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    經(jīng)皮芒硝超聲導入對急性胰腺炎大鼠模型的實驗研究*

    2016-09-21 06:03:34金佳佳陳建華楊偉剛浙江省湖州市中醫(yī)院浙江湖州313000
    中國中醫(yī)急癥 2016年8期
    關鍵詞:芒硝淀粉酶胰腺炎

    金佳佳 陳建華 楊偉剛(浙江省湖州市中醫(yī)院,浙江 湖州 313000)

    ·研究報告·

    經(jīng)皮芒硝超聲導入對急性胰腺炎大鼠模型的實驗研究*

    金佳佳 陳建華 楊偉剛
    (浙江省湖州市中醫(yī)院,浙江 湖州 313000)

    目的 觀察經(jīng)皮芒硝超聲導入對急性胰腺炎大鼠的影響。方法 取清潔級SD大鼠90只,按隨機數(shù)字表法隨機分成3組,空白對照組(A組)、傳統(tǒng)芒硝外敷組(B組)、經(jīng)皮芒硝超聲導入組(C組)。B、C組袋中裝有30 g芒硝,A組袋中裝有同樣重量鋁片。C組大鼠運用超聲不間斷超聲導入,每12小時更換芒硝1次。將各組大鼠血液進行血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和血清淀粉酶(AMY)檢測,對胰腺組織病理變化進行評分,觀察各組大鼠急性胰腺炎模型胰腺損傷程度、不同時相各組大鼠胰腺組織的病理評分的比較以及各組大鼠血清TNF-α及AMY的水平。結果 從病理改變輕重程度,C組>B組>A組;B組和C組大鼠的病理評分均明顯低于A組(P<0.05);與B組相比,C組大鼠第2日和第3日的病理學評分均更低(P<0.05);與A組相比,B組的血清TNF-α和AMY水平降低(P<0.05);C組各指標均較B組顯著降低(P<0.05)。結論 經(jīng)皮芒硝超聲藥物導入法對急性胰腺炎大鼠模型的療效明顯優(yōu)于單一傳統(tǒng)給藥療法。

    急性胰腺炎 經(jīng)皮超聲導入 芒硝 實驗研究

    【Abstract】Objective:To explore the observation of mirabilite by percutaneous ultrasound guided for rat model with acute pancreatitis.Methods:90 clean grade SD rats were selected,which were randomly divided into 3 groups:the control group(group A),the group of traditional external application of mirabilite(group B),the group by Percutaneous ultrasound guided mirabilite(group C).Group B and group C were filled with 30 g of mirabilite,as well as group A with the same weight of aluminum sheet.The rats in group C were treated with mirabilite by percutaneous ultrasound guided,changed once every 12 hours.The blood samples were taken and serum tumor necrosis factor-α(TNF-α),amylase(AMY)in different groups were compared;simultaneously the pathological changes of pancreatic tissue were scored.Then the degree of pancreatic injury,pathological score of model rats′tissues of acute pancreatitis and the level of serum TNF-α,AMY in the three groups were observed and compared.Results:From the comparison of pathological changes of the degree,the order was group C>group B> group A;the pathological scores of group B and group C were significantly lower than that of group A(P<0.05);compared with group B,the pathological scores of group C on the second day and the third day were lower(P<0.05);the levels of serum TNF-α and AMY in group B were lower appreciably than that of group A,and the difference was statistically significant(P<0.05).Each index in group C was significantly lower than that of group B (P<0.05).Conclusion:The curative effect of percutaneous ultrasound drug delivery method of mirabilite on rat models with acute pancreatitis is better than that of the traditional single drug therapy,worthy of further clinical research and exploration henceforward.

    【Key words】Acute pancreatitis;Percutaneous ultrasonic introduction;Mirabilite;Experimental study

    急性胰腺炎(AP)是多種病因導致胰酶在胰腺內(nèi)被激活后引起胰腺組織自身消化、水腫、出血甚至壞死的炎性反應,是臨床較為嚴重的一種急腹癥[1]?,F(xiàn)代許多研究證明,芒硝外敷具有消炎止痛、預防感染、吸收腹腔滲液、促進膿腫吸收、促進與恢復消化道功能等功效[2]。筆者通過動物實驗,研究經(jīng)皮芒硝超聲導入對急性胰腺炎大鼠模型的影響?,F(xiàn)報告如下。

    1 材料與方法

    1.1 實驗動物 清潔級健康成年雄性SD大鼠90只,體質量180~220 g,購自上海動物實驗中心,動物許可證號:X1402263。

    1.2 試藥與儀器 芒硝 (由湖州市中醫(yī)院中藥房提供)。?;悄懰徕c(Sigma公司),TNF-α ELISA試劑盒(Takara Bio Company);淀粉酶ELISA試劑盒(QIAGEN);羊抗鼠occludin、ZO-1單克隆抗體(Santa Cruz Biotechnology,Inc.);熒光標記兔抗羊二抗(Cell Signaling Technology,Inc.,工作濃度1∶100);高速離心機(上海精密器材廠);酶標儀(美國SUNRISE公司);超聲中頻導藥儀(沈陽市美辰醫(yī)療器械有限公司,型號MCTD-01型)。

    1.3 分組與造模 取大鼠90只,按隨機數(shù)字表法隨機分成3組,空白對照組(A組)、傳統(tǒng)芒硝外敷組(B組)、經(jīng)皮芒硝超聲導入組 (C組)。胰腺炎造模參照LANGE等方法[3],全部大鼠予以禁食(不禁水)12 h,3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉 (按體質量0.1 mL/100 g),固定,剪毛,消毒,取長約5 cm上腹部正中切口,進腹后順胃逐步尋到開口于十二指腸起始部的胰膽管,用針頭自開口根部逆行注射?;悄懰徕c(濃度3%,用量2 mL/kg),采用微量泵恒速注入,注射結束時用微血管夾鉗閉胰膽管,15 min后取出微血管夾,關腹。

    1.4 給藥方法 造模后,各組按20 mL/(kg·d)皮下注射平衡液以支持,A、B、C組大鼠均以紗布袋敷于大鼠腹部剃毛處,用束帶在大鼠背部捆綁,并在芒硝袋四角用絲線固定于大鼠腹部皮膚上各1針,B、C組袋中裝有30 g芒硝,A組袋中裝有同樣重量鋁片,C組大鼠運用超聲導藥儀不間斷超聲導入,每12小時更換芒硝1次。

    1.5 標本采集 在第1日、2日、3日后分批處死大鼠,采用斷頸法處死大鼠并取完整的胰腺組織,以預冷的4℃0.9%氯化鈉注射液快速、徹底清洗胰腺組織,沿主胰管軸剖開胰腺,每次每組10只,將切取胰腺標本放入甲醛固定液中,制作病理切片并評分。

    1.6 胰腺病理學評分 參考改良版SCHMIDT等[4]標準,根據(jù)胰腺炎的特點進行評分。1)水腫:0分為無;1分為輕度胰腺小葉距離增寬;2分為重度胰腺小葉距離增寬;3分為胰腺腺泡距離增寬;4分為胰腺組織細胞距離增寬。2)壞死:0分為胰腺組織無壞死;1分為胰腺組織壞死面積1%~10%;2分為胰腺組織壞死面積11%~20%;3分為胰腺組織壞死面積21%~30%;4分為胰腺組織壞死面積大于30%。3)出血:0分為胰腺組織無出血;1分為胰腺組織有出血。4)炎性細胞浸潤:高倍鏡視野下計數(shù)胰腺血管周圍或胰腺小葉內(nèi)白細胞數(shù)量。0分為0分~1個;1分為2~10個;2分為11~20個;3分為21~30個;4分>30個或出現(xiàn)微膿腫。以上4項評分相加即為每張切片的病理評分結果。

    1.7 血清TNF-α及血清淀粉酶的檢測 經(jīng)心臟穿刺采血3 mL,采用雙抗體夾心ELISA法檢測血清TNF-α和淀粉酶水平,按試劑盒說明書進行操作。

    1.8 統(tǒng)計學處理 應用SPSS19.0統(tǒng)計軟件處理。計量資料以(±s)表示,組間比較采用析因設計方差分析,并判斷因素間是否存在交互作用。組內(nèi)兩兩比較采用LSD-t檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結 果

    2.1 各組大鼠胰腺組織的病理改變 見圖1。A組:肉眼觀察,胰腺組織彌漫性水腫,部分胰腺組織呈黑色改變并伴有明顯出血;鏡下觀察,胰腺組織結構模糊,胰腺小葉間有大量炎癥細胞浸潤。B組:肉眼觀察,胰腺組織輕度水腫;鏡下觀察,胰腺小葉之間有少量炎癥細胞,腺泡輕度水腫,伴有少量紅細胞。C組:肉眼觀察,胰腺組織無出血、水腫改變;鏡下觀察,胰腺小葉間未見炎癥細胞浸潤,腺泡未見水腫和出血。

    圖1 各組大鼠胰腺組織病理切片(HE染色,200倍)

    2.2 各組大鼠不同時期胰腺炎組織病理切片評分比較 見表1。A組大鼠各時相病理學評分差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);B組和C組大鼠評分都隨時間延長而逐漸降低,各時相間兩兩比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),且均明顯低于A組(P<0.05);與B組相比,C組大鼠第2日和第3日的病理學評分均更低 (P<0.05)。

    表1 各組大鼠不同時相胰腺組織病理切片評分比較(分,±s)

    表1 各組大鼠不同時相胰腺組織病理切片評分比較(分,±s)

    與A組比較,*P<0.05;與B組比較,△P<0.05。下同。

    組別n 第3日第1日 第2日A組 10 5.03±0.51 B組 10 3.91±0.68*9.57±0.35 8.21±0.91 9.62±0.81*7.42±0.12*C組 10 2.02±0.68*△9.59±1.11*6.23±0.57*△

    2.3 各組大鼠血清TNF-α及血清淀粉酶的含量比較見表2。與A組相比,B組血清TNF-α和淀粉酶水平降低(P<0.05);而C組各指標均較B組顯著降低(P<0.05)。

    3 討 論

    近年來,急性胰腺炎發(fā)病率急劇上升,尤其是AP已成為威脅人類健康的重要疾病之一[5]。該病病情兇險,變化快,可引發(fā)多種并發(fā)癥,病死率高。因此,如何有效地防治急性胰腺炎具有重要的臨床意義[6-7]。

    表2 各組大鼠血清TNF-α及血清淀粉酶的水平比較(±s)

    表2 各組大鼠血清TNF-α及血清淀粉酶的水平比較(±s)

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    TNF-α是一種具有廣泛生物活性的非特異性炎癥介質,是導致胰腺及胰外器官組織損傷和刺激其他炎癥細胞因子釋放的重要啟動因子,血清中TNF-α活性的大小與胰腺組織的損害程度密切相關[8-9]。而人體內(nèi)AMY主要來源于胰腺。正常情況下,胰腺細胞將儲藏在酶原顆粒的消化酶和酶原分泌到胰管,這種分泌活動被限制在腺泡細胞頂膜。而頂膜分布有防止胰管內(nèi)容物進入細胞內(nèi)空間的連接屏障[10]。血清淀粉酶的升高多由急性胰腺炎引起的,常見于在發(fā)病后6~12 h,24 h達峰值,48 h開始下降,恢復正常則需3~5 d。淀粉酶活性升高的程度雖然并不一定和胰腺損傷程度相關,但其在一定程度上反映了炎癥的變化,所以臨床上仍以AMY作為AP診斷的首選指標[11]。

    芒硝為硫酸鹽類礦物芒硝族芒硝經(jīng)加工精制而成的結晶體,主要含水硫酸鈉(Na2SO4·10H2O)。其性味咸、苦,寒,歸胃、大腸經(jīng),咸能軟堅,苦能瀉熱。2010版《中華人民共和國藥典》[12]記載其功能為瀉下通便、潤燥軟堅、清火消腫,用于實熱積滯、腹?jié)M脹痛、大便燥結、腸癰腫痛;外治乳癰、痔瘡腫痛。中醫(yī)學認為芒硝苦能瀉熱,咸能軟堅,其性善消[13],且芒硝苦寒,外用可改善局部循環(huán),促進滲出吸收,減輕炎癥反應。芒硝有好的抗炎作用,可能與芒硝外敷可加快淋巴循環(huán)、增強網(wǎng)狀內(nèi)皮細胞吞噬功能、減少局部白細胞浸潤、減輕炎性反應有關。

    超聲電導靶向給藥治療技術是近年來國內(nèi)外出現(xiàn)的一種藥物滲透的新療法。其主要作用機制是通過電致孔技術、超聲空化技術和現(xiàn)代離子導人技術的綜合應用產(chǎn)生促進藥物的透皮疊加作用,給藥速度快。這種給藥方法避免藥物在肝臟首過效應,不受胃腸道的消化酶的降解破壞,無血藥濃度的峰谷變化。藥物在病變局部形成較高的血藥濃度,代謝緩慢,作用時間長久。

    本實驗研究,B組和C組大鼠的病理評分均明顯低于A組,與B組相比,C組大鼠第2日和第3日的病理學評分均更低;與A組相比,B組的血清TNF-α 和AMY降低,差異有統(tǒng)計學意義;C組各指標均較B組顯著降低,故經(jīng)皮芒硝超聲導入較傳統(tǒng)芒硝外敷對急性胰腺炎具有更好的炎癥吸收作用。通過超聲波對流轉運、輻射等功能的強力驅動作用,使藥物沿人工生物通道直接進入病變的器官和組織,并迅速形成藥物高濃度浸潤區(qū),使組織局部血管擴張,血流加速,增加滲透,加速組織的新陳代謝,改善組織的營養(yǎng);同時可使肌張力下降,結締組織的延展性增強,軟化瘢痕,松解粘連,有消炎鎮(zhèn)痛的作用[15]。

    總之,本研究利用經(jīng)皮芒硝超聲藥物導入法對急性胰腺炎大鼠模型的療效明顯優(yōu)于單一傳統(tǒng)給藥療法,能有效地改善血液循環(huán),增強胰腺炎癥滲出物的吸收,從而達到治療疼痛的目的。故經(jīng)皮芒硝超聲導入法有望運用于臨床急性胰腺患者,以期為急性胰腺炎患者提供多樣化的輔助療法。

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    Experimental Study on Mirabilite by Percutaneous Ultrasound Guided for Rat Model with Acute Pancreatitis

    JIN Jiajia,CHEN Jianhua,YANG Weigang.Huzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine,Zhejiang,Huzhou 313003,China.

    R576 文獻標志碼:A

    1004-745X(2016)08-1471-03

    10.3969/j.issn.1004-745X.2016.08.005

    浙江省中醫(yī)藥科技計劃項目(2013ZB125)

    2016-02-15)

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