5 CsGSTs基因熒光定量PCR分析

    以龍井43一芽一葉、第二葉、第三葉、第四葉、第五葉、第六葉的cDNA為模板,選取RPKM值較高的基因進(jìn)行熒光定量PCR分析。根據(jù)前期轉(zhuǎn)錄組測序獲得的基因序列片段,使用NCBI在線Prime-blast軟件設(shè)計熒光定量特異引物(表1)。采用相對定量的方法,以GAPDH為內(nèi)參基因,分析基因的表達(dá)量。反應(yīng)體系為SYBR Premix Ex Taq 10mL,ROX DyeⅡ 0.4mL,10mmol·L-1上、下游引物各0.8mL,cDNA 2mL,加水至終體積20mL,反應(yīng)在ABI PRISM 7500實(shí)時定量PCR儀上進(jìn)行。反應(yīng)程序如下:95℃預(yù)變性30?s,95℃變性5?s,62℃退火延伸34?s,40個循環(huán),反應(yīng)結(jié)束后分析熒光值變化曲線和融解曲線。4次技術(shù)性重復(fù),結(jié)果采用2-??CT算法分析。

    表1 實(shí)時熒光定量PCR引物

    2 結(jié)果與分析

    2.1 CsGSTs基因的篩選結(jié)果及表達(dá)情況

    根據(jù)轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果篩選得到49個基因,按照基因序列號從小到大進(jìn)行命名,并對其進(jìn)行亞家族分類。4組轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中,以RPKM最高值進(jìn)行統(tǒng)計(表2),結(jié)果表明,49個基因可分為7個亞家族,其中近一半基因?qū)儆赨型(25個:)其次是F型(10個:),T型(6個:),DHAR型(3個:),Z型(2個:),TCHQD型(2個:),MAPEG型最少(1個:)。按照基因表達(dá)水平進(jìn)行分析,結(jié)果表明,12.24%的基因?yàn)槌弑磉_(dá)水平(RPKM≥100),主要是U型和F型;26.53%的基因?yàn)楦弑磉_(dá)水平(10≤RPKM<100);42.86%的基因?yàn)橹斜磉_(dá)水平(1≤RPKM<10);18.37%的基因?yàn)榈捅磉_(dá)水平(0<RPKM<1),總體來說,基因在茶樹芽葉中表達(dá)量較為豐富。

    表2 不同亞家族CsGSTs基因的RPKM值分布

    亞家族中基因的表達(dá)量差異較大(圖1),大部分為中低表達(dá)水平。其中,以的RPKM值最高,在中黃2號對照組中甚至高達(dá)650,其次是、和。大部分基因在經(jīng)過遮蔭處理后,表達(dá)量均有一定程度的下降,如、和;、和的RPKM值在品種之間的差異明顯大于處理之間的差異,如在不同品種對照組間的表達(dá)差異達(dá)到6倍以上。

    CsGSTF亞家族的表達(dá)情況如圖2所示。其中以的表達(dá)量最高,4組數(shù)據(jù)中RPKM的平均值在470左右。中黃2號品種,大部分基因的表達(dá)量經(jīng)遮蔭處理后略有上升;而龍井43多數(shù)基因的表達(dá)量在遮蔭后則略有降低,尤其是,對照組與處理組的RPKM值相差3倍,說明茶樹基因的表達(dá)具有一定的品種差異。

    其他CsGSTs亞家族的表達(dá)情況如圖3所示。大部分基因?yàn)橹懈弑磉_(dá)水平,以MAPEG亞家族的表達(dá)量最高;GSTT亞家族中,的表達(dá)量最高,RPKM最大值約為50;DHAR亞家族中,最高,RPKM最大值接近100;而Z型和TCHQD型的RPKM值則相對較低;大部分基因在不同品種和處理之間的表達(dá)量變化較小,相對穩(wěn)定。

    2.2 CsGSTs的序列分析及聚類分析

    進(jìn)一步對RPKM最高值大于10且包含完整ORF閱讀框的19個基因進(jìn)行分析表明,(7個)和(5個)仍占主導(dǎo)地位(表3)。其中3個基因與AtGSTU19的序列相似度較高,說明這類基因可能在茶樹芽葉中具有重要作用。

    表3CsGSTs基因的RPKM值及BLASTX結(jié)果

    基于氨基酸序列對這19個基因進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析(圖4),結(jié)果與BLASTX分類結(jié)果基本一致。和被聚在相距較遠(yuǎn)的兩個分支中。除CsGSTT基因外,同屬一個亞家族的基因都聚在一起,說明不同亞家族基因之間的序列差異較大。

    2.3 CsGSTs基因的表達(dá)分析

    選取RPKM值較高的8個基因(CsGST8、、、、、、和),分別測定它們在龍井43不同葉位的表達(dá)量(圖5)。結(jié)果表明,這8個基因在一芽一葉到第六葉中均有表達(dá),但表達(dá)量及其變化規(guī)律不同。除和外,其他基因在一芽一葉中的表達(dá)量均小于在其他葉位的表達(dá)量。其中,的表達(dá)量隨葉片成熟度的增加明顯下降,在第四葉中的表達(dá)量只有一芽一葉的1%,第六葉中僅檢測到微量的表達(dá)。而的表達(dá)量變化規(guī)律則完全相反,隨著葉子成熟度的增加,表達(dá)量逐漸上升,第六葉中的表達(dá)量為一芽一葉的15.86倍。其他基因的表達(dá)規(guī)律并不明顯:除在第六葉中表達(dá)量略有下降外,總體有一定的上升趨勢;CsGST8與的表達(dá)量變化相對穩(wěn)定。、、的表達(dá)量變化規(guī)律相似,在第二葉或第四葉的表達(dá)量達(dá)到最高,整體呈波動變化。

    注:1代表一芽一葉;2代表第二葉;3代表第三葉;4代表第四葉;5代表第五葉;6代表第六葉。

    Notes:1 represents a bud with a leaf, 2 represents the second leaf, 3 represents the third leaf, 4 represents the fourth leaf, 5 represents the fifth leaf, 6 represents the sixth leaf.

    圖5在龍井43不同葉位的表達(dá)量

    Fig. 5 Relative expression ofin different leaf positions of Longjing43

    3 小結(jié)與討論

    本研究主要通過轉(zhuǎn)錄組測序、生物信息學(xué)分析和實(shí)時熒光定量PCR等試驗(yàn)對茶樹中基因進(jìn)行了篩選和分析。前期轉(zhuǎn)錄組測序篩選獲得了49個差異表達(dá)的基因,它們的表達(dá)量變化范圍較大(表2),同一基因在不同品種和處理之間的RPKM值也不盡相同(圖1~圖3)。大部分基因在經(jīng)遮蔭處理后的表達(dá)量有一定程度下降(圖1);而基因在不同品種中對遮蔭有不同的響應(yīng):中黃2號大多數(shù)基因的表達(dá)量在遮蔭后略有上升,而龍井43中基因的表達(dá)量在遮蔭后普遍降低(圖2);其他亞家族成員在不同品種和處理之間的表達(dá)量則相對穩(wěn)定(圖3)。

    部分基因的表達(dá)具有明顯的品種差異,尤其是,它在兩個品種之間的RPKM值相差6倍以上(圖1);qRT-PCR結(jié)果表明,基因的表達(dá)隨葉子成熟度的增加而顯著上升,一芽一葉與第六葉中的表達(dá)量甚至相差16倍。與擬南芥()的相似度達(dá)71%,研究表明,與植物抗脅迫能力緊密相關(guān),如抗旱和抗鹽脅迫[12-14]。一方面,可能作為抗氧化酶直接與活性氧(Reactive Oxygen Species, ROS)反應(yīng),減少細(xì)胞損傷[15],提高植物抗性;另一方面,還可能作為脅迫調(diào)控因子,當(dāng)植物受到脅迫時可激活脅迫響應(yīng)途徑,使相應(yīng)的抗氧化酶活性提高,間接參與植物抗脅迫反應(yīng)[14]??赡芘c的功能相似,通過減少ROS在植物體內(nèi)的積累,直接或間接參與植物抗逆反應(yīng)。

    而則對遮蔭處理較為敏感,與龍井43對照組相比,遮蔭組的RPKM值明顯下降(圖2)。qRT-PCR結(jié)果表明,基因的表達(dá)量隨葉子成熟度的增加而急劇下降,在第六葉中僅有微量表達(dá)。與擬南芥中的相似度最高,諸多研究表明,作為轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,可將花青素和原花青素從合成部位(主要是細(xì)胞質(zhì))運(yùn)至液泡并累積[16-18],這樣不僅能減少產(chǎn)物對反應(yīng)的抑制作用,促進(jìn)花青素和原花青素的合成,還可以減少類黃酮等次級代謝產(chǎn)物對細(xì)胞的毒害作用[19]。Hu等[20]發(fā)現(xiàn)荔枝()中(F型)也與花青素累積相關(guān)。茶樹體內(nèi)的多酚類主要集中分布在新梢生長旺盛的部分,也隨著葉子成熟度的增加而逐漸減少[21-23],這與的表達(dá)量變化規(guī)律也相對一致。此外,Wang等人的研究表明中黃2號中類黃酮如花青素和兒茶素的含量顯著低于龍井43[24],且經(jīng)遮蔭處理后,會促進(jìn)茶樹氮代謝,碳代謝相應(yīng)減弱,導(dǎo)致類黃酮途徑中多酚類含量降低[21],這與轉(zhuǎn)錄組測序中的RPKM值變化規(guī)律也相對一致。因此與功能相似,也可能作為轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白參與類黃酮物質(zhì)從細(xì)胞質(zhì)到液泡中的轉(zhuǎn)運(yùn)和累積,從而影響茶樹體內(nèi)花青素等類黃酮物質(zhì)的代謝。

    是僅有的MAPEG型的GST,表達(dá)量相對穩(wěn)定。目前,植物中的MAPEG蛋白大部分都具有谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶的活性[25],但難溶于水,與其他幾類可溶性GST蛋白相比,它在大部分植物中的酶活性相對較低[26]。因此,Basantani等[3]認(rèn)為在正常生長環(huán)境條件下,此類基因可能無明顯功能,但經(jīng)一定條件誘導(dǎo)后可發(fā)揮重要作用;的表達(dá)量變化也較小,與擬南芥AtGSTU17的序列相似度較高。AtGSTU17可通過影響谷胱甘肽庫的平衡來參與調(diào)節(jié)光信號傳導(dǎo)和植物生長發(fā)育等過程[27];Chen等[28]還發(fā)現(xiàn)在干旱和鹽脅迫中,AtGSTU17還可作為負(fù)調(diào)節(jié)因子,低表達(dá)量或基因缺失有利于提高植物抗性。與擬南芥中AtGSTF8的相似度最高。研究表明,在多種生物和非生物脅迫條件下,包括H2O2[29]、水楊酸[30]、生長素、除草劑和微生物侵染[31]等,AtGSTF8均可被誘導(dǎo)表達(dá),還可作為早期氧化脅迫反應(yīng)信號[32],參與植物抗氧化脅迫反應(yīng)。而、、雖然分別屬于DHAR型、Z型、T型,但表達(dá)規(guī)律相似,在第二葉和第四葉的表達(dá)量較高。植物中的DHAR型GST具有巰基轉(zhuǎn)移酶活性,可作為氧化還原酶參與抗壞血酸循環(huán)[33],水稻[34]和蝴蝶蘭[35]中的DHAR還與植物抗高溫脅迫有關(guān);Z型GST主要是作為馬來酰乙酰乙酸異構(gòu)酶,參與植物體內(nèi)酪氨酸代謝[36-37],此外,水稻中還可被茉莉酸誘導(dǎo),可能參與抗脅迫反應(yīng)[38];T型具有谷胱甘肽過氧化物酶活性,在植物抗氧化脅迫反應(yīng)中,可減少有機(jī)過氧化物的生成,減少細(xì)胞損傷[39]。

    由于是由眾多基因組成的龐大而復(fù)雜的家族,其編碼產(chǎn)物也具有多種功能。雖然家族成員之間存在著功能冗余的現(xiàn)象,但每一個基因在不同物種中可能都具有一定的特異性和特定的表達(dá)模式[40]。結(jié)合以上轉(zhuǎn)錄組測序和實(shí)時熒光定量PCR的結(jié)果,推測茶樹中的成員亦是如此:在不同茶樹品種、組織部位或不同處理下,即使同屬一個亞家族,不同基因之間的表達(dá)模式和功能也可能不盡相同。因此在茶樹中是否具有轉(zhuǎn)運(yùn)花青素或抗脅迫等類似功能,仍需進(jìn)一步研究。

    參考文獻(xiàn)

    [1] Mohsenzadeh S, Esmaeili M, Moosavi F, et al. Plant glutathione-transferase classification, structure and evolution [J]. African Journal of Biotechnology, 2011, 10(42): 8160-8165.

    [2] Shimabukuro RH, Swanson HR, Walsh WC. Glutathione conjugation: atrazine detoxification mechanism in corn [J]. Plant Physiology, 1970, 46(1): 103-107.

    [3] 馬立功, 孟慶林, 張勻華, 等. 向日葵谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶基因的克隆及抗病功能研究[J]. 中國油料作物學(xué)報, 2015, 37(5): 635-643.

    [4] Basantani M, Srivastava A. Plant glutathione transferases—a decade falls short [J]. Canadian Journal of Botany, 2007, 85(5): 443-456.

    [5] Dixon DP, Skipsey M, Edwards R. Roles for glutathione transferases in plant secondary metabolism [J]. Phytochemistry, 2010, 71(71): 338-350.

    [6] Bilang J, Sturm A. Cloning and characterization of a glutathione-transferase that can be photolabeled with 5-Azido-indole-3-acetic acid [J]. Plant Physiology, 1995, 109(1): 253-260.

    [7] Dixon DP, Lapthorn A, Madesis P, et al. Bingding and glutathione conjugation of porphyrinogens by plant glutathione transferases [J]. The Journal of Biological Chemistry, 2008, 283(29): 20268-20276.

    [8] Loyall L, Uchida K, Braun S, et al. Glutathione and a UV light-induced glutathione-transferases are involved in signaling to chalcone synthase in cell cultures [J]. Plant Cell, 2000, 12(10): 1939-1950.

    [9] Kampranis SC, Damianova R, Atallah M, et al. A novel plant glutathione-transferase/peroxidase suppresses bax lethality in yeast [J]. The Journal of Biological Chemistry, 2000, 275(38): 29207-29216.

    [10] 夏濤, 高麗萍. 類黃酮及茶兒茶素生物合成途徑及其調(diào)控研究進(jìn)展[J]. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué), 2009, 42(8): 2899-2908.

    [11] Wei K, Wang LY, Wu LY, et al. Transcriptome analysis of indole-3-butyric acid-induced adventitious root formation in nodal cuttings of(L.) [J]. PLoS ONE, 2014, 9(9): e107201.

    [12] Bianchi MW, Roux C, Vartanian N. Drought regulation of GST8, encoding the Arabidopsis homologue of ParC/Nt107 glutathione tranferase/peroxidase [J]. Physiologia plantarum, 2002, 116(1): 96-105.

    [13] Wagner U, Edwards R, Dixon DP, et al. Probing the diversity of the Arabidopsis glutathione-transferase gene family [J]. Plant Molecular Biology, 2002, 49(5): 515-532.

    [14] Xu J, Tian YS, Xing XJ, et al. Over-expression ofprovides tolerance to salt, drought and methy viologen stresses in Arabidopsis [J]. Physiologia Plantarum, 2015, 156(2): 164-175.

    [15] Jiang Y, Yang B, Harris NS, et al. Comparative proteomic analysis of Arabidopsis roots [J]. Journal of Experimental Botany, 2007, 58(13): 3591-3607.

    [16] Kitamura S, Shikazono N, Tanaka A. Transparent testa 19 is involved in the accumulation of both anthocyanins and proanthocyanidins in Arabidopsis [J]. The Plant Journal, 2004, 37(1): 104-114.

    [17] Sun Y, Li H, Huang JR. Arabidopsis TT19 function as a carrier to transport anthocyanin from the cytosol to tonoplasts [J]. Molecular Plant, 2012, 5(2): 387-400.

    [18] Li X, Gao P, Cui DJ, et al. The Arabidopsis tt19-4 mutant differentially accumulates proanthocyanidin and anthocyanin through a 3′amino acid substitution in glutathione-transferase [J]. Plant Cell and Environment, 2010, 34(3): 374-388.

    [19] Zhao J. Flavonoid transport mechanisms: how to go, and with whom [J]. Trends in Plant Science, 2015, 20(9): 576-585.

    [20] Hu B, Zhao J, Lai B, et al.is an anthocyanin-related glutathione-transferase gene in Litchi chinensis Sonn [J]. Plant Cell Rep, 2016. DOI: 10.1007/s00299-015-1924-4.

    [21] 宛曉春. 茶葉生物化學(xué)[M]. 北京: 中國農(nóng)業(yè)出版社, 2003: 132-140.

    [22] 張琳, 何曉葉, 李建科. 紫陽富硒地區(qū)茶葉中茶多酚及硒含量不同季節(jié)與葉片分布規(guī)律[J]. 農(nóng)產(chǎn)品加工, 2014, 10: 13-15.

    [23] 游見明, 曹新志. 福林酚法測定茶樹中茶多酚的分布水平[J]. 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué), 2013, 52(10): 2417-2419.

    [24] Wang L, Yue C, Cao HL, et al. Biochemical and transcriptome analysis of a novel chlorophyll-deficient chlorina tea plant cultivar [J]. BMC Plant Biology, 2014, 14(1): 1-13.

    [25] Bresell A, Weinander R, Lunsqvist G, et al. Bioinformatic and enzymatic characterization of the MAPEG superfamily [J]. FEBS Journal, 2005, 272(7): 1688-1703.

    [26] Pflugmacher S, Schroder P, Sandermann H Jr. Taxonomic distribution of plant glutathione-transferases acting on xenobiotics [J]. Phytochemistry, 2000, 54(3): 267-273.

    [27] Jiang HW, Liu MJ, Chen IC, et al. A glutathione-transferase regulated by light and hormones participates in the modulation of Arabidopsis seedling development [J]. Plant Physiology, 2010, 154(4): 1646-1658.

    [28] Chen JH, Jiang HW, Hsieh EJ, et al. Drought and salt stress tolerance of an Arabidopsis glutathione-transferase U17 knockout mutant are attributed to the combined effect of glutathione and abscisic acid [J]. Plant Physiology, 2012, 158(1): 340-351.

    [29] Chen WQ, Chao G, Singh KB. The promoter of a H2O2-inducible, Arabidopsis glutathione-transferase gene contains closely linked OBF- and OBP1-binding sites [J]. The Plant Journal, 1996, 10(6): 955-966.

    [30] Chen W, Singh KB. The auxin, hydrogen peroxide and salicylic acid induced expression of the Arabidopsis GST6 promoter is mediated in part by an ocs element [J]. The Plant Journal, 1999, 19(6): 667-677.

    [31] Kovtun Y, Chiu WL, Tena G, et al. Functional analysis of oxidative stress-activated mitogen-activated protein kinase cascade in plants [J]. Proc Natl Acad Sci, 2000, 97(6): 2940-2945.

    [32] Thatcher LF, Carrie C, Andersson CR, et al. Differential gene expression and subcellular targeting of Arabidopsis glutathione-transferase F8 is achieved through alternative transcription start sites [J]. The Journal of Biological Chemistry, 2007, 282(39): 28915-28928.

    [33] Dixon DP, Davis BG, Edwards R. Functional divergence in the glutathione transferase superfamily in plants [J]. The Journal of Biological Chemistry, 2002, 277(34): 30859-30869.

    [34] Urano J, Nakagawa T, Maki Y, et al. Molecular cloning and characterization of a rice dehydroascorbate reductase [J]. Federation of European Biochemical Societies, 2000, 466(1): 107-111.

    [35] Ali MB, Hahn EJ, Paek KY. Effects of temperature on oxidative stress defense systems, lipid peroxidation and lipoxygenase activity in[J]. Plant Physiology and Biochemistry, 2005, 43(3): 213-223.

    [36] Dixon DP, Cole DJ, Edwards R. Characterisation of a zeta class glutathione transferase fromwith a putative role in tyrosine catabolism [J]. Archives of Biochemistry and Biophysics, 2000, 384(2): 407-412.

    [37] Thom R, Dixon DP, Edwards R, et al. The structure of a zeta class glutathione-transferase from: characterisation of a GST with novel active-site architecture and a putative role in tyrosine catabolism [J]. Journal of Molecular Biology, 2001, 308(5): 949-962.

    [38] Tsuchiya T, Takesawa T, Kanzaki H, et al. Genomic structure and differential expression of two tandem-arranged GSTZ genes in rice [J]. Gene, 2004, 335(23): 141-149.

    [39] Reumann S, Quan S, Aung K, et al. In-depth proteome analysis ofleaf peroxisomes combined with in vivo subcellular targeting verification indicates novel metabolic and regulatory functions of peroxisomes [J]. Plant Physiology, 2009, 150(1): 125-143.

    [40] Sappl PG, Carroll AJ, Clifton R, et al. Theglutathione transferase gene family displays complex stress regulation and co-silencing multiple genes results in altered metabolic sensitivity to oxidative stress [J]. The Plant Journal, 2009, 58(1): 53-68.

    Analysis ofGenes in Tea Plant () Based on Transcriptome Analysis

    ZHANG Yazhen, WEI Kang*, WANG Liyuan, CHENG Hao

    Tea Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences; National Center for Tea Improvement; Key Laboratory of Tea Biology and Resources Utilization, Ministry of Agriculture, Hangzhou 310008, China

    Glutathione-transferases (GSTs) belong to a superfamily of multifunctional enzymes and are ubiquitous in plants. Forty ninegenes were identified by transcriptome analysis of Zhonghuang2 and Longjing43 under control and shading treatment. Nineteenwith relatively high expression levels in buds were used for sequence and phylogenetic tree analysis. Real-time fluorescence quantitative PCR (qRT-PCR) was performed to analyze the expression patterns of 8 candidate genes in different leaf positions of Longjing43. The results showed thatwere expressed in all tested leaves, but exhibited different expression patterns.showed an increasing expression from a bud with a leaf to the sixth leaf, suggesting a potential role in stress resistance. On the other hand, the expression level ofdropped significantly, suggesting thatmight participate in anthocyanin accumulation in tea plants.

    tea plant (), transcriptome analysis, GST, expression analysis

    S571.1;Q51

    A

    1000-369X(2016)05-513-10

    2016-04-14

    2016-05-20

    現(xiàn)代農(nóng)業(yè)(茶葉)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(CARS-23)、國家自然科學(xué)基金項目(31470396)、浙江省自然科學(xué)基金項目(LY14C020001)。

    張亞真,女,碩士研究生,主要從事茶樹分子生物學(xué)研究。

    weikang@tricaas.com

    猜你喜歡
    龍井谷胱甘肽花青素
    龍井問茶
    原花青素B2通過Akt/FoxO4通路拮抗內(nèi)皮細(xì)胞衰老的實(shí)驗(yàn)研究
    西湖龍井蝦仁
    花青素對非小細(xì)胞肺癌組織細(xì)胞GST-π表達(dá)的影響
    中成藥(2017年5期)2017-06-13 13:01:12
    蚯蚓谷胱甘肽轉(zhuǎn)硫酶分離純化的初步研究
    山楸梅漿果中花青素提取方法的優(yōu)化和測定
    中成藥(2016年8期)2016-05-17 06:08:41
    分光光度法結(jié)合抗干擾補(bǔ)償檢測谷胱甘肽
    原花青素對腦缺血再灌注損傷后腸道功能的保護(hù)作用
    TBBPA對美洲鰻鱺谷胱甘肽代謝相關(guān)指標(biāo)的影響
    湖畔品龍井 人在天上行
    觀察與思考(2014年4期)2014-02-27 10:52:39
    99精品在免费线老司机午夜| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 精品不卡国产一区二区三区| 久久精品91蜜桃| 欧美最新免费一区二区三区 | 日本免费a在线| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 嫩草影院精品99| 亚洲性夜色夜夜综合| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 国产一区在线观看成人免费| 男人舔女人下体高潮全视频| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 亚洲美女视频黄频| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 国产爱豆传媒在线观看| 成人国产一区最新在线观看| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 午夜福利18| 国产爱豆传媒在线观看| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 精华霜和精华液先用哪个| avwww免费| 99久久精品热视频| 国产成年人精品一区二区| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 天堂动漫精品| 天堂√8在线中文| 国产一区二区激情短视频| 香蕉丝袜av| 俺也久久电影网| 女警被强在线播放| 99久久精品国产亚洲精品| 欧美成人免费av一区二区三区| 国产精华一区二区三区| 亚洲人成电影免费在线| 日本一二三区视频观看| 无限看片的www在线观看| 欧美高清成人免费视频www| 亚洲无线观看免费| 成年版毛片免费区| 国产99白浆流出| 麻豆久久精品国产亚洲av| 午夜福利高清视频| 亚洲乱码一区二区免费版| 国产野战对白在线观看| 亚洲国产精品999在线| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 黄色女人牲交| 美女黄网站色视频| 国产精品三级大全| 51午夜福利影视在线观看| 一边摸一边抽搐一进一小说| 成年人黄色毛片网站| 精品一区二区三区视频在线 | av在线蜜桃| 午夜福利在线在线| 男女午夜视频在线观看| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 欧美av亚洲av综合av国产av| 伊人久久精品亚洲午夜| 国产亚洲欧美98| 国产精品免费一区二区三区在线| 欧美精品啪啪一区二区三区| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 免费看日本二区| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 一个人看视频在线观看www免费 | 亚洲欧美一区二区三区黑人| www.www免费av| 国产日本99.免费观看| www国产在线视频色| 日韩欧美国产在线观看| 欧美一级a爱片免费观看看| 啦啦啦韩国在线观看视频| netflix在线观看网站| 又黄又爽又免费观看的视频| 动漫黄色视频在线观看| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 男人舔女人下体高潮全视频| 又爽又黄无遮挡网站| 国产成人欧美在线观看| 国产成人a区在线观看| 成人永久免费在线观看视频| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产精品影院久久| 欧美又色又爽又黄视频| av欧美777| 久久精品影院6| 国产精品精品国产色婷婷| 天天躁日日操中文字幕| 国产成人影院久久av| 国产中年淑女户外野战色| 首页视频小说图片口味搜索| 日本在线视频免费播放| 丁香六月欧美| 亚洲最大成人中文| 天天一区二区日本电影三级| 国产99白浆流出| 亚洲国产精品999在线| 十八禁网站免费在线| 亚洲av第一区精品v没综合| 99在线视频只有这里精品首页| 老司机午夜十八禁免费视频| 日本三级黄在线观看| 中文字幕av在线有码专区| 国产探花极品一区二区| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 国产三级在线视频| 精品国产三级普通话版| 成人特级av手机在线观看| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 国产麻豆成人av免费视频| 亚洲第一电影网av| 中文字幕av在线有码专区| 又紧又爽又黄一区二区| 动漫黄色视频在线观看| 色噜噜av男人的天堂激情| 国产黄a三级三级三级人| 欧美激情在线99| 一级黄片播放器| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 日韩国内少妇激情av| 国产99白浆流出| 国产真实伦视频高清在线观看 | 国产激情偷乱视频一区二区| 亚洲欧美日韩东京热| 此物有八面人人有两片| 丰满人妻一区二区三区视频av | 午夜激情福利司机影院| 免费看日本二区| 看片在线看免费视频| 久久精品国产综合久久久| 国产视频一区二区在线看| 午夜福利欧美成人| 国产精品爽爽va在线观看网站| 成年人黄色毛片网站| 国产精品久久电影中文字幕| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 亚洲av一区综合| 精品欧美国产一区二区三| 精品久久久久久成人av| 波多野结衣巨乳人妻| 久久香蕉精品热| 搡老岳熟女国产| 久久久国产精品麻豆| 嫁个100分男人电影在线观看| 国产v大片淫在线免费观看| 亚洲人成网站高清观看| 少妇高潮的动态图| 村上凉子中文字幕在线| 亚洲av免费在线观看| 欧美成人性av电影在线观看| 黄色片一级片一级黄色片| 国产 一区 欧美 日韩| 亚洲午夜理论影院| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 男人舔女人下体高潮全视频| 国产精品一区二区三区四区久久| 色播亚洲综合网| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 在线播放无遮挡| 人妻夜夜爽99麻豆av| 成人三级黄色视频| 日韩欧美三级三区| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 成年免费大片在线观看| 看片在线看免费视频| 国产爱豆传媒在线观看| 欧美黑人欧美精品刺激| 国产高清有码在线观看视频| 久久久国产成人免费| xxx96com| 黄色日韩在线| 3wmmmm亚洲av在线观看| 亚洲性夜色夜夜综合| 欧美日韩福利视频一区二区| 精品国内亚洲2022精品成人| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| eeuss影院久久| 中文字幕熟女人妻在线| 一级作爱视频免费观看| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 日韩中文字幕欧美一区二区| www.色视频.com| 欧美成人a在线观看| 免费看日本二区| 一个人看视频在线观看www免费 | 日韩有码中文字幕| 在线观看免费午夜福利视频| 黄色片一级片一级黄色片| 欧美中文综合在线视频| 中文字幕av在线有码专区| 91久久精品电影网| 九色成人免费人妻av| 青草久久国产| 99热这里只有精品一区| 亚洲欧美日韩东京热| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 18禁国产床啪视频网站| 久久久久久久精品吃奶| 夜夜夜夜夜久久久久| 国产探花在线观看一区二区| 一区二区三区激情视频| 欧美黑人欧美精品刺激| 俺也久久电影网| 亚洲av电影不卡..在线观看| 特级一级黄色大片| 午夜免费成人在线视频| 色综合站精品国产| 99在线视频只有这里精品首页| 国产成人a区在线观看| 99久久成人亚洲精品观看| 搞女人的毛片| 成人国产一区最新在线观看| 国产成人福利小说| 麻豆国产av国片精品| 可以在线观看毛片的网站| 精品一区二区三区人妻视频| 欧美黑人欧美精品刺激| 国产精华一区二区三区| av黄色大香蕉| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 免费电影在线观看免费观看| 俺也久久电影网| 黑人欧美特级aaaaaa片| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 男人舔女人下体高潮全视频| 久久亚洲真实| 日韩欧美国产在线观看| 黄色成人免费大全| 99久久精品热视频| 日韩高清综合在线| www.熟女人妻精品国产| 国产精品98久久久久久宅男小说| 久久久久久久久大av| 久久九九热精品免费| 日本一本二区三区精品| 国产午夜福利久久久久久| 亚洲精品色激情综合| 好男人在线观看高清免费视频| 日日摸夜夜添夜夜添小说| av天堂在线播放| 九九热线精品视视频播放| 国产97色在线日韩免费| 欧美精品啪啪一区二区三区| 最新中文字幕久久久久| 欧美成人a在线观看| 天堂影院成人在线观看| 又紧又爽又黄一区二区| 18禁国产床啪视频网站| 久久午夜亚洲精品久久| 国产成人a区在线观看| 国产精品综合久久久久久久免费| 九色成人免费人妻av| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 香蕉久久夜色| 亚洲国产精品999在线| av视频在线观看入口| 日本在线视频免费播放| 熟女电影av网| 亚洲18禁久久av| 成人av在线播放网站| 国产激情欧美一区二区| 国产三级中文精品| 香蕉丝袜av| 欧美中文日本在线观看视频| 国产免费男女视频| 日韩成人在线观看一区二区三区| 性色av乱码一区二区三区2| 亚洲av不卡在线观看| 少妇熟女aⅴ在线视频| 此物有八面人人有两片| 亚洲无线在线观看| 国产精品亚洲av一区麻豆| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 悠悠久久av| 午夜福利免费观看在线| 免费在线观看成人毛片| 91九色精品人成在线观看| 国产一区在线观看成人免费| 色播亚洲综合网| 国产在视频线在精品| 久久香蕉精品热| 97超视频在线观看视频| 国产淫片久久久久久久久 | 老鸭窝网址在线观看| 国产精品 欧美亚洲| 又紧又爽又黄一区二区| 久久久久久久久久黄片| 精品一区二区三区视频在线 | 淫秽高清视频在线观看| 夜夜夜夜夜久久久久| 欧美日韩精品网址| 精品乱码久久久久久99久播| 国产真实乱freesex| netflix在线观看网站| 美女大奶头视频| 十八禁人妻一区二区| 国产精品电影一区二区三区| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 99热这里只有精品一区| 日本黄色视频三级网站网址| 有码 亚洲区| 成人鲁丝片一二三区免费| 欧美最新免费一区二区三区 | 国产野战对白在线观看| 免费人成视频x8x8入口观看| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 亚洲专区中文字幕在线| 18禁美女被吸乳视频| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 久久午夜亚洲精品久久| 91在线观看av| 成人国产一区最新在线观看| 日本a在线网址| 九色国产91popny在线| 亚洲精品在线观看二区| 亚洲av第一区精品v没综合| 亚洲av成人精品一区久久| 搡老岳熟女国产| 亚洲精华国产精华精| 欧美最黄视频在线播放免费| 亚洲精品在线观看二区| 欧美成人性av电影在线观看| 久久久精品大字幕| 日本与韩国留学比较| 色播亚洲综合网| 亚洲人成网站在线播| 日韩欧美 国产精品| 天天添夜夜摸| 亚洲av电影不卡..在线观看| 全区人妻精品视频| 少妇的逼好多水| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 无限看片的www在线观看| 色综合亚洲欧美另类图片| 可以在线观看的亚洲视频| 欧美日韩国产亚洲二区| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 亚洲欧美日韩高清专用| 伊人久久精品亚洲午夜| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 精品欧美国产一区二区三| 91九色精品人成在线观看| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 嫁个100分男人电影在线观看| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 在线观看一区二区三区| 俺也久久电影网| 亚洲一区二区三区不卡视频| 国产91精品成人一区二区三区| bbb黄色大片| 婷婷亚洲欧美| 国产精品免费一区二区三区在线| 三级毛片av免费| 婷婷精品国产亚洲av| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲av电影不卡..在线观看| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 乱人视频在线观看| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 久久精品影院6| 亚洲avbb在线观看| 我的老师免费观看完整版| av在线天堂中文字幕| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 日本黄色视频三级网站网址| 丰满的人妻完整版| 亚洲人成伊人成综合网2020| 一个人看的www免费观看视频| 国产高清视频在线观看网站| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 女同久久另类99精品国产91| 精品久久久久久久毛片微露脸| svipshipincom国产片| 精品人妻偷拍中文字幕| 日韩av在线大香蕉| 一级毛片女人18水好多| 男女下面进入的视频免费午夜| 欧美日韩一级在线毛片| 少妇熟女aⅴ在线视频| 国产成人福利小说| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 成年女人看的毛片在线观看| 69人妻影院| 一级毛片高清免费大全| 亚洲美女视频黄频| 熟女人妻精品中文字幕| 国产精品久久久久久久电影 | 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 国产 一区 欧美 日韩| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 国产精品 国内视频| 99久久99久久久精品蜜桃| 丰满的人妻完整版| 久99久视频精品免费| 国产免费男女视频| АⅤ资源中文在线天堂| 成人亚洲精品av一区二区| 国产精品影院久久| 久久九九热精品免费| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 国产一区二区激情短视频| 欧美国产日韩亚洲一区| 此物有八面人人有两片| 俺也久久电影网| 99国产精品一区二区三区| 岛国视频午夜一区免费看| 国产成人欧美在线观看| av在线蜜桃| 亚洲av熟女| 波多野结衣巨乳人妻| 草草在线视频免费看| 黄色片一级片一级黄色片| www日本在线高清视频| 久久中文看片网| 国产精品嫩草影院av在线观看 | ponron亚洲| 中国美女看黄片| 久久人妻av系列| 波多野结衣高清无吗| 黄片大片在线免费观看| 欧美大码av| 人妻夜夜爽99麻豆av| 一区二区三区免费毛片| 又黄又粗又硬又大视频| 少妇的逼好多水| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 国产av在哪里看| 国产麻豆成人av免费视频| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 深爱激情五月婷婷| 亚洲在线观看片| 欧美av亚洲av综合av国产av| 国产欧美日韩一区二区精品| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 国产欧美日韩一区二区三| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 给我免费播放毛片高清在线观看| 最新美女视频免费是黄的| 国产不卡一卡二| 很黄的视频免费| 国产免费一级a男人的天堂| 国产高清有码在线观看视频| 看片在线看免费视频| 欧美黑人欧美精品刺激| 黄色丝袜av网址大全| 精品久久久久久,| 欧美色欧美亚洲另类二区| 日韩免费av在线播放| 午夜精品在线福利| 九九在线视频观看精品| 午夜精品久久久久久毛片777| 一级黄片播放器| 国产99白浆流出| 一边摸一边抽搐一进一小说| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 天天添夜夜摸| 国产av麻豆久久久久久久| 久久精品国产清高在天天线| 91麻豆av在线| 在线观看av片永久免费下载| 亚洲最大成人手机在线| 国产精品99久久久久久久久| 国产黄a三级三级三级人| 久久国产精品人妻蜜桃| 少妇丰满av| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 嫩草影视91久久| 欧美色视频一区免费| 亚洲中文字幕日韩| 一个人观看的视频www高清免费观看| 国产成+人综合+亚洲专区| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 国产激情欧美一区二区| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 亚洲片人在线观看| 亚洲精品456在线播放app | 一级作爱视频免费观看| 成年女人看的毛片在线观看| 日韩欧美精品免费久久 | 一级黄色大片毛片| 亚洲av熟女| 国产午夜精品论理片| 久久久久久大精品| 成人欧美大片| 哪里可以看免费的av片| 高清在线国产一区| 午夜a级毛片| 老司机福利观看| 波多野结衣高清无吗| 操出白浆在线播放| 在线观看av片永久免费下载| 亚洲欧美日韩高清专用| 身体一侧抽搐| 免费观看的影片在线观看| 欧美日韩综合久久久久久 | 美女高潮的动态| 好男人电影高清在线观看| 好男人在线观看高清免费视频| 熟女电影av网| 日日干狠狠操夜夜爽| 欧美乱色亚洲激情| 亚洲av电影在线进入| a级一级毛片免费在线观看| 波多野结衣高清作品| 亚洲第一电影网av| 国产精品av视频在线免费观看| 日本在线视频免费播放| 婷婷六月久久综合丁香| 国产单亲对白刺激| 亚洲国产精品sss在线观看| 美女高潮的动态| 亚洲国产精品sss在线观看| 99久久综合精品五月天人人| 丁香欧美五月| 可以在线观看的亚洲视频| 久久精品91蜜桃| 日本 欧美在线| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 久久亚洲真实| 国语自产精品视频在线第100页| 亚洲七黄色美女视频| 欧美精品啪啪一区二区三区| 99国产精品一区二区蜜桃av| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 国产黄色小视频在线观看| 国产毛片a区久久久久| 日本a在线网址| 国内精品一区二区在线观看| 欧美zozozo另类| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 亚洲av第一区精品v没综合| 亚洲欧美日韩东京热| 99国产综合亚洲精品| 免费av观看视频| 欧美黄色片欧美黄色片| 天堂影院成人在线观看| 国产91精品成人一区二区三区| 99久久成人亚洲精品观看| 国产一区在线观看成人免费| 一级黄片播放器| 大型黄色视频在线免费观看| 热99re8久久精品国产| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| bbb黄色大片| 国产av在哪里看| 欧美3d第一页| 少妇人妻一区二区三区视频| 91麻豆av在线| 啦啦啦免费观看视频1| 中文字幕精品亚洲无线码一区| ponron亚洲| 免费在线观看亚洲国产| 日本五十路高清| www国产在线视频色| www日本黄色视频网| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 在线播放国产精品三级| 热99在线观看视频| 欧美中文综合在线视频| 午夜免费观看网址| 亚洲av成人精品一区久久| АⅤ资源中文在线天堂| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 麻豆一二三区av精品| 天堂√8在线中文| 中文字幕av在线有码专区| 露出奶头的视频| 日韩大尺度精品在线看网址| 成年女人永久免费观看视频| 免费一级毛片在线播放高清视频| 欧美性猛交黑人性爽| 在线观看舔阴道视频| 天美传媒精品一区二区| 国产亚洲精品一区二区www| 欧美zozozo另类| 九九在线视频观看精品| 精品欧美国产一区二区三| 97碰自拍视频| 国产精品亚洲av一区麻豆| 啦啦啦免费观看视频1| 亚洲国产精品久久男人天堂| 黄片小视频在线播放| 99热精品在线国产| 叶爱在线成人免费视频播放| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 色精品久久人妻99蜜桃| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 欧美日韩一级在线毛片| 日韩精品青青久久久久久| 又爽又黄无遮挡网站| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 日本一本二区三区精品| 国产一区二区在线av高清观看| 欧美高清成人免费视频www| 性色av乱码一区二区三区2| 国产伦在线观看视频一区| а√天堂www在线а√下载| 黄色日韩在线| 午夜老司机福利剧场| 久久久久久九九精品二区国产| 少妇的逼好多水| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 香蕉丝袜av| 免费无遮挡裸体视频| 1024手机看黄色片| 精品人妻1区二区| 国产精品 欧美亚洲|