Ki-67抗原與CDK8在宮頸癌及宮頸上皮內(nèi)瘤變中的表達(dá)及臨床意義

胡利霞　涂雪松　陳玉環(huán)#　李楓

孝感市中心醫(yī)院1婦產(chǎn)科，2藥學(xué)部，湖北　孝感　432000

Ki-67抗原與CDK8在宮頸癌及宮頸上皮內(nèi)瘤變中的表達(dá)及臨床意義

胡利霞1涂雪松2陳玉環(huán)1#李楓1

孝感市中心醫(yī)院1婦產(chǎn)科，2藥學(xué)部，湖北孝感432000

目的探究Ki-67抗原與細(xì)胞周期依賴性蛋白激酶8（CDK 8）在宮頸癌和宮頸上皮內(nèi)瘤變中的表達(dá)和臨床意義。方法選取宮頸癌患者64例，宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）患者138例，并對其進(jìn)行分級分期，同時選取正常婦女宮頸組織50例，運(yùn)用免疫組化方法檢測所納入研究病例宮頸組織Ki-67抗原與CDK8的表達(dá)水平。結(jié)果Ki-67與CDK8在正常宮頸、宮頸癌、CIN中的陽性率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；Ki-67與CDK8在宮頸癌各分化程度間，各臨床分期間的陽性率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；Ki-67與CDK8在鱗癌中的陽性率與腺癌比較，及在有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌中的陽性率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論Ki-67抗原及CDK8與宮頸癌、CIN的病變程度存在一定的關(guān)系，檢測其表達(dá)水平和強(qiáng)弱可能有助于預(yù)測宮頸高度病變的轉(zhuǎn)歸。

宮頸癌；宮頸上皮內(nèi)瘤變；Ki-67抗原；CDK8

Oncol Prog，2016，14（4）

宮頸癌是全球范圍內(nèi)具有高度危害性的女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之一，其發(fā)病率僅次于乳腺癌，且隨著時代發(fā)展，宮頸癌患病年齡愈趨低齡化，且每年因?qū)m頸癌死亡的患者數(shù)量也在逐年上升。宮頸上皮內(nèi)瘤變（cervical intraepithelial neoplasias，CIN）是一組與宮頸浸潤癌聯(lián)系緊密的癌前疾病的統(tǒng)稱，其包含了宮頸不典型增生和宮頸原位癌，根據(jù)細(xì)胞增生異常的程度可分為高度CIN和低度CIN，臨床上可分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期［1］。細(xì)胞周期依賴性蛋白激酶8（CDK8）在上皮組織的腫瘤中分布較廣，其表達(dá)與宮頸上皮細(xì)胞分化程度有關(guān)，而增殖細(xì)胞核抗原Ki-67是一種與細(xì)胞周期相關(guān)的蛋白質(zhì)，并且是一種與DNA結(jié)合的蛋白，參與細(xì)胞的有絲分裂，是區(qū)別正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞增殖狀況極為重要的一項(xiàng)指標(biāo)［2］。本研究應(yīng)用免疫組化方法檢測CDK8和Ki-67的表達(dá)水平和強(qiáng)度，探討這兩種物質(zhì)的表達(dá)與宮頸癌、CIN的關(guān)系及臨床意義，具體結(jié)果報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

病例來源于孝感市中心醫(yī)院2011年10月至2014年8月收治的宮頸癌患者64例及CIN患者138例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①宮頸癌的診斷、臨床分期及病理分型均符合《2012NCCN子宮腫瘤臨床實(shí)踐指南（第二版）》［3］中的標(biāo)準(zhǔn)；②CIN的診斷及分級符合2013年美國陰道鏡及宮頸病理協(xié)會對CIN的診斷分級標(biāo)準(zhǔn)［4］；③全部患者進(jìn)行宮頸部位病理取材前都未施行放、化療及生物與免疫治療；④相關(guān)操作均獲得患者知情同意，并簽署知情同意書。同時選取婦產(chǎn)科因子宮肌瘤等良性疾病行子宮完全切除術(shù)，且病理檢查證實(shí)無其他宮頸疾病婦女的正常宮頸上皮組織50例作為對照。CIN患者中病變程度為Ⅰ期34例，Ⅱ期48例，Ⅲ期56例。宮頸癌患者中發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移18例，未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者46例（64排CT下行全盆腔增強(qiáng)掃描判定淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移）；鱗狀細(xì)胞癌49例，腺癌15例；Ⅰ期17例，Ⅱ期22例，Ⅲ期13例，Ⅳ期12例；低分化20例，中分化29例，高分化15例。

1.2試劑

采用SP免疫組化試劑盒（通用）（北京北瑞達(dá)醫(yī)藥科技有限公司，型號規(guī)格：w i83516），Ki-67鼠抗人單克隆抗體（上海研生實(shí)業(yè)有限公司），CDK8鼠抗人單克隆抗體（北京萬域美瀾科技有限公司），兔抗人β-actin多克隆抗體（上?？婆d生物科技有限公司）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.3實(shí)驗(yàn)方法與陽性結(jié)果判定

對全部研究對象的宮頸上皮組織進(jìn)行病理標(biāo)本采集，并送病理科封蠟切片，嚴(yán)格依照試劑盒說明書所述步驟進(jìn)行免疫組化實(shí)驗(yàn)。

Ki-67抗原以細(xì)胞核出現(xiàn)紅褐色著色時判定為陽性細(xì)胞；CDK8以細(xì)胞核中呈現(xiàn)棕黃色著色時判定為陽性細(xì)胞。片中陽性細(xì)胞判定方法：每張切片在400倍光學(xué)顯微鏡下隨機(jī)選取5個視野，視野中出現(xiàn)陽性細(xì)胞的數(shù)量未超過總細(xì)胞數(shù)的25%者為0分，視野中出現(xiàn)陽性細(xì)胞的數(shù)量超過總細(xì)胞數(shù)的25%且小于50%者為2分；視野中出現(xiàn)陽性細(xì)胞的數(shù)量超過總細(xì)胞數(shù)的75%為3分。細(xì)胞核著色度的判定：未發(fā)現(xiàn)染色者為0分，出現(xiàn)淡黃（CDK8）或淡紅色（Ki-67）者為1分，出現(xiàn)棕黃色與黃色（CDK8）或紅褐色（Ki-67）者為3分，著色深淺介于1分與3分之間者判定為2分?？傟栃栽u分=陽性細(xì)胞出現(xiàn)率評分×著色度評分?！?分者為陰性，2分或3分者為低陽性，4分或5分者為中陽性，6分者為強(qiáng)陽性。評分≥2分者視為該病理切片陽性表達(dá)，陽性表達(dá)率等于出現(xiàn)陽性表達(dá)的病例數(shù)與總受試對象數(shù)比值的百分率［5］。

1.4觀察指標(biāo)

比較分析Ki-67與CDK8分別在宮頸癌、CIN及健康宮頸組織中的表達(dá)情況，并比較分析Ki-67與CDK8分別在宮頸癌不同病理類型、是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、不同分化程度及各臨床分期中的表達(dá)情況。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS1-8.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以百分率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1Ki-67與CDK8分別在各組織中的陽性表達(dá)情況比較

Ki-67與CDK8分別在正常宮頸、宮頸癌、CINⅠ期、CINⅡ期、CINⅢ期中的細(xì)胞陽性率不同，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表1）

表1　Ki-67與CDK8分別在各組織中的陽性表達(dá)情況比較［n（%）］

2.2Ki-67與CDK8分別在不同宮頸癌分化程度中的表達(dá)情況比較

Ki-67與CDK8分別在低、中、高各分化程度的宮頸癌中的表達(dá)不同，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表2）

表2　Ki-67與CDK8分別在不同宮頸癌分化程度中的表達(dá)情況比較［n（%）］

2.3Ki-67與CDK8分別在不同宮頸癌臨床分期中的表達(dá)情況比較

Ki-67與CDK8分別在宮頸癌的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各臨床分期中的細(xì)胞陽性率依次上升，且各期差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表3）

表3　Ki-67與CDK8分別在不同宮頸癌臨床分期中的表達(dá)情況比較［n（%）］

2.4Ki-67與CDK8在不同病理類型及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否宮頸癌中的表達(dá)比較

Ki-67在鱗癌中陽性率為89.80%（44/49），腺癌中陽性率為66.67%（10/15），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2= 4.66，P＜0.05）；CDK8在鱗癌中陽性率為87.76%（43/49），腺癌中陽性率為60.00%（9/15），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.81，P＜0.05）。Ki-67在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌中的陽性率為94.44%（17/18），在不存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌中的陽性率為71.74%（33/46），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=3.90，P＜0.05）；CDK8在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌中的陽性率為94.44%（17/18），在不存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌中的陽性率為69.57%（37/46），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.46，P＜0.05）。

3　討論

目前，隨著現(xiàn)代社會生活節(jié)奏的不斷變快與女性在工作中的競爭壓力逐漸增大，女性發(fā)生宮頸癌概率正在緩慢上升，我國是宮頸癌的高發(fā)區(qū)，每年新出現(xiàn)的宮頸癌患者超過10萬人，占女性每年新出現(xiàn)惡性生殖系統(tǒng)腫瘤近80%［6］。宮頸癌發(fā)病原因可能與多個性伴侶、過早進(jìn)行性生活、早育及人類乳頭瘤病毒（papillomavirus，HPV）感染等有關(guān)，病理分型以鱗狀細(xì)胞癌為主，其次為腺癌［7］。由宮頸疾病發(fā)展到宮頸癌是一個漸進(jìn)性、持續(xù)性過程，其從癌前病變進(jìn)展至宮頸浸潤癌需要近十年時間，其中CIN存在較大概率進(jìn)展為宮頸癌，而CINⅢ期在臨床上被視為宮頸癌的癌前病變，臨床上常根據(jù)陰道出血癥狀或子宮頸病理切片異常發(fā)現(xiàn)及確診［8］。CIN的致病因素較為廣泛，最為常見的是HPV感染，其中CINⅠ期主要由HPV6感染所致，而CINⅢ期主要由HPV16及HPV18感染所致，還有一些易增加HPV易感性的微生物感染、免疫缺陷等因素［9］。因?qū)m頸癌的危害性極大，嚴(yán)重影響了患者的生存質(zhì)量，且由于CIN的發(fā)生發(fā)展與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展及浸潤轉(zhuǎn)移存在較大的關(guān)聯(lián)，故研究觀察與二者起因、發(fā)展有密切聯(lián)系的指標(biāo)，對于宮頸癌的早期防控、診斷、治療及其預(yù)后情況具有重要臨床意義。

CDK8是細(xì)胞周期依賴性蛋白激酶（CDK）家族中的一員，其在宮頸上皮組織中的表達(dá)情況與CIN及宮頸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，觀察CDK8在宮頸上皮組織的表達(dá)水平能夠較好地預(yù)防與指導(dǎo)宮頸癌的臨床治療，進(jìn)而使宮頸癌的發(fā)病率大幅降低［10］。Ki-67是人細(xì)胞核于細(xì)胞周期增殖期分泌的一種特異性抗原，其能夠有效地反映組織細(xì)胞群的增殖活性，且在CIN及宮頸癌中表達(dá)水平與病情的進(jìn)展相一致，現(xiàn)今已被廣泛應(yīng)用于臨床對宮頸癌及其癌前病變的篩查，并常用于評價腫瘤的分化程度及癌癥放療與化療的治療效果［11］。

本研究結(jié)果顯示，Ki-67與CDK8在正常宮頸、CIN、宮頸癌組織中的陽性率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；CDK8與Ki-67在宮頸癌中的陽性率隨著分化程度的降低，陽性率也依次下降，各分化程度間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；Ki-67與CDK8在鱗癌或已發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌中的陽性率高于腺癌和未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。這與劉安麗和賀生［12］對Ki-67在宮頸鱗癌及CIN組織中表達(dá)的研究結(jié)果及李貞等［13］對CDK8在宮頸癌及CIN中表達(dá)的研究結(jié)果相一致。Gurda等［14］報(bào)道，Ki-67在低分期I型子宮內(nèi)膜癌與內(nèi)膜分化較好的子宮內(nèi)膜癌患者中陽性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究結(jié)果顯示，Ki-67在宮頸癌中的陽性率隨著分化程度的降低而降低，與其報(bào)道相似。Seo等［15］對結(jié)腸癌患者CDK8表達(dá)情況分析發(fā)現(xiàn)，CKD8表達(dá)率與患者的預(yù)后程度相關(guān)，其表達(dá)越高預(yù)后越差。因此，我們可以推斷CDK8也可以作為評價宮頸癌預(yù)后的指標(biāo)之一。結(jié)合本研究及國內(nèi)外學(xué)者的觀點(diǎn)可以推測，在宮頸上皮表達(dá)的Ki-67和CDK8與CIN和宮頸癌的發(fā)生及病變嚴(yán)重程度由淺至深逐漸發(fā)展的過程有一定的關(guān)聯(lián)，但仍尚需研究證實(shí)。

綜上所述，宮頸癌發(fā)展過程是一個有多級因子作用的復(fù)雜過程，但本研究屬于小樣本研究，且根據(jù)各因素分組后各組病例數(shù)較少，從而有可能造成統(tǒng)計(jì)學(xué)上有所偏差，因此尚需要大樣本量研究證實(shí)。

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The expression and clinical significance of Ki-67 antigen and CDK8 in cervical cancer and cervical intraepithelial neoplasia

HU Li-xia1TU Xue-song2CHEN Yu-huan1#LI Feng1
1Department of Obstetrics and Gynecology，2Department of Pharmacy，Central Hospital of Xiaogan，Xiaogan 432000，Hubei，China

Objective To explore the expression and clinical significance of Ki-67 antigen and CDK8 in cervical cancer and cervical intraepithelial neoplasia.Method A total of 64 cases of cervical cancer，and 138 cases of cervical intraepithelial neoplasia，were enrolled in this study，of which the differentiation and stage were determined；meanwhile，50 cases of normal cervical tissues were included as control，and immunohistochem ical method was applied to detect the expression level of Ki-67 antigen and CDK8 in these tissues.Result The positive rates of Ki-67 and CDK8 in normal cervix，cervical cancer and cervical intraepithelial neoplasia were significantly different（P＜0.05）；the positive rates of Ki-67 and CDK8 varied significantly w ith the differentiation，and clinical stages of cervical cancer（P＜0.05）；And the positive rates in squamous carcinoma vs adenocarcinoma，and in the presence of lymph node metastasis vs no metastasis were of statistically significant difference（P＜0.05）.Conclusion Ki-67 antigen and CDK8 are generally associated w ith the stage of cervical cancer and cervical intraepithelial neoplasia，besides，the expression level and potential m ight be useful in predicting the outcome of cervical cancer in advanced stage.

cervical cancer；cervical intraepithelial neoplasia；Ki-67 antigen；CDK8

R737.33

A

10.11877/j.issn.1672-1535.2016.14.04.16

2015-06-29）

（corresponding author），郵箱：chenyuhuanhubei@163.com