新疆多民族食管癌患者癌組織中p53蛋白表達(dá)及其臨床意義

阿卜拉江·阿卜杜熱合曼，伊地力斯·阿吾提，侯志超，阿不都艾尼·吐爾洪，張力為，居來提·艾尼瓦爾，劉　輝，才　仁， 買地尼也提·尼亞孜

(新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院1臨床醫(yī)學(xué)研究院， 2胸外科， 烏魯木齊　830054)

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·民族腫瘤學(xué)·

新疆多民族食管癌患者癌組織中p53蛋白表達(dá)及其臨床意義

阿卜拉江·阿卜杜熱合曼1,2，伊地力斯·阿吾提2，侯志超2，阿不都艾尼·吐爾洪2，張力為2，居來提·艾尼瓦爾2，劉輝1，才仁1， 買地尼也提·尼亞孜1

(新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院1臨床醫(yī)學(xué)研究院，2胸外科， 烏魯木齊830054)

目的探討新疆多民族食管癌患者癌組織及癌旁組織中 p53 蛋白表達(dá)情況及其臨床意義。方法采用免疫組織化學(xué)EnVision法檢測214例維吾爾族、漢族、哈薩克族食管癌患者癌組織以及100例癌旁正常組織中p53蛋白表達(dá)情況，并結(jié)合不同民族、腫瘤分化程度等臨床病理特點進(jìn)行分析。結(jié)果44.3%的食管癌病例檢測到p53蛋白的陽性表達(dá)，p53蛋白在癌組織的陽性表達(dá)率高于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。維吾爾族、漢族、哈薩克族食管癌組織中p53蛋白陽性表達(dá)率分別為45.6%、38.4%、49.3%，各民族間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，p53在不同性別、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的陽性表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)?；颊叩念A(yù)后與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管侵犯、浸潤程度狀況有關(guān)(P<0.05)。結(jié)論p53基因在新疆不同民族食管癌的發(fā)生、發(fā)展及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中可能有重要作用，可作為預(yù)測轉(zhuǎn)移潛能的參考指標(biāo)。

食管癌； 多民族； p53蛋白； 免疫組織化學(xué)

食管癌是最具有侵襲性的惡性腫瘤之一，死亡率居全球癌癥死因的第六位[1-2]。中國是世界食管癌高發(fā)區(qū)，其中90%以上為食管鱗癌[3-4]。新疆是我國多民族居住區(qū)，也是食管癌集中高發(fā)區(qū)之一，主要以哈薩克族食管癌發(fā)病率最高，最高達(dá)155.9/10萬，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于全國的平均水平(14.95/10萬)，其次為維吾爾族和漢族[5]。p53是重要的腫瘤抑制基因，在包括食管癌在內(nèi)的許多腫瘤中發(fā)現(xiàn)了p53基因的突變，正常情況下，p53可通過誘導(dǎo)G1期細(xì)胞周期阻滯或被DNA損傷信號激活后誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡來抑制細(xì)胞惡變[2]。本研究采用免疫組織化學(xué)法檢測哈薩克族、維吾爾族和漢族食管癌患者癌組織及癌旁組織中p53蛋白表達(dá)情況，探討其在不同民族食管癌發(fā)生發(fā)、展中的作用及其臨床意義。

1　資料與方法

1.1臨床資料收集新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院胸外科2009-2014年收治并行食管癌根治術(shù)的214例食管鱗癌患者的食管癌組織及100例癌旁正常組織(距癌組織>5 cm的組織)。其中維吾爾族68例，漢族73例，哈薩克族73例，男性152例，女性62例，年齡37～83歲，中位年齡60.8歲。按第七版TNM分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行pTNM分期，據(jù)WHO 2010年腫瘤組織學(xué)分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行組織學(xué)分類及分化程度分級[6]:腫瘤分化程度：高分化64例，中分化96例，低分化54例。腫瘤T分期：T1 12例，T2 76例，T3 111例，T4 15。N分期：N0 123例，N1 91例。所有患者術(shù)前均未接受過放療、化療或其他特殊治療。所有患者均在簽署知情同意書后留取手術(shù)標(biāo)本。本研究通過了本院醫(yī)學(xué)倫理委員會的批準(zhǔn)。

1.2方法標(biāo)本經(jīng)4%中性甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚度連續(xù)切片，進(jìn)行HE染色及免疫組織化學(xué)染色(EnVision法)。小鼠抗人p53單克隆抗體及免疫組化試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司,嚴(yán)格按說明書進(jìn)行，一抗?jié)舛冗x用1∶50，用0.01 mol/L PBS 替代一抗作為陰性對照，用已知乳腺癌陽性組織切片為陽性對照。由2位病理科醫(yī)師采取雙盲法觀察切片并診斷，結(jié)果一致則記錄結(jié)果，如有爭議，以2個相同意見為準(zhǔn)。p53蛋白陽性標(biāo)準(zhǔn)：原發(fā)灶≥10% 的癌細(xì)胞有明顯的核棕黃色或棕褐色染色，包括一些黏膜的基底細(xì)胞層中≥10% 的細(xì)胞有相應(yīng)的 p53 特征染色。只限于基底細(xì)胞的很弱的染色被認(rèn)為陰性[7]。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件包對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，組間采用非參數(shù)2個或多個獨立樣本檢驗，2個指標(biāo)間采用卡方檢驗。分別采用Kaplan-Meier 法、COX回歸模型進(jìn)行單因素和多因素生存分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1不同民族食管癌患者癌組織中p53蛋白的表達(dá)情況p53蛋白的陽性細(xì)胞染色定位于腫瘤細(xì)胞核，在所有214例食管鱗癌組織標(biāo)本中p53蛋白陽性表達(dá)率為44.3%(95/214)，癌旁正常食管組織中p53陽性蛋白表達(dá)率為5.6%(12/214)，癌組織與癌旁正常組織p53蛋白陽性表達(dá)率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(圖1)。

a: A.正常食管黏膜組織HE染色(×100倍)

b: 正常食管黏膜組織p53 免疫組織化學(xué)染色陰性表達(dá)(×100倍)

c: 高分化鱗狀細(xì)胞癌HE染色(×400倍)

d: 高分化鱗狀細(xì)胞癌p53免疫組織化學(xué)染色陽性表達(dá),p53陽性細(xì)胞染色定位于腫瘤細(xì)胞核(×400)

e: 中分化鱗狀細(xì)胞癌HE染色(×200倍)

f: 中分化鱗狀細(xì)胞癌p53免疫組織化學(xué)染色陽性表達(dá)(×200倍)

圖1食管正常組織和癌組織HE染色及p53免疫組化染色結(jié)果

維吾爾族、漢族、哈薩克族癌組織中p53蛋白陽性表達(dá)率分別為45.6%、38.4%、49.3%，3個民族間p53蛋白陽性表達(dá)率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)(表1)。

表1　不同民族食管癌患者p53表達(dá)情況/例(%)

2.2p53蛋白表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系女性患者p53蛋白陽性率(54.8%)明顯高于男性(40.1%)，且女性食管癌患者出現(xiàn)p53蛋白陽性的概率是男性的1.811倍(OR=1.811，95%CI：0.998～3.288)；不同分化程度患者的p53蛋白表達(dá)陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.956，P<0.05)，其中低分化食管癌患者的p53蛋白陽性率(57.4%)明顯高于高、中分化者(40.1%)，且低分化食管癌患者出現(xiàn)p53蛋白陽性的概率是高、中分化者的2.022倍(OR=2.022，95%CI：1.082～3.778)；不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況患者的p53蛋白表達(dá)陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.461，P<0.05)，其中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的p53蛋白陽性率(51.2%)明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(35.2%)，且有轉(zhuǎn)移的食管癌患者出現(xiàn)p53蛋白陽性的概率是無轉(zhuǎn)移者的1.934倍(OR=1.934，95%CI：1.109～3.378)(表2)。

2.3患者術(shù)后生存狀況214例各民族食管鱗癌患者術(shù)后6、12、18、24、30、36個月生存率分別為67%、55%、55%、34%、32%和32%，平均生存期為(15.87±12.26)個月，中位生存期為18.00個月。患者整體的生存曲線顯示患者術(shù)后36個月內(nèi)，曲線較為陡峭，生存率下降趨勢較為明顯。

表2新疆食管癌 p53表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系/例(%)

臨床病理因素n陽性陰性χ2值P值性別 男性15261(40.1)91(59.9)3.8590.049 女性6234(54.8)28(45.2)年齡/歲 ≤6513658(42.6)78(57.4)0.4610.497 >657837(47.4)41(52.6)分化程度 高中分化16064(40.0)96(60.0)4.9560.026 低分化5431(57.4)23(42.6)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 無12363(51.2)60(48.8)5.4610.019 有9132(35.2)59(64.8)脈管侵犯 無17579(45.1)96(54.9)0.2190.640 有3916(41.0)23(59.0)腫瘤直徑/cm <411457(50.0)57(50.0)3.1070.078 ≥410038(38.0)62(62.0)浸潤深度 T1125(41.7)7(58.3) T27635(46.1)41(53.9)0.2120.976 T311148(43.2)63(56.8) T4157(46.7)8(53.3)

2.4食管鱗癌患者臨床及病理指標(biāo)與預(yù)后的關(guān)系不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況患者的預(yù)后差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=24.001，P<0.05)，其中無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的平均生存期(23.645個月，95%CI：21.177～26.113)明顯長于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者(12.241個月, 95%CI：12.170～17.096)，且中位生存期也是相似的結(jié)果；不同脈管侵犯患者的預(yù)后差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=15.382，P<0.05)，其中無脈管侵犯患者的平均生存期(21.020個月，95%CI：19.535～23.717)明顯長于有脈管侵犯患者(12.241個月，95%CI：9.059～15.423)，且中位生存期差異更顯著；不同浸潤深度患者的預(yù)后差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=10.407，P<0.05)，其中T4患者的平均生存期(8.896個月，95%CI：5.938～11.854)明顯低于T1-T3患者(19.250～21.677個月)，且中位生存期差異同樣顯著。本研究中單因素分析也顯示，不同性別、不同年齡段、不同民族、分化程度、腫瘤大小、不同p53蛋白表達(dá)與食管鱗癌預(yù)后差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)(表3)。

表3　新疆多民族食管癌患者臨床病理特征與預(yù)后的關(guān)系

將單因素分析有統(tǒng)計學(xué)差異的3個指標(biāo)(不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管侵犯、浸潤程度)納入COX回歸分析模型，結(jié)果顯示：淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤侵犯脈管是新疆多民族食管癌預(yù)后的獨立危險因素(χ2分別為11.164和4.399,P<0.05)。其中，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的死亡風(fēng)險僅為有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的51.2%(RR=0.512，95%CI：0.345～0.758)；無腫瘤侵犯脈管患者的死亡風(fēng)險僅為有侵犯患者的62.5%(RR=0.625，95%CI：0.403～0.970)。

進(jìn)一步將以上3個指標(biāo)納入ROC曲線模型，分析指標(biāo)預(yù)測預(yù)后的特異度，結(jié)果顯示：浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤侵犯脈管的預(yù)測特異度均不夠理想，分別為54.3%、54.8%和50.3%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)(表4)。

表4ROC曲線評價腫瘤侵潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和脈管浸潤的預(yù)后準(zhǔn)確度

因素曲線下面積SEP值95%CI浸潤深度0.5430.0480.3600.449～0.638淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移0.5480.0470.3090.455～0.641腫瘤侵犯脈管0.5030.0480.9430.410～0.597

3　討論

作為一種重要的抑癌基因，p53基因編碼的53 kDa蛋白在細(xì)胞周期過程中發(fā)揮著重要的作用，具有抑制腫瘤生長的作用。但是，當(dāng)該基因發(fā)生突變時反而會促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[8]。正常細(xì)胞中野生型p53蛋白半衰期短，很難用免疫組化檢出，而當(dāng)p53基因突變后，其產(chǎn)物蛋白穩(wěn)定性增加，半衰期明顯延長，用免疫組化法檢出的p53蛋白可代表突變型p53的存在[9-10]。在食管癌中p53過表達(dá)能夠促進(jìn)腫瘤血管生成，加速腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移，細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡調(diào)控平衡遭到破壞，因此與不良預(yù)后關(guān)系密切，已基本明確該基因突變可作為一種獨立可靠的生物學(xué)指標(biāo)來判斷患者的預(yù)后[11]。本研究采用免疫組織化學(xué)EnVision法檢測214例食管癌組織及癌旁組織中p53蛋白表達(dá)情況，在癌組織中 p53 蛋白陽性表達(dá)率為44.3%，明顯高于癌旁正常食管組織(5.6%)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，提示p53突變與食管癌發(fā)生密切相關(guān)，這也與大多數(shù)研究結(jié)果相一致[12-13]。

有研究報道，食管癌不同的高、低發(fā)區(qū)中p53蛋白陽性表達(dá)率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，說明在高、低發(fā)區(qū)食管癌p53蛋白的積聚是類同的[14]。本研究對新疆維吾爾族、漢族、哈薩克族食管鱗癌患者p53蛋白表達(dá)情況進(jìn)行分析，結(jié)果顯示各民族間p53蛋白表達(dá)率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，提示p53蛋白在不同民族食管癌中的表達(dá)也是類同的。進(jìn)一步分析p53蛋白表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系，不同性別食管癌患者p53蛋白陽性表達(dá)率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，且女性患者p53蛋白陽性率明顯高于男性。腫瘤分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是判定食管癌預(yù)后的重要因素。有研究表明，腫瘤分化程度越差、存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管癌組織中p53蛋白陽性率越高，患者預(yù)后越差[15-16]。本研究結(jié)果顯示，低分化患者的p53蛋白陽性率高于高、中分化患者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者p53蛋白陽性率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)，提示p53過表達(dá)與新疆多民族食管癌患者的預(yù)后有關(guān)。而p53蛋白表達(dá)水平與患者年齡、腫瘤大小、有無脈管侵犯、浸潤深度等指標(biāo)無關(guān)(P>0.05)。

本研究對患者術(shù)后生存情況和預(yù)后進(jìn)行了分析，各民族食管鱗癌患者術(shù)后平均生存期為(15.87±12.26)個月，中位生存期為18.00個月。Kaplan-Meier法分析臨床病理因素與預(yù)后的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管侵犯、浸潤程度狀況患者的預(yù)后差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及脈管侵犯、浸潤深度越淺，患者預(yù)后更好，平均生存期更長。用COX回歸模型進(jìn)一步分析顯示：淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤侵犯脈管是新疆多民族食管癌預(yù)后的獨立危險因素(P均<0.05)。

綜上所述，原癌基因激活、抑癌基因失活是腫瘤發(fā)生與發(fā)展過程中重要的分子遺傳學(xué)基礎(chǔ)。p53基因作為一個重要的抑癌基因在新疆多民族食管癌的發(fā)生、發(fā)展中可能起著重要作用，也可作為預(yù)測轉(zhuǎn)移潛能的重要參考指標(biāo)。但是，本研究只使用了免疫組織化學(xué)法進(jìn)行檢測，檢測方法比較單一，局限于蛋白層面，沒有充分分析p53基因狀態(tài)與生存期的相關(guān)性，在后期研究中可采用熒光原位雜交等方法在基因?qū)用孢M(jìn)行進(jìn)一步研究。

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(本文編輯楊晨晨)

Expression of p53 and its clinical significance in esophageal cancer of multi-ethnics in Xinjiang

Abulajiang Abudureheman1,2, Yidilisi Awuti2, HOU Zhichao2, Abuduaini Tuerhong2, ZHANG Liwei2,Julaiti Ainiwaer2, LIU Hui1, CAI Ren1, Maidiniyeti Niyazi1

(1ClinicalMedicalResearchInstitute，1DepartmentofThoracicSurgery，theFirstAffiliatedHospital，XinjiangMedicalUniversity，Urumqi830054，China)

ObjectiveTo study the expression of p53 gene and its clinical significance in esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) and adjacent normal tissues of Multi-ethnic groups in Xinjiang. MethodsImmunohistochemistry Envision method was used to detect the p53 gene expression of 214 cases with ESCC and 100 cases of adjacent normal tissues，including Uyghur, Han, Kazak three different ethnic groups. And the differences of clinicopathological characteristics among them were analyzed. Resultsp53 protein positively expressed in 44.3% cases of ESCC. The positive rate of p53 protein expression in ESCC tissues and adjacent normal tissues was significantly different (P<0.05). The positive rate of p53 protein expression in Uyghur， Han， Kazak ESCC patients was 45.6%， 38.4%， 49.3%， respectively. There was no significant differences among the three different ethnic groups (P>0.05). However, the positive expression of p53 protein had statistical differences among genders，degrees of tumor differentiation and lymph node metastasis (P<0.05). After analyzing the correlation between clinical pathological factors and prognosis， we found that the prognosis of patients had significant differences according to lymph node metastasis，vascular invasion and depth of tumor invasion (P<0.05). Conclusionp53 gene may play an important role in the occurrence and development of esophageal carcinoma and lymph node metastasis in different ethnic groups in Xinjiang, and it can be used as a reference index for predicting the metastatic potential of ESCC.

ESCC； Multi-ethnic groups； p53 protein； immunohistochemistry

國家自然科學(xué)基金(81360305)

阿卜拉江·阿卜杜熱合曼(1987-)，男(維吾爾族)，在讀博士，研究方向：胸部腫瘤。

買地尼也提·尼亞孜，女(維吾爾族)，博士，副研究員，研究方向：消化道腫瘤分子生物學(xué)，E-mail: mdnyn5@yahoo.com。

R735.1

A

1009-5551(2016)10-1329-05

10.3969/j.issn.1009-5551.2016.10.029

2016-07-02]