MCM2和E2F3在腦膜瘤中的表達(dá)及臨床意義

張　彪　夏祥國

1.西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)外科，四川瀘州646000；2.重慶市大足區(qū)人民醫(yī)院神經(jīng)外科，重慶402360

MCM2和E2F3在腦膜瘤中的表達(dá)及臨床意義

張彪1，2夏祥國1▲

1.西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)外科，四川瀘州646000；2.重慶市大足區(qū)人民醫(yī)院神經(jīng)外科，重慶402360

目的探討腦膜瘤中MCM2、E2F3的表達(dá)與臨床及病理特征的關(guān)系。方法收集2013～2015年西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)外科手術(shù)切除并經(jīng)病理確診的腦膜瘤標(biāo)本69例以及2015年腦外傷患者行內(nèi)外減壓術(shù)采集的正常腦膜19例，運(yùn)用免疫組化檢測MCM2、E2F3在腦膜瘤以及正常腦膜中的表達(dá)，分析瘤組織中MCM2、E2F3的表達(dá)與腦膜瘤臨床及病理特征的關(guān)系。結(jié)果腦膜瘤中MCM2、E2F3的表達(dá)強(qiáng)度明顯高于正常腦膜（P<0.05）。MCM2、E2F3在不同病理級別腦膜瘤間的表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），并且與腦膜瘤的病理級別呈正相關(guān)（P<0.05）。MCM2、E2F3在不同性別、年齡、部位、大小腦膜瘤間的表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。腦膜瘤中的MCM2與E2F3表達(dá)呈正相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論腦膜瘤中MCM2、E2F3的表達(dá)水平顯著增高，并且與病理分級程度密切相關(guān)，在調(diào)控腦膜瘤細(xì)胞的異常增殖方面起協(xié)同作用，值得臨床引起重視。

微小染色體維持蛋白2；E2F3；腦膜瘤；免疫組化

ZHANG Biao1，2XIA Xiangguo1▲

1.Department of Neurosurgery，the Affiliated Hospital of Southwest Medical University，Sichuan Province，Luzhou 646000，China；2.Department of Neurosurgery，the People's Hospital of Dazu District in Chongqing City，Chongqing 402360，China

［Abstract］Objective To discuss the relationship between the expression of MCM2 and E2F3 in meningioma，and the clinical and pathological characteristics.Methods 69 cases of meningioma specimens derived from operation resection and diagnosed by pathology in the Department of Neurosurgery，the Affiliated Hospital of Southwest Medical University from 2013 to 2015，and 19 cases of normal meningeal collected from patients with cerebral trauma by internal and external decompression in 2015 were collected.Immunohistochemistry was applied to detect the expression of MCM2 and E2F3 in meningioma and normal meningeal.The relationship between the expression of MCM2 and E2F3 in meningioma，and the clinical and pathological characteristics of meningioma were analzyed.Results The expression intensity of MCM2 and E2F3 in meningioma was significantly higher than that in the normal meningeal tissues（P<0.05）.Significant differences in the expression of MCM2 and E2F3 were found among different levels of pathology meningioma（P< 0.05），and the correlation between the expression of MCM2 and E2F3 in meningioma and the pathological grading of meningioma was positive（P<0.05）.The differences of the expression of MCM2 and E2F3 in meningioma between different genders，ages，locations，tumor sizes were not statistically significant（P>0.05）.The correlation between the expression of MCM2 and E2F3 in meningioma was positive（P<0.05）.Conclusion The expression of MCM2 and E2F3 in meningioma increased significantly and correlated with pathological grading of meningioma closely.Both of them may have synergistic effect on regulating abnormal proliferation of meningioma cells.Therefore，it is worthy of promotion in clinic.

［Key words］MCM2；E2F3；Meningioma；Immunohistochemistry

部分腦膜瘤由于生長部位特殊、毗鄰周圍重要組織結(jié)構(gòu)、侵襲性生長或具惡性生物學(xué)特征等原因，手術(shù)不能全切腫瘤致腫瘤殘留或術(shù)后復(fù)發(fā)，從而影響患者預(yù)后［1-2］，因此有必要從生物學(xué)角度尋找新的突破點(diǎn)探討腦膜瘤發(fā)生及演變過程。MCM2僅表達(dá)于增殖狀態(tài)細(xì)胞周期，研究表明多種腫瘤的發(fā)生與MCM2的高表達(dá)有關(guān)［3-5］。E2F3作為E2F轉(zhuǎn)錄因子家族成員，通過調(diào)控CyclinE、CDK2等多種基因的表達(dá)對細(xì)胞增殖活動進(jìn)行調(diào)控。E2F3在不同類型的腫瘤異常增殖過程中可能表達(dá)上調(diào)［6-7］，也可能下調(diào)［8-9］。E2F3與MCM2通過CyclinE、CDK2相互聯(lián)系，推測腦膜瘤的發(fā)生可能與E2F3、MCM2相關(guān)。目前國內(nèi)外對于MCM2、E2F3在腦膜瘤中研究較少，聯(lián)合研究更少，而且E2F3在腦膜瘤中是低表達(dá)還是高表達(dá)，需要進(jìn)一步研究。本實驗采用免疫組化方法檢測MCM2、E2F3在腦膜瘤及正常腦膜組織中的表達(dá)，分析MCM2以及E2F3在腦膜瘤中的表達(dá)與臨床以及病理特征的關(guān)系，為尋找腦膜瘤的新的診療途徑提供理論依據(jù)。

1　資料與方法

1.1一般資料

腦膜瘤標(biāo)本69例為2013～2015年西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院（以下簡稱“我院”）神經(jīng)外科手術(shù)切除并經(jīng)病理科確診的病理標(biāo)本，均系首次開顱手術(shù)、未行放化療、未進(jìn)行激素治療且未合并其他部位的腫瘤。69例腦膜瘤患者中，男28例，女41例；平均年齡為（55.40± 9.80）歲，≥40歲57例，<40歲12例；顱底腦膜瘤29例，非顱底腦膜瘤40例；以MRI或CT中腫瘤平均徑［（最大橫徑+豎徑+矢狀徑）/3］作為大小分型標(biāo)準(zhǔn)：小型腦膜瘤14例（<3 cm）、中型腦膜瘤30例（3～5 cm）、大型腦膜瘤25例（>5 cm）。根據(jù)2007年WHO對中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級腦膜瘤分別為38、25、6例。收集2015年我院腦外傷患者行內(nèi)外減壓術(shù)的正常腦膜組織標(biāo)本19例，男8例，女11例；平均年齡為（50.87±12.32）歲。本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)且均簽署知情同意書。腦膜瘤和腦外傷患者性別、年齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本取材和處理69例腦膜瘤標(biāo)本以及19例正常腦膜組織取材后均及時石蠟包埋，并連續(xù)以4 μm的厚度切片（僅對腦膜瘤標(biāo)本進(jìn)行HE染色，通過鏡檢確認(rèn)為腦膜瘤并病理分級）。

1.2.2免疫組化法兔抗人MCM2和E2F3單克隆抗體均購自南京Bioworld Technology公司。采用免疫組化S-P法檢測。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：MCM2、E2F3典型陽性表達(dá)為細(xì)胞核呈現(xiàn)黃色、黃褐色顆粒。在400倍顯微鏡下隨機(jī)選取5個視野，觀察100個腫瘤細(xì)胞中陽性細(xì)胞。判定標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)陽性細(xì)胞百分比及染色的強(qiáng)度：①陽性表達(dá)細(xì)胞百分比分級為<5%（0分）、5%～25%（1分）、>25%～50%（2分）、>50%～75%（3分）、>75%（4分）；②陽性表達(dá)細(xì)胞的染色強(qiáng)度分為無染色（0分）、淡黃色（1分）、褐色或黃色（2分）、深褐色（3分）。根據(jù)以上兩指標(biāo)的積分相加得總分，其中，0分為陰性（-），1～2分為弱陽性（+）、3～5分為中度陽性（++），>5分為強(qiáng)陽性（+++）。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，兩組等級資料比較采用Man-Whitney U秩和檢驗，多組樣本比較采用Kruskal-Wallis H秩和檢驗，采用Spearman秩相關(guān)分析進(jìn)行變量關(guān)聯(lián)性分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1正常腦膜與腦膜瘤組織中MCM2、E2F3表達(dá)情況

腦膜瘤中MCM2、E2F3的表達(dá)強(qiáng)度明顯高于正常腦膜組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1、2，圖1～2（封三）。

表1　正常腦膜與腦膜瘤中MCM2表達(dá)強(qiáng)度比較（例）

表2　正常腦膜與腦膜瘤中E2F3表達(dá)強(qiáng)度比較（例）

2.2腦膜瘤中MCM2、E2F3表達(dá)強(qiáng)度相關(guān)因素分析

MCM2、E2F3在不同病理級別腦膜瘤間的表達(dá)強(qiáng)度差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），并且與腦膜瘤的病理級別呈正相關(guān)（rs=0.490、0.436，P<0.05）。MCM2、E2F3在不同性別、年齡、部位、大小腦膜瘤之間的表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表3。

2.3MCM2與E2F3在腦膜瘤中表達(dá)的相關(guān)性

腦膜瘤中的MCM2表達(dá)與E2F3表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系（rs=0.619，P<0.05）。見表4。

3　討論

MCM2蛋白由MCM2基因編碼，與M3/4/5/6/7形成六聚體，在G1早期形成前復(fù)制復(fù)合物，通過CDK2/ CyclinE和CDC7/DBF4激活后結(jié)合CDC45，啟動DNA復(fù)制。E2F3系E2F家族成員，由465個氨基酸組成。CDK2/CyclinE在CyclinD、CDK4/6的作用下通過磷酸化激活pRb后分離出E2F，而E2F能夠進(jìn)一步編碼調(diào)控細(xì)胞周期CDK2/CyclinE基因從而控制CDK2/CyclinE蛋白的表達(dá)，發(fā)揮轉(zhuǎn)錄作用且使G1期細(xì)胞進(jìn)入S期促進(jìn)細(xì)胞增殖。

本研究采用免疫組化法檢測MCM2、E2F3在腦膜瘤中的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，腦膜瘤中MCM2、E2F3的表達(dá)強(qiáng)度顯著高于正常腦膜組織。大量研究證明，腎上腺皮質(zhì)腺瘤、膠質(zhì)瘤、賁門癌中MCM2表達(dá)明顯上調(diào)［3，10-11］。目前有關(guān)MCM2在腦膜瘤中表達(dá)的報道較少，Saydam等［12］研究結(jié)果表明，腦膜瘤中MCM2表達(dá)明顯高于正常腦膜，與本研究相符，推測MCM2可能促進(jìn)細(xì)胞周期G1向S期過渡而促進(jìn)腦膜瘤的發(fā)生。許多研究表明，E2F3在惡性黑色素瘤、前列腺癌、膀胱癌、喉鱗癌組織中的表達(dá)水平顯著上調(diào)［7，13-14］，而胃癌、腎癌中E2F3的表達(dá)低于瘤旁組織［8-9］。因此，E2F3轉(zhuǎn)錄因子在不同腫瘤中表達(dá)水平不一致，可能因為不同腫瘤中E2F3下游結(jié)合的靶基因不同。

表3　腦膜瘤中MCM2、E2F3表達(dá)強(qiáng)度相關(guān)因素分析（例）

表4　MCM2與E2F3在腦膜瘤中表達(dá)的關(guān)系（例）

本研究結(jié)果表明，MCM2、E2F3在不同病理級別腦膜瘤中表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），并且腦膜瘤中的MCM2、E2F3的表達(dá)水平與病理級別呈正相關(guān)。國內(nèi)外研究表明［3，10-11，15］，MCM2、E2F3在前列腺癌、卵巢腺癌、肝癌中的表達(dá)隨病理級別升高而增加。本研究與其他研究結(jié)果相符，提示MCM2、E2F3的高表達(dá)可能與腦膜瘤細(xì)胞惡性增殖有關(guān)，可能成為評價腦膜瘤惡性增殖指標(biāo)。Saydam等［12］研究表明，MCM2和E2F3在各級別腦膜瘤間的表達(dá)差異無顯著性，考慮與其實驗方法不同以及樣本數(shù)量偏少有關(guān)。

本研究表明，腦膜瘤中的MCM2表達(dá)與E2F3表達(dá)呈正相關(guān)（rs=0.619，P<0.05）。CDK2/CyclinE在CyclinD、CDK4/6的共同參與下可引起pRb磷酸化失去活性，使pRb與E2F分離，E2F聚集后激活DNA復(fù)制以及細(xì)胞周期進(jìn)程所必要的大量的基因轉(zhuǎn)錄。在E2F的基因靶點(diǎn)中有CDK2/CyclinE，E2F3的釋放使CyclinE/CDK2復(fù)合物激活引起更多的pRb發(fā)生磷酸化而失活，導(dǎo)致E2F3的活性進(jìn)一步增強(qiáng)以及CDK2/ CyclinE的聚集，這一循環(huán)依賴CyclinD、CDK4/6的作用使pRb持續(xù)失活，促使E2F3過度表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞由G1期過渡到S期，最終引起細(xì)胞異常增殖［16］。因此，MCM2促進(jìn)腫瘤細(xì)胞異常增殖依賴于E2F3過度表達(dá)后編碼的CDK2/CyclinE激活，這為本實驗結(jié)果提供理論依據(jù)，從而表明MCM2、E2F3在腦膜瘤細(xì)胞異常增殖方面可能起著重要的協(xié)同作用。

總之，MCM2與E2F3在腦膜瘤診斷、惡性增殖等過程中發(fā)揮著重要作用。由于本研究方法尚顯簡淺，樣本量偏少，筆者將繼續(xù)收集臨床標(biāo)本進(jìn)行較全面的MCM2、E2F3基因及蛋白表達(dá)的研究，以期探尋MCM2、E2F3與腦膜瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。目前關(guān)于腫瘤中以MCM2、E2F3基因以及蛋白為治療靶點(diǎn)的研究還處于起步階段，未進(jìn)入臨床試驗［17-20］。伴隨MCM2、E2F3相應(yīng)的抑制劑在腦膜瘤中研究的深入，可能為腦膜瘤的診斷及分子靶向治療提供新思路。

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The expression and significance of MCM2 and E2F3 in Meningioma

R739.45

A

1673-7210（2016）09（c）-0039-04

2016-06-20本文編輯：程銘）

張彪（1984-），男，西南醫(yī)科大學(xué)2013級神經(jīng)外科專業(yè)在讀碩士研究生；研究方向：腦腫瘤。