粵北地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)藍(lán)耳病抗體水平及其與病毒血癥關(guān)系的初步研究

吳靜波，黃健強(qiáng)，南文金，胡鴻惠，彭國(guó)良（韶關(guān)學(xué)院/廣東省粵北生豬生產(chǎn)及疫病防控協(xié)同創(chuàng)新發(fā)展中心，廣東 韶關(guān) 512005）

粵北地區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)藍(lán)耳病抗體水平及其與病毒血癥關(guān)系的初步研究

吳靜波，黃健強(qiáng)，南文金，胡鴻惠，彭國(guó)良
（韶關(guān)學(xué)院/廣東省粵北生豬生產(chǎn)及疫病防控協(xié)同創(chuàng)新發(fā)展中心，廣東 韶關(guān) 512005）

藍(lán)耳病是全球生豬規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)所面臨的共同難題，現(xiàn)仍缺少有效的治療藥物，而疫苗免疫是控制該病最為有效的手段。為了解粵北地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)的藍(lán)耳病抗體水平，對(duì)該地區(qū)4家豬場(chǎng)382份血清樣品進(jìn)行ELISA檢測(cè)，并設(shè)計(jì)熒光定量RT-PCR方法對(duì)血清中的病毒RNA進(jìn)行檢測(cè)，以初步探討豬群抗體水平與病毒血癥的關(guān)系。結(jié)果顯示：粵北地區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)的藍(lán)耳病抗體陽性率為82.9%，平均S/P值為1.59；但抗體水平離散度較大，4家豬場(chǎng)抗體水平的變異系數(shù)均高于25%。經(jīng)靈敏度為10-1.5TCID50/mL的熒光定量RT-PCR方法檢測(cè)顯示，豬群病毒血癥發(fā)生率為12.4%，其中抗體水平不穩(wěn)定群中病毒血癥發(fā)生率為16.7%，明顯高于抗體穩(wěn)定群的7.3%。研究表明，粵北地區(qū)地區(qū)抗體陽性率和抗體效價(jià)較高，但均一性差，藍(lán)耳病發(fā)病的可能性較大；同時(shí)抗體不穩(wěn)定豬群出現(xiàn)病毒血癥的概率更高。

藍(lán)耳?。籔RRSV；抗體水平；病毒血癥

吳靜波，黃健強(qiáng)，南文金，等. 粵北地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)藍(lán)耳病抗體水平及其與病毒血癥關(guān)系的初步研究［J］.廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，43（8）：143-150.

豬呼吸道與繁殖綜合征（PRRS）又稱藍(lán)耳病，是由豬呼吸道與繁殖綜合征病毒（PRRSV）引起的一種嚴(yán)重危害生豬養(yǎng)殖業(yè)的急性、高度傳染性疾病，主要引起發(fā)熱、母豬繁殖障礙、早產(chǎn)、流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎及仔豬呼吸綜合征等臨床癥狀，母豬流產(chǎn)率可達(dá)40%，仔豬病死率高達(dá)50%以上，是目前造成生豬生產(chǎn)損失最嚴(yán)重的疾病之一［1-3］。

由于PRRS缺少有效的治療藥物，并且存在高度變異、免疫逃避和持續(xù)感染等因素，使得豬場(chǎng)一旦感染PRRSV就很難完全清除［4-7］。目前控制PRRS發(fā)生的方法主要有優(yōu)化管理、撲殺感染豬、生物隔離和接種疫苗，其中定期對(duì)豬群進(jìn)行疫苗免疫仍然是控制該病傳播最有效的手段。當(dāng)前我國(guó)市場(chǎng)上商品化的藍(lán)耳病疫苗包括滅活疫苗和弱毒疫苗兩類，滅活疫苗安全但是抗體產(chǎn)生慢，免疫效率低；弱毒疫苗雖有毒力并可引起流產(chǎn)等癥狀，但抗體產(chǎn)生快，效價(jià)高且持續(xù)時(shí)間持久，能有效降低疾病的嚴(yán)重性、縮短毒血癥時(shí)間、減低繼發(fā)感染幾率。因此大部分豬場(chǎng)偏好免疫弱毒苗用于藍(lán)耳病防控［8-9］。但是隨著近年弱毒疫苗的大量使用和混用，使得藍(lán)耳病疫情越來越復(fù)雜［10］。從我們近幾年對(duì)藍(lán)耳抗體的檢測(cè)數(shù)據(jù)來看，雖然豬場(chǎng)抗體陽性率和抗體水平不斷上升，但抗體的整齊性卻越來越差，異常的抗體水平越來越多。其中，低水平抗體可能因抗體依賴增強(qiáng)作用（ADE）反而有利于病毒生長(zhǎng)［11］，而異常高的抗體水平有可能是疫苗引起的病毒血癥或者野毒感染，因此異?？贵w水平給豬群帶來的保護(hù)力并不明確。

最近幾年，粵北地區(qū)藍(lán)耳病的防控形勢(shì)也越來越嚴(yán)峻，多種弱毒疫苗的混用和不規(guī)范引種導(dǎo)致部分豬場(chǎng)病毒株群越來越復(fù)雜。為進(jìn)一步了解目前形勢(shì)下粵北地區(qū)藍(lán)耳病抗體水平，本研究對(duì)該地區(qū)的4個(gè)豬場(chǎng)328份樣品進(jìn)行藍(lán)耳病抗體ELISA檢測(cè)，并構(gòu)建高靈敏度的熒光定量RT-PCR方法對(duì)其中121份樣品進(jìn)行藍(lán)耳病病原RNA的定量檢測(cè)，初步分析藍(lán)耳病抗體水平與病毒血癥的關(guān)系。

1　材料與方法

1.1血清樣品的采集及處理

2014年12月至2015年12月，我們?cè)趯?duì)豬場(chǎng)抗體水平的常規(guī)監(jiān)測(cè)中，采集了粵北地區(qū)4家規(guī)?；i場(chǎng)共328頭豬的上腔靜脈血，包括208頭種豬和120頭仔豬，具體采集情況如表1所示。靜脈血采集后室溫靜置1 h釋出血清，然后冷藏運(yùn)輸回實(shí)驗(yàn)室，10 000 r/min離心分離血清。將血清分為兩部分，一部分進(jìn)行ELISA檢測(cè)，一部分進(jìn)行病毒RNA提取，用于病原RTPCR檢測(cè)。在檢測(cè)抗體的同時(shí)，我們還對(duì)豬場(chǎng)的疫苗免疫、生產(chǎn)和發(fā)病情況進(jìn)行調(diào)查，具體情況如表1所示。

1.2抗體水平的ELISA檢測(cè)

使用PRRSV抗體檢測(cè)試劑盒（美國(guó)IEDXX公司）對(duì)抗體水平進(jìn)行ELISA檢測(cè)，該試劑盒只檢測(cè)針對(duì)PRRSV核衣殼蛋白（N蛋白）的抗體。實(shí)驗(yàn)操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。在陰陽性對(duì)照成立的前提下，如果S/P值＜0.4，樣品判定為PRRSV抗體陰性；如果S/P值≥0.4，樣品判定為PRRS抗體陽性。

表1　4個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)基本情況和采樣信息

1.3RNA提取

采用RNAiso Plus試劑〔Code No.：9108Q，寶生物工程（大連）有限公司〕進(jìn)行病毒RNA提取，實(shí)驗(yàn)操作要按照說明書進(jìn)行。所提取的RNA于-70℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4熒光定量RT-PCR的引物探針設(shè)計(jì)及擴(kuò)增條件

PRRSV的膜基質(zhì)蛋白（M蛋白）基因序列在所有毒株中呈高度保守。我們對(duì)10株經(jīng)典株和10株高致病株的M蛋白基因進(jìn)行多重比對(duì)，以高致病株JXA1的基因組序列（GenBank登錄號(hào)：EF112445）為參考序列在M蛋白基因的保守區(qū)內(nèi)設(shè)計(jì)引物和探針，引物和探針序列信息如表2所示，使用FAM發(fā)光基團(tuán)和BHQ1淬滅基團(tuán)標(biāo)記探針兩端。使用MAGA 5.1和Oligo 7進(jìn)行多重比對(duì)和引物探針設(shè)計(jì)，引物探針由寶生物工程（大連）有限公司合成。

熒光定量RT-PCR擴(kuò)增使用ABI 7 500熒光定量RT-PCR系統(tǒng)進(jìn)行擴(kuò)增和分析，以O(shè)ne Step PrimeScript? RT -PCR Kit （Perfect Real Time）〔Code No.：RR064A，寶生物工程（大連）有限公司〕作為檢測(cè)試劑。擴(kuò)增體系20 μL，包括10 μL One Step RT-RT-PCR Buffer （2×）、0.4 μL Ex Taq HS（5 U/μL），0.4 μL PrimeScript RT Enzyme Mix，0.5 μL引物（10 μmol/L）和探針（5μmol/L）、2 μL RNA模板、0.4 μL ROX Reference Dye（50×），無RNA酶水補(bǔ)至25 μL。擴(kuò)增條件：42℃逆轉(zhuǎn)錄30 min，94℃滅活逆轉(zhuǎn)錄酶和預(yù)變性2 min；94℃變性5 s、60℃退火和延伸35 s，40個(gè)循環(huán)，并收集熒光。

表2　引物探針序列

1.5熒光定量RT-PCR的特異性和靈敏度檢測(cè)

用我們建立的方法對(duì)多個(gè)病毒（HPPRRSV、經(jīng)典PRRSV、JEV、CSFV、PCV、PRV、TGEV、PEDV、ProV）的RNA/DNA進(jìn)行檢測(cè)，以驗(yàn)證本方法的特異性。病毒來源：豬圓環(huán)病毒為本實(shí)驗(yàn)室分離保存；高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（JXA1-R株）購(gòu)自廣東大華農(nóng)動(dòng)物保健品股份有限公司；豬乙型腦炎活疫苗（SA-14-14-2株）、豬瘟活疫苗（CVCC AV1412）、豬偽狂犬活疫苗（HB-98株）購(gòu)自武漢科前生物制品有限公司；豬繁殖與呼吸綜合征疫苗（CH-1R株）和豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉、豬輪狀病毒三聯(lián)活疫苗（弱毒華毒株+弱毒CV777株+NX株）購(gòu)自哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司。

將提取的HP-PRRSV JXA1-R株的RNA進(jìn)行10倍梯度稀釋作為標(biāo)準(zhǔn)品，根據(jù)病毒的原始滴度計(jì)算，梯度稀釋后的濃度為1×105.5～1× 10-1.5TCID50/mL。使用我們建立的方法對(duì)稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行擴(kuò)增，每個(gè)梯度3個(gè)復(fù)孔，檢測(cè)方法的靈敏度并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算相關(guān)系數(shù)和擴(kuò)增效率。

1.6抗體水平與病毒血癥關(guān)系分析

提取A和B豬場(chǎng)121份血清的病毒RNA作為模板，用我們建立的熒光定量RT-PCR方法進(jìn)行檢測(cè)，記錄樣品攜帶PRRSV的情況，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算陽性樣品中含有的PRRSV滴度。結(jié)合樣品的ELISA和病原RT-PCR結(jié)果，分析不同S/P值區(qū)間內(nèi)樣品RT-PCR陽性率、RT-PCR陽性樣品的S/P值大小分布及樣品攜帶病毒量對(duì)S/P值大小的影響，初步探討抗體水平與病毒血癥的相關(guān)性。

2　結(jié)果與分析

2.1抗體水平檢測(cè)結(jié)果

4個(gè)豬場(chǎng)328份血清的抗體S/P值情況如圖1所示。從圖1可以看見，4個(gè)豬場(chǎng)樣品S/P值的離散度較大，表明抗體水平的均一性較差。從表3可知，4個(gè)豬場(chǎng)總的抗體陽性率為82.9%，各豬場(chǎng)的總體抗體陽性率都達(dá)到80%以上，但A豬場(chǎng)仔豬群的抗體陽性率只有38.5%。4個(gè)豬場(chǎng)的平均S/P值均大于0.8，總體平均S/P值達(dá)到1.59，處于一個(gè)較高的水平；25.4%的抗體陽性樣品的S/P值＞2.5，其中A豬場(chǎng)種豬群的平均值達(dá)到2.82，63.8%的樣品S/P值＞2.5，最高S/P值甚至達(dá)到4.243。檢測(cè)顯示4個(gè)豬場(chǎng)抗體水平的變異系數(shù)均高于25%，最低和最高值均出現(xiàn)在A豬場(chǎng)，分別是種豬群的32.1%和仔豬群的109.0%。

圖1　4個(gè)豬場(chǎng)的血清樣品S/P值情況

2.2熒光定量RT-PCR的特異性

所建立的熒光定量RT-PCR方法對(duì)HPPRRSV、經(jīng)典PRRSV、JEV、CSFV、PCV、PRV、TGEV、PEDV、ProV的檢測(cè)結(jié)果如圖2所示，顯示本方法可特異性檢測(cè)出HP-PRRSV和經(jīng)典PRRSV，而對(duì)JEV、CSFV等其他陰性對(duì)照病毒沒有非特異性反應(yīng)，具有良好的特異性。

圖2　熒光定量RT-PCR特異性檢測(cè)擴(kuò)增曲線

2.3熒光定量RT-PCR的標(biāo)準(zhǔn)曲線及靈敏度

熒光定量RT-PCR對(duì)濃度梯度為1× 105.5～1×10-1.5TCID50/mL的標(biāo)準(zhǔn)品的檢測(cè)結(jié)果如圖3A所示，顯示1×10-1.5TCID50/mL以上的標(biāo)準(zhǔn)品均出現(xiàn)熒光增長(zhǎng)曲線，檢測(cè)為陽性，即本方法的檢測(cè)極限達(dá)到1×10-1.5TCID50/mL。對(duì)所有標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖3B），顯示8個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品的檢測(cè)CT值與對(duì)應(yīng)滴度的Log10值呈線性關(guān)系，且線性范圍極寬；線性方程為y =-3.077x+33.42（y為CT值，x為原始滴度的Log10值），相關(guān)系數(shù)（R2）為0.9959，擴(kuò)增效率為111.345%。

表3　4個(gè)豬場(chǎng)的抗體檢測(cè)結(jié)果

圖3　熒光定量RT-PCR對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)的擴(kuò)增曲線（A）及標(biāo)準(zhǔn)曲線（B）

2.4血清樣品的RT-PCR檢測(cè)結(jié)果

應(yīng)用建立的熒光定量RT-PCR方法對(duì)A 和B兩豬場(chǎng)的所有血清樣品的病毒RNA進(jìn)行檢測(cè)，部分樣品的擴(kuò)增結(jié)果如圖4所示，兩豬場(chǎng)121份樣品中有15份樣品熒光定量RTPCR檢測(cè)為陽性，陽性率為12.4%，其中仔豬占66.7%、種豬占33.3%。由表4可知，A豬場(chǎng)陽性樣品4份，占該豬場(chǎng)檢測(cè)樣品數(shù)的6.7%；B豬場(chǎng)陽性樣品11份，占該豬場(chǎng)檢測(cè)樣品數(shù)的18.0%。另外A豬場(chǎng)種豬陽性樣品3份、仔豬1份，分別占各自豬群的6.4%和7.7%；B豬場(chǎng)種豬陽性樣品3份、仔豬9份，分別占各自豬群的12.5%和24.3%。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算獲得各陽性樣品的原始PRRSV滴度，A豬場(chǎng)陽性樣品病毒滴度較低，含量在1×10-1.16～1×101.9TCID50/mL之間，B豬場(chǎng)病毒滴度含量范圍較大，在1 ×10-1.3～1×105.3TCID50/mL之間，最高與最低相差106.6倍。

圖4　部分樣品的熒光定量RT-PCR檢測(cè)擴(kuò)增曲線

表4　15份陽性樣品熒光定量RT-PCR檢測(cè)結(jié)果

2.5抗體水平與病毒血癥的關(guān)系

結(jié)合表3的ELISA檢測(cè)結(jié)果和表4的熒光定量RT-PCR檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，S/P值＜0.4和S/P值＞2.5的豬群中病毒血癥發(fā)生率為16.7%，其中S/P值＜0.4的豬群病毒血癥發(fā)生率為17.6%；S/P值＞2.5的豬群中病毒血癥發(fā)生率為16.3%，并且B場(chǎng)仔豬S/P值＞2.5的豬群中病毒血癥發(fā)生率達(dá)到33.3%；S/P值在0.4～2.5之間的豬群中病毒血癥發(fā)生率為7.3%，其中S/P值在0.8～1.2之間的豬群病毒血癥發(fā)生率為0。分析RT-PCR陽性樣品的S/P值還發(fā)現(xiàn)，73.3%的RT-PCR陽性樣品的S/P值處在異常范圍（＜0.4或＞2.5），其中A場(chǎng)的RT-PCR陽性樣品的S/P值均在異常范圍；但血清中的病毒滴度與S/P值沒有明顯的相關(guān)性，滴度較高的幾份樣品的S/P值分別為0.23、3.38、0.66、2.5，在抗體水平的3個(gè)區(qū)間內(nèi)均有分布。

3　討論

由于免疫效果不明顯、病毒不斷變異及其他免疫逃逸機(jī)制等因素的存在，PRRSV急性發(fā)病后一般會(huì)出現(xiàn)一個(gè)慢性、持續(xù)性的感染過程［4-7，12］。持續(xù)感染是PRRSV流行中的一個(gè)重要特征，同時(shí)也是病毒在豬群內(nèi)成功長(zhǎng)期存在的關(guān)鍵，而這些帶毒豬正是藍(lán)耳病最主要的傳染源。為對(duì)抗PRRSV的持續(xù)感染，防治疾病的再次暴發(fā)，接種疫苗是最為有效的方法。研究顯示，一定的抗體水平，尤其是中和抗體，有利于減輕PRRSV陽性豬的臨床癥狀，降低豬群發(fā)病率和死亡率［13-15］，因此藍(lán)耳病疫苗一直是農(nóng)業(yè)部強(qiáng)制免疫的范圍。良好的豬場(chǎng)藍(lán)耳病抗體陽性率為70%～80%，離散度在25%左右，S/P值在0.8～1.2之間，并且保證S/P值＞2.5的豬只占豬群5%以下。但最近幾年出現(xiàn)部分豬場(chǎng)為追求高的抗體陽性率和效價(jià)，超份額、頻繁甚至混用藍(lán)耳病疫苗，造成豬場(chǎng)的抗體水平越來越不穩(wěn)定，疫情也越來越復(fù)雜。從我們的調(diào)查可看到，粵北地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)藍(lán)耳病的平均抗體陽性率達(dá)到82.9%，平均S/P值達(dá)到1.59，各豬場(chǎng)的平均陽性率和S/P值均能到達(dá)70%和0.8的合格線，發(fā)病1個(gè)月后的A豬場(chǎng)種豬抗體陽性率甚至達(dá)到100%，平均S/P達(dá)到2.82。調(diào)查顯示此地區(qū)的藍(lán)耳病抗體水平保持在一個(gè)較高的水平，但抗體水平的均一性較差，各豬場(chǎng)種豬和仔豬的變異系數(shù)均高于25%，25.4%的抗體陽性樣品的S/P值＞2.5；A豬場(chǎng)的同一批免疫的仔豬甚至出現(xiàn)明顯的抗體強(qiáng)陽性群和抗體陰性群。結(jié)合各豬場(chǎng)疫病情況，可初步說明高抗體水平并不能完全阻擋PRRSV的侵襲，反而抗體水平不穩(wěn)定的豬場(chǎng)面臨藍(lán)耳病暴發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)更大。

PRRSV感染的第一階段一般持續(xù)2周或以上，此時(shí)所有年齡段的豬群均可發(fā)病，發(fā)病率為5%～75%，主要表現(xiàn)為急性病毒血癥，PRRSV能夠使感染豬在12 h即出現(xiàn)病毒血癥，24 h時(shí)病毒遍布所有淋巴組織和肺臟，7～14 d時(shí)血清、淋巴結(jié)和肺臟中的病毒滴度達(dá)到最高峰，大概為102～105TCID50/mL。急性病例第一階段后進(jìn)入以繁殖障礙為主要特征的第二階段，此階段一般持續(xù)1～4個(gè)月，同樣會(huì)伴隨病毒血癥，斷奶前仔豬死亡也主要發(fā)生在這一階段。經(jīng)歷完這一階段后，大部分豬群會(huì)進(jìn)入持續(xù)感染階段，此階段血液中病毒與抗體長(zhǎng)期共存［16］。因此病毒血癥伴隨著PRRSV流行的每一個(gè)階段，有研究表明，PRRSV引起的病毒血癥在豬群中可持續(xù)6～7周，甚至可長(zhǎng)達(dá)210 d［17］。而這些都是使用普通RT-PCR方法檢測(cè)所獲得的數(shù)據(jù)，為更準(zhǔn)確檢測(cè)病毒血癥，我們建立了針對(duì)PRRSV膜基質(zhì)蛋白基因的熒光定量RTRT-PCR檢測(cè)技術(shù)，該方法靈敏度達(dá)到10-1.5TCID50/mL，并且具有良好的特異性。從我們檢測(cè)的數(shù)據(jù)可看到，A、B兩豬場(chǎng)的病毒血癥發(fā)生率為12.4%，處在第一階段的B豬場(chǎng)和處在第二階段后期的A豬場(chǎng)都仍有病毒血癥的存在，發(fā)生率分別為18.0%和6.7%，第一階段稍高于第二階段。分析還發(fā)現(xiàn)A、B兩豬場(chǎng)仔豬病毒血癥發(fā)生率為7.7%和24.3%，而種豬的發(fā)生率為6.4%和12.5%，即無論是疾病的第一階段還是第二階段，出現(xiàn)病毒血癥的主要是免疫力較低的仔豬（占病毒血癥樣品的66.7%），與相應(yīng)群體的抗體陽性率無明顯相關(guān)性。說明病毒血癥發(fā)生率與豬群的抗體陽性率沒有直接關(guān)系，另外定量結(jié)果也顯示病毒血癥樣品的病毒滴度與其抗體水平同樣沒有直接關(guān)系。

按照藍(lán)耳病抗體水平的高低，我們將藍(lán)耳病陽性豬場(chǎng)的豬群分為抗體水平穩(wěn)定群（0.4≤S/P值＜2.5）和抗體水平不穩(wěn)定群（S/P值＜0.4 或S/P值≥2.5）。其中，抗體水平穩(wěn)定群因有抗體的保護(hù)受PRRSV感染的壓力最小，但隨著抗體依賴增強(qiáng)作用機(jī)制的發(fā)現(xiàn)，低濃度的抗體或許更有利于病毒的傳播；抗體水平不穩(wěn)定群的陰性群（S/P值＜0.4）沒有抗體保護(hù)，面臨PRRSV感染的壓力最大，只能依靠自身免疫機(jī)制抵抗野毒入侵；抗體水平不穩(wěn)定群中的高抗體群（S/P值≥2.5）現(xiàn)在對(duì)病毒的抵御能力還比較模糊，一般認(rèn)為高抗體效價(jià)是由于野毒或者毒力較強(qiáng)的疫苗株感染導(dǎo)致，即異常高的抗體水平預(yù)示著豬只正在發(fā)病。為進(jìn)一步探究豬只抗體水平與病毒血癥的關(guān)系，我們對(duì)A、B兩豬場(chǎng)的121份樣品進(jìn)行ELISA和熒光定量RTPCR檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)抗體水平不穩(wěn)定群的陰性群和陽性群病毒血癥發(fā)生率分別為17.6%和16.3%，合計(jì)為16.7%，均明顯高于抗體水平穩(wěn)定群的7.3%，抗體水平良好的豬群（S/P值在0.8～1.2之間）甚至為0；另一方面，73.3%的RT-PCR陽性樣品為抗體水平不穩(wěn)定群樣品。以上結(jié)果說明抗體不穩(wěn)定豬群與病毒血癥的關(guān)系較為密切，抗體不穩(wěn)定豬群中發(fā)生病毒血癥的概率更高，而病毒血癥樣品中抗體異常的樣品也占主要部分，但兩者之間并沒有絕對(duì)的對(duì)應(yīng)關(guān)系。至于到底是病毒血癥引起抗體異常，還是抗體異常導(dǎo)致抵抗力下降引起病毒血癥，我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果并不能體現(xiàn)，需要后續(xù)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)作進(jìn)一步研究探索。

綜上所述，經(jīng)過初步調(diào)查，粵北地區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)的抗體陽性率和抗體效價(jià)較高，但離散度大，均一性差，藍(lán)耳病發(fā)病的可能性較大；同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)，抗體不穩(wěn)定豬群中出現(xiàn)病毒血癥的概率更高，兩者之間關(guān)系密切但不是絕對(duì)的對(duì)應(yīng)關(guān)系。

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（責(zé)任編輯 崔建勛）

Preliminary research on PRRSV antibody level of scale pig farms in northern Guangdong and its relationship with viremia

WU Jing-bo，HUANG Jian-qiang，NAN Wen-jin，HU Hong-hui，PENG Guo-liang
（Shaoguan University/North Guangdong Collaborative Innovation Development Center for Swine Farming and Disease Control，Shaoguan 512005，China）

Porcine reproductive and respiratory syndrome （PRRS） is a serious problem common to the swine industry worldwide. Because it is lack of effective drug for treatment，vaccination is still the most effective means for preventing and controlling PRRS. In order to monitor the PRRSV antibody level of the scale pig farms in northern Guangdong，this study conducted ELISA of the PRRSV antibody of 382 serum samples from 4 pig farms in northern Guangdong. For explorating the relationship of PRRS antibody level and viremia，this study detected PRRSV RNA by fluorescence quantitative reverse-transcriptase PCR assay which was established in this study. Results showed that the positive rate of PRRS antibody of 4 pig farms was 82.9%. Mean value of S/P was 1.59. But the degree of dispersion was large，variable coefficient of S/P value was over 25% in all farms. This study found that the incidence of viremia of 4 pig farms was 12.4%，using the fluorescence quantitative RT-PCR whose detection limit was 10-1.5TCID50/mL，and the incidence of viremia of antibody unstable group was 16.7%，significantly higher than antibody stable group，whose incidence was 7.3%. The positive rate and antibody titer in northern Guangdong were high，but consistencywas poor，leading to high incidence of PRRS. Besides，this study also found that the incidence of viremia in antibody unstable groups was higher than that in stable groups.

PRRS；PRRSV；antibody level；viremia

S852.65+9；S858. 28

A

1004-874X（2016）08-0143-08

2016-04-11

廣東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)（生豬產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)）；韶關(guān)市科技計(jì)劃項(xiàng)目（2013CX/NO9，2014CX/N319）；韶關(guān)學(xué)院科研項(xiàng)目（314-140694）

吳靜波（1988-），男，碩士，助教，E-mail：xiaobo.maple@163.com

彭國(guó)良（1965-），男，碩士，研究員，E-mail：pengguoliang168@163.com