《中國藥典》2010年版二部注射用頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉含量測定方法探討

雷成康,楊范莉

(1.西安市食品藥品檢驗所，西安　710054；2.西安交通大學(xué)藥學(xué)院，西安　710061)

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《中國藥典》2010年版二部注射用頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉含量測定方法探討

雷成康1,楊范莉2

(1.西安市食品藥品檢驗所，西安710054；2.西安交通大學(xué)藥學(xué)院，西安710061)

目的 研究磷酸鹽緩沖液的用量對舒巴坦對照品色譜峰的影響。方法以半峰寬、拖尾因子、理論板數(shù)及質(zhì)量/面積等參數(shù)為指標，研究不同用量的磷酸鹽緩沖液對舒巴坦對照品色譜峰的影響程度，從而確定合適的磷酸鹽緩沖液用量。結(jié)果隨著磷酸鹽緩沖液用量的增加，各指標均有不同程度的下降。結(jié)論磷酸鹽緩沖液的用量必須控制在合適的范圍內(nèi)。

舒巴坦；高效液相色譜法；色譜峰評價

注射用頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉收載于《中國藥典》2010年版，為頭孢哌酮鈉及舒巴坦鈉不同配比的復(fù)方制劑，實驗證實，2種成分配伍后增強了抗菌活性[1-2]，應(yīng)用于臨床抗感染效果較佳[3]。其含量測定方法為高效液相色譜法，采用頭孢哌酮對照品及舒巴坦對照品分別測量[4-6]。在溶解對照品時，《中國藥典》規(guī)定：將對照品先以少量磷酸鹽緩沖液[0.2mol·L-1的磷酸二氫鈉溶液-0.2mol·L-1的磷酸氫二鈉溶液(39∶61)]溶解，再用流動相稀釋制成1mL各含0.5mg的溶液，磷酸鹽緩沖液起助溶作用?！吨袊幍洹芬?guī)定在溶解對照品時所用磷酸鹽緩沖液的用量為“適量”，即能完全溶解對照品的最少溶劑量。筆者在實際檢驗中發(fā)現(xiàn)，磷酸鹽緩沖液的用量對舒巴坦峰有明顯的影響，進而會影響含量測定的結(jié)果。為了研究磷酸鹽緩沖液的用量對舒巴坦峰的影響程度，筆者以對照品的峰形、半峰寬、理論板數(shù)、拖尾因子及舒巴坦含量測定結(jié)果等參數(shù)作為評價指標，對磷酸鹽緩沖液的用量進行了研究。

1　儀器與試藥

1.1儀器Agilent1260型高效液相色譜儀、AgilentChemStation色譜工作站;SHIMADZULC-2010HT型高效液相色譜儀、SHIMADZULC-Solution色譜工作站(日本島津公司)；SartoriusPB-10型酸度計，SartoriusBT25S型十萬分之一電子天平(德國賽多利斯公司)；KQ-300V型超聲波清洗機(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2試藥頭孢哌酮對照品(批號130420-201105，質(zhì)量分數(shù)96.5%)、舒巴坦對照品(批號130430-201408，質(zhì)量分數(shù)90.5%)均購于中國食品藥品檢定研究院。注射用頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉(1∶1)3批，分別為：規(guī)格2.0g，產(chǎn)地黑龍江；規(guī)格1.5g，產(chǎn)地山東；規(guī)格1.0g，產(chǎn)地北京。均為西安市食品藥品檢驗所抽驗樣品留樣。其余試劑均為分析純，水為自制實驗用水。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件C18柱(Kromasil100-5C18和PhenomenexLunaC182種，250mm×4.6mm，5μm)；以0.005mol·L-1的氫氧化四丁基銨溶液(取400g·L-1的氫氧化四丁基銨溶液6.6mL，加水1 800mL后，用1mol·L-1的磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值至4.0，再用水稀釋至2 000mL)-乙腈(75∶25)為流動相；流速為1mL·min-1；柱溫為室溫。

2.2溶液的制備

2.2.1磷酸鹽緩沖液0.2mol·L-1的磷酸二氫鈉溶液-0.2mol·L-1的磷酸氫二鈉溶液(39∶61)，測得該緩沖液的pH值為7.0。

2.2.2對照品溶液精密稱取頭孢哌酮對照品及舒巴坦對照品各10mg，置于同一20mL量瓶中，共稱量5份，分別精密加入2.2.1項下磷酸鹽緩沖液0.5，1.0，2.0，3.0和5.0mL，振搖使對照品溶解，再用流動相稀釋至刻度，搖勻，分別作為對照品溶液系列1，2，3，4和5號，其質(zhì)量濃度均為0.5g·L-1左右。

2.2.3樣品溶液分別取3批樣品各5瓶，按照《中國藥典》2010年版二部相關(guān)要求分別測定裝量差異，求得每批樣品的平均裝量。分別將3批樣品裝量差異項下內(nèi)容物混勻，精密稱取相當于頭孢哌酮0.1g的內(nèi)容物，分別置于200mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。

2.3測定方法及結(jié)果

2.3.1舒巴坦對照品溶液測定結(jié)果按照2.1項下色譜條件，精密吸取1～5號對照品溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。實驗條件下，各對照品溶液中舒巴坦峰保留時間約為15min，頭孢哌酮峰保留時間約為40min，兩峰之間分離度大于26。其中2號對照品溶液圖譜見圖1，5號對照品溶液中舒巴坦峰放大后的圖譜見圖2。

圖12號對照品溶液色譜圖

a.舒巴坦；b.頭孢哌酮

Fig.1ChromatogramoftheNo.2referencesolution

a.sulbactam；b.cefoperazone

由圖2可知，5號對照品溶液中舒巴坦峰出現(xiàn)了嚴重的拖尾現(xiàn)象，但如果不將色譜圖局部放大，該拖尾現(xiàn)象較難發(fā)現(xiàn)。

圖25號對照品溶液中舒巴坦色譜圖

Fig.2ChromatogramofsulbactaminNo.5referencesolution

通過AgilentChemStation色譜工作站計算出各對照品溶液中舒巴坦峰的峰形、半峰寬、拖尾因子及理論板數(shù)等參數(shù)，同時計算出舒巴坦峰的質(zhì)量/面積值，結(jié)果見表1。

由表1可知，磷酸鹽緩沖液用量大于2mL時，舒巴坦峰出現(xiàn)拖尾，且隨著磷酸鹽緩沖液用量的增加，色譜峰的半峰寬、拖尾因子及理論板數(shù)等參數(shù)值變化較為明顯。同時，質(zhì)量/面積值逐漸變小，這種變化將會影響到含量測定結(jié)果。當磷酸鹽緩沖液用量為0.5mL時，峰參數(shù)雖較為理想，質(zhì)量/面積值也與磷酸鹽緩沖液用量為1.0mL時差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但實際操作較為困難。

表1系列對照品溶液中舒巴坦峰評價

Tab.1Peakevaluationofsulbactaminaseriesofreferencesolutions

對照品溶液序號緩沖鹽用量/mL峰形半峰寬/min拖尾因子理論板數(shù)質(zhì)量/面積×100010.5好0.3211.899127874.41121.0好0.3241.905127054.41532.0出現(xiàn)拖尾0.3622.336101784.39343.0拖尾較明顯0.4083.25480124.37155.0嚴重拖尾0.5534.36643614.362

注：半峰寬、拖尾因子與理論板數(shù)為平行兩針樣品的平均值。

2.3.2樣品中舒巴坦含量測定結(jié)果按照2.2.3項下方法制備供試品溶液，以1～5號對照品溶液峰面積計算樣品中的舒巴坦含量(按平均裝量計)，色譜圖見圖3，測定結(jié)果見表2。

圖3樣品溶液色譜圖

a.舒巴坦；b.頭孢哌酮

Fig.3Chromatogramofthesamplesolution

a.sulbactam；b.cefoperazone

表2舒巴坦含量測定結(jié)果

Tab.2Resultsofthecontentdeterminationofsulbactam(%,n=2)

由表2可知，隨著磷酸鹽緩沖液用量的增大，樣品中的舒巴坦含量呈逐漸下降趨勢，其中5號對照品測定的含量結(jié)果比2號對照品約低1.2%；1號對照品定量結(jié)果與2號對照品基本無差異；2號對照品與3號對照品結(jié)果雖在允許范圍內(nèi)，但結(jié)合峰參數(shù)結(jié)果證明,磷酸鹽緩沖液的用量必須控制在合理范圍內(nèi)。實驗結(jié)果表明，若舒巴坦對照品稱量在10mg左右，磷酸鹽緩沖液的用量為1mL左右即可。

3　討論

為了排除偶然性，將該套實驗方案在另一單位不同品牌的高效液相色譜儀上以不同色譜柱、不同實驗人員進行了重復(fù)性實驗，結(jié)果證實，磷酸鹽緩沖液的用量確實對舒巴坦峰的峰參數(shù)及含量測定有影響，該現(xiàn)象并非偶然。

理論上通過測定舒巴坦對照品在磷酸鹽緩沖液中的溶解度便可較好地確定磷酸鹽緩沖液的用量。但因無法得到足夠量的舒巴坦對照品進行該項實驗，故本文僅選取了幾個有代表性的溶劑用量關(guān)鍵點，根據(jù)實驗結(jié)果來初步判斷其大致的溶解情況。

實驗結(jié)果證實，磷酸鹽緩沖液用量的多少對頭孢哌酮峰基本無影響，故本文未涉及對其峰的評價及含量測定。

[1]趙崗，康俠明，張小彬，等.不同配比頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉體內(nèi)抗菌作用研究[J].西北藥學(xué)雜志，2006，21(5)：212-214.

[2]陳吉生，陳碧珊，沈健銦.不同配比的頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉體外抗菌活性評價[J].中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2007，1(2)：6-8.

[3]鐘津.頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉治療60例患者的臨床應(yīng)用效果探討[J].當代醫(yī)學(xué)，2015，21(24)：137-138.

[4]國家藥典委員會.中國藥典2010年版[S].二部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010:1042-1043.

[5]王蕙.注射用頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉含量測定方法的改進[J].西北藥學(xué)雜志，2008，23(1)：46.

[6]黃琦，季曉娟.HPLC法測定注射用頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉(2∶1)的含量[J].浙江科技學(xué)院學(xué)報，2012，24(1)：44-47.

Discussion about the assay method of cefoperazone sodium and sulbactam sodium for injection in Chinese Pharmacopoeia (2010) volume Ⅱ

LEIChengkang1，YANGFanli2

(1.Xi′an Institute for Food and Drug Control，Xi′an 710054，China；2.School of Pharmacy，Xi′an Jiaotong University，Xi′an 710061，China)

ObjectiveTostudytheeffectoftheconcentrationofphosphatebufferonthechromatographicpeakofcontrolsubstancesulbactam.MethodThesuitableconcentrationwasdeterminedbyinvestigatingtheeffectoftheconcentrationofphosphatebufferonthechromatographicpeakonthebasisoftheseparametresincludinghalfpeakwidth，trailingfactor，thetheoreticalplatenumberandtheratioofmass/area，etc.ResultWithincreasingtheconcentrationofphosphatebuffer，alltheparametresdecreasedindifferentdegree.ConclusionTheconcentrationofphosphatebuffershouldbecontrolledinasuitablerange.

sulbactam；HPLC；peakevaluation

10.3969/j.issn.1004-2407.2016.05.010

R927.2

A

1004-2407(2016)05-0471-03

2015-12-03)