CD14啟動子-159位點基因多態(tài)性與中國延邊地區(qū)原發(fā)性高血壓左心室肥厚的關(guān)系*

金星，崔敬蘭，鄭壽煥，金光明

（延邊大學(xué)附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)影像二科，吉林延吉133000）

CD14啟動子-159位點基因多態(tài)性與中國延邊地區(qū)原發(fā)性高血壓左心室肥厚的關(guān)系*

金星，崔敬蘭，鄭壽煥，金光明

（延邊大學(xué)附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)影像二科，吉林延吉133000）

目的探討CD14啟動子-159位點基因多態(tài)性與中國延邊地區(qū)朝鮮族及漢族人群中原發(fā)性高血壓左心室肥厚的相關(guān)性。方法選取中國延邊地區(qū)朝鮮族原發(fā)性高血壓左心室肥厚116例，朝鮮族原發(fā)性高血壓非左心室肥厚107例及朝鮮族正常對照組108例；漢族原發(fā)性高血壓左心室肥厚103例，漢族原發(fā)性高血壓非左心室肥厚100例及漢族正常對照者108例。應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)多態(tài)性技術(shù)對正常對照者及所有患者的CD14啟動子-159位點基因進行基因型分析。多普勒超聲心動圖評估并計算其左心室質(zhì)量指數(shù)，并記錄體重指數(shù)、血壓、血糖、血脂、低密度脂蛋白及肌酐等指標。結(jié)果在朝鮮族及漢族受試人群中，原發(fā)性高血壓左心室肥厚組與原發(fā)性高血壓非左心室肥厚組相比，各基因型分布頻率在兩組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；在原發(fā)性高血壓左心室肥厚組中，CD14-159位點CC純合子基因型頻率高于原發(fā)性高血壓非左心室肥厚組及正常對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論CD14啟動子-159（C-T）基因多態(tài)性與延邊地區(qū)朝鮮族及漢族人群原發(fā)性高血壓左心室肥厚的形成相關(guān)，CC基因型是延邊地區(qū)人群發(fā)生原發(fā)性高血壓左心室肥厚的風(fēng)險因素。

CD14啟動子；民族；基因多態(tài)性；原發(fā)性高血壓；左心室肥厚

近年來，一些研究表明CD14啟動子-159位點C-T的多態(tài)性與腦卒中、頸動脈硬化、糖尿病腎病等血管病變的發(fā)生有密切關(guān)系[1-3]，且這種相關(guān)性與種族相關(guān)。左心室肥厚（left ventricular hypertrophy，LVH）是心腦血管事件的獨立危險因素，患者一旦發(fā)生原發(fā)性高血壓左心室肥厚（essential hypertension with left ventricular hypertrophy，EH-LVH），則心力衰竭的風(fēng)險明顯增高[4]。池小鉅等[5]研究提示，CYBA C242T多態(tài)性可能與中國EH-LVH相關(guān)，并認為T等位基因?qū)χ袊颊叽嬖诒Ｗo作用。但有關(guān)CD14啟動子-159位點C-T的多態(tài)性與EH-LVH關(guān)系的報道并不多。本實驗應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）技術(shù)，研究CD14啟動子-159位點基因多態(tài)性在延邊地區(qū)朝鮮族及漢族人群中EH-LVH與本族正常人中的分布，探討該位點的基因多態(tài)性與延邊地區(qū)朝漢兩個民族EH-LVH的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料

選取2012年1月-2014年1月在本院門診就診及住院的朝鮮族及漢族原發(fā)性高血壓（essential hypertension，EH）患者及朝漢對照組人群，最終入選朝鮮族EH患者223例，其中EH-LVH 116例，原發(fā)性高血壓非左心室肥厚（essential hypertension with non-left ventricular hypertrophy，EH-NLVH）107例；對照組108例。其中，男性184例，女性147例；平均年齡（58.47±9.63）歲。漢族最終入選EH患者203例，其中EH-LVH 103例，EH-NLVH 100例；對照組108例。其中，男性175例，女性136例；平均年齡（59.17±9.55）歲。所有人員均為中國延邊地區(qū)人群。EH診斷標準依據(jù)《中國高血壓防治指南》2005版，即坐位收縮壓（systolic blood pressure，SBP）≥140 mmHg和（或）舒張壓（diastolic blood pressure，DBP）≥90 mmHg。排除以下任一情況：繼發(fā)性高血壓、冠狀動脈粥樣硬化性心臟?。ü谛牟。?、先天性心臟病、瓣膜性心臟病和其他器質(zhì)性心臟病，糖尿病、惡性腫瘤、免疫系統(tǒng)疾病以及藥物引起的肝腎功能異常也需排除。所有納入標準的受試者均簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1臨床資料采集清晨空腹抽取靜脈血，測定生化指標，并記錄受試者年齡、體重指數(shù)（body mass index，BMI）、SBP、DBP、空腹血糖（fasting plasma glucose，F(xiàn)BG）、三酰甘油（Triglyceride，TG）、總膽固醇（total cholesterol，TC）、低密度脂蛋白（low-density lipoprotein-cholestero，LDL-C）和肌酐（creatinine，Cr）等，BMI=體重（kg）/[身高（m）]2。

1.2.2超聲心動圖檢查采用德國Seimens公司S2000彩色多普勒超聲診斷儀，探頭頻率1.7～3.4MHz，測定左心室舒張末期內(nèi)徑（Left ventricular end-diastolic diameter，LVEDD）、舒張期室間隔厚度（Diastolic ventricular septal thickness，DVST）、舒張期左心室后壁厚度（diastolic left ventricular posterior wall thickness，DLVPWT）。計算左心室質(zhì)量（left ventricular mass，LVM）和左心室質(zhì)量指數(shù)（left ventricular mass index，LVMI）。根據(jù)Devereux公式計算[6]。LVH定義為：男性LVMI>125g/m2，女性LVMI>120g/m2。

1.2.3基因型檢測提取DNA后進行PCR擴增，正向引物：5'-GCCTCTGACAGTTTATGTAATC-3'，反向引物：5'-GTGCCAACAGATGAGGTTCAC-3'（美國Promega公司）。之后取PCR擴增產(chǎn)物10μl，用限制性內(nèi)切酶AvaⅡ酶切（美國Promega公司）CD14基因-159位點，待反應(yīng)終止后，電泳并經(jīng)紫外燈判斷結(jié)果拍照。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料用均數(shù)±標準差（±s）表示，等位基因和基因型頻率用χ2檢驗，各分組間臨床指標比較用t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

經(jīng)Hardy-Weinberg平衡定律檢驗，CD14啟動子-159位點基因型分布符合遺傳平衡定律，符合等位基因頻率在人群中的分布。

2.1CD14基因型分析

CD14 PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)酶切后基因型有3種，CC型（497 bp），CT型（497、353和144 bp），TT型（353和l44 bp）。測序結(jié)果表明該位點存在C-T的基因多態(tài)性。見圖1、2。

圖1　CD14啟動子-159位點基因型2%瓊脂糖凝膠電泳圖

圖2　CD14啟動子-159位點基因型測序圖

2.2朝鮮族患者各組間CD14基因型、等位基因及CC VS CT+TT基因型比較

采用χ2檢驗，發(fā)現(xiàn)朝鮮族患者CD14啟動子-159位點基因型在EH-LVH、EH-NLVH及對照組中的分布差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；等位基因頻率在各組人群中的分布差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；朝鮮族患者CD14啟動子-159位點CC基因頻率與CT+TT基因頻率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

表1　朝鮮族各組間CD14-159位點各基因型、等位基因及CC VS CT+TT基因型頻率分布例（%）

2.3漢族患者各組間CD14基因型、等位基因及CC VS CT+TT基因型比較

采用χ2檢驗，發(fā)現(xiàn)漢族患者CD14啟動子-159位點基因型在EH-LVH、EH-NLVH及對照組中的分布差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；等位基因頻率在各組人群中的分布差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；漢族患者CD14啟動子-159位點CC基因頻率與CT+TT基因頻率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

表2　漢族各組間CD14-159位點各基因型、等位基因及CC VS CT+TT基因型頻率分布例（%）

2.4朝鮮族、漢族EH-LVH組及EH-NLVH組中CC基因型和CT+TT基因型分布

采用χ2檢驗，發(fā)現(xiàn)朝鮮族、漢族EH-LVH組及EH-NLVH組中CC基因型和CT+TT基因型分布差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），證明朝鮮族、漢族EH-LVH組及EH-NLVH組中CC基因型和CT+TT基因型分布相似。見表3。

表3　CC基因型和CT+TT基因型比較例

2.5一般臨床資料比較

采用t檢驗，在朝鮮族和漢族人群中，EH-LVH組、EH-NLVH組和對照組3組比較，受試者在年齡、體重、BMI、FBG、TC、TG、LDL及Cr差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。EH-LVH組和EH-NLVH組的SBP、DBP要高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）。見表4、5。

表4　朝鮮族患者各組間臨床資料比較（±s）

表4　朝鮮族患者各組間臨床資料比較（±s）

組別年齡/歲體重/kgBMI/（kg/m2）SBP/mmHgDBP/mmHg EH-LVH（n=116）59.211±10.42269.533±12.61524.122±4.357163.404±16.28796.616±10.281 EH-NLVH（n=107）60.128±10.33068.549±11.37524.205±5.001147.590±14.30488.857±11.798對照組（n=108）56.472±9.77166.505±10.16322.187±5.455120.336±13.01968.545±16.207 t值2.1123.8971.9877.0318.892 P值0.7930.3330.1390.0190.005組別FBG/（mmol/L）TC/（mmol/L）TG/（mmol/L）LDL/（mmol/L）Cr/（mmol/L）EH-LVH（n=116）5.704±1.3354.405±1.3331.496±0.6752.799±0.78755.494±35.210 EH-NLVH（n=107）5.823±1.3264.427±1.4551.459±0.8022.711±0.80553.452±39.917對照組（n=108）5.594±1.0904.343±1.7731.511±0.5752.542±1.17647.336±17.507 t值3.5562.9882.0531.2483.051 P值0.2910.1300.9960.8960.549

表5　漢族患者各組間臨床資料比較

3 討論

動脈內(nèi)中膜厚度的增厚及硬化斑塊形成是冠心病、腦血管疾病的重要發(fā)病預(yù)測指標[7-8]。CD14主要表達在單核巨噬細胞表面，通過刺激單核-巨噬細胞系統(tǒng)釋放多種炎癥細胞因子，加速蛋白質(zhì)糖化產(chǎn)物的形成并導(dǎo)致其在血管內(nèi)堆積，引起血管平滑肌細胞增生和內(nèi)中膜增厚；其次，通過合成膠原蛋白Ⅲ[9]或者直接作用于管壁細胞，增加血管細胞外基質(zhì)[10]，引起纖維組織增生及鈣質(zhì)沉著，使內(nèi)中膜增厚、血栓形成，最終導(dǎo)致動脈硬化及硬化斑塊的形成[11-12]。

EH患者外周血管阻力的增高及冠狀動脈粥樣硬化斑塊的形成均可以造成大動脈彈性下降，導(dǎo)致心肌缺血，使心臟前、后負荷增大。為代償提高心臟的排血量，只能通過增加心肌收縮力和增大心室舒張末期容量來完成，前者導(dǎo)致心肌細胞發(fā)生纖維化使心肌肥厚，后者導(dǎo)致心肌細胞發(fā)生重構(gòu)使心腔擴張，當上述改變超過機體的代償能力時，會引起心肌順應(yīng)性及心臟舒張功能下降，最終導(dǎo)致收縮功能下降引發(fā)心力衰竭。

雖然不同種族和不同地域之間在遺傳背景上的差異是導(dǎo)致疾病易感性不同的一個重要因素，但不可否認的是，環(huán)境、生活習(xí)慣及其他因素也在疾病的發(fā)生過程中起著十分重要的作用。延邊朝鮮族地區(qū)是中國最大的朝鮮族聚集地，居住人口主要為朝鮮族和漢族，民族團結(jié)緊密，生活及飲食習(xí)慣也相互滲透、影響，在延邊地區(qū)居住的漢族人群也多喜食朝鮮族的傳統(tǒng)飲食。傳統(tǒng)的朝鮮族飲食主要特點就是鹽分及糖分所占比例較高，如泡菜等，而高鹽高糖飲食則普遍被認為是導(dǎo)致高血壓發(fā)病的重要原因。因此，筆者假設(shè)是環(huán)境因素導(dǎo)致了朝漢兩個不同民族在CD14-159位點基因多態(tài)性分布上出現(xiàn)相似點并共同擁有相同的EH-LVH易感基因，即純合子CC基因型。

在本研究中，筆者對延邊地區(qū)朝鮮族和漢族人群CD14啟動子上游-159位點進行基因型的調(diào)查。研究表明，CD14啟動子上游-159位點C-T基因多態(tài)性與延邊地區(qū)朝鮮族及漢族人群EH-LVH相關(guān)，其中純合子CC基因型是延邊地區(qū)人群發(fā)生EH-LVH的遺傳學(xué)風(fēng)險因素。

4 結(jié)論

CD14啟動子-159（C-T）基因多態(tài)性與延邊地區(qū)朝鮮族及漢族人群EH-LVH的形成相關(guān)，CC基因型是延邊地區(qū)人群發(fā)生EH-LVH的風(fēng)險因素。

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（申海菊編輯）

Correlation between CD14 promoter gene-159（C-T）polymorphism and essential hypertension with left ventricular hypertrophy in China Yanbian area*

Xing Jin，Jing-lan Cui，Shou-huan Zheng，Guang-ming Jin
（Department of Radiology，the Affiliated Hospital of Yanbian University，Yanji，Jilin 133000，China）

Objective To investigate the correlation between CD14 promoter gene-159（C-T）polymorphism and essential hypertension with left ventricular hypertrophy（EH-LVH）in Korean and Han populations of China Yanbian area.Methods In the two case-control research，one contained 331 volunteers which were all Korean nationality patients including 116 EH-LVH and 107 EH-NLVH and 108 normal controls，the other contained 311 volunteers which were all Han nationality patients including 103 EH-LVH and 100 EH-NLVH and 108 normal controls.CD14 promoter gene-159（C-T）polymorphism was analyzed by polymorphism chain reaction.Left ventricular mass index was measured and calculated by echocardiography.Body mass index，blood pressure（BP），fasting blood glucose，triglycerides，total cholesterol，low-density lipoprotein and creatinine were recorded.Results There was a difference in genotype distribution frequency between the EH-LVH group and the EH-NLVH group of both Korean and Han patients（P＜0.05）.The CC homozygous genotype frequency of the CD14-159 locus in the EH-LVH group was significantly higher than that in the EH-NLVH group andthe normal control group both in Korean and Han populations（P＜0.05）.Conclusions The distribution of CD14 promoter gene-159（C-T）polymorphism has a significant correlation with EH-LVH both in Korean nationality and Han nationality of China Yanbian area.The CC genotype is a susceptible gene for EH-LVH in Yanbian area.

CD14 promoter-159 gene；nationality；polymorphism；essential hypertension；left ventricular hypertrophy

R 544.11

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.17.010

1005-8982（2016）17-0049-05

2016-03-10

國家自然科學(xué)基金（No：30560054）

金光明，E-mail；jgm920@sina.com；Tel：13844318641