液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)測定酒類產(chǎn)品中γ—氨基丁酸

伊芳

摘要 建立液相色譜—四極桿串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，測定酒類產(chǎn)品中γ-氨基丁酸。結(jié)果表明：γ-氨基丁酸的濃度在0.01～0.50 mg/L范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r2=0.999 1。食品中γ-氨基丁酸的檢出限為0.003 mg/L，加標(biāo)回收率在85%以上。該方法快速、靈敏、準(zhǔn)確。

關(guān)鍵詞 γ-氨基丁酸；酒類；液相色譜-四極桿串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)

中圖分類號 TS262.2；TS261.7 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-5739（2016）06-0272-02

γ-氨基丁酸（GABA）是一種天然存在的非蛋白組成氨基酸，廣泛分布在動植物體中，是很重要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，可改善腦、腎、肝等器官的生理活性，還能促進(jìn)人體內(nèi)氨基酸代謝的平衡，調(diào)節(jié)免疫功能。γ-氨基丁酸在2009年經(jīng)衛(wèi)生部批準(zhǔn)為一種新資源食品，能夠被應(yīng)用于飲料、巧克力及其制品、烘烤食品、糖果、可可制品等食品中，但不用于嬰幼兒食品?！秶沂称钒踩珮?biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)（GB2760-2011）》將γ-氨基丁酸列入“表B.3允許使用的食品用合成香料名單”，并規(guī)定：食品用香料、香精在各類食品中按生產(chǎn)需要適量使用。因此，γ-氨基丁酸在食品行業(yè)得到更廣泛的研究和應(yīng)用。在酒類產(chǎn)品中，γ-氨基丁酸也得到了廣泛研究，酒中添加適當(dāng)劑量的GABA，起到鎮(zhèn)定、醒酒、促進(jìn)乙醇代謝、增加飲用者酒量的作用。葡萄酒和果酒中添加適當(dāng)劑量的GABA，配制成GABA酒，可以滿足更多消費(fèi)群體的需求，如適合女性、中老年人群、白領(lǐng)人士享用的中高檔花色果酒中可以添加GABA。

GABA具有對電化學(xué)、紫外、可見光不靈敏的特點(diǎn)，對其測定不能使用直接測定的方法。關(guān)于GABA 的測定，近年來國內(nèi)外有氨基酸分析儀測定[1-3]、柱層析熒光測定法、比色法[4]、薄層法[5]、紙電泳法[6]、毛細(xì)管電泳法[7]、離子色譜法[8]、高效液相色譜法[9- 10]、液質(zhì)聯(lián)用法[11]等。但酒基體比較復(fù)雜，一般由生物發(fā)酵而成，干擾較嚴(yán)重。本文探索液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用法測定酒類中γ-氨基丁酸含量的方法，該技術(shù)無須衍生化等特殊條件，精密度和準(zhǔn)確度符合要求。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)儀器和試劑

試驗(yàn)用液質(zhì)聯(lián)用儀：液相色譜四極桿串聯(lián)質(zhì)譜（電噴霧電離源（ESI））安捷倫6410，液相色譜系統(tǒng)包括自動進(jìn)樣器。

試驗(yàn)試劑：γ-氨基丁酸標(biāo)準(zhǔn)樣品（含量為99%，SIGMA公司生產(chǎn)），甲醇（色譜純）。

1.2 儀器分析條件

1.2.1 液相色譜條件。流動相組成：0.1%乙酸水溶液+甲醇（4+6，體積比）；流速：200 μL/min；注射體積：20 μL；柱溫：26 ℃。

1.2.2 質(zhì)譜條件。離子源：電噴霧離子源（ESI）；掃描方式：正離子掃描；檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；干燥氣溫度：350 ℃；干燥氣流速：10 L/min；霧化器壓力；275.8 kPa；毛細(xì)管電壓：4 000 V。

1.3 試驗(yàn)方法

白酒：直接移取1 mL試樣過0.22 μm濾膜；葡萄酒和果酒：移取5 mL試樣冷凍離心（10 000 r/min，15 min，2～4 ℃），取上清液過0.22 μm濾膜，根據(jù)其含量直接或稀釋液相色譜—質(zhì)譜/質(zhì)譜測定。

2 結(jié)果與分析

2.1 γ-氨基丁酸分析條件確定

γ-氨基丁酸化分子量103，在液質(zhì)里選擇正離子模式，得到母離子[M+1]為103.9，在一定碰撞電壓和能量下，失去NH3得到子離子M/Z：86.9，再失去1個H2O得到子離子M/Z：68.9，具體碰撞條件見表1，母離子和子離子在液質(zhì)中形成見圖1，色譜圖見圖2。

2.2 前處理方法

γ-氨基丁酸在白酒含量較低，一般直接過0.22 μm濾膜進(jìn)樣測定。葡萄酒和果酒冷凍離心（10 000 r/min，15 min，2～4 ℃），去除部分酒石酸鹽類、單寧、果膠、色素等，取上清液過0.22 μm濾膜，根據(jù)其含量直接或稀釋進(jìn)樣。

2.3 線性關(guān)系和檢出限

配制不同濃度梯度的γ-氨基丁酸溶液，其濃度分別為0.01、0.02、0.04、0.10、0.20、0.50 mg/L。在試驗(yàn)設(shè)定條件，將γ-氨基丁酸的質(zhì)量濃度（mg/L）作為橫坐標(biāo)X，將γ-氨基丁酸的峰面積作為縱坐標(biāo)Y進(jìn)行線性回歸，確定回歸方程為Y=177.4X，回歸系數(shù)r2=0.999 1，具有良好的線性關(guān)系。當(dāng)信噪比（S/N）=3時，儀器檢出限為0.003 mg/L。

2.4 方法的精密度和回收率

取不含γ-氨基丁酸的白酒10 mL作為空白基質(zhì)，分別添加5 mg/L標(biāo)液0.08、0.20、0.40 mL共3組，每組6份，進(jìn)行平行試驗(yàn)。按照試驗(yàn)方法進(jìn)行前處理和儀器分析測定，計(jì)算回收率和精密度試驗(yàn)數(shù)據(jù)，結(jié)果見表2。

從表2可以看出，采用該方法能夠使回收率達(dá)到85%以上，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD小于6%。采用該方法能夠獲得較高的測量精密度和準(zhǔn)確度。

2.5 樣品測定

依據(jù)《國家食品安全標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)（GB2760-2014）》，化學(xué)合成的γ-氨基丁酸可作為在食品生產(chǎn)中能夠作為香料使用，但要控制使用量和使用范圍。在白酒中，γ-氨基丁酸是按生產(chǎn)需要適量使用。在市場抽取白酒樣品近50組，運(yùn)用液相色譜—四極桿串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)測定，共檢出5組樣品含有γ-氨基丁酸，含量為0.1～0.8 mg/L。

3 結(jié)論

運(yùn)用液相色譜—四極桿串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)測定酒類中γ-氨基丁酸，當(dāng)濃度在0.01～0.50的范圍內(nèi)，表現(xiàn)出良好的線性關(guān)系。該方法具有前處理方法簡單、測定過程快速、靈敏度高、測定結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。

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