甲狀腺乳頭狀癌組織中Ki-67表達(dá)及其臨床病理意義

李鴻濤， 單美慧， 羅　琳， 馬斌林

(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院乳腺頭頸外科, 烏魯木齊　830011)

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甲狀腺乳頭狀癌組織中Ki-67表達(dá)及其臨床病理意義

李鴻濤， 單美慧， 羅琳， 馬斌林

(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院乳腺頭頸外科, 烏魯木齊830011)

目的探討甲狀腺乳頭狀癌組織中增殖抗原-67(Ki-67)的表達(dá)水平及其與臨床病理因素之間的關(guān)系。方法完整收集甲狀腺臨床病理資料共計(jì)545例；其中甲狀腺乳頭狀癌275例，甲狀腺良性腫瘤270例，使用免疫組織化學(xué)SP法檢測甲狀腺癌中Ki-67的表達(dá)情況，并對(duì)臨床病理結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析。結(jié)果甲狀腺乳頭狀癌、甲狀腺良性腫瘤Ki-67陽性表達(dá)率分別為91.27%(251/275)、44.07%(119/270)，癌灶與良性腫瘤相比，Ki-67表達(dá)明顯增高(χ2=220.28，P=0.00)；多灶性甲狀腺癌與單病灶Ki-67表達(dá)陽性率分別為(96.03%和71.83%)，多灶性甲狀腺乳頭狀癌Ki-67表達(dá)水平明顯增高(χ2=45.05，P=0.00)；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者和未轉(zhuǎn)移者Ki-67表達(dá)陽性率分別為81.20%(108/133)、47.18%(67/142)，其中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者Ki-67表達(dá)水平明顯增高(χ2=36.90，P=0.00)，CD56陽性與陰性患者Ki-67表達(dá)陽性率分別為76.09%(70/92)、59.44%(107/180)，其中CD56陽性組Ki67表達(dá)水平明顯增高(χ2=13.05，P=0.01)。結(jié)論Ki-67蛋白在甲狀腺癌中表達(dá)明顯增高，其陽性表達(dá)與多灶性甲狀腺癌、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及CD56陽性表達(dá)有關(guān)，提示Ki-67陽性表達(dá)對(duì)甲狀腺癌侵襲性和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有一定預(yù)測意義。

增殖抗原-67； 甲狀腺癌； 免疫組化

自20世紀(jì)90年代以來，甲狀腺癌發(fā)病率穩(wěn)步上升，據(jù)統(tǒng)計(jì)，現(xiàn)已上升為女性惡性腫瘤第二位。甲狀腺癌與環(huán)境、局部放射、飲食、精神心理、經(jīng)濟(jì)條件等均有不同程度的關(guān)系，尤其是<1 cm的甲狀腺微小癌發(fā)病更是升高明顯。近年來針對(duì)甲狀腺癌在基因及蛋白水平深入研究更多。增殖抗原-67(Ki-67)參與多種惡性腫瘤細(xì)胞的增殖與侵襲，其蛋白表達(dá)在甲狀腺癌、乳腺癌中表達(dá)明顯增高，總結(jié)新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院乳腺頭頸外科近年來275例甲狀腺癌患者的臨床病理資料，就Ki-6蛋白在545例甲狀腺病例中表達(dá)情況做回顧性分析，探討Ki-67與甲癌侵襲、轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系。

1　材料與方法

1.1標(biāo)本收集收集2011年6月-2016年4月就診于新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院乳腺頭頸外科并均行外科手術(shù)治療的甲狀腺疾病患者石蠟切片共計(jì)545例。甲狀腺癌275例，其中女性209例，男性66例；<45歲144例，≥45歲131例；漢族224例，維吾爾族36例，哈薩克族7例，回族9例；病理類型均為甲狀腺乳頭狀癌。甲狀腺良性腫瘤270例，其中女性225例，男性45例；所有病例均均未接受術(shù)前放、化療、內(nèi)分泌治療，無其他惡性腫瘤史。所有標(biāo)本均經(jīng)10%福爾馬林固定，石蠟包埋切片并經(jīng)2位副高職稱病理科醫(yī)師確認(rèn)診斷。

1.2免疫組化染色及結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)使用免疫組化SP法對(duì)所有切片行Ki-67染色標(biāo)記，Ki-67抗體購自中杉金橋技術(shù)有限公司，兔抗人單克隆抗體，稀釋度為1∶100。Ki-67蛋白陽性表達(dá)部位均為細(xì)胞核，判讀結(jié)果均經(jīng)2位副高級(jí)職稱病理科醫(yī)師確認(rèn)，均按照陽性細(xì)胞百分比計(jì)分和染色強(qiáng)度計(jì)分的乘積作為最后計(jì)分。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理使用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料及等級(jí)資料采用χ2檢驗(yàn)，并計(jì)算陽性表達(dá)率，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2　結(jié)果

2.1甲狀腺癌與甲狀腺良性腫瘤組織中Ki-67表達(dá)情況Ki-67陽性染色位于細(xì)胞核，甲狀腺癌與良性腫瘤相比，Ki-67表達(dá)明顯增高(χ2=220.28，P=0.00)，Ki-67在良性腫瘤中僅有4例為強(qiáng)陽性表達(dá)，在惡性腫瘤中普遍為++～+++表達(dá)，甲狀腺癌與良性腫瘤組織中Ki-67陽性表達(dá)率分別為91.27%(251/275)、44.07%(119/270)，見表1。

表1　甲狀腺癌與良性腫瘤中Ki-67表達(dá)情況

2.2甲狀腺癌組織中Ki-67蛋白表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系101例多灶性甲狀腺癌患者中，Ki-67陽性表達(dá)率為96.03%(97/101)，單病灶甲癌Ki-67陽性表達(dá)率為71.83%(125/174)，多灶性甲癌患者較單病灶者Ki-67蛋白表達(dá)明顯增高(χ2=45.05，P=0.00)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者和未轉(zhuǎn)移者Ki-67陽性表達(dá)率分別為81.20%(108/133)、47.18%(67/142)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者Ki-67表達(dá)水平明顯增高(χ2=36.90，P=0.00)；CD56陽性與陰性者Ki-67表達(dá)陽性率分別為76.09%(70/92)、59.44%(107/180)，CD56陽性者Ki67表達(dá)水平明顯增高(χ2=13.05，P=0.01)，Ki-67表達(dá)與年齡、腫瘤大小、微小癌與否、包膜是否受侵、CK19、Galetin表達(dá)、HBME等因素?zé)o明顯相關(guān)性,見表2。

3　討論

甲狀腺乳頭狀癌是甲狀腺惡性腫瘤中最常見的病理類型，但其具有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高、轉(zhuǎn)移時(shí)間早的特點(diǎn)。Ki-67是多種惡性腫瘤細(xì)胞研究的熱點(diǎn)抗原蛋白，參與多種惡性腫瘤的分化、浸潤及轉(zhuǎn)移,檢測Ki-67的陽性表達(dá)，可探知惡性腫瘤細(xì)胞的增殖活性[1]。本研究顯示有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺腫瘤Ki-67蛋白表達(dá)率明顯增高(81.20% vs 47.18%，P=0.00)；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的133例患者中，80例患者Ki67蛋白呈中-強(qiáng)陽性表達(dá)，占61.05%，僅有25例患者為陰性表達(dá)，表達(dá)率為18.80%；在142例淋巴結(jié)陰性者中，中-強(qiáng)陽性表達(dá)率為37.59%，陰性表達(dá)率為

表2　乳頭狀甲狀腺癌組織中Ki-67表達(dá)與臨床病理因素關(guān)系

52.82%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00)，提示乳頭狀癌Ki-67表達(dá)明顯增加，尤其是當(dāng)中-強(qiáng)陽染色時(shí)，可推測淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生概率高。Xu等[2]指出，中央?yún)^(qū)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移危險(xiǎn)性增高與男性、腫瘤直徑>5 mm、多灶等多種因素相關(guān)；Miyauchi等[3]對(duì)390例乳頭狀癌Ki-67表達(dá)指數(shù)分析：N1b較N0或N1a組相比可見，Ki-67強(qiáng)陽性表達(dá)分別為22例和8例(P=0.01)，說明Ki-67蛋白陽性表達(dá)潛在參與乳頭狀癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移進(jìn)展；Jeong等[4]指出，當(dāng)腫瘤直徑≥0.3 cm時(shí)，甲狀腺癌中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高達(dá)79.00%，多因素分析結(jié)果顯示，Ki-67表達(dá)與腫瘤大小、是否存在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等因素相關(guān)。與本研究結(jié)果類似：淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移個(gè)數(shù)越多，Ki-67中-強(qiáng)陽性表達(dá)率更高，而在良性腫瘤患者中尚未發(fā)現(xiàn)此特點(diǎn)，提示Ki-67表達(dá)率較高時(shí)，需考慮淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、甚至是微轉(zhuǎn)移的可能性。

甲狀腺乳頭狀癌分化程度較好，但多灶性癌多見，局部轉(zhuǎn)移發(fā)生率高，尤其對(duì)于伴有甲狀腺炎的患者[5]。本研究顯示101例多灶性乳頭狀癌Ki-67陽性表達(dá)率為96.03%，中-強(qiáng)陽性表達(dá)構(gòu)成比為77.23%，僅4例為陰性表達(dá)(3.96%)；而174例單一病灶患者中，Ki-67陽性表達(dá)率為71.83%，Ki-67蛋白多以陰-弱陽性表達(dá)為主(59.77%)，49例為陰性表達(dá)(28.16%)，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00)；單志東等[6]對(duì)1 616例乳頭狀甲狀腺癌進(jìn)行臨床病理因素分析可見：多灶性乳頭狀癌(MPTC)發(fā)病率呈逐年上升趨勢，并且具有易出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、包膜受侵、腺體外浸潤的特點(diǎn)。本研究與其結(jié)果類似，提示多灶性乳頭狀癌較單一病灶者預(yù)后不良，復(fù)發(fā)危險(xiǎn)因素多，復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移可能性大。Huang等[7]對(duì)686例多灶性癌患者病例分析顯示多灶性癌患者具有惡性程度高、分化差異大的特點(diǎn)，應(yīng)采取更加積極的臨床治療原則。本研究發(fā)現(xiàn)，多灶性甲狀腺乳頭狀癌具有男性病例多、腫瘤直徑大等特點(diǎn)，與Mcleod等[8]的研究結(jié)果相似。 CD56在甲狀腺癌中表達(dá)缺失是鑒別良、惡性病變的重要指標(biāo)之一[9]，其在良性病變中多為陽性表達(dá)。本研究結(jié)果顯示，乳頭狀癌組織中CD56陰性表達(dá)率為76.09%，陽性表達(dá)率為59.40%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.01)，與Mozhgan等[10]的研究結(jié)果相似。

綜上所述，Ki-67在甲狀腺乳頭狀癌組織中陽性表達(dá)具有一定特異性，尤其是在淋巴結(jié)陽性、多灶性癌中。Ki-67表達(dá)水平是指導(dǎo)治療、判斷預(yù)后的重要指標(biāo)，是惡性腫瘤細(xì)胞增殖活性強(qiáng)的重要標(biāo)志；本研究通過對(duì)545例甲狀腺病例分析尚未發(fā)現(xiàn)Ki-67與性別、年齡、腫瘤大小、微小癌與否、包膜受侵等因素有關(guān)，這可能與病例選擇偏倚有關(guān)；增殖抗原Ki-67在某些良性病變也存在陽性表達(dá)，因此要求臨床醫(yī)師在臨床工作中應(yīng)正確、客觀地應(yīng)用這些指標(biāo)作為參考，從而避免假陰性、假陽性的出現(xiàn)，提高診斷正確性。

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(本文編輯周芳)

Expression of Ki-67 in papillary thyroid carcinoma and its relationship with clinical pathological factors

LI Hongtao, DAN Meihui, LUO Lin, MA Binlin

(DepartmentofBreastandNeck,AffiliatedTumorHospitalofXinjiangMedicalUniversity,Urumqi830011,China)

ObjectiveTo investigate the expression of Proliferating Antigen-67 (Ki-67) in papillary thyroid carcinoma and its relationship with clinical pathological factors. MethodsClinical pathological data of 545 cases were collected, including 275 cases of thyroid carcinoma, 270 cases of benign tumors of the thyroid gland. The expression of Ki-67 in thyroid carcinoma was detected by immunohistochemical SP, and the clinical pathological results were compared and analyzed. ResultsKi-67 positive expression rates in papillary thyroid carcinoma and benign thyroid tumor were 91.27% (251/275), 44.07% (119/270), respectively. Compared with benign tumor, the expression of Ki-67 in cancer group increased significantly (χ2=220.28, P=0.00); Ki-67 expression positive rates in multifocal thyroid carcinoma group and single lesion group were 96.03% and 71.83%, respectively. And the expression level of Ki-67 in focal papillary thyroid carcinoma group increased significantly (χ2=45.05, P=0.00); The positive expression rate of Ki-67 in lymph node metastasis group and non metastasis were 81.20% (108/133), 47.18% (67/142), respectively. And the expression level of Ki-67 in lymph node metastasis group increased significantly (χ2=36.90, P=0.00). The positive expression rates of Ki-67 in CD56 positive and CD56 negative group were 76.09% (70/92), 59.44% (107/180), respectively. The expression level of Ki67 in CD56positive group was significantly higher (χ2=13.05, P=0.01). ConclusionThe expression of Ki-67 protein in thyroid cancer was significantly increased. What's more, the positive expression of Ki-67 was related to the multiple foci of thyroid cancer, lymph node metastasis and CD56 positive expression, which suggests that the positive expression of Ki-67 has certain significance in the prediction of thyroid cancer invasion and lymph node metastasis.

Antigen-67； Thyroid carcinoma； Immunohistochemistry

新疆維吾爾自治區(qū)自然科學(xué)基金(2012211A046)

李鴻濤(1976-)，男，碩士，副主任醫(yī)師，研究方向：乳腺頭頸腫瘤。

馬斌林，男，教授，主任醫(yī)師，研究方向：乳腺頭頸腫瘤，E-mail：mbldoctor@126.com。

R736.1

A

1009-5551(2016)10-1291-04

10.3969/j.issn.1009-5551.2016.10.019

2016-07-04]