梔子石油醚有效部位的快速抗抑郁潛力與BDNF、p-eEF2的表達(dá)上調(diào)相關(guān)

任　荔，陶偉偉，柴　毅，李守雪，王　省，張煜萱，陳　麗，夏寶妹,吳顥昕,陳　剛

(南京中醫(yī)藥大學(xué)1.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院轉(zhuǎn)化系統(tǒng)生物學(xué)與神經(jīng)科學(xué)研究中心;2.中醫(yī)腦病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 南京　210023)

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梔子石油醚有效部位的快速抗抑郁潛力與BDNF、p-eEF2的表達(dá)上調(diào)相關(guān)

任荔1,2，陶偉偉1,2，柴毅1,2，李守雪1,2，王省1,2，張煜萱1,2，陳麗1,2，夏寶妹1,2,吳顥昕1,2,陳剛1,2

(南京中醫(yī)藥大學(xué)1.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院轉(zhuǎn)化系統(tǒng)生物學(xué)與神經(jīng)科學(xué)研究中心;2.中醫(yī)腦病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 南京210023)

目的篩選出梔子石油醚有效部位具有快速抗抑郁潛力并對(duì)其初始起效時(shí)間點(diǎn)及生物學(xué)機(jī)制進(jìn)行了探討。方法采用給藥后24 h進(jìn)行小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和新奇抑制攝食實(shí)驗(yàn)來(lái)初步篩選具有快速抗抑郁潛力的梔子石油醚有效部位。給藥30 min后進(jìn)行懸尾行為實(shí)驗(yàn)及給藥2 h后進(jìn)行強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)以測(cè)試梔子石油醚有效部位起效時(shí)間。Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)2 h及24 h小鼠海馬區(qū)BDNF及p-eEF2蛋白的表達(dá)。結(jié)果單次給藥GJ-PE1后2 h到24 h均能降低小鼠強(qiáng)迫游泳行為的不動(dòng)時(shí)間, 同時(shí)降低小鼠陌生環(huán)境下攝食的潛伏時(shí)間。GJ-PE3單次給藥24 h后能降低小鼠陌生環(huán)境下攝食的潛伏時(shí)間。GJ-PE4給藥24 h后能增加小鼠陌生環(huán)境下的攝食量。給藥2 h后，GJ-PE1小鼠海馬中的BDNF表達(dá)明顯上調(diào)而p-eEF2表達(dá)明顯下調(diào)，24 h后小鼠海馬中BDNF表達(dá)明顯下調(diào)而p-eEF2表達(dá)明顯上調(diào)。結(jié)論梔子石油醚的4個(gè)下分部位中，GJ-PE1最具有快速抗抑郁潛力,起效時(shí)間為給藥后2 h，其機(jī)制與BDNF的上調(diào)及p-eEF2的下調(diào)相關(guān)。GJ-PE3、GJ-PE4具有部分潛在快速起效抗抑郁藥物的特征。GJ-PE2不具有快速抗抑郁潛力。

梔子；石油醚有效部位；快速抗抑郁；BDNF；p-eEF2；氯胺酮

隨著社會(huì)競(jìng)爭(zhēng)的日益激烈，抑郁癥的發(fā)病率也在逐年增加。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，抑郁癥已成為世界第四大疾患，預(yù)計(jì)到2020年，可能成為僅次于冠心病的第二大疾病[1]。目前主流抗抑郁藥起效緩慢、首次用藥有效率低、不良反應(yīng)多等局限性，降低了患者用藥的依從性，不利于重癥抑郁患者自殺風(fēng)險(xiǎn)的防范。因此，臨床迫切需要尋找和研制起效快、療效好以及副作用小的抗抑郁藥物[2]。

梔子來(lái)源于茜草科Rubiaceae植物梔子Capejasmine的干燥成熟果實(shí)。 中醫(yī)謂其“性寒味苦, 歸心肺三焦經(jīng), 具有泄火除煩, 清熱利尿, 涼血解毒之功效”。以梔子為主要藥物組分的復(fù)方研究中發(fā)現(xiàn)其有明顯的抗抑郁作用[3]。本實(shí)驗(yàn)室前期的研究發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)中藥方劑越鞠丸具有快速起效抗抑郁作用[4]，確認(rèn)了其石油醚部位具有快速起效抗抑郁潛力[5]，并發(fā)現(xiàn)在越鞠丸快速起效抗抑郁中起關(guān)鍵作用的藥物組分為梔子[6]。在此基礎(chǔ)上，對(duì)梔子下分部位進(jìn)行的研究發(fā)現(xiàn)，梔子石油醚部位具有快速起效抗抑郁作用，其機(jī)制與BDNF及其特異性受體TrkB的激活相關(guān)[7]。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步對(duì)梔子石油醚的下分部位進(jìn)行了研究，以明確其快速起效時(shí)程及探討其相關(guān)生物學(xué)機(jī)制，從而為快速起效抗抑郁藥物的新藥研發(fā)提供臨床前依據(jù)。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康昆明種小鼠160只，體質(zhì)量20～25 g，♂，由常州卡文斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(蘇)2011-0003。動(dòng)物房室溫25℃，濕度45%，晝夜交替12 h,動(dòng)物自由飲食進(jìn)水。

1.2實(shí)驗(yàn)藥物梔子石油醚有效部位(689.9 g)經(jīng)硅膠柱色譜分離，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫(100 ∶0～50 ∶50)得到4個(gè)組分(GJ-PE1、GJ-PE2、GJ-PE3、GJ-PE4)，各組分別采用1L旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(河南鞏義予華儀器設(shè)備有限責(zé)任公司，產(chǎn)品型號(hào)：501)濃縮得到浸膏，各部位浸膏均采用1%的吐溫-80溶解。鹽酸氯胺酮(ketamine)注射液為福建古田制藥廠生產(chǎn)(批號(hào)：20140301)。使用時(shí)用0.9%生理鹽水配成30 g·L-1的藥液。

2　方法

2.1分組與給藥160只小鼠分3批實(shí)驗(yàn)進(jìn)行。首先進(jìn)行梔子石油醚4個(gè)部位給藥后24 h的快速抗抑郁篩藥測(cè)試，以確定具有快速抗抑郁潛力的梔子石油醚下分部位。之后分別進(jìn)行30 min和2 h的行為測(cè)試，以確定具有快速起效抗抑郁潛力的梔子石油醚有效部位的初始起效時(shí)間。

24 h測(cè)試：60只♂小鼠分為空白組、GJ-PE的4個(gè)部位(按照梔子石油醚部位[7]有效劑量折算)：GJ-PE1組(0.07 g·kg-1)、GJ-PE2組(0.08 g·kg-1)、GJ-PE3組(0.01 g·kg-1)、GJ-PE4組(0.5 g·kg-1)以及氯胺酮組(30 mg·kg-1)。灌胃24 h后依次進(jìn)行小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和陌生環(huán)境攝食。

30 min測(cè)試：50只♂小鼠分為空白組、GJ-PE的3個(gè)部位組以及氯胺酮組(30 mg·kg-1)。灌胃，30 min后進(jìn)行小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)。

2 h測(cè)試：50只♂小鼠分為空白組與GJ-PE的3個(gè)部位組以及氯胺酮組(30 mg·kg-1)。灌胃，2 h后進(jìn)行小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)。

2.2行為學(xué)測(cè)試

2.2.1小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)(TST)將單個(gè)小鼠尾端用膠布粘在懸掛鉤上面，尾尖距膠布約1 cm。將小鼠放入通用隔音行為箱內(nèi)，使其成倒掛狀態(tài)，頭部離箱底20 cm。小鼠為了克服不正常體位而掙扎活動(dòng)，活動(dòng)一段時(shí)間后出現(xiàn)間斷性不動(dòng)，顯示絕望狀態(tài)。小鼠懸尾視頻分析系統(tǒng)3.0版(上海吉量軟件公司)記錄6 min內(nèi)小鼠的活動(dòng)情況，前2 min為小鼠的懸尾適應(yīng)期，分析后4 min內(nèi)小鼠的不動(dòng)時(shí)間[5]。

2.2.2小鼠強(qiáng)迫游泳(FST)實(shí)驗(yàn)前1 h空調(diào)調(diào)整行為房溫度至26℃，將3L水灌入5 L(直徑18 cm×高25 cm)的玻璃燒杯中，水溫調(diào)至24℃～26℃。之后將小鼠依次放入隔音行為箱中，強(qiáng)迫游泳視頻分析系統(tǒng)3.0版(上海吉量軟件公司)記錄小鼠6 min內(nèi)的活動(dòng)。前2 min為小鼠的游泳適應(yīng)期，分析后4 min內(nèi)小鼠游泳的總不動(dòng)時(shí)間，即小鼠在水中停止掙扎，或呈漂浮狀態(tài)，僅有細(xì)小的肢體運(yùn)動(dòng)[8]。

2.2.3新奇抑制攝食實(shí)驗(yàn)(novelty suppressed feeding test, NSFT)小鼠禁食24 h后，依次從固定角落被放入一個(gè)新的空鼠籠內(nèi)，中心放置已稱(chēng)重的糧食。放入后，檢測(cè)小鼠首次進(jìn)食的潛伏時(shí)間。小鼠進(jìn)食標(biāo)準(zhǔn)為開(kāi)始咀嚼食物，而不僅僅嗅食或擺弄食物。以吃食的潛伏期和消耗食物的重量為觀測(cè)指標(biāo)[8]。單位時(shí)間攝食量計(jì)算公式為：?jiǎn)挝粫r(shí)間攝食量/g=10 min內(nèi)消耗糧食重量(g)/小鼠體重(g)

2.3Western blotWestern blot檢測(cè)BDNF、p-eEF2、eEF2水平: 24 h及2 h行為實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，分別處死兩批小鼠中的空白組、GJ-PE1組及氯胺酮組，冰上取腦，并提取小鼠海馬蛋白，用Nanodrop測(cè)定樣品中蛋白濃度。根據(jù)BDNF、p-eEF2 、eEF2的分子量選擇SDS-PAGE膠(分別為15%、8%、8%的膠)電泳(Bio-Rad電泳系統(tǒng))分離蛋白質(zhì)，300 mA恒流冰浴轉(zhuǎn)膜，將蛋白轉(zhuǎn)移至聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上。將裁剪好的PVDF膜分別放入1%的BSA中室溫?fù)u床震蕩1h，然后將膜分別放入加有BDNF(Santa Cruz, sc-546, 1 ∶200)、p-eEF2(CellSignaling Technology, 貨號(hào)：2331S)、eEF2(Cell Signaling Technology, 貨號(hào)：2332S)、β-tubulin (Proteintech, 10094-1-AP, 1:2000)抗體的抗體盒中，4℃冰箱搖床過(guò)夜。次日TBST緩沖液漂洗3次后，將PVDF膜分別放入加有羊抗兔二抗(Proteintech, SA00001-2, 1 ∶2 000)的抗體盒中，室溫孵育1h，ECL(康為世紀(jì)，貨號(hào)：CW0048C)顯影。凝膠成像及分析系統(tǒng)(Tannon)采集BDNF、p-eEF2、eEF2及Tubulin條帶灰度值，分析各樣本BDNF、p-eEF2、eEF2與Tubulin的灰度值。

3　結(jié)果

3.1給予梔子石油醚4個(gè)部位24 h后對(duì)小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)的影響給藥24 h后，梔子石油醚4個(gè)部位組在小鼠懸尾上不動(dòng)時(shí)間與空白組相比差異均無(wú)顯著性(P>0.05)。Ket組與空白組相比不動(dòng)時(shí)間明顯縮短(P<0.05)，見(jiàn)Fig 1。

Fig 1　Immobility time in tail suspension test at 24 h after a single treatment of four fractions(n=10)

*P<0.05vscontrol

3.2給予梔子石油醚4個(gè)部位24 h后對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)的影響給藥24 h后，與空白組相比，GJ-PE1組及Ket組在強(qiáng)迫游泳上不動(dòng)時(shí)間明顯降低(P<0.01)，其余3個(gè)部位組差異無(wú)顯著性(P>0.05)，見(jiàn)Fig 2。

Fig 2　Immobility time in forced swimming test at 24 h after a single treatment of four fractions(n=10)

**P<0.01vscontrol

3.3給予梔子石油醚4個(gè)部位24 h后對(duì)小鼠新奇抑制攝食實(shí)驗(yàn)的影響給藥24 h后，與空白組相比，GJ-PE4組和Ket組在陌生環(huán)境中的單位時(shí)間攝食量明顯增加(P<0.01，P<0.05)，其余各部位組與空白組相比差異無(wú)顯著性(P>0.05)。與空白組相比，GJ-PE1、GJ-PE3和Ket組在陌生環(huán)境中的攝食潛伏期明顯縮短(P<0.01，P<0.05,P<0.05)，GJ-PE2、GJ-PE4組差異無(wú)顯著性(P>0.05),見(jiàn)Fig 3,4。

Fig 3　Unit food comsumptions in novelty suppressed-feeding test at 24 h after a single treatment of four fractions(n=10)

*P<0.05,**P<0.01vscontrol

3.4給予梔子石油醚3個(gè)有效部位30 min后對(duì)小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)的影響給藥30 min后，與空白組相比,梔子石油醚3個(gè)部位在小鼠懸尾上不動(dòng)時(shí)間均差異無(wú)顯著性(P>0.05),Ket組在小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)上不動(dòng)時(shí)間明顯降低(P<0.05)，見(jiàn)Fig 5。

Fig 4　Latency time at 24 h after a single treatment of four fractions(n=10)

*P<0.05,**P<0.01vscontrol

Fig 5　Immobility time in tail suspension test at 30 min after a single treatment of three fractions(n=10)

*P<0.05vscontrol

3.5給予梔子石油醚3個(gè)部位2 h后對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)的影響給藥2 h后，與空白組相比,GJ-PE1和Ket組在小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)上不動(dòng)時(shí)間明顯降低(P<0.05)，其余部位組與空白組相比差異無(wú)顯著性(P>0.05)，見(jiàn)Fig 6。

Fig 6　Immobility time in forced swimming test at 2 h after a single treatment of three fractions(n=10)

*P<0.05vscontrol

3.6給藥2 h后梔子石油醚有效部位GJ-PE1給藥的小鼠海馬BDNF及p-eEF2的Western blot檢測(cè)結(jié)果給藥2 h后，與空白組相比，GJ-PE1組和Ket組小鼠海馬BDNF的表達(dá)均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);與空白組相比，梔子石油醚有效部位組和Ket組小鼠海馬p-eEF2的表達(dá)均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)Fig 7。

3.7給藥24 h后梔子石油醚有效部位GJ-PE1給藥的小鼠海馬BDNF及p-eEF2的Western blot檢測(cè)結(jié)果給藥24 h后，與空白組相比，GJ-PE1組小鼠海馬BDNF的表達(dá)明顯降低(P<0.05)，Ket組小鼠海馬BDNF的表達(dá)明顯升高(P<0.01)；與空白組相比，GJ-PE1組小鼠海馬的p-eEF2表達(dá)明顯升高而Ket組小鼠海馬的p-eEF2表達(dá)明顯降低(P<0.05)，見(jiàn)Fig 8。

Fig 7　BDNF and p-eEF2 expressions in hippocampus at 2 h after GJ-PE1 treatment(n=7)*P<0.05,**P<0.01 vs control

Fig 8　BDNF and p-eEF2 expressions in hippocampus at 24 h after GJ-PE1 treatment(n=7)*P<0.05,**P<0.01 vs control

4　討論

谷氨酸受體N-甲基-D-天冬氨酸受體(N-methyl-D-aspartic acid receptor, NMDAR )的拮抗劑氯胺酮為公認(rèn)的具有快速起效抗抑郁作用的藥物，它同時(shí)也是快速起效抗抑郁研究的原型藥[9]。臨床研究發(fā)現(xiàn)，低劑量氯胺酮在給藥30～40 min后開(kāi)始起效[10]。雖然氯胺酮的體內(nèi)代謝半衰期只有3 h[11]，其單次給藥后的抗抑郁效果卻能持續(xù)7 d[10]。本實(shí)驗(yàn)室前期的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，與氯胺酮類(lèi)似，單次給予梔子石油醚部位能夠減輕動(dòng)物的抑郁樣癥狀[7]，而常規(guī)單胺類(lèi)藥物在此模型上至少需要7 d以上才能發(fā)揮作用[12]，體現(xiàn)出梔子石油醚部位具有快速抗抑郁特性。

小鼠懸尾和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)是兩種對(duì)抗抑郁藥敏感的行為絕望模型，常用于抗抑郁藥的初篩。兩個(gè)實(shí)驗(yàn)中小鼠不動(dòng)時(shí)間的延長(zhǎng)模擬了人類(lèi)抑郁癥中的“絕望”狀態(tài)。新奇抑制攝食實(shí)驗(yàn)是根據(jù)測(cè)量在一個(gè)新環(huán)境中動(dòng)物的抑郁潛伏期和食物消耗量的減退情況來(lái)模擬出一個(gè)長(zhǎng)期的抑郁模型[13]。本研究采用這3種小鼠抑郁行為實(shí)驗(yàn)來(lái)篩選梔子石油醚4個(gè)下分部位中最具有快速抗抑郁潛力的部位，并進(jìn)一步探討其初始起效時(shí)間。

腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(brain derived neurotrophic factor，BDNF)是目前研究較多的與抑郁癥發(fā)病及抗抑郁作用相關(guān)的蛋白[14]。抑郁癥的發(fā)生與神經(jīng)可塑性的損傷密切相關(guān)。BDNF能促進(jìn)神經(jīng)發(fā)生及調(diào)節(jié)神經(jīng)可塑性。臨床研究發(fā)現(xiàn)抑郁癥患者海馬部位及前額葉皮層部位BDNF水平明顯減少[15]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也證實(shí)，誘發(fā)抑郁癥的壓力應(yīng)激會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物海馬部位BDNF mRNA表達(dá)減少[16]。而抗抑郁藥物治療能夠?qū)е聞?dòng)物海馬部位BDNF水平升高[17]。真核細(xì)胞肽鏈延伸因子-2激酶(eukaryotic elongation factor 2 kinase，eEF2K) 是一類(lèi)鈣離子/鈣調(diào)蛋白依賴(lài)的絲氨酸/蘇氨酸激酶，并在調(diào)控蛋白質(zhì)翻譯的延長(zhǎng)過(guò)程中發(fā)揮重要作用[18]。eEF2K目前已知的唯一底物是eEF-2(真核生物肽鏈延伸因子-2)。eEF2通過(guò)誘導(dǎo)肽基轉(zhuǎn)運(yùn)RNA從核糖體A位到P位的移位而使肽鏈進(jìn)一步延伸。eEF2激酶通過(guò)磷酸化eEF-2上的蘇氨酸56位點(diǎn)降低其與核糖體的親和力從而終止肽鏈延伸[19]。研究發(fā)現(xiàn)給予氯胺酮30 min至2 h內(nèi)，eEF2的磷酸化水平迅速降低，表明了其活性的增加[2]。Autry等[20]報(bào)道快速抗抑郁藥物氯胺酮可能通過(guò)快速降低eEF2磷酸化水平，從而對(duì)BDNF的翻譯去抑制，以達(dá)到快速增加BDNF合成，增強(qiáng)突觸應(yīng)答來(lái)實(shí)現(xiàn)快速抗抑郁作用。

本研究將3批動(dòng)物分為3個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行測(cè)試。研究首先分別對(duì)給予梔子石油醚4個(gè)部位后24 h的小鼠進(jìn)行了懸尾、強(qiáng)迫游泳和新奇抑制攝食實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示，GJ-PE1給藥后24 h明顯縮短了小鼠的游泳不動(dòng)時(shí)間，同時(shí)減少了小鼠在新奇抑制攝食實(shí)驗(yàn)的潛伏時(shí)間。GJ-PE3僅減少了24 h后小鼠在新奇抑制攝食實(shí)驗(yàn)的潛伏時(shí)間。GJ-PE4僅增加了給藥24 h后小鼠新奇抑制攝食實(shí)驗(yàn)的單位時(shí)間攝食量。而GJ-PE2給藥24 h后在3種行為測(cè)試中均未表現(xiàn)出抗抑郁作用。因此我們認(rèn)為GJ-PE2不具有快速起效抗抑郁潛力。在初始起效時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)中我們排除了GJ-PE2，僅對(duì)GJ-PE1、GJ-PE3、GJ-PE4 3個(gè)部位進(jìn)行測(cè)試。給藥30 min后的小鼠懸尾測(cè)試結(jié)果顯示，梔子石油醚的這3個(gè)部位在給藥后30 min均未顯示出抗抑郁作用。我們又選取了梔子快速抗抑郁初始起效時(shí)間點(diǎn)2 h作為測(cè)試時(shí)程[6]。結(jié)果顯示GJ-PE1在給藥后2 h明顯縮短了小鼠的游泳不動(dòng)時(shí)間。行為學(xué)研究結(jié)果表明GJ-PE1、GJ-PE3、GJ-PE4均具有快速起效抗抑郁潛力，其中GJ-PE1具有快速起效，抗抑郁的潛力最大，且其最快起效時(shí)間為給藥后2 h。GJ-PE2不具有快速抗抑郁潛力。

分子機(jī)制研究中，與前期越鞠丸實(shí)驗(yàn)結(jié)果類(lèi)似[4]，GJ-PE1降低了給藥24 h后小鼠海馬中BDNF的表達(dá)，增加了磷酸化eEF2的表達(dá)。這表明給藥后24 h，GJ-PE1激活了eEF2，并導(dǎo)致了BDNF的翻譯抑制。與越鞠丸[4]及越鞠丸石油醚部位研究[5]結(jié)果不同，而與梔子快速起效抗抑郁研究結(jié)果[6]相同的是，GJ-PE1在給藥后2 h，而非30 min才表現(xiàn)出快速抗抑郁作用。其給藥后2 h上調(diào)了BDNF并下調(diào)了磷酸化eEF2，提示其在2 h這一時(shí)間點(diǎn)的快速起效抗抑郁機(jī)制可能與氯胺酮快速起效抗抑郁機(jī)制類(lèi)似。越鞠丸及越鞠丸石油醚部位給藥后30 min顯示出抗抑郁樣作用，同時(shí)引起了小鼠海馬BDNF表達(dá)的上調(diào)。而梔子、梔子石油醚部位及梔子石油醚有效部位GJ-PE1均在給藥后2 h才開(kāi)始顯示出抗抑郁樣作用。這表明越鞠丸及越鞠丸石油醚部位30 min的抗抑郁作用可能是梔子與其它藥物組分共同作用的結(jié)果。

在目前的研究中，我們發(fā)現(xiàn)了梔子石油醚3個(gè)有效部位具有快速抗抑郁潛力，篩選出了GJ-PE1具有的快速抗抑郁潛力最大，并發(fā)現(xiàn)這種快速起效抗抑郁潛力的起效時(shí)間為給藥后2 h，其機(jī)制與BDNF的上調(diào)及p-eEF2的下調(diào)相關(guān)。而給藥后24 h，GJ-PE1的快速抗抑郁作用則可能并非BDNF的作用。影響其抗抑郁持久性方面的生物學(xué)機(jī)制值得進(jìn)一步探討。越鞠丸中給藥30 min后發(fā)揮快速抗抑郁作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，同樣值得后期的進(jìn)一步研究，以期為快速起效抗抑郁藥物的研發(fā)提供思路。

(致謝：本文實(shí)驗(yàn)在南京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院轉(zhuǎn)化系統(tǒng)生物學(xué)與神經(jīng)科學(xué)研究中心與中醫(yī)腦病校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室完成，特此致謝!)

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Potent rapid antidepressant effects of effective fraction of GJ-PE and up-regulation of BDNF and TrkB

REN Li1,2,TAO Wei-wei1,2,CHAI Yi1,2,LI Shou-xue1,2,WANG Xing1,2,ZHANG Yu-xuan1,2,CHEN Li1,2,XIA Bao-mei1,2,WU Hao-xing1,2,CHEN Gang1,2

(1.CenterforTranslationalSystemsandNeuroscience,SchoolofBasicBiomedicalScience,2.KeyLaboratoryofIntegrativeBiomedicineofBrainDiseases,NanjingUniversityofChineseMedicine,Nanjing210023,China)

AimTo identify whether the petroleum ether fraction of Gardenia jasminoides Ellis(GJ-PE) could effetive exhibit a rapid antidepressant effect and also to investigate the biological mechanism. MethodsTail suspension test(TST), forced swimming test(FST) and novelty suppressed-feeding(NSF) were used to screen the rapid antidepressant potential of effective fractions of GJ-PE in KM mice at 24h post a single administration. Tail suspension test (TST) was also used at 30 min and forced swimming test(FST) was used at 2 h to test the initial onset time of effective fractions of GJ-PE in KM mice. Western blot was performed to examine the expression of BDNF and p-eEF2 in hippocampus of KM mice at 2 h and 24 h. ResultsAn acute administration of GJ-PE1 decreased the immobility time of KM mice in FST at 2 h and 24 h and decreased the latency time in NSF at 24 h. GJ-PE3 decreased the latency time in NSF at 24 h. GJ-PE4 increased the unit food consumption in NSF at 24 h. At 2 h post a single GJ-PE1 treatment, the expression of BDNF was significantly up-regulated while the expression of p-eEF2 was significantly down-regulated. At 24 h post a single GJ-PE1 treatment, the expression of BDNF was significantly down-regulated while p-eEF2 expression was significantly up-regulated. ConclusionGJ-PE1 has the most significant rapid antidepressant potential among the four fractions of GJ-PE. The effective time of GJ-PE1 is 2 h after drug treatment. The mechanism of the rapid antidepressant effect of GJ-PE1 at 2 h is related to the up-regulation of BDNF and down-regulation of p-eEF2. GJ-PE3 and GJ-PE4 also have some features of rapid antidepressants. GJ-PE2 doesn′t have the rapid antidepressant potential.

Gardenia jasminoides Ellis; petroleum ether fraction; rapid antidepressant; BDNF; p-eEF2; ketamine

2016-05-18，修回稿日期：2016-06-26

國(guó)家自然科學(xué)基金(No 81403041)；江蘇省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No BK20151568)；江蘇省高校優(yōu)勢(shì)學(xué)科支持項(xiàng)目(PAPD)

任荔(1988-)，女，博士生，研究方向：越鞠丸治療抑郁癥的機(jī)制，E-mail：nicolight@163.com；

陶偉偉(1984-)，男，博士，助理研究員，研究方向：中醫(yī)藥的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，并列第一作者，E-mail:tw845@163.com；

10.3969/j.issn.1001-1978.2016.09.008

A

1001-1978(2016)09-1224-07

R-332；R284.1；R322.81；R971.43；R977.6

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2016-8-23 14:29:00網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20160823.1429.016.html

陳剛(1972-)，男，博士，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向: 抑郁癥的中醫(yī)藥機(jī)制，通訊作者，E-mail :chengang@njucm.edu.cn