新疆產(chǎn)4種錦雞兒屬植物總黃酮含量研究

賈盛杰， 賈月梅， 潘　蘭， 楊海燕， 賈新岳， 石明輝， 力瓦衣丁·買合蘇提, 賈曉光

(1新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)， 烏魯木齊　830046； 2新疆維吾爾自治區(qū)中藥民族藥研究所， 烏魯木齊　830002)

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新疆產(chǎn)4種錦雞兒屬植物總黃酮含量研究

賈盛杰1， 賈月梅2， 潘蘭2， 楊海燕1， 賈新岳2， 石明輝2， 力瓦衣丁·買合蘇提2, 賈曉光2

(1新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)， 烏魯木齊830046；2新疆維吾爾自治區(qū)中藥民族藥研究所， 烏魯木齊830002)

目的對(duì)新疆產(chǎn)4種錦雞兒植物的根及地上部分的總黃酮含量進(jìn)行測(cè)定比較。方法用70%乙醇提取錦雞兒樣品中總黃酮，亞硝酸鈉-硝酸鋁比色法測(cè)定樣品溶液中總黃酮含量。結(jié)果對(duì)于不同錦雞兒，其各部位總黃酮含量差異較大，根部總黃酮含量為吐魯番錦雞兒>狹葉錦雞兒>粉刺錦雞兒>刺葉錦雞兒；地上部分總黃酮含量為刺葉錦雞兒>狹葉錦雞兒>吐魯番錦雞兒>粉刺錦雞兒。對(duì)于同種植物，其根與地上部分總黃酮含量不同。結(jié)論對(duì)錦雞兒不同部位進(jìn)行總黃酮含量測(cè)定，有助于錦雞兒屬植物的充分開(kāi)發(fā)及可持續(xù)利用。

錦雞兒； 根； 地上部分； 總黃酮

錦雞兒屬(Caragana Fabr.)植物隸屬于豆科，落葉灌木，全世界有100多種，主要分布于亞洲和歐洲的干旱和半干旱地區(qū)；中國(guó)有62種，主產(chǎn)于東北、華北、西北、西南各省區(qū)[1]。錦雞兒屬植物在藏藥、蒙藥、維藥、中藥等傳統(tǒng)藥中有著悠久的用藥歷史，《中國(guó)民族藥志要》記載錦雞兒屬植物具有祛風(fēng)除濕、活血、利尿、調(diào)經(jīng)、消炎等功效，在治療高血壓、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、跌打損傷、膽囊炎等疾病方面有顯著效果[2]。目前已從錦雞兒屬植物中分離鑒定了黃酮類、二苯乙烯類、萜類等化合物[3-5]，黃酮類化合物是錦雞兒屬植物中的一類重要的化學(xué)成分。孫曉東等[6]研究了昌都錦雞兒異黃酮類成分，體外活性試驗(yàn)顯示其具有抑制大鼠巨噬細(xì)胞NO生成活性?？祦喣械萚7]研究表明小葉錦雞兒總黃酮能降低血黏度，對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷具有腦保護(hù)作用。蒙秋霞等[8]對(duì)小葉錦雞兒、南口錦雞兒、樹(shù)錦雞兒、青海錦雞兒、扁刺錦雞兒、鬼箭錦雞兒不同部位的總黃酮含量進(jìn)行了測(cè)定。目前尚未見(jiàn)刺葉錦雞兒、吐魯番錦雞兒、狹葉錦雞兒總黃酮含量的報(bào)道，為此，本研究對(duì)4種錦雞兒根部及其地上部分總黃酮含量進(jìn)行了測(cè)定分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　試藥與儀器

1.1材料吐魯番錦雞兒采集于新疆烏恰縣(經(jīng)度E75°25′41.76″，緯度N40°05′19.05″)，粉刺錦雞兒采集于新疆烏恰縣(經(jīng)度E75°23′12.24″，緯度N40°05′57.30″)，狹葉錦雞兒采集于新疆奇臺(tái)縣半截溝(經(jīng)度E89°44′15.73″，緯度N43°39′30.42″)，刺葉錦雞兒采集于新疆烏魯木齊市紅雁池(經(jīng)度E87°38′10.09″，緯度N43°41′12.57″)。樣品經(jīng)新疆維吾爾自治區(qū)中藥民族藥研究所賈曉光研究員鑒定，憑證標(biāo)本保存在新疆維吾爾自治區(qū)中藥民族藥研究所。蘆丁對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100080-201408)，無(wú)水乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁均為分析純。

1.2儀器電子天平(AE163，metterler)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(RE-52AA，上海亞榮生化儀器廠)，超聲波清洗器(KQ3200型，昆山市超聲儀器有限公司)，電熱恒溫水浴鍋(HHS，江蘇省醫(yī)療器械廠)，循環(huán)水式多用真空泵(SHB-Ⅲ，鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司)，紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(UV-2600，島津儀器有限公司)。

2　方法與結(jié)果

2.1對(duì)照品溶液的制備精密稱取蘆丁對(duì)照品適量，置于25 mL容量瓶中，加入70%乙醇定容至刻度，使其濃度為160 μg/mL對(duì)照品溶液。

2.2供試品溶液的制備稱取4種錦雞兒根、地上部分粗粉約10 g，分別置于圓底燒瓶中，加150 mL70%乙醇,水浴回流提取2 h，連續(xù)提取3次，合并濾液，減壓濃縮，干燥，獲得浸膏。將各部位浸膏用70%乙醇溶解，定容至50 mL，取1 mL置于25 mL容量瓶中，加入70%乙醇定容至刻度，作為供試品溶液。

2.3測(cè)定波長(zhǎng)的選擇精密移取蘆丁對(duì)照品溶液1 mL,加入1 mL5%亞硝酸鈉溶液，經(jīng)10%硝酸鋁堿性條件下顯色，以試劑為空白，測(cè)定絡(luò)合物吸光度，500 nm處有最大吸收波長(zhǎng)，故選用此波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定。

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密吸取0、0.5、1、2、3、4、5 mL蘆丁對(duì)照品溶液，分別置于25 mL容量瓶，加70%乙醇至5 mL，先加5%亞硝酸鈉1 mL，搖勻，放置6 min，再加入10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加10%NaOH試液10 mL，再加70%乙醇至刻度，搖勻，放置15 min，以試劑做空白參比液測(cè)500 nm處的吸光度。應(yīng)用最小二乘法，以濃度X(μg/mL)與吸光度Y進(jìn)行線性擬合，得以吸光度做線性回歸Y=0.016X+0.012，r=0.999 5。結(jié)果表明蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液在濃度為2.957～31.006 μg/mL范圍內(nèi)濃度與吸光度的線性關(guān)系良好(圖1)。

圖1　蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.5穩(wěn)定性考察取同一供試品溶液于0、20、40、60、80、100 min測(cè)定吸光度，結(jié)果表明供試品溶液在40 min內(nèi)穩(wěn)定。

2.6精密度考察精密移取供試品溶液1份，以不加樣品溶液為空白，按“2.4”項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度，平行測(cè)定 5 次，結(jié)果RSD=0.19%，說(shuō)明精密度良好。

2.7重復(fù)性考察精密移取同一供試品溶液5份，每份2 mL，于500 nm處測(cè)吸光度，結(jié)果RSD=1.63%，說(shuō)明重現(xiàn)性良好。

2.8加樣回收率試驗(yàn)精密稱取已知含量的供試品溶液1 mL，9份，分別加入3水平的蘆丁對(duì)照品溶液，按“2.4”項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度，結(jié)果回收率98.71%，RSD=0.66%。

2.9樣品中總黃酮的測(cè)定取供試品溶液2 mL，按“2.4”項(xiàng)下方法顯色，于500 nm處測(cè)吸光度。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算4種錦雞兒不同部位的總黃酮含量，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　4種錦雞兒不同部位總黃酮的含量

3　討論

錦雞兒屬植物中含有豐富的黃酮類物質(zhì)，同種錦雞兒不同部位總黃酮含量不相同，刺葉錦雞兒和粉刺錦雞兒地上部分都比根部黃酮含量高，而吐魯番錦雞兒和狹葉錦雞兒根部比地上部分總黃酮含量高。不同種錦雞兒各部位總黃酮含量差異較大，根部總黃酮含量為吐魯番錦雞兒>狹葉錦雞兒>粉刺錦雞兒>刺葉錦雞兒；地上部分部分總黃酮含量為刺葉錦雞兒>狹葉錦雞兒>吐魯番錦雞兒>粉刺錦雞兒。其中，錦雞兒屬植物總黃酮含量差異可能與采集時(shí)期[9]、生長(zhǎng)地氣候條件、海拔等因素相關(guān)。

所測(cè)4種錦雞兒中，吐魯番錦雞兒和狹葉錦雞兒中的總黃酮含量較高，超過(guò)3%。黃酮類物質(zhì)具有良好的抗氧化、抗癌、抗血管增生、消炎、抗變應(yīng)性和抗病毒的功效。與方獻(xiàn)[6-7]的研究結(jié)果一致。提示吐魯番錦雞兒和狹葉錦雞兒黃酮成分的開(kāi)發(fā)利用具有較好的前景，有待進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用。

錦雞兒屬植物大多分布于新疆自然條件惡劣的荒漠、半荒漠、干旱、半干旱地區(qū)，其根系發(fā)達(dá)，具有防風(fēng)固沙的作用[10]，而錦雞兒的傳統(tǒng)用藥部位是根部，過(guò)度采挖必然會(huì)對(duì)當(dāng)?shù)丨h(huán)境造成極大破壞。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，刺葉錦雞兒、吐魯番錦雞兒和狹葉錦雞兒地上部分中同樣含有豐富的總黃酮，為錦雞兒地上部分替代根部入藥提供可能，也為地上部分部分總黃酮進(jìn)一步研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

[1]中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編輯委員會(huì).中國(guó)植物志[M].北京:科學(xué)出版社,1993:1.

[2]賈敏如,李星煒.中國(guó)民族藥志要[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2005:131-132.

[3]宋萍,楊趙立,包錦淵.鬼箭錦雞兒化學(xué)成分的研究[J].華西藥學(xué)雜志,2009,24(4):381-382.

[4]郝英魁.藏藥鬼箭錦雞兒化學(xué)成分的研究[D].天津:天津大學(xué),2007:27-28.

[5]Shi J, Chen B, Sun ZH, et al. Studies on flavonoid constituents of Caragana intermedia[J]. Acta Pharmaceutica Sinica, 2003, 38(8): 599-602.

[6]孫曉東,房士明,臧小單,等.昌都錦雞兒異黃酮類成分及其抑制NO生成活性[J].中國(guó)中藥雜志,2015, 40(16):3220-3223.

[7]康亞男,李媛媛,岳永花,等.小葉錦雞兒總黃酮提取工藝研究及對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠的作用[J].藥物評(píng)價(jià)研究,2013,36(1):22-25.

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[9]蒙秋霞,張麗珍,牛宇.不同生長(zhǎng)時(shí)期小葉錦雞兒黃酮類化合物含量的變化動(dòng)態(tài)[J].草地學(xué)報(bào),2011, 19(6):943-947.

[10]姚彥臣.我國(guó)錦雞兒屬灌叢草地類型的基本特點(diǎn)及其經(jīng)濟(jì)評(píng)價(jià)[J].中國(guó)草地,1992,14(2):55,60.

(本文編輯周芳)

Determination of total flavonoids content of four genus Caragana Fabr in Xinjiang

JIA Shengjie1, JIA Yuemei2, PAN Lan2, YANG Haiyan1, JIA Xinyue2, SHI Minghui2,Liwayiding Maihesuti2, JIA Xiaoguang2

(1XinjiangAgriculturalUniversity,Urumqi830046,China;2XinjiangInstituteofChineseMateriaMedicaandEthnodrug,Urumqi830002,China)

ObjectiveTo determine and compare the contents of total flavonoids from the root and acrial part of four genus Caragana Fabr in Xinjiang. MethodsTotal flavonoids of samples extracted by 70% ethanol were determined with colorimetry. ResultsFor different genus C. Fabr, the contents of total flavonoids were different in various parts of the samples. The roots of total flavonoids contents: C. turfanensis (Krassn.) Kom>C. stenophylla>C. pruinosa Kom>C. acanthophylla Kom. The acrial part of flavonoids contents: C. acanthophylla Kom>C. stenophylla>C. turfanensis (Krassn.) Kom>C. pruinosa Kom. For the same genus C. Fabr, the flavonoids contents of root and aboveground part were different. ConclusionThe determination of total flavonoids content in different parts of C.Fabr may prove to be useful for the development, protection and further study.

CaraganaFabr; root; acrial part; total flavonoids

國(guó)家自然科學(xué)基金-新疆聯(lián)合基金(U1203202)； 新疆維吾爾自治區(qū)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放課題(XJDX0201-2013-02); 新疆維吾爾自治區(qū)科研機(jī)構(gòu)創(chuàng)新發(fā)展專項(xiàng)資金(2014004)

賈盛杰(1983-)，男，在讀碩士，研究方向：食品、藥品研究。

賈曉光，男，研究員，碩士生導(dǎo)師，研究方向：中藥民族藥，E-mail:xgjia@vip.sina.com。

R28

A

1009-5551(2016)10-1230-03

10.3969/j.issn.1009-5551.2016.10.004

2016-04-28]