外周血T淋巴細(xì)胞亞群檢測在胃癌病情監(jiān)測及預(yù)后評價中的意義

王展梅　曹芳麗　曲琳莉　王歡

山東大學(xué)齊魯醫(yī)院（青島）化療科，山東　青島　266000

外周血T淋巴細(xì)胞亞群檢測在胃癌病情監(jiān)測及預(yù)后評價中的意義

王展梅曹芳麗曲琳莉#王歡

山東大學(xué)齊魯醫(yī)院（青島）化療科，山東青島266000

目的探討外周血T淋巴細(xì)胞亞群檢測在胃癌病情監(jiān)測及預(yù)后評價中的價值。方法選擇100例胃癌患者作為胃癌組，患者采用mFOLFOX6方案，2周為1個療程，每位患者化療4個療程以上。另選擇同期在醫(yī)院體檢的健康人群80例作為對照組，采用流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測兩組外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平。結(jié)果化療前胃癌組外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+顯著低于對照組，CD8+顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。Ⅰ～Ⅱ期胃癌患者外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+顯著高于Ⅲ～Ⅳ期，CD8+顯著低于Ⅲ～Ⅳ期，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。不同療效的胃癌患者化療前外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），化療后CR+ PR組、SD組、PD組外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+顯著降低，CD8+顯著上升，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），且CR+ PR組外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+顯著高于SD組和PD組，CD8+顯著低于SD組和PD組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)論通過檢測血清外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平能夠有助于評估胃癌的病情和預(yù)后。

T淋巴細(xì)胞；胃癌；臨床分期；預(yù)后

Oncol Prog，2016，14（4）

胃癌是臨床上常見的消化系統(tǒng)腫瘤［1］，化療是治療胃癌的主要手段之一。然而臨床上依然存在部分患者對化療不敏感或療效不佳，若能在此時及時調(diào)整治療方案對臨床治療具有重要的指導(dǎo)意義。目前用于評價胃癌臨床療效及預(yù)后的指標(biāo)較多，包括癌胚抗原、糖類抗原等血清生物標(biāo)志物，但是這些指標(biāo)均存在敏感性不高等缺點［2-3］，限制了其臨床應(yīng)用。目前研究證實胃癌的發(fā)生、發(fā)展與免疫功能密切相關(guān)，當(dāng)機(jī)體免疫功能失調(diào)可以在一定程度上預(yù)測腫瘤的預(yù)后及進(jìn)展。國外研究顯示，宿主對腫瘤組織存在自然抵抗作用，機(jī)體的免疫應(yīng)答能夠部分清除腫瘤細(xì)胞；其中由T淋巴細(xì)胞所介導(dǎo)的細(xì)胞免疫在抗腫瘤方面發(fā)揮著重要作用［4］。鑒于此，本研究對擬行化療的胃癌患者化療前后外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平進(jìn)行檢測，評估外周血T淋巴細(xì)胞亞群在胃癌的療效、預(yù)后評價中的價值，現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

選擇2011年3月至2013年5月醫(yī)院收治的100例胃癌患者作為胃癌組，男57例，女43例，年齡27～82歲，平均（59.3±7.5）歲；按照國際抗癌聯(lián)盟腫瘤TNM分期［5］：Ⅰ～Ⅱ期38例，Ⅲ～Ⅳ期62例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理學(xué)證實為原發(fā)性胃癌初治患者；②患者擬行新輔助化療，對于有手術(shù)指征者，待4個療程化療結(jié)束后再擇期行手術(shù)切除；③化療前卡氏評分≥60分，預(yù)計生存期≥3個月；④告知患者及家屬治療目的、方案及不良反應(yīng)，經(jīng)患者同意并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并代謝性疾病或自身免疫性疾病者；②患者入組前1個月內(nèi)使用免疫抑制劑者；③肝、腎功能嚴(yán)重衰竭或其他重要臟器疾病者；④合并全身嚴(yán)重感染或治療中途自愿放棄治療者。另選擇同期在醫(yī)院體檢的健康人群80名作為對照組，納入標(biāo)準(zhǔn)：①體格檢查正常；②告知受試者研究目的，并取得受試者知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①凝血功能異常，長期服用糖皮質(zhì)激素或免疫抑制劑；②肝腎功能損害或其他臟器疾病。對照組男43名，女37名，年齡22～85歲，平均（60.1±8.3）歲。胃癌組與對照組性別、年齡等一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2方法

1.2.1治療方法胃癌組采用mFOLFOX6方案：奧沙利鉑85 mg/m2，d1，靜脈滴注；亞葉酸鈣400 mg/m2，d1，靜脈滴注2 h；氟尿嘧啶400 mg/m2，d1，靜脈推注，后2400 mg/m2，加入Baxter輸液泵持續(xù)靜脈輸注46 h；每2周為1個療程，每位患者化療4個療程以上。患者化療前常規(guī)進(jìn)行止吐等預(yù)處理，化療后門診定期檢查血常規(guī)、肝腎功能。

1.2.2檢查方法胃癌組分別于化療前與化療4個療程后抽取肘靜脈血3 ml，對照組于體檢時抽取肘靜脈血3 ml，置于抗凝管中；分離單個核細(xì)胞，并用PBS緩沖液將細(xì)胞懸液配制成2×105/ml；1500 r/min離心5min后再分別滴加鼠抗人CD3+、CD4+、CD8+單克隆抗體；加入1 ml PBS緩沖液混勻后于2 h內(nèi)上機(jī)檢測，采用貝克曼CytoFLEX流式細(xì)胞儀檢測外周血CD3+、CD4+、CD8+水平。

1.3評價標(biāo)準(zhǔn)

參考實體瘤療效評價標(biāo)準(zhǔn)RECIST1.1版［6］進(jìn)行評價。完全緩解（CR）：瘤體完全消失并持續(xù)4周以上；部分緩解（PR）：瘤體最大單徑之和減少30%以上并保持4周以上，病灶周圍未發(fā)現(xiàn)新病灶；穩(wěn)定（SD）：腫瘤最大單徑之和減少不超過30%或增加不超過20%并保持4周以上；疾病進(jìn)展（PD）：腫瘤最大單徑之和增加20%以上或出現(xiàn)新病灶。其中客觀有效率=（CR+PR）例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS19.0統(tǒng)計-學(xué)軟件進(jìn)行檢驗，計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，治療前后比較采用配對t檢驗，兩組間比較采用成組t檢驗，多組間比較采用one-way ANOVA單因素方差分析，兩兩比較采用SNK-q檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，相關(guān)性分析采用Pearson檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1化療前兩組外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平比較

化療前胃癌組外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+顯著低于對照組，CD8+顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），詳見表1。

表1　化療前兩組外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平比較（±s）

表1　化療前兩組外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平比較（±s）

組別胃癌組（n=100）對照組（n=80）t值P值CD3+（%）0.81±0.17 1.60±0.34 20.033＜0.01 CD4+（%）0.52±0.12 0.88±0.23 13.525＜0.01 CD8+（%）0.85±0.21 0.54±0.14 11.338＜0.01 CD4+/CD8+0.63±0.21 1.58±0.52 16.658＜0.01

2.2胃癌組不同臨床分期外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平比較

Ⅰ～Ⅱ期胃癌患者外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+顯著高于Ⅲ～Ⅳ期，CD8+顯著低于Ⅲ～Ⅳ期，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），詳見表2。

表2　胃癌組不同臨床分期外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平比較（±s）

表2　胃癌組不同臨床分期外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平比較（±s）

臨床分期Ⅰ～Ⅱ期（n=38）Ⅲ～Ⅳ期（n=62）t值P值CD3+（%）1.05±0.32 0.56±0.11 13.805＜0.01 CD4+（%）0.69±0.22 0.48±0.10 7.906＜0.01 CD8+（%）0.73±0.31 1.19±0.21 11.349＜0.01 CD4+/CD8+0.98±0.21 0.46±0.10 20.369＜0.01

2.3胃癌組化療療效

化療4個療程后，胃癌組CR 3例，PR 34例，SD 37例，PD 26例，客觀有效率為37.0%（37/100）。

2.4胃癌組不同臨床療效外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平比較

不同療效的胃癌患者化療前外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），化療后CR+PR組、SD組、PD組外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+顯著降低，CD8+顯著上升，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；且CR+PR組外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+顯著高于SD組和PD組，CD8+顯著低于SD組和PD組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），詳見表3。

3　討論

我國是胃癌的高發(fā)區(qū)域，其病死率居各類惡性腫瘤的第2位［7］。在胃癌的綜合治療中，化療發(fā)揮著重要作用，目前已經(jīng)將化療應(yīng)用于聯(lián)合手術(shù)、放射治療等。Schumacher等［8］證實對于中晚期胃癌患者，在根治性切除后聯(lián)合化療能夠顯著提高患者的生存期，并降低腫瘤局部復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險。但是由于化療的個體差異較大，且隨著化療方案的不斷更新，選擇敏感的化療方案對提高患者預(yù)后具有重要意義。雖然目前臨床上用于評估化療療效的生化指標(biāo)較多，然而大多數(shù)腫瘤標(biāo)志物敏感性不高，或特異性較低，當(dāng)臨床證實化療效果不佳時常已是幾個療程之后，部分患者甚至因此而錯過最佳的治療時機(jī)。

表3　胃癌組不同臨床療效外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平比較（±s）

表3　胃癌組不同臨床療效外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平比較（±s）

注：a與化療前比較，P＜0.01；b與PD組比較，P＜0.01；c與SD組比較，P＜0.01

療效CR+PR組（n=66）SD組（n=23）PD組（n=11）F值P值CD3+（%）化療前0.91±0.33 0.84±0.27 0.79±0.20 0.989 0.376化療后0.77±0.14abc0.47±0.09ab0.45±0.05a69.301＜0.01 CD4+（%）化療前0.65±0.13 0.69±0.15 0.61±0.09 1.509 0.226化療后0.37±0.06abc0.24±0.04ab0.21±0.03a77.520＜0.01 CD8+（%）化療前0.83±0.22 0.84±0.25 0.81±0.20 0.066 0.936化療后1.15±0.10abc1.48±0.23ab1.50±0.27a48.511＜0.01 CD4+/CD8+化療前0.69±0.22 0.71±0.26 0.68±0.31 0.079 0.924化療后0.32±0.06abc0.16±0.03ab0.15±0.03a110.503＜0.01

目前研究已證實，腫瘤前期，機(jī)體自身免疫系統(tǒng)會通過特異性免疫作用將腫瘤突變細(xì)胞殺滅或清除；而惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移均與機(jī)體免疫功能降低、腫瘤細(xì)胞從機(jī)體免疫監(jiān)控中逃逸有關(guān)［9-10］。在機(jī)體眾多免疫細(xì)胞中，T淋巴細(xì)胞所介導(dǎo)的細(xì)胞免疫在腫瘤細(xì)胞的免疫監(jiān)控中起著重要作用。Aizawa等［11］報道存在浸潤的腫瘤周圍淋巴細(xì)胞中，CD3+、CD4+、CD8+等T淋巴細(xì)胞亞群水平出現(xiàn)異常，并認(rèn)為T淋巴細(xì)胞在抗腫瘤免疫效應(yīng)中起到主要作用。T淋巴細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用主要由CD4+、CD8+參與完成，其中CD4+能夠誘導(dǎo)B細(xì)胞分化，并產(chǎn)生相應(yīng)抗體；而CD8+則主要抑制B細(xì)胞抗體的合成和T淋巴細(xì)胞的增殖。正常情況下CD4+、CD8+保持平衡，共同維持機(jī)體正常的免疫應(yīng)答反應(yīng)；當(dāng)細(xì)胞發(fā)生惡變時，CD4+、CD8+平衡被打破，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞逃脫免疫監(jiān)控，進(jìn)而形成惡性腫瘤。本研究中，化療前胃癌組外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+顯著低于對照組，CD8+顯著高于對照組，提示相比較于正常人群，胃癌患者的免疫功能顯著減退，其機(jī)制可能與腫瘤在形成過程中產(chǎn)生大量免疫抑制因子有關(guān)。此外本研究還顯示Ⅰ～Ⅱ期胃癌患者外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+顯著高于Ⅲ～Ⅳ期，CD8+顯著低于Ⅲ～Ⅳ期，說明隨著病情的不斷加重，患者的免疫功能進(jìn)一步降低，患者體內(nèi)淋巴細(xì)胞的活化和增殖受到明顯抑制，機(jī)體對突變的腫瘤細(xì)胞清除能力也受到抑制。Ubukata等［12］亦證實隨著腫瘤TNM分期的升高，其免疫功能明顯減退，導(dǎo)致對腫瘤的抑制作用也降低，最終疾病不斷惡化。

在療效評估方面，化療后CR+PR組、SD組、PD組外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+顯著降低，CD8+顯著上升，說明化療藥物在發(fā)揮抗腫瘤治療的同時也會抑制機(jī)體的免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致免疫細(xì)胞受到損傷。劉驊等［13］報道稱胃癌患者化療3周后CD3+、CD4+會顯著降低，患者免疫功能受到抑制。然而本研究中化療后CR+PR組外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+依然顯著高于SD組和PD組，CD8+顯著低于SD組和PD組，說明不同療效患者外周血T淋巴亞群水平依然存在差異，化療效果越好，免疫損傷程度越低。這亦說明通過檢測外周血T淋巴亞群水平能在一定程度上反映出化療的療效。當(dāng)然本研究僅對外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平進(jìn)行初步分析，本指標(biāo)的檢測效能以及與其他指標(biāo)聯(lián)合檢測能夠提高其臨床價值，尚需要深入研究。

綜上所述，通過檢測血清外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平能夠有助于監(jiān)測胃癌的病情和預(yù)后，T淋巴細(xì)胞亞群檢測有望成為腫瘤評估的一項簡單、易操作的檢查項目。

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（收稿日期：2015-09-24）

Clinical significance of peripheral blood T lymphocyte subsets as prognostic markers in patients with gastric cancer

WANG Zhan-mei CAO Fang-li QU Lin-li#WANG Huan
Department of Oncology，Qilu Hospital of Shandong University，Qingdao 266000，Shandong，China

ObjectiveTo explore the clinical value of peripheral blood T lymphocyte subsets as markers for surveillance and prognosis in patients with gastric cancer（GC）.MethodA total of 100 cases of gastric cancer patients were enrolled as GC group，treated with mFOLFOX6 regimen，with 2 weeks as 1 cycle，and each patient was given 4 cycles of chemotherapy at least.Another 80 cases of healthy adults in clinic during the same period were included as the control group，and the level of T lymphocyte subsets in peripheral blood of the two groups were detected by flow cytometry.ResultBefore chemotherapy，the CD3+，CD4+，and CD4+/CD8+were significantly lower，and CD8+was higher in GC group compared with that of control group（P＜0.05）；The CD3+，CD4+，and CD4+/CD8+in GC patients of I-II stage were significantly higher than those of III-IV stage，while the CD8+in the former was significantly lower than that in the latter（P＜0.01）. There was no significant difference in T lymphocyte subsets level in peripheral blood of GC patients with different response before chemotherapy（P＞0.05），After treatment，the CR+PR group，SD group，PD group had decreased peripheral blood CD3+，CD4+，and CD4+/CD8+，and increased CD8+（P＜0.01），CD3+，CD4+，and CD4+/CD8+in CR+PR group were significantly higher than，while CD8+was significantly lower than those in SD group and PD group（P＜0.01）.ConclusionDetecting the T lymphocyte subsets in peripheral blood is beneficial in monitoring disease condition and predicting prognosis.

T lymphocytes；gastric cancer；clinical staging；prognosis

R735.2

A

10.11877/j.issn.1672-1535.2016.14.04.22

2016-01-13）

（corresponding author），郵箱：qulinli77@163.com