丹苓顆粒水提工藝的研究

王纖汝， 王曉梅， 李　茜

(新疆醫(yī)科大學(xué)1附屬中醫(yī)醫(yī)院藥學(xué)部, 烏魯木齊　830000； 2附屬腫瘤醫(yī)院藥劑科, 烏魯木齊　830011)

?

丹苓顆粒水提工藝的研究

王纖汝1， 王曉梅2， 李茜1

(新疆醫(yī)科大學(xué)1附屬中醫(yī)醫(yī)院藥學(xué)部, 烏魯木齊830000；2附屬腫瘤醫(yī)院藥劑科, 烏魯木齊830011)

目的優(yōu)選丹苓顆粒的最佳水提工藝。方法采用單因素結(jié)合L9(34)正交實驗設(shè)計對水提倍量、提取次數(shù)、提取時間等因素進行考察，以丹參丹酚酸B的含量和水浸膏得率指標(biāo)為綜合評價指標(biāo)，篩選出最佳水提工藝條件。結(jié)果9倍量水、回流提取2次、每次提取1 h的丹苓顆粒水提工藝最佳。結(jié)論該工藝簡便、快捷、穩(wěn)定，可為生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

丹苓顆粒； 水提工藝； 正交試驗

丹苓顆粒來源于新疆維吾爾自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院臨床多年使用的臨床經(jīng)驗方，該方由丹參、茯苓、赤芍，白術(shù)等藥材組成，具有活血化瘀的功效，在臨床上主要用于治療瘀血內(nèi)停所致的胸痹，癥見心前區(qū)刺痛、氣短、胸悶[1]。根據(jù)方中藥材所含有效成分的理化性質(zhì)，擬定丹參、茯苓等藥材采用水提取，方中具有活血祛瘀等功效丹酚酸B是丹參中的指標(biāo)活性成分[2-3]，以丹酚酸B含量和水浸膏得率為綜合評價指標(biāo)[4-5]。本研究采用單因素和正交試驗確定丹苓顆粒提取工藝參數(shù)，為進一步提高丹苓顆粒的臨床研究提供依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1　儀器與試藥

1.1儀器美國2996高效液相色譜儀(Waters公司)，Direct-QTM5超純水儀(Millipore 公司)，AG-135電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)。

1.2試藥丹參(亳州市亳廣中藥飲片有限公司，批號：20150804)、茯苓(亳州市亳廣中藥飲片有限公司，批號：20150817)等藥材均符合《中華人民共和國藥典》2010年版一部各藥材項下的規(guī)定，并經(jīng)新疆醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院藥學(xué)部李永和主任藥師鑒定；丹酚酸B對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：111562-200302)，乙腈、甲醇(色譜純，美國fisher公司)，其余試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1對照品溶液的制備精密稱取丹酚酸B對照品0.56 mg，加甲醇制成0.56 mg/mL的丹酚酸B對照品溶液[6]。

2.2樣品溶液的制備稱取上述處方藥材56 g，分別以12倍用量的水，提取2次，提取1.0 h。濾過后取上述溶液2.5 mL于10 mL容量瓶中用甲醇定容至10 mL，倒入10 mL離心管，5 000 r/min離心15 min，即得。

2.3陰性對照品實驗按樣品的測定方法制備缺丹參陰性對照溶液，進樣量10 μL并測定。實驗表明，丹苓顆粒水提液中其余藥材對丹酚酸B的含量測定無干擾。精密吸取丹酚酸B對照品溶液與含有丹參供試品溶液及缺丹參的陰性樣品溶液各10 μL進行測定,結(jié)果表明在此色譜條件下供試品溶液分離效果良好,見圖1～3。

圖1　丹酚酸B對照品溶液

圖2　供試品溶液

圖3　陰性溶液

2.4色譜條件色譜柱：symmetry shield RpC18柱(3.9 mm×150 mm，5 μm),流動相：甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59),檢測波長286 nm,流速1 mL/min,柱溫30℃，進樣量10 μL。

2.5線性關(guān)系考察分別精密吸取(0.56 mg/mL)3、6、9、12、15 μL對照品溶液，注入液相色譜儀，得到相應(yīng)的峰面積。以縱坐標(biāo)為進樣濃度，橫坐標(biāo)為峰面積進行線性回歸，回歸方程：C=6.465×10-7A+0.081 3，r=0.999 8，在1.68～8.40 μg/mL范圍內(nèi)，丹酚酸B進樣濃度與峰面積線性關(guān)系良好，見表1。

表1　線性關(guān)系實驗結(jié)果

2.6精密度試驗日內(nèi)精密度試驗用標(biāo)準(zhǔn)溶液在同一天連續(xù)進樣7次，每次進樣量10 μL，結(jié)果日內(nèi)精密度RSD=0.53%;日間精密度試驗用標(biāo)準(zhǔn)溶液間隔進樣7 d，每天1次，每次進樣量10 μL，結(jié)果日間精密度RSD=1.59%。

2.7加樣回收率試驗精密稱定已知含量的丹苓顆粒3份，每份3 mL，精密加入丹酚酸B對照品適量，按 “ 2.4”項下方法制備供試品溶液，分別進樣測定，加樣回收率分別為100.5%、99.9%、100.2%，平均加樣回收率為100.2%,RSD=1.59%。

2.8單因素試驗根據(jù)處方藥味的功能主治的化學(xué)成分的理化特性擬采用水提提取，并對提取次數(shù)、水提用量、提取時間進行研究，再采用L9(34)對提取次數(shù)、水提用量、提取時間進行正交實驗研究，以丹酚酸B含量和水浸膏得率為綜合評價指標(biāo)(權(quán)重系數(shù)為70%、30%)，從而篩選出最佳提取工藝[7-9]。綜合評分分值=(70%/最大丹酚酸B含量)×丹酚酸B含量+(30%/最大水浸膏得率)×水浸膏得率。精密吸取丹苓顆粒供試液20 mL置于干燥恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，105℃干燥3 h，至干燥器中，冷卻30 min，快速精密稱取重量，獲得殘渣重為X，得出浸膏得率，公式：

2.8.1料液比的考察加15倍量水提取率最高， 12倍量其次，18倍量第3，但考慮節(jié)省成本18倍用量太大，選擇9倍量、12倍量和15倍量3個水平進行正交試驗考察，見表2。

2.8.2提取時間的考察水提2.0 h提取率最高， 1.0 h其次， 1.5 h第3，選擇1.0、1.5、2.0 h 3個水平進行正交試驗考察，見表3。

2.8.3提取次數(shù)的考察提取4次提取率最高，3次其次，2次第3，為了節(jié)省工時，節(jié)約成本，選擇提取1、2、3次3個水平進一步進行正交考察，見表4。

表2　加水倍量對提取效果的影響

表3　提取時間對提取效果的影響

表4　提取次數(shù)對提取效果的影響

2.8.4正交試驗影響提取效果的因素是：A(提取時間)> B(料液比)>C(提取次數(shù))，以提取時間最大，其次料液比、提取次數(shù)影響較小。經(jīng)方差分析可知：提取時間對提取效果有較大影響，考慮到生產(chǎn)成本，選定最佳提取工藝為A2B1C1。因此，由實驗結(jié)果，確定丹苓顆粒水提取工藝條件為9倍量水、回流提取2次、每次1.0 h，見表5～7。

表5　L9(34)正交試驗因素水平表

表6　L9(34)正交試驗表

表7　方差分析表

2.9驗證試驗按上述工藝條件進行3次驗證試驗，按A2B1C1提取得到的丹酚酸B含量和水浸膏得率非常接近,正交試驗設(shè)計中的最大含量且更符合工藝實際,說明此工藝條件穩(wěn)定、可行,見表8。

表8　驗證試驗結(jié)果(n=3)

3　討論

處方中丹參的水溶性成分丹酚酸B等具有降低血脂的作用，但加溫條件下丹參提取物中酚酸類成分的穩(wěn)定性有一定影響[10]。丹參提取生產(chǎn)中,為減少酚酸類成分損失應(yīng)盡量減少加熱時間，故選擇加熱時間為1 h，同時降低提取次數(shù)為2次。單因素實驗法考察的因素水平多，但無法比較各因素之間影響作用，正交試驗法具有顯著性差異的比較，將兩者結(jié)合彌補這一缺陷，綜合了兩者優(yōu)點確定為加9倍量水，回流提取2次，每次1.0 h為丹苓顆粒最佳水提工藝。通過工藝驗證實驗說明此工藝穩(wěn)定、合理、可行。

[1]徐麗君，黃光英.丹參的化學(xué)成分及其藥理作用研究概述[J].中西醫(yī)結(jié)合研究，2009,11(1):45-49.

[2]王蓉,原永芳.丹酚酸B藥理作用的研究概況[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報. 2011,10(4):12-13.

[3]蔡麗萍,習(xí)志剛,楊紅.丹參酮的藥理作用和臨床研究進展[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報,2008,24(3):321-325.

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(第一部)[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：204-208.

[5]武尉杰,盛蓉,譚睿,等.正交試驗法優(yōu)選丹參藥材中丹參酮ⅡA提取工藝的研究[J].川北醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2013,28(1):10-12.

[6]易艷東,謝岱,馬威.正交試驗法優(yōu)歸芪補腎顆粒的水提工藝[J].湖北中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2014,16(2):47-49.

[7]趙珉,郭靖,張紅巖,等.正交試驗法優(yōu)選舒欣膠囊中丹參酮ⅡA提取工藝[J].長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2011,27(3):355-356.

[8]謝燕,李建利,施明毅,等.正交試驗法優(yōu)選軟脈通瘀顆粒的水提工藝[J].中國醫(yī)藥指南,2013,11(12):466-483.

[9]唐康琛,梁學(xué)政,陳惠紅,等.正交試驗法優(yōu)選五子補腎膠囊水提醇沉工藝[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2013,33(23):2002-2004.

[10]張春光,崔翰明,張秋燕,等.丹參提取物中的丹酚酸B在不同pH條件下的穩(wěn)定性研究[J]. 中國實驗方劑學(xué)雜志. 2009，12(1) :55-57.

(本文編輯施洋)

Optimization of water extraction process of DanLin GranuLes

WANG Qianru1, WANG Xiaomei2, LI Qian1

(1DepartmentofPharmacy,theAffiliatedTraditionalChineseHospitalofXinjiangMedicalUniversity,Urumqi830000,China;2DepartmentofPharmacy,AffiliatedTumorHospitalofXinjiangMedicalUniversity,Urumqi830011,China)

ObjectiveTo optimize the water extraction conditions of DanLin GranuLes. MethodsThe extraction conditions were optimized by orthogonal tests with the extract yield and Salvianolic acid B as indexes, and water volume, extracting times and extracting duration as factors. ResultsThe optimum extraction process was as follows： adding 9 times water and extracting 1h for 2 times. ConclusionThe optimum extraction process is reasonable, feasible, and suitable for industrialized production.

DanLin GranuLes; water extraction process; orthogonal tests

新疆醫(yī)科大學(xué)2012年度科研創(chuàng)新基金(ZYY201207)

王纖汝(1969-)，女，大專，主管藥師，研究方向：新藥研發(fā)與醫(yī)院藥學(xué)管理， E-mail:2326193940@qq.com。

李茜，女，碩士，副主任中藥師，研究方向：新藥研發(fā)， E-mail:reallynana@163.com。

R943

A

1009-5551(2016)10-1302-04

10.3969/j.issn.1009-5551.2016.10.022

2016-6-17]