小兒百部止咳糖漿中橙皮苷成分研究

廣東省東莞東華醫(yī)院（523110）黎秀平

小兒百部止咳糖漿由百部、陳皮、杏仁、桑白皮等11味中藥組成的中藥復(fù)方制劑，具有化痰通絡(luò)、清熱解毒等功效，目前多用于小兒肺熱咳喘及痰多等治療[1]。方中主要成分之一的橙皮苷為二氫黃酮衍生物中的一種，能夠抗菌、抗氧化、抗癌，還可以對(duì)免疫力進(jìn)行調(diào)節(jié)。根據(jù)大量研究結(jié)果顯示，黃酮類(lèi)化合物主要有兩種作用，促進(jìn)氧化作用和抗氧化作用[2]，橙皮苷的促氧化作用特別強(qiáng)，能夠誘導(dǎo)人類(lèi)基因發(fā)生毒害變化。目前經(jīng)常使用分光光度法及高效液相色譜法來(lái)測(cè)定藥品中的橙皮苷，以此來(lái)控制藥品質(zhì)量[3]。目前對(duì)于止咳藥品中橙皮苷含量測(cè)定尚不多見(jiàn)，為探究此類(lèi)藥品中橙皮苷含量，本文以小兒百部止咳糖漿為例，探究高效液相色譜法測(cè)定止咳類(lèi)藥物中的橙皮苷含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器及材料

1.1.1 儀器 色譜儀選擇Prostar325型高效液相色譜儀，供貨商為美國(guó)的Varian公司；清洗器選擇型號(hào)為KQ-250的超聲波清洗器，供貨商為昆山市的超聲儀器有限公司；選擇型號(hào)是BS110S的電子天平，供貨商為北京的賽多利斯有限公司；選擇型號(hào)是Cary 50的分光光度計(jì)，供貨商為美國(guó)的Varian公司。

1.1.2 試劑及材料 橙皮苷（中國(guó)藥品研究所提供，批號(hào)：20150223，含量98.0%），甲醇為色譜純（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），冰醋酸為分析純（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。實(shí)驗(yàn)藥品為小兒百部止咳糖漿（四川天誠(chéng)制藥有限公司提供，批號(hào)：20141217-20150612）。

1.2 方法

1.2.1 對(duì)照品溶液制備方法 選擇50ml的容量瓶，橙皮苷對(duì)照品于105℃干燥后，經(jīng)十萬(wàn)分位天平秤取11.02mg，轉(zhuǎn)移入容量瓶后，取適量甲醇，混合均勻溶液，澄清后加甲醇至刻度線，然后選擇10ml容量瓶，取1.5ml的溶液加進(jìn)去，再次加甲醇，到達(dá)刻度線即可，混合均勻，最終獲得的溶液為對(duì)照品溶液(33.06ug/ml)。

1.2.2 樣品溶液的制備方法 取止咳藥品5ml，將甲醇10ml加入其中進(jìn)行混合，完成后超聲處理15min，之后進(jìn)行抽濾5次，將獲得的濾液進(jìn)行混合，容器需要使用少許甲醇溶液反復(fù)清洗，清洗液和濾液混合在一起倒入50ml容量瓶中，最后加甲醇至刻度獲得供試品溶液。

1.2.3 分析方法 測(cè)量橙皮苷的最大吸收波長(zhǎng)：使用儀器為紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，首先使用精密天平秤取10mg的對(duì)照品，倒入甲醇溶液將對(duì)照品進(jìn)行稀釋，使最終溶液為100ml，之后選取50ml容量瓶，抽取5ml稀釋液加入其中，然后加入甲醇，達(dá)到刻度處停止。在紫外分光光度計(jì)上進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，經(jīng)圖譜分析得最大吸收峰波長(zhǎng)是285nm，選取285nm波段進(jìn)行液相分析，發(fā)現(xiàn)雜質(zhì)干擾少適宜于本次含量測(cè)定。

色譜條件：ODS-C18（4.6mm×250mm， 5μm），流動(dòng)相：甲醇-水-醋酸（34∶60∶6），流速：1.0ml·min-1檢測(cè)波長(zhǎng)285nm，柱溫：25℃。

1.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

1.3.1 空白溶劑的篩選 選取流動(dòng)相時(shí)，不會(huì)出現(xiàn)任何雜質(zhì)峰，對(duì)測(cè)定不會(huì)造成影響，因此在制作供試品時(shí)選擇的空白溶劑為流動(dòng)相。

1.3.2 塔板數(shù)、拖尾因子、分離度 經(jīng)圖譜分析顯示，理論塔板數(shù)為8238，拖尾因子為1.02，分離度良好。

1.3.3 精密度試驗(yàn) 精密量取10μL對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，分別測(cè)定峰面積，并計(jì)算其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=1.2%（小于2.0%），符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，結(jié)果表明本實(shí)驗(yàn)精密度良好。

1.3.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取百部止咳糖漿樣品6份，參考“1.2.2”項(xiàng)下供試品制備過(guò)程制備供試品，測(cè)定其中橙皮苷含量，得到6份供試品溶液含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=0.9%（小于2.0%），符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。

1.3.5 線性關(guān)系考察 使用對(duì)應(yīng)移液管精密量取“1.2.1”項(xiàng)下橙皮苷對(duì)照品溶液，1，2，3，4，5ml，轉(zhuǎn)移至10ml容量瓶中，加50%甲醇定容至刻度，搖勻后，即得5個(gè)不同濃度的橙皮苷對(duì)照品溶液，經(jīng)0.2um微孔濾膜過(guò)濾后，進(jìn)樣1為橫坐標(biāo)，通過(guò)excel軟件擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性方程為：Y=75357X-34237.4，r=0.9997結(jié)果表明，橙皮苷濃度在3.306～16.530ug/ml范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

1.3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液與對(duì)照品溶液，分別在0h、2h、4h、8h、12h、24h精密量取10μL注入液相色譜儀，進(jìn)樣測(cè)定，對(duì)照品溶液峰面積的RSD為1.8%（小于2.0%），符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。結(jié)果表明對(duì)照品和供試品溶液至少在24h內(nèi)穩(wěn)定。

1.3.7 回收率實(shí)驗(yàn) 分別取約5ml同一批次的供試品，保存至3個(gè)錐形瓶?jī)?nèi)，依次加橙皮苷對(duì)照品2.61mg、4.23mg和8.73mg，根據(jù)制作供試品的步驟，取得適量的續(xù)濾液，取10ul完成進(jìn)針，對(duì)峰面積進(jìn)行測(cè)定，分別計(jì)算回收率為101.31%、100.25%和99.26%，平均回收率為100.27%，RSD為1.37%，與藥典標(biāo)準(zhǔn)相符。

1.3.8 樣品中橙皮苷含量測(cè)定 在同一色譜條件下分別把對(duì)照品溶液與不同批次供試品溶液進(jìn)行含量測(cè)定，采用外標(biāo)法計(jì)算橙皮苷含量，結(jié)果見(jiàn)附表。

2 結(jié)果

采用高效液測(cè)定結(jié)果顯示，小兒百部止咳糖漿中橙皮苷含量如附表所示。

附表 小兒百部止咳糖漿中橙皮苷含量

3 討論

本次實(shí)驗(yàn)所選方法準(zhǔn)確性高、精密度好、重現(xiàn)性和相關(guān)性均符合相關(guān)要求，所得小兒百部止咳糖漿中，橙皮苷含量（19.34±0.18）ug/ml。結(jié)果提示，高效液相法測(cè)定橙皮苷的含量具有準(zhǔn)確性高、精密程度好、有良好的線性關(guān)系，可考慮作為小兒百部止咳糖漿中橙皮苷含量測(cè)定方法，且可考慮在同類(lèi)藥物中推廣。