丹參酮ⅡA磺酸鈉對高血壓模型犬冠狀動脈螺旋條舒縮功能的實驗研究*

黃　萍吳勝英江雪蓮△

（1.湖北省十堰市太和醫(yī)院，湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院，湖北　十堰442000；2.湖北醫(yī)藥學(xué)院病理生理教研室，湖北　十堰442000）

·研究報告·

丹參酮ⅡA磺酸鈉對高血壓模型犬冠狀動脈螺旋條舒縮功能的實驗研究*

黃萍1吳勝英2江雪蓮1△

（1.湖北省十堰市太和醫(yī)院，湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院，湖北十堰442000；2.湖北醫(yī)藥學(xué)院病理生理教研室，湖北十堰442000）

目的觀察丹參酮ⅡA磺酸鈉對高血壓模型模型犬冠狀動脈螺旋條舒縮作用的影響，探討其作用機制。方法犬6只，于左腎動脈上0.5 cm處行腹主動脈環(huán)扎縮窄術(shù)，造成心臟后負荷增加而復(fù)制犬腹主動脈狹窄型高血壓動物模型，8周以后麻醉處死后分別取冠狀動脈并制成寬2mm，長5mm的18條冠狀動脈螺旋條，將動脈螺旋條標(biāo)本隨機分為對照組、酚妥拉明組、丹參酮ⅡA磺酸鈉組，用1%去甲腎上腺素分別加入兩組標(biāo)本中預(yù)激使之達到最大收縮峰值，在每組依次加入10-5～10-1mol/L相應(yīng)藥物，測定其對犬冠狀動脈螺旋條舒縮張力，計算其半抑制濃度（IC50）及量效曲線。結(jié)果10-3～10-1mol/L的丹參酮ⅡA磺酸鈉可明顯抑制去甲腎上腺素預(yù)激引起的犬冠狀動脈螺旋條收縮張力，IC50值及量效曲線最大反應(yīng)明顯降低，與對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論10-3～10-1mol/L的丹參酮ⅡA磺酸鈉可抑制去甲腎上腺素引起的冠脈收縮，其作用機制可能與α受體阻斷劑酚妥拉明類似，具有阻斷α受體及外鈣內(nèi)流、抑制平滑肌細胞內(nèi)鈣釋放而降低冠狀動脈收縮的作用。

丹參酮ⅡA磺酸鈉高血壓模型犬冠狀動脈舒縮功能鈣通道

【Abstract】Objective：To establish themodel of canine hypertension，and to observe the effect and mechanism of Sodium tanshinoneⅡA sulfonate on diastolic function of coronary artery strips in Hypertension model dog. M ethods：6 dogs were given the left renal artery for 0.5 cm at the abdominal aorta constriction caused by cerclage to copy canine abdominal aortic stenosis hypertension animalmodel of increased cardiac load.8 weeks later，animals were anaesthetized and taken into the coronary artery to make 18 coronary arterial strips 2 mm wide and 5mm long.Arterial stripswere random ly divided into the control group，phentolamine group，tanshinoneⅡA sodium sulfonate group.1%norepinephrine was added in two groups for pre-excitation to achievemaximum systolic peak，followed by 10-5～10-1mol/L of sodium tanshinone A sulfonate，and determined the tension of canine coronary artery，calculate the half inhibitory concentration（IC50）and dose effect curve.Results：10-3～10-1mol/L tanshinoneⅡa sulfonate sodium inhibited norepinephrine preexcitation caused by canine coronary artery contraction tension，with IC50values of and dose-response curve ofmaximum response decreased significantly，and compared to the control group（P＜0.05），the differences were statistically significant.Conclusion：10-3～10-1mol/L tanshinoneⅡa sulfonate sodium can inhibit the norepinephrine induced coronary artery contraction，whose mechanism may be similar to alpha receptor blocking agent phentolaminer，with a blocking alpha receptors and extracellular calcium flow，inhibition of smooth muscle cell intracellular calcium to release and reduce coronary artery systolic function.

【Key words】Sodium tanshinoneⅡA sulfonate；Hypertensionmodel dog；Coronary artery；Diastolic function；Calcium channel

丹參酮ⅡA磺酸鈉是由中藥丹參、紅花配伍，經(jīng)現(xiàn)代工藝提取、純化、精制而成的中藥酮類化學(xué)物質(zhì)［1］?！秴瞧毡静荨费缘ⅰ拔缎列詻觥⒅涡募「雇础??！端幤坊x》言紅花“味辛性溫、善通利經(jīng)脈”［2］。未純化前的丹參主要有效成分包括丹參酚酸、丹參酮、紅花黃素、黃酮類化合物等，兩藥合用具有“涼血消癰、調(diào)經(jīng)鎮(zhèn)痛、活血通經(jīng)、散癖鎮(zhèn)痛，益氣固脫，養(yǎng)陰生津生脈之功效［3］?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)實驗證實丹參酮ⅡA磺酸鈉主要藥理作用為擴張冠脈，增強心肌收縮力的作用［4］。以往對丹參酮ⅡA磺酸鈉的研究多局限在整體動物或臨床應(yīng)用方面，而對離體實驗特別是離體冠狀動脈舒縮功能的影響及其作用機制卻鮮有報道，本實驗以去甲腎上腺素預(yù)激犬離體冠狀動脈螺旋條，系統(tǒng)觀察丹參酮ⅡA磺酸鈉及α-受體阻斷劑酚妥拉明對犬離體冠狀動脈螺旋條的影響，分析丹參酮ⅡA磺酸鈉與α-受體及鈣通道的相互關(guān)系，為臨床用藥提供實驗及理論依據(jù)?，F(xiàn)報告如下。

1　材料與方法

1.1實驗動物普通級健康成年雜種犬6只，雌雄兼用，體質(zhì)量10～12 kg，由湖北醫(yī)藥學(xué)院實驗動物房提供，實驗動物設(shè)施使用許可證號：SYXK（鄂）2011-0031，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（鄂）2011-0008。

1.2試藥與儀器BL-420F生物信號采集記錄系統(tǒng)（成都泰盟電子有限公司，型號BL-420F）；HV-4離體組織器官恒溫灌流儀（成都泰盟電子有限公司，型號HV-4）；大鼠尾動脈血壓計（成都泰盟電子有限公司，型號Medlab-u/4c501）；Tripette（100～1000μL）移液器；酚妥拉明（揚州制藥有限公司，批號H20063706）；去甲腎上腺素（武漢遠大制藥集團有限公司，批號080203）；戊巴比妥鈉（北京化學(xué)試劑公司，批號061222）；Krebs-Henseleit（KH）營養(yǎng)液，用1 mol/L HCl調(diào)pH至7.4，通混合氣體（95%O2+5%CO2）。丹參酮ⅡA磺酸鈉（菏澤步長制藥有限公司，批號Z20026866）。

1.3模型制備參照文獻［5］，腹腔注射3%戊巴比妥鈉（40 mg/kg）麻醉犬，仰位固定后用碘伏胸腹部消毒，腰椎4～6左側(cè)切口暴露左腎動脈及腹主動脈，將8號針頭與腹主動脈平行放置并用線結(jié)扎，使腹主動脈內(nèi)徑減少1/2，然后抽去針頭，關(guān)閉腹腔碘伏消毒，20mg/100 g肌肉注射慶大霉素，連續(xù)用藥1周預(yù)防感染。造模8周后用無創(chuàng)尾動脈血壓計測定模型犬血壓，以≥20 kPa為造模成功。本組實驗動物全部造模成功。術(shù)后動物福利：飼養(yǎng)要求滿足實驗動物倫理［6］，飼養(yǎng)環(huán)境要求動物房怛溫（22℃，濕度65%～75%），單籠飼養(yǎng)以防止咬傷，交替光照；自由飲水，高脂飼料喂養(yǎng)，觀察動物飲水進食情況，及時清理糞便［7］。

1.4標(biāo)本采集與檢測參照文獻［8］，8周后用3%戊

巴比妥鈉麻醉造模型成功犬，開胸取出心臟，置于4℃，95%O2+5%CO2混合氣體充氣30 min的飽和KH氏營養(yǎng)液中，迅速分離犬心左冠狀動脈前降支，剔除結(jié)締組織，剪成寬成寬2mm，長5 mm的動脈螺旋條18條，采用隨機數(shù)字表，將制備的犬離體冠狀動脈前降支螺旋條標(biāo)本隨機分為對照組、丹參酮ⅡA磺酸鈉組，酚妥拉明組，每組6例。將丹參酮ⅡA磺酸鈉組標(biāo)本懸掛于37℃20mL KH氏營養(yǎng)液的恒溫浴槽中，一端接張力轉(zhuǎn)感器與BL-420F生物信號采集系統(tǒng)相連，一端固定于恒溫浴槽通氣鉤上，標(biāo)本均加1 g的前負荷，恒溫浴槽充95%O2+5%CO2混合氣體，氣體流量1mL/min。將犬冠狀動脈血管螺旋條在KH氏液中平衡溫孵30min，加入去甲腎上腺素預(yù)激，待收縮幅度達峰值后用移液器準確按10-5～10-1mol/L依次加入不同濃度的丹參酮ⅡA磺酸鈉100μL，采用BL-420F生物信號采集系統(tǒng)記錄以上標(biāo)本的收縮、舒張張力（g）。對照組加入等體積生理鹽水，酚妥拉明組依次加入10-5～10-1mol/L的酚妥拉明100μL，其余處理同丹參酮ⅡA磺酸鈉。

1.5統(tǒng)計學(xué)處理應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計軟件處理。數(shù)據(jù)以（表示，組間比較差異采用Dunnet t檢驗，不同濃度丹參酮ⅡA磺酸鈉（10-5～10-1mol/L）對冠狀動脈血管螺旋條的影響采用重復(fù)測量方差分析對數(shù)據(jù)進行分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)　果

2.1各組半抑制濃度（IC50）值比較見表1，酚妥拉明組IC50在10-4mol/L，丹參酮ⅡA磺酸鈉組的IC50為10-3，并且其在10-3～10-1mol/L之間可以劑量依賴性地抑制去甲腎上腺素引起的犬離體冠狀動脈螺旋條的收縮。

表1　各組IC50值比較（mol/L，

表1　各組IC50值比較（mol/L，

與對照組比較，△P＜0.05。下同。

組別n 10-510-410-310-210-1對照組6酚妥拉明組6 96.39±8.97 85.63±7.29 65.43±6.91 94.30±8.48 51.24±5.32△41.53±4.39△53.19±5.20 14.18±1.24 30.02±5.20△26.82±1.35△丹參酮ⅡA磺酸鈉組6 92.48±8.01 80.54±7.05 50.03±5.13△42.54±4.61△37.23±0.75△

2.2各組量效曲線（%）比較見圖1。對照組對去甲腎上腺素致外源性鈣收縮張力無明顯影響，量效曲線無下移。酚妥拉明組10-4、10-3、10-2、10-1mol/L均可明顯使量效曲線明顯下移。丹參酮ⅡA磺酸鈉組10-3、10-2、10-1mol/L 3個濃度明顯降低去甲腎上腺素引起的外源性鈣收縮張力，其最大反應(yīng)壓低、量效曲線明顯下移，與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

圖1　冠狀動脈環(huán)收縮張力量效曲線圖

2.3各組犬冠狀動脈收縮張力比較見表2。對照組、酚妥拉明組、丹參酮ⅡA磺酸鈉組3組犬離體冠狀動脈螺旋條，在以去甲腎上腺素灌流預(yù)激后很快達到最大收縮峰值，與預(yù)激前比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），說明離體冠狀動脈螺旋條活性及反應(yīng)性均正常。對照組在給藥后收縮張力無明顯變化，與預(yù)激前比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。酚妥拉明組加入酚妥拉明后，收縮張力明顯降低，與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。丹參酮ⅡA磺酸鈉組在加入10-3、10-2、10-1mol/L 3個濃度后平均收縮張力明顯降低，與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。說明丹參酮ⅡA磺酸鈉可抑制去甲腎上腺素預(yù)激冠狀動脈螺旋條平滑肌細胞的內(nèi)鈣釋放，降低冠狀動脈收縮張力。其作用與α-受體阻斷劑酚妥拉明類似。

表2　各組犬冠狀動脈收縮張力比較（g，

表2　各組犬冠狀動脈收縮張力比較（g，

與預(yù)激前比較，▲P＜0.05。

10-210-14.16±0.27 4.27±0.28 4.11±0.23 4.18±0.19 4.15±0.41 4.19±0.31（n=6）　給藥后3.53±0.22△3.24±0.17△2.52±0.18△1.02±0.09△0.82±0.09△丹參酮ⅡA磺酸鈉組　預(yù)激前4.42±0.36 4.39±0.28 4.11±0.45 4.37±0.53 4.26±0.33（n=6）　給藥后4.40±0.21 3.33±0.21 2.97±0.16△▲2.11±0.11△▲1.08±0.12△▲組別　時間對照組　預(yù)激前（n=6）　給藥后酚妥拉明組　預(yù)激前10-510-410-34.46±0.23 4.42±0.30 4.37±0.24 4.32±0.21 4.37±0.22 4.43±0.22 4.40±0.30 4.25±0.26 4.34±0.29

2.4組犬冠狀動脈舒張張力比較見表3。丹參酮ⅡA磺酸鈉組在加入10-3、10-2、10-1mol/L 3個濃度后平均舒張張力明顯降低，與對照組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

表3　各組犬冠狀動脈舒張張力比較（g，

表3　各組犬冠狀動脈舒張張力比較（g，

組別n 10-510-410-310-210-1對照組6酚妥拉明組6 2.02±0.21 2.10±0.22 2.03±0.21 2.06±0.23 1.03±0.14△0.85±0.12△2.01±0.19 2.09±0.20 0.57±0.10△0.29±0.07△丹參酮ⅡA磺酸鈉組6 2.04±0.22 1.72±0.11 1.21±0.09△1.03±0.12△0.91±0.10△

3　討　論

高血壓是老年常見心血管疾病，發(fā)病率有隨年齡增長而增高的趨勢，40歲以上者發(fā)病率高，2005年高血壓調(diào)查顯示有至少1.6億人罹患高血壓，患病率達18.8%［9］，故積極防治高血壓心臟病尤其重要。高血壓治療方案多以單獨或者聯(lián)合使用噻嗪類利尿劑、β受體阻滯劑等，現(xiàn)在大量中藥及其制劑應(yīng)用于臨床治療心血管疾病取得了肯定療效。有研究表明丹參酮ⅡA磺酸鈉有抑制去甲腎上腺素引起家兔離體動脈收縮、降低冠脈阻力及動脈血壓、增加冠脈流量的作用［10-11］。

觀察發(fā)現(xiàn)，10-3～10-1mol/L丹參酮ⅡA磺酸鈉可劑量依賴性地抑制去甲腎上腺素引起的犬離體冠狀動脈螺旋條的收縮舒張功能，其收縮張力及舒張張力均明顯下降，IC50為10-3mol/L處，其最大反應(yīng)壓低、量效曲線平行后移。實驗中隨丹參酮ⅡA磺酸鈉濃度增高，其以上反應(yīng)更加明顯，說明丹參酮ⅡA磺酸鈉對去甲腎上腺素引起的犬離體冠狀動脈螺旋條收縮具有拮抗作用，且丹參酮ⅡA磺酸鈉可劑量依賴性地抑制去甲腎上腺素對外源性鈣內(nèi)流（KH液中的Ca2+）所引起的犬冠狀動脈螺旋條的收縮。分析認為，丹參酮ⅡA磺酸鈉有Ca2+拮抗作用，可減少Ca2+內(nèi)流。去甲腎上腺素是α1受體激動劑，可促進血管平滑肌細胞膜上的鈣通道開放，并通過第2信使IP3的作用使細胞內(nèi)鈣釋放［12］，促進KH液中的Ca2+內(nèi)流引起肌張力升高［13］。由于犬冠狀動脈螺旋條平滑肌細胞上分布有交感縮血管纖維，其末梢釋放去甲腎上腺素，故其冠脈螺旋條收縮也是通過增加平滑肌細胞內(nèi)的Ca2+實現(xiàn)，如細胞內(nèi)鈣釋放和外鈣內(nèi)流［14-15］。故本研究以α1受體激動劑去甲腎上腺素預(yù)激使犬冠狀動脈螺旋條平滑肌收縮，以觀察丹參酮ⅡA磺酸鈉對血管平滑肌細胞鈣通道與外鈣內(nèi)流和內(nèi)鈣釋放對血管收縮功能的影響。實驗中當(dāng)KH液中加入去甲腎上腺素時可激活冠狀動脈螺旋條平滑肌上分布的α1受體，α1受體激動時可引起平滑肌細胞釋放Ca2+，促進細胞膜上的鈣通道開放并通過第2信使IP3的作用使細胞內(nèi)鈣釋放引起肌張力升高，故標(biāo)本在加入去甲腎上腺素預(yù)激均可使犬冠狀動脈螺旋條平滑肌收縮張力增強。在依次加入10-5、10-4、10-3、10-2、10-1mol/L的丹參酮ⅡA磺酸鈉后，10-3、10-2、10-1mol/L 3個濃度能抑制去甲腎上腺素預(yù)激引起的冠狀動脈螺旋條收縮，IC50為在10-3mol/L，其最大反應(yīng)壓低、量效曲線平行后移。說明丹參酮ⅡA磺酸鈉對去甲腎上腺素可能存在拮抗作用。實驗量效曲線顯示丹參酮ⅡA磺酸鈉可劑量依賴性地抑制去甲腎上腺素對外源性鈣內(nèi)流所引起的冠狀動脈螺旋條的收縮。提示丹參酮ⅡA磺酸鈉抑制冠脈收縮張力的作用可能與其降低外鈣內(nèi)流相關(guān)，這進一步揭示丹參酮ⅡA磺酸鈉可能具有阻斷α1受體效應(yīng)。

綜上所述，丹參酮ⅡA磺酸鈉可抑制去甲腎上腺素引起的冠脈收縮，其作用機制可能與α受體阻斷劑酚妥拉明類似，具有阻斷α受體，抑制平滑肌細胞內(nèi)鈣釋放及外鈣內(nèi)流而降低冠狀動脈收縮的作用。

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Experimental Research of Sodium TanshinoneⅡA Sulfonate on Diastolic Function of Coronary Artery Strips in Hypertension M odel Dog

HUANG Ping，WU Shengying，JIANG Xuelian.Dermatologist of Taihe Hospital of Shiyan（HubeiMedical College Affiliated Hospital），Hubei，Shiyan 442000，China.

R285.5

A

1004-745X（2016）09-1686-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2016.09.012

2015-10-26）

湖北省教育廳重點項目（D20092404）

（電子郵箱：chends1226@163.com）