IL-17A和G-CSF在炎癥相關(guān)結(jié)腸癌中的作用△

劉建成　張興華　袁偉　王曉童　馬潔#北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院分子腫瘤學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京　000首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院消化科，北京　00050

IL-17A和G-CSF在炎癥相關(guān)結(jié)腸癌中的作用△

劉建成1張興華2袁偉1王曉童1馬潔1#
1北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院分子腫瘤學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京1000212首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院消化科，北京100050

目的探索在小鼠結(jié)腸炎相關(guān)結(jié)腸癌（CAC）發(fā)展過程中IL-17A和G-CSF的調(diào)控關(guān)系。方法采用氧化偶氮甲烷和葡聚糖硫酸鈉聯(lián)合誘導(dǎo)建立CAC動(dòng)物模型，得到了從結(jié)腸炎發(fā)展到結(jié)腸癌三個(gè)階段的小鼠模型（分別為AD1、AD2、AD3），免疫組化檢測(cè)各階段小鼠結(jié)直腸部位IL-17A和G-CSF表達(dá)；重組小鼠IL-17A體外刺激流式分選得到的結(jié)直腸上皮細(xì)胞，實(shí)時(shí)PCR和ELISA方法檢測(cè)G-CSF基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)水平。結(jié)果CAC模型經(jīng)歷了從隱窩病灶—腺瘤—腺癌疾病發(fā)展過程，與人CAC病程相似。免疫組化結(jié)果顯示，IL-17A和G-CSF在CAC小鼠結(jié)直腸部位的表達(dá)均高于健康對(duì)照組；IL-17A作用于小鼠結(jié)直腸上皮細(xì)胞，G-CSF在處理組轉(zhuǎn)錄（10.34±0.8）ng/m l和蛋白表達(dá)水平（3.5±0.24）ng/m l的表達(dá)均高于對(duì)照組轉(zhuǎn)錄（0.94±0.04）ng/m l和蛋白水平（0.05±0.008）ng/m l的表達(dá)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。結(jié)論隨著小鼠CAC的發(fā)展，IL-17A和G-CSF在結(jié)直腸組織中均上調(diào)表達(dá)，且體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)IL-17A促進(jìn)了結(jié)直腸上皮細(xì)胞G-CSF表達(dá)。

結(jié)腸炎相關(guān)結(jié)腸癌；IL-17A；G-CSF

Oncol Prog，2016，14（4）

結(jié)腸炎相關(guān)結(jié)腸癌（colitis-associated cancer，CAC）與炎癥性腸?。╥nflammatory bowel disease，IBD）密切相關(guān)，如克羅恩病和潰瘍性結(jié)腸炎，是IBD死亡的主要原因，IBD患者發(fā)展成為結(jié)直腸癌的風(fēng)險(xiǎn)是普通人的6倍［1］。由于CAC的發(fā)病原因復(fù)雜，調(diào)控機(jī)制尚不清楚，因此有必要對(duì)其發(fā)病機(jī)制進(jìn)行研究。IBD患者的結(jié)直腸組織在經(jīng)歷了長(zhǎng)達(dá)數(shù)十年的周期性黏膜潰瘍、壞死、修復(fù)等病理過程后發(fā)展成為結(jié)直腸癌。在CAC發(fā)展過程中許多細(xì)胞因子參與炎癥反應(yīng)，具有代表性的炎癥性細(xì)胞因子有IL-17A［2］，以及參與調(diào)控炎癥細(xì)胞增殖和分化的G-CSF［3］。這兩個(gè)炎癥因子在CAC發(fā)展過程中是否有一定的調(diào)控關(guān)系，通過什么類型細(xì)胞發(fā)揮調(diào)控作用已成為研究熱點(diǎn)。本研究通過誘導(dǎo)能模擬人CAC發(fā)展的AOM/DSS動(dòng)物模型，以揭示IL-17A與G-CSF的調(diào)控關(guān)系，為CAC的免疫干預(yù)治療提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

氧化偶氮甲烷（azoxymethane，AOM）購自美國(guó)Sigma公司；葡聚糖硫酸鈉（dextran sodium sulfate，DSS）購自美國(guó)MP生物醫(yī)藥公司。重組小鼠IL-17A和EGF細(xì)胞因子購自美國(guó)PeproTech；小鼠G-CSF ELISA檢測(cè)試劑盒購自美國(guó)R&D公司；G-CSF山羊抗小鼠多抗和IL-17A山羊抗小鼠多抗購自美國(guó)Santa Cruz公司；過氧化物封閉液、一抗稀釋液、山羊超敏二步法檢測(cè)試劑盒、哈瑞蘇木素染液、中性快干膠、內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑（3%H2O2）、DAB顯色液均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；牛血清白蛋白（BSA）購自美國(guó)Am resco公司；抗小鼠CD324（E-cadherin）A lexa Fluor?488和抗小鼠CD45 APC購自于美國(guó)eBioscience公司；Triozl購自美國(guó)Invitrogen公司；反轉(zhuǎn)錄試劑盒和SYBR Green熒光定量PCR試劑盒購自日本TaKaRa公司；70 μm細(xì)胞濾網(wǎng)和Matrigel Basement Membrane Matrix購自美國(guó)BD公司；膠原酶XI和DNaseI均購自瑞士Roche公司。

無特定病原體級(jí)（specific pathogen free，SPF）雌性C57BL/6小鼠，7～9周齡，體質(zhì)量19～20 g，購自北京華阜康生物科技股份有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證編號(hào)：SCXK（京）2014-0004，飼養(yǎng)于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院SPF級(jí)動(dòng)物房。

1.2實(shí)驗(yàn)儀器

采用BD流式細(xì)胞分選儀、Eppendorf熒光定量PCR儀、nanodrop 2000紫外分光光度儀、三洋CO2培養(yǎng)箱、美國(guó)寶特（Bio-Tek）ELx-800自動(dòng)酶標(biāo)儀、LEICA倒置顯微鏡進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1誘導(dǎo)小鼠CAC動(dòng)物模型［2］將7～9周齡，體質(zhì)量為19～20 g的雌性C57BL/6小鼠隨機(jī)分成健康對(duì)照組和給藥組，健康對(duì)照組不做任何處理（n=5），給藥組小鼠第一天腹腔注射致癌劑AOM（12.5 mg/kg），休息10 d，給予第一次喂食含致炎劑DSS（2.5%）的飲用水5 d，該階段誘導(dǎo)結(jié)束后命名為AD1（n=5）；休息14 d，第二次飼喂含致炎劑DSS（2.5%）的飲用水5 d，該階段誘導(dǎo)結(jié)束后小鼠命名為AD2（n=5）；休息14 d，第三次飼喂含致炎劑（DSS）（2.5%）的飲用水5 d，該階段誘導(dǎo)結(jié)束后命名為AD3（n=5）。

1.3.2免疫組化10%甲醛固定組織，常規(guī)石蠟包埋，組織蠟塊進(jìn)行4 μm厚的連續(xù)切片，用二甲苯、梯度濃度酒精脫蠟至水，檸檬酸鹽緩沖液抗原修復(fù)，冷卻至室溫，3%H2O2室溫孵育30 m in，PBS沖洗，3%BSA封閉1 h，一抗4℃孵育過夜，PBS沖洗，二抗孵育30 m in，PBS沖洗；DAB顯色，蘇木素染核，酒精鹽酸分色，氨水返藍(lán)，脫水，透明，封片。每組選取5只小鼠結(jié)直腸組織玻片進(jìn)行免疫組化染色，每張免疫組化片子隨機(jī)取4個(gè)視野進(jìn)行觀察。

1.3.3小鼠結(jié)直腸上皮細(xì)胞的分離和培養(yǎng)用預(yù)冷的PBS將小鼠結(jié)直腸組織清洗干凈，放入4 m l離心管中，加入2 m l含5%牛血清的PBS，用手術(shù)剪刀將組織剪成糜狀，轉(zhuǎn)入50 m l燒杯，加入10 m l DMEM培養(yǎng)基，膠原酶XI終濃度為100 U/m l，DN-aseI終濃度為0.22 mg/m l，37℃低速攪拌30 min，200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾，去除雜物，再用細(xì)胞篩（70 μm濾膜）過濾細(xì)胞，獲得結(jié)直腸單細(xì)胞懸液，將細(xì)胞數(shù)調(diào)整至1×107m l，加1 μl CD45流式抗體，4℃避光孵育30 m in，PBS洗掉未結(jié)合流式抗體，用流式細(xì)胞術(shù)分選CD45-細(xì)胞。

用DMEM培養(yǎng)基重懸CD45-細(xì)胞，接種于含2%Matrigel的6孔板中，加入10 ng/m l的EGF，置于CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)6 d后，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)上皮細(xì)胞的E-cadherin陽性率，取5×105個(gè)上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)入六孔板，加入重組小鼠IL-17A（終濃度100 ng/m l）細(xì)胞因子，培養(yǎng)24 h，收取培養(yǎng)上清和細(xì)胞。

1.3.4實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)按照TRIzol試劑說明書提取細(xì)胞總的mRNA，nanodrop 2000紫外分光光度儀測(cè)核酸濃度，逆轉(zhuǎn)錄制備cDNA，1 μg mRNA、1 μl Oligo dT、1 μl AMV逆轉(zhuǎn)錄酶、RNase Free dH2O補(bǔ)足20 μl。反應(yīng)條件：37℃、15 min（反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)），85℃、5 （s反轉(zhuǎn)錄酶的失活反應(yīng)），4℃、10 m in。實(shí)時(shí)PCR引物及其序列見下：

20μl實(shí)時(shí)PCR體系SYBR Premix Ex Taq II（2×）10 μl、PCR Forward Primer（10 μm）0.4 μl、PCR Reverse Primer（10 μm）各0.4 μl、cDNA溶液2 μl、補(bǔ)足20 μl反應(yīng)體系。反應(yīng)條件，第一步預(yù)示變性95℃、30 s，第二步95℃、5 s，第三步退火60℃、30 s，第二步至第三步循環(huán)40次。

1.3.5ELISA檢測(cè)按照R&D公司小鼠G-CSF ELISA檢測(cè)試劑盒方法，96孔板每孔加入50 μl捕獲抗體，4℃過夜。棄去孔板液體，每孔加入50 μl G-CSF標(biāo)準(zhǔn)品、陰性對(duì)照和待測(cè)樣品，室溫孵育2 h；棄去孔中液體，用PBST洗板。每孔加入100 μl抗小鼠G-CSF二抗，室溫孵育2 h，PBST洗板。每孔加入100 μ DAB顯色液，避光孵育30 m in，加50 μl終止液，酶標(biāo)儀450 nm波長(zhǎng)檢測(cè)吸收值。

1.4實(shí)驗(yàn)所用軟件

Flow Jo 7.6軟件分析流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果，Graph-Pad Prism 5.0制作圖表，SPSS 19軟件分析統(tǒng)計(jì)結(jié)果，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示計(jì)量資料數(shù)據(jù)，計(jì)量資料數(shù)據(jù)的比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1小鼠CAC動(dòng)物模型的建立

觀察結(jié)果顯示，小鼠飲用第一輪DSS水后，出現(xiàn)精神不振、怠倦、體質(zhì)量減輕、腹瀉和便血癥狀。飼喂普通水后，小鼠大便、精神狀態(tài)和體質(zhì)量逐步恢復(fù)正常。第二、三循環(huán)期內(nèi)，小鼠表現(xiàn)與第一循環(huán)期相似。在AD小鼠誘導(dǎo)結(jié)束后，解剖小鼠結(jié)直腸，可觀察到3組AD小鼠結(jié)直腸內(nèi)多有血便和血便黏附，糞便惡臭，并且結(jié)直腸長(zhǎng)度較健康組短，腸壁增厚，AD3有肉眼可見腺瘤。

結(jié)直腸HE病理結(jié)果顯示，AD1小鼠結(jié)直腸有大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，表明誘導(dǎo)初期有炎性腸病癥狀，AD2小鼠結(jié)直腸有大量的不典型增生和腺瘤病變組織，AD3小鼠結(jié)直腸部位有原位癌。

綜合觀察和結(jié)直腸病理結(jié)果分析，小鼠CAC發(fā)展過程經(jīng)歷由正常隱窩變?yōu)楫惓ｋ[窩，異常隱窩增殖形成微腺瘤，逐漸形成腺瘤、腺癌，與人的CAC發(fā)展病程相似。

2.2IL-17A在CAC發(fā)展過程中的表達(dá)

免疫組化檢測(cè)結(jié)果顯示，IL-17A在AD1、AD2、AD3小鼠結(jié)直腸中的表達(dá)均高于健康對(duì)照組（n=5）。IL-17A在健康小鼠結(jié)腸組織中幾乎檢測(cè)不到，在AD1組小鼠結(jié)直腸腸道黏膜有少量IL-17A表達(dá)，在AD2和AD3組小鼠結(jié)直腸黏膜和固有層均有IL-17A表達(dá)，但AD3組表達(dá)較AD2組IL-17A降低。（圖1）

2.3G-CSF在CAC發(fā)展過程中的表達(dá)

免疫組化檢測(cè)結(jié)果顯示，與健康對(duì)照組相比，AD1、AD2、AD3小鼠結(jié)直腸中G-CSF表達(dá)上調(diào)。G-CSF在健康小鼠組幾乎檢測(cè)不到，在AD1和AD2小鼠結(jié)直腸組織主要表達(dá)在腸黏膜和固有層，G-CSF在AD3小鼠結(jié)直腸組織中主要表達(dá)在腸道固有層。與IL-17A表達(dá)類似，AD3組較AD2組的G-CSF表達(dá)也呈現(xiàn)降低趨勢(shì)。（圖2）

圖1　對(duì)照組和CAC組小鼠結(jié)直腸IL-17A表達(dá)典型結(jié)果（免疫組化法，10×40）

圖2　對(duì)照組和CAC組結(jié)直腸組織G-CSF表達(dá)典型結(jié)果（免疫組化法，10×40）

圖3　小鼠結(jié)直腸上皮細(xì)胞的富集

2.4IL-17A對(duì)結(jié)直腸上皮細(xì)胞G-CSF表達(dá)的影響

先利用流式細(xì)胞術(shù)分選獲得結(jié)直腸CD45-（95.9%）細(xì)胞，然后將分選的細(xì)胞用上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)的方法進(jìn)行富集，培養(yǎng)6 d，流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)直腸上皮細(xì)胞的純度，結(jié)果顯示，約99%的細(xì)胞為E-cadherin+上皮細(xì)胞。（圖3）

將上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)到6孔板，IL-17A刺激24 h，檢測(cè)結(jié)直腸上皮細(xì)胞G-CSF轉(zhuǎn)錄水平和培養(yǎng)上清液中的G-CSF表達(dá)水平，結(jié)果顯示，IL-17A處理組G-CSF轉(zhuǎn)錄水平［（10.34±0.8）ng/m l，n=3］和蛋白水平［（3.5± 0.24）ng/m l，n=3］的表達(dá)均高于對(duì)照組轉(zhuǎn)錄水平［（0.94±0.04）ng/m l，n=3］和蛋白水平［（0.05±0.008）ng/m l，n=3］的表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。（圖4）

圖4　IL-17A刺激后小鼠結(jié)直腸上皮細(xì)胞的G-CSF表達(dá)

3　討論

近些年越來越多研究表明，炎癥與腫瘤的關(guān)系密切。慢性炎癥持續(xù)存在時(shí)，炎性細(xì)胞產(chǎn)生大量的活性氧自由基（reactive oxygen species，ROS）和活性氮中間體（reactive nitrogen intermediates，RN），可引起DNA損傷和基因組不穩(wěn)定，介導(dǎo)致癌效應(yīng)，如幽門螺旋桿菌感染的慢性胃炎與胃癌，乙肝病毒感染的慢性肝炎與肝癌，以及IBD與結(jié)直腸癌等［4］。而CAC是IBD最嚴(yán)重的并發(fā)癥，IBD患者在10年、20年、30年發(fā)展為CAC的概率分別為2%、8%、18%［5］。雖然炎癥是導(dǎo)致腫瘤的一個(gè)明確危險(xiǎn)因素，但I(xiàn)BD向CAC發(fā)展過程中的調(diào)控機(jī)制尚不明確。炎癥發(fā)生的機(jī)制是炎癥組織內(nèi)微血管的舒張，血細(xì)胞的滲入和大量炎性細(xì)胞因子的釋放［6］。炎性細(xì)胞因子IL-17A和G-CSF在介導(dǎo)炎性調(diào)控和腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用。

IL-17A主要是由Th17細(xì)胞分泌的一種較強(qiáng)的炎癥性細(xì)胞因子，具有募集中性粒細(xì)胞和促進(jìn)多種細(xì)胞進(jìn)一步釋放炎性細(xì)胞因子的作用，可通過誘導(dǎo)IL-6、TNF-α、MMP參與炎癥反應(yīng)，在自身免疫性疾?。愶L(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、硬化癥）和腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。

IL-17A通過作用于腫瘤成纖維細(xì)胞和腫瘤基質(zhì)細(xì)胞，誘導(dǎo)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在內(nèi)的大量促血管生長(zhǎng)因子的產(chǎn)生，大大促進(jìn)了炎癥和腫瘤血管的生成?，F(xiàn)在普遍觀點(diǎn)認(rèn)為，IL-17A可以誘導(dǎo)腫瘤微環(huán)境的形成，促進(jìn)血管生成和腫瘤的遷移，加速腫瘤的生長(zhǎng)［7］。IL-17A能上調(diào)結(jié)直腸癌細(xì)胞系EGFR的表達(dá)，促進(jìn)結(jié)直腸癌的惡性發(fā)展［8］。近期有研究報(bào)道在誘導(dǎo)IL-17A基因敲除小鼠CAC模型中，結(jié)直腸上皮增生減慢，腫瘤減少，CAC的發(fā)展受到抑制［9］。本研究結(jié)果顯示，IL-17A在健康小鼠結(jié)腸組織中難以檢測(cè)到，但隨著CAC的發(fā)展，IL-17A在結(jié)直腸組織中表達(dá)上調(diào)，但AD3組較AD2組IL-17A表達(dá)降低，說明IL-17A在CAC發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用，且主要作用于早期階段。

G-CSF是造血因子家族的一員，在促進(jìn)中性粒細(xì)胞的增殖和分化、動(dòng)員骨髓細(xì)胞向外周和組織遷移、維持免疫微環(huán)境的穩(wěn)態(tài)發(fā)揮重要作用。近期研究發(fā)現(xiàn)，G-CSF在多種腫瘤中表達(dá)上調(diào)，促進(jìn)腫瘤的增殖和轉(zhuǎn)移。體外實(shí)驗(yàn)表明，結(jié)直腸癌和胃癌細(xì)胞的增殖能力對(duì)G-CSF的處理具有濃度和時(shí)間依賴性［10］。G-CSF可通過STAT3信號(hào)通路促進(jìn)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和侵襲［11］。肺癌高表達(dá)腫瘤相關(guān)的G-CSF與腫瘤的淋巴侵襲轉(zhuǎn)移和不良預(yù)后有關(guān)［12］。本實(shí)驗(yàn)前期研究結(jié)果證實(shí)，G-CSF在CAC發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用，結(jié)直腸組織的G-CSF通過募集MDSC，介導(dǎo)小鼠CAC的發(fā)展，抗G-CSF治療能干預(yù)CAC的發(fā)展［13］。本研究結(jié)果顯示，G-CSF和IL-17A在健康小鼠結(jié)直腸組織低表達(dá)，隨著CAC的發(fā)展，G-CSF和IL-17A均表達(dá)上調(diào)，在AD2階段達(dá)峰值。AD3階段較AD2階段炎癥程度下降，可觀察到IL-17A及G-CSF表達(dá)的下調(diào)。由于腸道炎癥微環(huán)境復(fù)雜，細(xì)胞因子變化機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

有研究報(bào)道IL-17A能促進(jìn)肺臟上皮細(xì)胞GCSF的表達(dá)［14］，本實(shí)驗(yàn)室前期實(shí)驗(yàn)證實(shí)，結(jié)直腸上皮細(xì)胞表達(dá)G-CSF［15］，推測(cè)IL-17A可能作用于結(jié)直腸上皮細(xì)胞，調(diào)控G-CSF的表達(dá)。本研究亦發(fā)現(xiàn)IL-17A和G-CSF在CAC發(fā)展過程中表達(dá)變化趨勢(shì)一致，但I(xiàn)L-17A與G-CSF的表達(dá)是否有一定的調(diào)控關(guān)系？為了驗(yàn)證該設(shè)想，本實(shí)驗(yàn)利用重組小鼠IL-17A處理結(jié)直腸上皮細(xì)胞，從轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平均檢測(cè)到G-CSF在IL-17A處理組表達(dá)上調(diào)，證實(shí)IL-17A促進(jìn)了結(jié)直腸上皮細(xì)胞G-CSF的表達(dá)。但是，IL-17家族的其他成員如IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E、IL-17F是否影響G-CSF的表達(dá)及作用機(jī)制，結(jié)直腸組織中其他類型細(xì)胞的GCSF表達(dá)是否也受IL-17家族影響，需要進(jìn)一步深入研究。

綜上所述，本研究通過建立CAC動(dòng)物模型，模擬人CAC的發(fā)展過程，不僅檢測(cè)到IL-17A和GCSF在CAC發(fā)展過程中協(xié)同上調(diào)表達(dá)，而且證明了IL-17A可通過作用于結(jié)直腸上皮細(xì)胞促進(jìn)GCSF表達(dá)。

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The association between IL-17A and G-CSF in murine colitis-associated cancer△

LIU Jian-cheng1ZHANG Xing-hua2YUAN Wei1WANG Xiao-tong1MA Jie1#
1State Key Laboratory of Molecular Oncology，Cancer Hospital，Chinese Academy of Medical Sciences&Peking Union Medical College，Beijing 100021，China
2Department of Gastroenterology，Beijing Friendship Hospital，Capital Medical University，Beijing l00050，China

Objective To investigate the correlation between IL-17A and G-CSF during the development of colitis-associated cancer（CAC）.Method A murine colitis-associated colon cancer（CAC）model was established using azoxymethane（AOM）and dextran sulfate sodium（DSS）.The three stages from colitis to colon cancer were named as ADl，AD2 and AD3，respectively.The expression of IL-17A and G-CSF in rectum were detected by immunohistochem istry.Recombinant mouse IL-17A was used to stimulate the colorectal epithelial cells sorted by flow cytometry.The transcription and protein expression level of G-CSF were detected by Real-time PCR and ELISA.Result The CAC mouse model underwent a normal development process of mucosa—dysplasia—adenoma—carcinoma，which was sim ilar to the development of human CAC.Immunohistochem istry results indicated that the expression of IL-17A and G-CSF in CAC model was higher than that in normal m ice.A fter IL-17A stimulation，the level of IL-17A and G-CSF were up-regulated in epithelial cells compared w ith control［（10.34±0.8）ng/m l vs（0.94±0.04）ng/m l］and［（3.5±0.24）ng/m l vs（0.05±0.008）ng/m l］，P＜0.001，respectively.These findings were statistically significant.Conclusion IL-17A and G-CSF are up-regulated in colorectal tissue as the murine CAC develops，and it is demonstrated that IL-17A promotes the expression of G-CSF in colorectal epithelial cells.

colitis-associated cancer；IL-17A；G-CSF

R735.3

A

10.11877/j.issn.1672-1535.2016.14.04.08

2016-03-04）

國(guó)家自然科學(xué)基金（81541154）；國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃（2014CB542103）；科技北京百名領(lǐng)軍人才培養(yǎng)工程（Z131107000513001）；北京市科技新星計(jì)劃（Z131107000413066）

（corresponding author），郵箱：majie1965@163.com