普洱茶茶褐素對(duì)大鼠尿液影響的代謝組學(xué)研究

劉建，彭春秀，盛軍，高斌，龔加順*

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普洱茶茶褐素對(duì)大鼠尿液影響的代謝組學(xué)研究

劉建1，彭春秀2，盛軍1，高斌1，龔加順1*

1. 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院，云南昆明 650201；2. 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)園林園藝學(xué)院，云南昆明 650201

本研究采用核磁共振（NMR）代謝組學(xué)法研究普洱茶茶褐素（TB，分子量>50?kDa）對(duì)大鼠尿液代謝的影響。將實(shí)驗(yàn)大鼠分為正常對(duì)照組、正常+TB組、高脂組和高脂+TB組，以生物核磁共振技術(shù)結(jié)合正交偏最小二乘-判別分析（OPLS-DA）研究灌胃高劑量普洱茶茶褐素后大鼠尿液內(nèi)源性代謝物的變化。結(jié)果表明，正常+TB組與正常對(duì)照組，高脂+TB組與高脂組的尿液代謝譜有明顯差異；篩選出纈氨酸、檸檬酸、牛磺酸、丙酸鹽、α-酮戊二酸、β-羥基丁酸等6種普洱茶茶褐素標(biāo)志性代謝物；普洱茶茶褐素對(duì)大鼠尿液的影響可能涉及到氨基酸代謝、能量代謝、三羧酸循環(huán)、脂類代謝和氧化應(yīng)激反應(yīng)。

茶褐素；代謝組學(xué)；核磁共振

普洱茶是以云南大葉種茶樹的鮮葉經(jīng)殺青、揉捻、日曬等工序制成的曬青綠毛茶為原料，再經(jīng)發(fā)酵、蒸壓、成型工藝制成的各種形狀的成品茶[1]。研究表明，普洱茶有較為明顯的降脂、降糖、防止動(dòng)脈硬化等功效[2-4]。普洱茶中主要功能活性來源于茶多酚以及茶色素，茶色素可以分為茶黃素、茶紅素和茶褐素，其中以茶褐素的含量最高，可達(dá)17%[5-6]。目前公認(rèn)茶褐素是一類分子差異極大的復(fù)雜的高聚合物，不溶于氯仿、乙酸乙酯以及正丁醇，且茶褐素中含有相當(dāng)數(shù)量的蛋白質(zhì)、糖類、酸類物質(zhì)（包括羧酸基以及酚羥基）[7-8]。

茶褐素是普洱茶重要的活性物質(zhì)，已有多篇文獻(xiàn)報(bào)道普洱茶茶褐素具有降脂減肥的功效[9-10]。陳婷等[11]研究表明，茶褐素能減少肝臟脂肪沉積，具有預(yù)防實(shí)驗(yàn)動(dòng)物脂肪肝形成的作用。與陳婷的研究結(jié)果相同，王秋萍等[12]以水提醇沉法制備紫娟普洱茶茶褐素飼喂大鼠，發(fā)現(xiàn)該茶褐素不僅能減少肝臟脂肪沉積，而且可以顯著抑制大鼠體重的增長速度。高斌等[13]研究發(fā)現(xiàn)，普洱茶茶褐素可顯著增強(qiáng)大鼠肝臟和附睪脂肪組織HSL活性及其mRNA的表達(dá)，對(duì)大鼠降血脂效果明顯。

普洱茶茶褐素如何在生物體內(nèi)吸收、代謝以及發(fā)生降血脂功效等情況尚不清楚。代謝組學(xué)是一種系統(tǒng)研究生物體內(nèi)代謝物的組學(xué)方法，可以從整體上把握生物體內(nèi)源性代謝產(chǎn)物的變化及其發(fā)展規(guī)律，能夠全面、即時(shí)地反映機(jī)體的變化信息[14]，以核磁共振（NMR）為基礎(chǔ)的代謝組分析技術(shù)已得到快速發(fā)展和較為廣泛的應(yīng)用[15-16]。本文通過水提醇沉法提取普洱茶茶褐素并灌胃大鼠，采用基于1H-NMR的代謝組學(xué)技術(shù)，檢測(cè)不同組別的大鼠尿液內(nèi)源性代謝物的變化，為研究普洱茶在體內(nèi)的降血脂作用機(jī)制提供新的思路。

1 材料與方法

1.1 主要試劑和儀器

普洱茶（大益牌，一級(jí)茶），購自云南大益茶業(yè)集團(tuán)有限公司；乙醇（純），D2O購自美國默克試劑公司，水為自制純凈水。MSC300超濾杯，上海靡速科技器材有限公司；FD-1PF真空冷凍干燥機(jī)，北京德天佑科技發(fā)展有限公司；RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮儀器廠；AVANCE 500核磁共振儀，德國BRUKER公司；CT15RE冷凍離心機(jī)，日本HITACHI公司；－80℃冰箱，美國Thermo Scientific公司。

1.2 普洱茶茶褐素的制備

普洱茶茶褐素參考楊大鵬[17]、王秋萍等[12]的制備方法，具體如下：取茶樣加入10倍蒸餾水浸提2次（70℃，0.5?h），過濾后合并濾液、減壓濃縮（65℃，0.07?MPa），再加乙醇醇沉6?h [（濾液）∶（無水乙醇）=1∶4]，離心（4?000?r·min-1, 20?min），收集沉淀，加蒸餾水溶解進(jìn)行超濾（膜孔徑5?nm），最后將濾液真空冷凍干燥，得到普洱茶茶褐素（分子量>50?kDa）。

該茶褐素呈黑褐色，細(xì)沙狀小顆粒，易溶于水。通過600℃下的CP-GC-MS分析顯示，含N-類化合物：18.42%；有機(jī)烴類：18.18%；酯類：16.2%；酚類：12.63%；生物堿：9.41%；醇類：7.4%；呋喃類：7.2%；酸類：4.82%；酮類：1.82%；其他：3.92%。

1.3 灌胃劑量的確定

龔加順等[6]研究發(fā)現(xiàn)，受試物的LD50＞10?g·kg-1（95%可信限），屬實(shí)際無毒級(jí)物質(zhì)。根據(jù)敬明武等[18]報(bào)道，茶色素的人體推薦量為45?mg·kg-1。按《保健食品評(píng)價(jià)程序和檢驗(yàn)方法》的要求，設(shè)高?中?低3個(gè)劑量組[19]，其中1個(gè)劑量組是人體可能攝入量的5~10倍，最高不超過30倍。因此本實(shí)驗(yàn)將人體推薦量的3倍設(shè)為低劑量，中、高劑量分別為人體推薦攝入量的9倍、27倍，即135?mg·kg-1、405?mg·kg-1、1215?mg·kg-1。最后本試驗(yàn)采用高劑量即1215?mg·kg-1且分子量大于50?kDa的茶褐素。

1.4 動(dòng)物分組和處理

基礎(chǔ)飼料由昆明醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，配方為：玉米350?g·kg-1、麥麩250?g·kg-1、豆粕250?g·kg-1、魚粉?80g·kg-1、酵母20?g·kg-1、骨粉20?g·kg-1、乳清粉10?g·kg-1、鹽5?g·kg-1、菜油5?g·kg-1、礦物添加劑1?g·kg-1、復(fù)合維生素0.3?g·kg-1、蛋氨酸1.3?g·kg-1、賴氨酸0.7?g·kg-1和魚肝油0.5?g·kg-1；高脂飼料配方來源于《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》[19]，配方為：基礎(chǔ)飼料78.8%、熟豬油10.0%、蛋黃粉10.0%、膽固醇1.0%、膽鹽0.2%。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由昆明醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（許可證號(hào)：SYXKX（滇2011-0004）），選擇健康成年雄性SD大鼠，體質(zhì)量180~200?g。將20只大鼠置于簡易代謝籠中，室內(nèi)保持12?h光照，12?h避光循環(huán)飼養(yǎng)，自由攝食，自由飲水。每天定時(shí)通風(fēng)，環(huán)境溫度控制在(20±2)℃，濕度45%~60%。

所有大鼠飼喂基礎(chǔ)飼料1周以適應(yīng)環(huán)境和飼喂方式，1周后根據(jù)大鼠體質(zhì)量水平，隨機(jī)分為4組，每組5只大鼠，分別為正常對(duì)照組、正常+TB組、高脂組、高脂+TB組。適應(yīng)期結(jié)束后進(jìn)入為期14?d的干預(yù)期，前兩組給予基礎(chǔ)飼料，后兩組給予高脂飼料。其中，正常+TB組和高脂+TB組按照設(shè)計(jì)劑量每日經(jīng)口灌胃茶褐素，其他組別均給予相同劑量蒸餾水灌胃。具體分組見表1。

表1 試驗(yàn)大鼠組別設(shè)計(jì)

干預(yù)期14?d結(jié)束時(shí)，收集每只大鼠第14天24?h內(nèi)的尿液，3?000?r·min-1低速離心15?min，用移液槍吸取上層尿液分裝于離心管中并放入－80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 尿液的1H-NMR分析

將尿液取出解凍，取尿樣0.5?mL置離心管中，1?2000?r·min-1離心10?min。取上清液300?μL加入5?mm核磁管中，再加入30?μL重水混合均勻，進(jìn)行1H-NMR測(cè)定。以肌酐甲基峰化學(xué)位移3.10為內(nèi)標(biāo)，采用Noesygpprld脈沖序列，參數(shù)如下：譜寬8?000?Hz，累積掃描32次，采樣點(diǎn)數(shù)64?000，采樣時(shí)間4?s，弛豫延遲8?s，試驗(yàn)溫度300?K。自由感應(yīng)衰減信號(hào)（FID）經(jīng)過傅立葉轉(zhuǎn)換后為一維NMR譜圖，利用MestReNova 6.1軟件對(duì)1H-NMR譜進(jìn)行相位矯正和基線矯正，經(jīng)相位和基線校正后，去除水峰4.3~6.0，然后將譜圖中0.2~4.3的譜峰，以每段0.02?mg·kg-1的寬度進(jìn)行分段積分，將積分?jǐn)?shù)據(jù)按每一張譜的總積分歸一化，以文本文件或Excel文件貯存，用于多元統(tǒng)計(jì)分析。

1.6 數(shù)據(jù)處理和分析

將所得積分?jǐn)?shù)據(jù)輸入SIMCA-P+12.0軟件，進(jìn)行平均中心化（Mean centering）和Pareto定標(biāo)（Pareto scaling），利用正交偏最小二乘-判別分析（OPLS-DA）等分析方法進(jìn)行分析。根據(jù)變量投影重要性（Variable importance in the projection, VIP）值、化學(xué)位移值以及Chenomx NMR suite 7.5數(shù)據(jù)庫對(duì)主要代謝物的化學(xué)位移進(jìn)行歸屬，VIP>1且具有統(tǒng)計(jì)意義的變量被認(rèn)為是對(duì)模型有顯著貢獻(xiàn)的潛在生物標(biāo)志物。將潛在生物標(biāo)志物輸入KEGG數(shù)據(jù)庫查找代謝物涉及的代謝途徑。采用檢驗(yàn)考察代謝物組間差異的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)采用SPSS (version 19.0S, Beijing Stats Data Mining Co. Ltd., China) 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±SD）表示。

2 結(jié)果與分析

2.1大鼠尿液1H-NMR圖譜的變化

尿液等終端代謝物是機(jī)體各種細(xì)胞、組織和器官功能變化的綜合反映，尿液的組成及其代謝物的濃度受機(jī)體各系統(tǒng)功能狀態(tài)的直接影響，反映機(jī)體的代謝狀況[20]。

不同組別大鼠尿液1H-NMR譜見圖1，利用library of the Chenoms NMR suite 7.5，并根據(jù)相關(guān)參考文獻(xiàn)[21-24]對(duì)主要代謝物的化學(xué)位移進(jìn)行歸屬，圖1中包含了7種內(nèi)源性代謝物，分別為丙酸鹽、β-羥基丁酸鹽、氧化三甲胺、牛磺酸、肌酸、α-酮戊二酸和檸檬酸。與正常對(duì)照組相比，正常+TB組的圖譜直接觀察變化不大，而高脂組和高脂+TB組均可看到明顯變化。通過目測(cè)很難得出不同組別大鼠尿液代謝物的具體差異，為尋找大鼠尿液的細(xì)微成分變化，通過正交偏最小二乘-判別分析（OPLS-DA）對(duì)圖譜數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，詳細(xì)研究茶褐素對(duì)大鼠尿液內(nèi)源代謝物的影響。

注：A-正常對(duì)照組，B-正常+TB組，C-高脂組，D-高脂+TB組。

2.2 大鼠尿液OPLS-DA分析

試驗(yàn)所建立的OPLS-DA模型的得分圖、載荷圖、S-圖如圖2所示。模型參數(shù)R2Y用來衡量已建立的模型對(duì)包含分類變量的Y矩陣的解釋能力，Q2表征模型對(duì)Y矩陣的預(yù)測(cè)能力[25]。試驗(yàn)所建立的OPLS-DA模型的R2Y、Q2值列于圖2中，兩組模型擬合效果較好，有良好的預(yù)測(cè)能力。

注：正常對(duì)照組和正常+TB組比較（A：得分圖，B：載荷圖，C:S-plot圖），高脂組和高脂+TB組比較（D：得分圖，E：載 荷圖，F(xiàn):S-plot圖）。正常對(duì)照組與高脂組為對(duì)照組，載荷圖中數(shù)字代表化學(xué)位移，紅色方框代表VIP值>1的化學(xué)位移。

根據(jù)得分矩陣主成分1可以區(qū)分正常+TB組和正常對(duì)照組，高脂+TB組和高脂組，對(duì)應(yīng)積分矩陣圖可見積分值集中分布于散點(diǎn)圖的橢圓內(nèi)（95％可信區(qū)間），不存在特異點(diǎn)，兩組的分布區(qū)域完全分開，說明普洱茶茶褐素對(duì)飼喂不同飼料的大鼠尿液均產(chǎn)生了影響。相應(yīng)的OPLS-DA載荷圖和S-plot圖，其中每個(gè)點(diǎn)代表1個(gè)譜峰段。通常在樣本分組方向上如果譜峰段偏離零點(diǎn)越遠(yuǎn)，表明這個(gè)譜峰段對(duì)分類的貢獻(xiàn)越大，越有可能是潛在的特征代謝物，部分相關(guān)代謝物見圖2載荷圖中標(biāo)注。

2.3 茶褐素對(duì)尿液內(nèi)源性化合物的影響

在OPLS-DA模型中得出的與茶褐素代謝相關(guān)度較高的化合物，其濃度變化以及VIP （Variable importance in the projection）值列于表2。VIP值大于1的代謝物被認(rèn)為是對(duì)組別分類貢獻(xiàn)較大的物質(zhì)，VIP值越大，貢獻(xiàn)越大。從表2可以看出，正常對(duì)照組和高脂組大鼠分別灌胃普洱茶茶褐素后，有多種代謝物發(fā)生明顯變化。正常對(duì)照組和正常+TB組比較中，丙酸鹽、蛋氨酸、α-酮戊二酸、檸檬酸、牛磺酸等對(duì)兩組差異貢獻(xiàn)較大。高脂組和高脂+TB組比較中，纈氨酸、β-羥基丁酸鹽、α-酮戊二酸、檸檬酸、?；撬?、甘氨酸等對(duì)兩組差異貢獻(xiàn)較大。這些代謝物涉及到的代謝途徑主要包括氨基酸代謝、能量代謝、三羧酸循環(huán)和氧化應(yīng)激等。

表2 Chenomx NMR Suite確認(rèn)的尿液樣品中代謝物質(zhì)

注：s為單峰，d為雙重峰，t為三重峰，m為多重峰，dd為2×2峰?！硎驹黾?，↑↑表示相對(duì)于對(duì)照組顯著增加（<0.05）；↓表示降低，↓↓表示相對(duì)于對(duì)照組顯著降低（<0.05），正常對(duì)照組和高脂組為對(duì)照組。

Note: s, d, t, m, dd represent single peak, double peaks, triple peaks, multiple peaks and 2×2 peaks, respectively. Metabolites marked with ↑ are increased and those marked with ↑↑ are significantly increased in comparison to the control (<0.05). Metabolites marked with ↓ are decreased and those marked with ↓↓ are significantly decreased in comparison to the respective group (<0.05), before vs is the comparative group.

2.4不同組別大鼠尿液中的差異代謝物

采用SPSS軟件對(duì)上述貢獻(xiàn)較大的代謝物進(jìn)一步處理，圖3為經(jīng)過檢驗(yàn)的差異代謝物在4組大鼠尿液中的含量比較。相對(duì)于正常對(duì)照組，正常+TB組大鼠尿液中丙酸鹽顯著升高（<0.05），α-酮戊二酸、檸檬酸、?；撬犸@著降低（<0.05）；相對(duì)于高脂組，高脂+TB組大鼠尿液中纈氨酸、α-酮戊二酸、檸檬酸、β-羥基丁酸鹽顯著升高（<0.05）；?；撬犸@著降低（<0.05）；相對(duì)于正常對(duì)照組，高脂組大鼠尿液中丙酸鹽、α-酮戊二酸顯著升高（<0.05），纈氨酸、牛磺酸顯著降低（<0.05）；相對(duì)于正常+TB組，高脂+TB組大鼠尿液中檸檬酸、α-酮戊二酸、β-羥基丁酸鹽顯著升高（<0.05），?；撬犸@著降低（<0.05）。

注：同一化合物對(duì)應(yīng)的組別小寫字母不同，代表差異顯著，P<0.05。

3 討論

自1999年以來，基于相關(guān)儀器和分析技術(shù)的快速提升，代謝組學(xué)研究發(fā)展迅速，發(fā)表的相關(guān)科學(xué)文獻(xiàn)和綜述的數(shù)量呈指數(shù)上升趨勢(shì)[26-28]。本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用1H-NMR代謝組學(xué)技術(shù)對(duì)灌胃普洱茶茶褐素（TB）后大鼠尿液中內(nèi)源性代謝產(chǎn)物的變化及其降血脂機(jī)制進(jìn)行探討。

由試驗(yàn)可知，不同組別大鼠尿液的核磁氫譜有一定差別，經(jīng)過OPLS-DA的進(jìn)一步分析和篩選，發(fā)現(xiàn)纈氨酸、丙酸鹽等代謝物的不同變化和涉及到的代謝途徑。最后經(jīng)過檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，確定纈氨酸、檸檬酸、?；撬帷⒈猁}、α-酮戊二酸、β-羥基丁酸為主要的差異代謝物。

已知丙酸鹽具有抑制膽固醇合成的功能[29]。據(jù)研究表明，乳酸鹽、丙酸鹽和氨基酸的增加有利于丙酮酸鹽的產(chǎn)生[30]。Stanko等[31]考察了丙酮酸鹽對(duì)身體的影響，結(jié)果顯示人體補(bǔ)充丙酮酸鹽后，脂肪消耗有明顯的增加趨勢(shì)。尿液中的檸檬酸、α-酮戊二酸是三羧酸循環(huán)的重要中間產(chǎn)物。由草酰乙酸和乙酰CoA合成檸檬酸是三羧酸循環(huán)的重要調(diào)節(jié)點(diǎn)，由檸檬酸經(jīng)脫氫脫羧后生成α-酮戊二酸，是三羧酸循環(huán)中的限速步驟。

纈氨酸是人體必需的8種氨基酸和生糖氨基酸之一，牛磺酸是一種由胱氨酸轉(zhuǎn)化而來的含硫的β-氨基酸，這兩種氨基酸都能調(diào)節(jié)血糖，促進(jìn)肌細(xì)胞對(duì)葡萄糖和氨基酸的攝取和利用。其中，?；撬徇€可以加速糖酵解，增加糖原異生[32]。?；撬崤c膽酸結(jié)合成?；悄懰幔瑓⑴c脂類的消化吸收[33]。同時(shí)有報(bào)道指出，高脂飲食動(dòng)物由于肝內(nèi)膽固醇堆積造成?；撬峤Y(jié)合的膽汁酸排泄增加，導(dǎo)致尿中?；撬釡p少[34]。Gong等[3]發(fā)現(xiàn)普洱茶茶褐素不僅可以促進(jìn)膽固醇的轉(zhuǎn)化，還可以促進(jìn)大鼠體內(nèi)膽固醇的排泄。β-羥基丁酸鹽是肝臟內(nèi)脂肪酸氧化的一種產(chǎn)物，Thiess等[35]發(fā)現(xiàn)高脂飲食條件下，貓血清中β-羥基丁酸鹽和膽固醇等顯著升高。牛磺酸和β-羥基丁酸鹽的變化表明了氧化應(yīng)激的產(chǎn)生[36-37]。

丙酸鹽、檸檬酸和α-酮戊二酸涉及到能量代謝，正常+TB組相對(duì)于正常對(duì)照組，丙酸鹽、檸檬酸和α-酮戊二酸都有顯著變化，說明正常飲食條件下，茶褐素會(huì)影響大鼠體內(nèi)的能量代謝；高脂+TB組相對(duì)于高脂組，α-酮戊二酸、檸檬酸顯著升高（<0.05），與正常+TB組對(duì)比正常對(duì)照組的變化不同，有可能是高脂飼料的飼喂條件下，茶褐素加速了大鼠體內(nèi)三羧酸循環(huán)過程，產(chǎn)生了更多的能量進(jìn)行脂肪代謝。

正常+TB組相對(duì)于正常對(duì)照組，高脂+TB組相對(duì)于高脂組的牛磺酸含量均顯著減少（<0.05），很有可能是茶褐素調(diào)節(jié)?；撬岣嗟嘏c膽酸結(jié)合，消化吸收脂類成分。高脂+TB組相對(duì)于高脂組，β-羥基丁酸鹽含量顯著升高（<0.05），這可能與茶褐素調(diào)節(jié)大鼠體內(nèi)脂肪酸代謝有關(guān)。此外，高脂+TB組大鼠尿液中纈氨酸含量相對(duì)于高脂組顯著升高（<0.05），反映出高脂飲食條件下，普洱茶茶褐素可以調(diào)節(jié)大鼠體內(nèi)的氨基酸代謝。

4結(jié)論

本文利用基于1H-NMR的代謝組學(xué)技術(shù)，探討了普洱茶茶褐素對(duì)大鼠尿液代謝產(chǎn)物的影響及其降血脂機(jī)制。篩選出纈氨酸、檸檬酸、?；撬?、丙酸鹽、α-酮戊二酸、β-羥基丁酸為普洱茶茶褐素在大鼠體內(nèi)的標(biāo)志性代謝物。普洱茶茶褐素通過這些代謝物，影響到大鼠機(jī)體的氨基酸代謝、能量代謝、脂類代謝和三羧酸循環(huán)等代謝途徑。這些標(biāo)志性代謝化合物和相關(guān)的代謝途徑，初步揭示了普洱茶茶褐素在生物體內(nèi)的代謝和作用機(jī)制，為解釋普洱茶的降血脂機(jī)制提供了新的思路。

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Metabolomic Analysis of Rat Urine after Intragastric Infusion of Pu-erh Theabrownins

LIU Jian1, PENG Chunxiu2, SHENG Jun1, GAO Bin1, GONG Jiashun1*

1. Faculty of Food Science and Technology, Yunnan Agricultural University, Kunming 650201, China; 2. Horticultural Department, Yunnan Agricultural University, Kunming 650201, China

The study was aimed to understand the effects of Pu-erh theabrownin (TB) (Mw>50?kDa) on the metabolism of rat urine by nuclear magnetic resonance (NMR)-based metabolomics. Rats were divided into four groups including rats receiving a basic diet alone (control group), a basic diet and intragastric infusion of Pu-erh TBs (TB infusion group), a high-lipid diet alone (high lipid group) and high-lipid diet and intragastric infusion of Pu-erh TBs (high lipid-TB infusion group) for 14 d. Urine samples were analyzed by biochemical assays, NMR and orthogonal partial least-square-discriminant analysis (OPLS-DA) to identify differential metabolism among these groups. The results showed that considerable differences in metabolite profiles of rat urine were detected between control group and TB infusion group, and between high lipid group and high lipid-TB infusion group. Valine, citric acid, taurine, propionate, α-ketoglutaric acid and β-hydroxybutyrate were identified as metabolic markers of Pu-erh TB. Besides, Pu-erh TBwas likely to influence several metabolic pathways in rat, including amino acid metabolism, energy metabolism, tricarboxylic acid cycle, lipid metabolism and oxidativestress.

theabrownins, metabolomics, NMR

TS272.5+4；Q946.84+1

A

1000-369X（2016）05-491-09

2016-02-25

2016-05-30

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（No. 31260195、30960241、30760152）

劉建，男，碩士，主要從事營養(yǎng)與食品安全研究，E-mail：sanliujian@126.com。

gong199@163.com