中風通絡丸對大鼠局灶性腦缺血模型的影響

鄧巧君，周 順，劉豐賢

（1.長沙市中醫(yī)院，長沙410002；2.湘西州民族中醫(yī)院，吉首416000；3.湖南師大醫(yī)學院，長沙 410013）

中風通絡丸對大鼠局灶性腦缺血模型的影響

鄧巧君1，周 順2，劉豐賢3

（1.長沙市中醫(yī)院，長沙410002；2.湘西州民族中醫(yī)院，吉首416000；3.湖南師大醫(yī)學院，長沙 410013）

目的：觀察中風通絡丸抗腦缺血的作用，為其臨床用藥提供實驗依據(jù)。方法：各組雄性SD大鼠采用線栓法復制局灶性腦缺血模型，造模后各組大鼠繼續(xù)給藥3d。于造模后24h及末次給藥后次日，對各組大鼠進行神經(jīng)功能評分，麻醉取腦，TTC染色，測量梗死面積并計算梗死率。結果：中風通絡丸中、高劑量組能顯著降低大鼠腦缺血模型神經(jīng)功能評分等級，顯著減少腦缺血所致的腦梗死面積百分比。結論：中風通絡丸能明顯改善腦缺血大鼠神經(jīng)功能癥狀，降低腦臟器系數(shù)及腦梗死面積百分比，具有明顯抗腦缺血作用。

中風通絡丸；抗腦缺血

中風通絡丸為長沙同瑞醫(yī)藥科技開發(fā)有限公司產(chǎn)品，由黃芪、葛根、丹參、等組成，具有平肝潛陽、益氣和血、通絡的功效，主要用于腦中風、偏癱等。本試驗采用線拴法復制大鼠局灶性腦缺血模型，觀察中風通絡丸對大鼠局灶性腦缺血模型的的保護作用。

1 實驗材料

1.1 藥品 中風通絡丸，由長沙同瑞醫(yī)藥科技開發(fā)有限公司提供；華佗再造丸，由廣州齊星藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。

1.2 實驗動物 SD雄性大鼠60只，SPF級，體重300～350 g，購于長沙天勤生物技術有限公司。

1.3 主要試劑 水合氯醛，天津市科密歐化學試劑有限公司產(chǎn)品；氯化三苯四氮唑（TTC），Amresco公司產(chǎn)品；Na2HPO4·12H2O，廣東光華科技股份有限公司產(chǎn)品；Na2HPO4·2H2O，江蘇強盛化工有限公司產(chǎn)品；pH=7.4的1.0mol/L磷酸緩沖液（PBS）：用110.84g Na2HPO4·12H2O加14.10g Na2HPO4·2H2O加蒸餾水溶解至2000 mL，即成；2%TTC染色液：20gTTC粉末加以上PBS溶解至1000 mL，即成。

1.4 儀器軟件 AUY220型分析天平，長沙精開儀器設備有限公司；Image pro plus圖像處理軟件（美國Media Cybernetics公司）。

2 實驗方法［1，2，3，4，5，6］

2.1 造模與分組 SD大鼠60只，雄性，300～350g，按體重分層隨機分為6組，每組10只動物，即：假手術組、模型對照組、華佗再造丸（1.978 g/kg）組、中風通絡丸0.742 g生藥/kg、1.483g生藥/kg、2.966 g生藥/kg，各給藥組大鼠按15 mL/kg灌胃給予相應劑量藥液，1次/日，連續(xù)10d，假手術組及模型對照組灌胃給予等體積蒸餾水。于第4d給藥后1h，除假手術組外，其余組大鼠均按以下方法制備大鼠腦缺血模型：大鼠腹腔注射10%的水合氯醛300 mg/kg麻醉，從頸部正中行切口，分別分離左側頸總動脈（CCA）、頸外動脈（ECA）、頸內(nèi)動脈（ICA），結扎頸總動脈近心端、頸外動脈起始端，經(jīng)頸總動脈插入0.234 mm直徑的魚線作為線拴（線端高溫熔化成光滑圓頭，在2.0 cm處用手術線綁一死結定位），插入深度約為2.0 cm，分層縫合肌肉和皮膚。假手術組除不進行頸動脈結扎及插線處理外，其余操作與模型組相同。手術完成后每只大鼠立即腹腔注射青霉素，20萬單位/只，1次/日，連續(xù)3d。各給藥組大鼠造模后再連續(xù)給藥3d。于手術后24 h及末次給藥后次日對各組大鼠進行神經(jīng)功能評分；末次給藥次日，各組大鼠腹腔注射300 mg/kg的10%水合氯醛麻醉，取腦，稱重，然后進行TTC染色。

2.2 檢測指標

2.2.1 神經(jīng)行為學評分 于手術后24 h及末次給藥后次日對各組大鼠進行神經(jīng)功能評分，評分標準如下：0分為無神經(jīng)功能缺損癥狀；1分為不能伸展前爪，輕度神經(jīng)功能缺損；2分為轉(zhuǎn)圈運動，中度神經(jīng)功能缺損；3分為向病灶對側跌倒，重度神經(jīng)功能缺損；4分為不能自發(fā)行走、意識水平下降。

2.2.2 腦臟器系數(shù) 準確稱取腦重量，腦臟器系數(shù)=腦重量（g）/體重（100g）。

2.2.3 腦部缺血相對梗死面積 末次給藥后次日各組大鼠腹腔注射水合氯醛300 mg/kg麻醉，冰上斷頭取腦，-20℃冷凍約15 min。待其稍變硬時，用刀片將腦切成厚2 mm的冠狀切片。浸于2%的TTC染色液中，37℃避光孵育約15 min，翻面繼續(xù)染15 min。正常腦組織染為深紅色，腦梗死區(qū)不染色（蒼白色）。所用腦組織切片均在距離鏡頭15 cm處照相，用Image plus圖像處理軟件計算相對梗死面積，并計算梗死率（%）=（腦切片面積/梗死面積）×100%。

2.3 劑量設計 中風通絡丸臨床擬用劑量為18g生藥/日，按成人平均體重70kg計算，臨床每日用量為0.257g生藥/kg。按體表面積折算大鼠等效劑量為1.483g生藥/kg。本實驗以大鼠臨床等效劑量的1/2、1、2倍作為大鼠實驗中風通絡丸的低、中、高劑量，即0.742g生藥/kg、1.483g生藥/kg、2.966g生藥/kg。

2.4 統(tǒng)計方法 采用SPSS16.0進行統(tǒng)計分析，統(tǒng)計學意義的水平設定為P＜ 0.05。計量資料采用均數(shù)±標準差。用Leven’s test方法檢驗正態(tài)性和方差齊性。如果符合正態(tài)性和方差齊性，用單因素方差分析（Oneway ANOVA）和post Hoc LSD進行統(tǒng)計分析；如果不符合正態(tài)性和方差不齊，則用Kruskal-Wallis檢驗。如果Kruskal-Wallis檢驗有統(tǒng)計學意義（P＜ 0.05），則用Dunnett’s Test（非參數(shù)方法）進行比較分析。評價時考慮統(tǒng)計學差異和生物學意義。

3 結果與討論

3.1 中風通絡丸對腦缺血大鼠神經(jīng)功能評分的影響如表1所示，與假手術組比較，模型對照組大鼠造模后24 h及給藥7 d后神經(jīng)功能評分顯著增加（P＜0.01），提示腦缺血模型復制成功；與模型對照組比較，造模后24h后中風通絡丸中、高劑量組大鼠神經(jīng)功能評分顯著減少（P＜0.05），給藥7d后中風通絡丸低、中、高劑量組大鼠神經(jīng)功能評分顯著減少（P＜0.01）

表1 中風通絡丸對腦缺血大鼠神經(jīng)功能評分的影響（n=10）

3.2 中風通絡丸對腦缺血大鼠腦臟器系數(shù)的影響 如表2所示，與假手術組比較，模型對照組大鼠腦臟器系數(shù)顯著升高（P＜0.01），達0.634±0.057；與模型對照組比較，中風通絡丸中、高劑量組大鼠腦臟器系數(shù)顯著降低（P＜0.01）。

表2 中風通絡丸對腦缺血大鼠腦臟器系數(shù)的影響（n=10）

3.3 中風通絡丸對腦缺血大鼠腦梗死面積百分比的影響 如表3所示，與假手術組比較，模型對照組大鼠腦梗死面積百分比達31.86±8.09%，提示腦缺血模型復制成功；與模型對照組比較，中風通絡丸中、高劑量組大鼠腦梗死面積百分比顯著減少（P＜0.01）（見圖1）。

表3 中風通絡丸對腦缺血大鼠腦梗死面積百分比的影響（n=10）

圖1 中風通絡丸對腦缺血大鼠腦組織缺血區(qū)域面積的影響

以上結果表明，中風通絡丸能明顯改善腦缺血大鼠神經(jīng)功能癥狀，降低腦臟器系數(shù)及腦梗死面積百分比，具有明顯抗腦缺血作用。

［1］ 陳奇. 中藥藥理研究方法學［M］. 北京： 人民衛(wèi)生出版社， 2010.

［2］ 苗明三. 常用醫(yī)藥研究動物模型［M］. 北京： 人民衛(wèi)生出版社， 2007.

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Effect of Zhongfeng Tongluo pills on the CerebralIschemia Injury Model of Rat

Deng Qiao-jun1， Zhou Shun2， Liu Feng-xian3
（1. Changsha Hospital of Traditional Chinese Medicine，Changsha 410002， China； 2.Ethnic Chinese Medicine Hospital of Xiangxi Autonomous Prefecture， Jishou 416000， China；3.Medical College of Hunan Normal University，Changsha 410013， China）

Objective To investigate the anti-cerebral ischemia effects of and provide experimental evidence for clinical use. Methods The ischemic model in each group was established by suture method using male SD rats， then rats were treated with drugs continuously for 3 days. The neurological function was evaluated at the time 24h after modeling and the day after the last ad ministration. The brains were obtained from anesthesia SD rats and stained with TTC. the infarction sizes and infarction rate were measured and calculated. Results Zhongfeng Tongluo Pills with medium or high doses reduced neurological rating scale and the percentage of infarct area caused by cerebral ischemia significantly. Conclusion Zhongfeng Tongluo Pills showed distinct anti-cerebral ischemia effect through improving the neurological symptoms of cerebral ischemia significantly in rats，reducing brain viscera coefficient and the percentage of infarction area.

zhongfeng tongluo pills； anti-cerebral ischemia

R285.5

A

1673-016X（2016）02-0142-04

2015-08-20

劉豐賢 ，E-mail：hplc@foxmail.com