滁菊總黃酮對寒凝血瘀證家兔血液流變學(xué)的影響

張本榮，李亞東，吳小二，俞浩

(1.廬江縣中醫(yī)院藥劑科，安徽 廬江　231500;2.安徽科技學(xué)院食品藥品學(xué)院，安徽 鳳陽　233100)

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滁菊總黃酮對寒凝血瘀證家兔血液流變學(xué)的影響

張本榮1，李亞東1，吳小二1，俞浩2

(1.廬江縣中醫(yī)院藥劑科，安徽 廬江231500;2.安徽科技學(xué)院食品藥品學(xué)院，安徽 鳳陽233100)

目的觀察滁菊總黃酮對寒凝血瘀證家兔血液流變學(xué)的影響。方法采用皮下注射腎上腺素加冰水浸泡復(fù)制寒凝血瘀證家兔模型，觀察滁菊總黃酮對寒凝血瘀證家兔全血黏度、血漿黏度，紅細胞沉降速率和紅細胞壓積，紅細胞聚集指數(shù)和剛性指數(shù)，以及二磷酸腺苷(ADP)誘導(dǎo)血小板聚集率的影響。結(jié)果與模型對照組比較，滁菊總黃酮能夠改善寒凝血瘀證家兔全血黏度和血漿黏度(P<0.05或P<0.01)，降低紅細胞沉降速率和紅細胞壓積(P<0.05或P<0.01)，降低紅細胞聚集指數(shù)和剛性指數(shù)(P<0.05或P<0.01)，抑制ADP誘導(dǎo)的血小板聚集(P<0.05或P<0.01)。結(jié)論滁菊總黃酮能夠改善寒凝血瘀證家兔血液流變學(xué)異常。

菊花/藥物作用;黃酮類;血瘀;血液流變學(xué);兔

滁菊為菊科植物菊(ChrysanthemummorifoliumRamat.)的干燥頭狀花序，原產(chǎn)于滁州、定遠，現(xiàn)主產(chǎn)于滁州譙城區(qū)、全椒馬場一帶，因品質(zhì)優(yōu)良，被譽為“四大名菊”之首，為藥食兩用之品。滁菊味甘、苦，微寒，具有散風清熱、平肝明目、清熱解毒之功效，臨床用于頭痛眩暈、目赤腫痛、眼目昏花等癥[1]。當前，以滁菊為原料的市場產(chǎn)品主要有飲品、保健枕等，具有防治肝陽上亢型高血壓、風火目痛、風熱感冒頭痛等作用?，F(xiàn)代研究表明，滁菊富含揮發(fā)油、黃酮、多糖、微量元素等多種生物活性成分，其中黃酮為其重要活性成分之一，具有抗心肌缺血[2]和心肌缺血再灌注損傷[3]、抗炎[4]、鎮(zhèn)痛[5]、抗氧化[6]和改善糖尿病大鼠血液流變學(xué)異常[7]等多種作用。本研究采用皮下注射腎上腺素合并冰水浸泡的方法復(fù)制寒凝血瘀證家兔模型，觀察滁菊總黃酮對寒凝血瘀證家兔血液流變學(xué)相關(guān)指標的影響，以期為滁菊的開發(fā)利用作一探索。

1　材料與方法

1.1藥品與試劑滁菊總黃酮，安徽科技學(xué)院食品藥品學(xué)院藥物制劑室制備(黃酮含量76.38%)；阿司匹林腸溶片，陜西健民制藥有限公司；二磷酸腺苷(ADP)二鈉鹽，Alexis公司產(chǎn)品，臨用時以0.1 mol·L-1的磷酸鹽緩沖液(pH 7.4)配制成1 mmol·L-1的溶液，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2主要儀器DL-5低速離心機，鄭州長城科工貿(mào)易有限公司；FA21048電子天平，上海市精密科學(xué)儀器總廠；FASCO-3010A全自動血液流變儀，重慶大學(xué)維多生物工程研究所；LBY-NJ4血小板凝聚儀，北京普利生公司。

1.3實驗動物雄性新西蘭大白兔，購于安徽長臨河醫(yī)藥科技有限公司，體質(zhì)量2～2.5 kg，動物使用許可證號：SCXK(蘇)2010-0002。

1.4方法

1.4.1動物分組及給藥取家兔48只，隨機分為滁菊總黃酮高、中、低劑量組(劑量分別為30、15、7.5 mg·kg-1體質(zhì)量)，復(fù)方阿司匹林組(8.0 mg·kg-1)，模型對照組和正常對照組，每組8只。連續(xù)灌胃給藥8 d，每日給藥1次。正常對照組和模型對照組灌服等容量的生理鹽水。第7 天給藥后30 min，參照文獻方法復(fù)制寒凝血瘀證家兔模型[8]，除正常對照組皮下注射等容量的生理鹽水外，其余各組家兔均皮下注射1%腎上腺素0.4 mL，然后將兔四肢自膝關(guān)節(jié)上部固定于自制的帶有四孔的木板上，并將四肢放入冰水中15 min，冰水浸沒至膝關(guān)節(jié)處，4 h后再次皮下注射1%腎上腺素0.4 mL。于第8天給藥后30 min自家兔心臟采血進行各項指標檢測。

1.4.2全血黏度、血漿黏度測定自家兔心臟采血4 mL，分別置2支抗凝管中，制備全血和血漿。測定全血黏度和血漿黏度。

1.4.3血沉和紅細胞壓積測定自兔心臟采血4 mL置抗凝管中，制備全血，取全血置潔凈、干燥的血沉管中(長200 mm，內(nèi)徑為2.5 mm)，調(diào)至“0”刻度，垂直放置于血沉管架上，1 h后讀取紅細胞沉降高度(mm)。另取1 mL全血注入比積管內(nèi)，3 500 r·min-1離心30 min，再離心10 min，記錄紅細胞層的高度，計算紅細胞壓積。

1.4.4紅細胞聚集指數(shù)、剛性指數(shù)測定自家兔心臟采血置抗凝管中，取抗凝血于全自動血液流變分析儀測定紅細胞聚集指數(shù)和剛性指數(shù)。

1.4.5血小板聚集率測定家兔心臟采血至抗凝管中(3.8%枸櫞酸鈉抗凝，抗凝劑∶血=1∶9)，120×g離心10 min，取上清(富血小板血漿)，余血1 200×g離心10 min，取上清(貧血小板血漿)。調(diào)富血小板血漿中血小板濃度約為600×109·L-1。按照Born氏比濁法，取比濁管加入富血小板血漿300 μL及小磁棒1個，置血小板聚集儀中37 ℃ 預(yù)熱5 min，貧血小板血漿調(diào)零后，加入終濃度為10 μmol·L-1ADP誘導(dǎo)聚集，測定血小板聚集率。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法數(shù)據(jù)處理采用SPSS17.0軟件，多組定量數(shù)據(jù)的比較采用One-Way ANOVA方差分析的方法,多組之間兩兩比較采用SNK-q檢驗的方法，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1滁菊總黃酮對寒凝血瘀證家兔全血黏度及血漿黏度的影響模型對照組家兔全血黏度、血漿黏度均顯著高于正常對照組(P<0.01)，說明采用腎上腺素加冰水復(fù)制的寒凝血瘀證家兔模型能夠滿足實驗研究需要。灌服滁菊總黃酮后，與模型對照組比較，滁菊總黃酮高、中劑量組家兔全血高切、中切、低切均顯著下降(P<0.05或P<0.01)，滁菊總黃酮低劑量組家兔全血低切亦顯著下降(P<0.01)，滁菊總黃酮高、中、低劑量組血漿黏度均顯著低于模型對照組(P<0.01)。結(jié)果表明，滁菊總黃酮能夠改善寒凝血瘀證家兔全血黏度和血漿黏度，具體見表1。

2.2滁菊總黃酮對寒凝血瘀證家兔血沉及紅細胞壓積的影響滁菊總黃酮高、中劑量組家兔血沉顯著低于模型對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。滁菊總黃酮高、中、低劑量組家兔紅細胞壓積亦顯著低于模型對照組(P<0.05或P<0.01)。結(jié)果表明，滁菊總黃酮能夠降低寒凝血瘀證家兔血沉和紅細胞壓積,具體見表2。

表1　滁菊總黃酮對寒凝血瘀證家兔全血黏度及血漿黏度的影響±s

注：與模型對照組比較aP<0.05,bP<0.01;與正常對照組比較cP<0.05，dP<0.01。

表2　滁菊總黃酮對寒凝血瘀證家兔血沉及紅細胞壓積的影響±s

注：與模型對照組比較aP<0.05,bP<0.01;與正常對照組比較cP<0.05，dP<0.01。

2.3滁菊總黃酮對寒凝血瘀證家兔紅細胞聚集指數(shù)和剛性指數(shù)的影響滁菊總黃酮高、中劑量組紅細胞聚集指數(shù)顯著低于模型對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。滁菊總黃酮高劑量組家兔紅細胞剛性指數(shù)亦顯著低于模型對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果表明，滁菊總黃酮能夠降低寒凝血瘀證家兔紅細胞聚集指數(shù)和剛性指數(shù)。具體見表3。

表3　滁菊總黃酮對寒凝血瘀證家兔紅細胞聚集指數(shù)、剛性指數(shù)的影響±s

注：與模型對照組比較aP<0.05,bP<0.01;與正常對照組比較cP<0.05，dP<0.01。

2.4滁菊總黃酮對寒凝血瘀證家兔血小板聚集率的影響由表4可知，滁菊總黃酮高、中劑量能夠顯著抑制ADP誘導(dǎo)的模型家兔血小板聚集，與模型對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。結(jié)果表明，滁菊總黃酮能夠抑制ADP誘導(dǎo)的寒凝血瘀證家兔血小板聚集。

3　討論

血瘀證是中醫(yī)臨床常見證型之一，氣虛、氣滯、寒凝、熱結(jié)、津虧、外傷、痰濁等多種原因均可導(dǎo)致血液運行不暢，形成血瘀。寒邪侵襲機體，使機體陽氣受損，溫煦、推動作用不足，致血液運行不暢而致血瘀[9-10]。同時，機體受寒后，外周血管收縮，促進或加重瘀血的形成。腎上腺素為α、β受體激動劑，α受體興奮會引起皮膚黏膜血管的強烈收縮[8]。研究表明，血瘀證患者存在血液流變學(xué)、血流動力學(xué)和微循環(huán)異常，其中血液流變學(xué)異常主要表現(xiàn)為血液黏度增加、紅細胞比容增加、沉降速度加快、血小板聚集性增強。本研究采用皮下注射腎上腺素加冰水復(fù)制寒凝血瘀證家兔模型，實驗結(jié)果顯示，模型家兔全血黏度與血漿黏度、紅細胞沉降及紅細胞壓積、紅細胞聚集指數(shù)與剛性指數(shù)及血小板聚集率等均顯著高于正常家兔，說明寒凝血瘀證模型復(fù)制成功，能夠很好滿足實驗研究需要。

表4　滁菊總黃酮對寒凝血瘀證家兔血小板聚集率的影響±s

注：與模型對照組比較aP<0.05,bP<0.01；與正常對照組比較cP<0.05，dP<0.01。

血液黏度是反應(yīng)血液黏滯性的重要指標之一，血瘀證患者血液黏稠，表現(xiàn)為全血黏度、血漿黏度增加；由于血液黏稠，血漿比容積相對較小，紅細胞比容積相對加大，壓積增加，沉降速度加快；因血漿比容積減小，血流速度減緩，紅細胞聚集指數(shù)、剛性指數(shù)增加。本研究結(jié)果表明，滁菊總黃酮能顯著降低寒凝血瘀證家兔全血黏度和血漿黏度，降低紅細胞沉降速率、紅細胞壓積、紅細胞聚集指數(shù)和剛性指數(shù)，說明滁菊總黃酮能改善寒凝血瘀證家兔血液黏度，進而改善寒凝血瘀證家兔的血瘀癥狀。

血小板在瘀血及血栓形成過程中發(fā)揮著非常重要的作用，寒凝血瘀證家兔血小板聚集率顯著高于正常對照組家兔。ADP能夠抑制血小板表面ATP酶活性，促使血小板暴露磷脂表面，進而誘導(dǎo)血小板聚集。本研究研究結(jié)果表明，滁菊總黃酮具有抑制ADP誘導(dǎo)的寒凝血瘀證家兔血小板聚集作用。滁菊總黃酮能夠顯著改善寒凝血瘀證家兔血液流變學(xué)相關(guān)指標，但其機制有待進一步深入研究。

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Effects of total flavonoids from Chuzhou Chrysanthemum morifolium Ramat on hemorheology in cold-coagulation and blood-stasis rabbits

ZHANG Benrong,LI Yadong,WU Xiaoer,et al

(DepartmentofPharmacy,LujiangHospitalofTraditionalChineseMedicine,Lujiang,Anhui231500,China)

ObjectiveTo observe the effects of total flavonoids from ChuzhouChrysanthemummorifoliumRamat on hemorheology in cold-coagulation and blood-stasis rabbits(CBR).MethodsThe model of CBR was induced by hypodermic injection of adrenalin combined with ice water soak.The effects of total flavonoids from ChuzhouChrysanthemummorifoliumRamat on viscosity of whole blood and plasma,erythrocyte sedimentation rate and hematocrit,erythrocyte aggregation index and erythrocyte rigidity index,and platelet aggregation induced by ADP were determined in cold-coagulation and blood-stasis rabbits.ResultsCompared with model group,total flavonoids from ChuzhouChrysanthemummorifoliumRamat could significantly reduce the viscosity of whole blood and plasma(P<0.05 orP<0.01),erythrocyte sedimentation rate and hematocrit(P<0.05 orP<0.01),decrease the erythrocyte aggregation index and erythrocyte rigidity index(P<0.05 orP<0.01),and inhibit platelet aggregation induced by ADP(P<0.05 orP<0.01).ConclusionsThe total flavonoids from ChuzhouChrysanthemummorifoliumRamat could improve hemorheological abnormality of CBR.

Chrysanthemum morifolium/drug effects；Flavones;Blood stasis;Hemorheology;Rabbits

安徽省青年科學(xué)基金(10040606Q13);安徽省創(chuàng)新型省份建設(shè)專項資金計劃(15czz03104)

俞浩，男，教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機制研究，E-mail：yhz_1230@163.com

10.3969/j.issn.1009-6469.2016.08.006

2016-03-22，

2016-05-12)