香元消痔巴布貼的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

李文兵，王洛臨，李智勇，張誠(chéng)光，范宋玲

·炮制制劑·

香元消痔巴布貼的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

李文兵，王洛臨，李智勇，張誠(chéng)光，范宋玲

目的：研究香元消痔巴布貼的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜法對(duì)制劑中地榆、黃柏進(jìn)行定性鑒別，并用高效液相色譜法對(duì)制劑中的主藥地榆進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果：薄層色譜斑點(diǎn)清晰，陰性對(duì)照無干擾；沒食子酸在8.34～83.40 ng之間成良好的線性關(guān)系，平均回收率為99.14％， RSD為1.06％（n=6）。結(jié)論：該法靈敏、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確和重復(fù)性好，可作為該制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

香元消痔巴布貼；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；高效液相色譜法；沒食子酸

香元消痔膏是我院肛腸科內(nèi)病外治的中醫(yī)特色療法，多年臨床用于治療痔瘡的經(jīng)驗(yàn)處方，具有療效確切，毒副作用小等特點(diǎn)。課題組在前期臨床應(yīng)用研究基礎(chǔ)上，針對(duì)其存在制備工藝粗糙、質(zhì)量控制方法落后等不足，對(duì)該制劑的工藝、質(zhì)量、劑型等進(jìn)一步研究，以期將其研制成治療痔瘡的新藥——香元消痔巴布貼。香元消痔巴布貼由地榆、黃柏、槐花、魚腥草、元胡、乳香、沒藥、冰片等八味中藥材組成，筆者對(duì)香元消痔巴布貼進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究時(shí)，采用薄層色譜法對(duì)制劑中地榆、黃柏進(jìn)行定性鑒別，并用高效液相色譜法對(duì)制劑中的主藥地榆進(jìn)行定量研究?，F(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1儀器

1100型高效液相色譜儀、DAD檢測(cè)器、四元梯度泵、G2170AA型數(shù)據(jù)處理軟件系統(tǒng)（美國(guó)Agilent公司）； Mettler-Toledo XS205DU電子分析天平（瑞士）； KQ5200DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）； CAMAG Reprostar薄層成像系統(tǒng)（瑞士CAMAG公司）； CAMAG Automatic TLC Sampler4全自動(dòng)薄層點(diǎn)樣儀（瑞士）；硅膠G薄層板（浙江省路橋四甲生化塑料廠）。

1.2試藥

地榆對(duì)照藥材（批號(hào)：121286-200402）、黃柏對(duì)照藥材（批號(hào)：121510-200703） 、沒食子酸對(duì)照品（批號(hào)：110831-200302）均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所； 地榆、黃柏等中藥均購(gòu)于廣州市藥材公司（廣東省第二中醫(yī)院李慶勇副主任中藥師鑒定，均為《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版收載的正品），香元消痔巴布貼（20140912、20141015、20141112廣東省第二中醫(yī)院自制）； 甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。

2 薄層鑒別

2.1地榆的TLC鑒別［1］

取本品1貼，除去蓋襯，剪碎，加10％鹽酸溶液100 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液用鹽酸飽和的乙醚萃取2次，每次20 mL，合并乙醚溶液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取地榆對(duì)照藥材1 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。按處方比例，稱取缺地榆的其它各藥材，按制備工藝制成不含地榆的陰性樣品，再按供試品溶液制備方法制成缺地榆陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，分別吸取上述供試品溶液、對(duì)照藥材溶液和陰性對(duì)照溶液各3 μL，點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯（用水飽和）-乙酸乙酯-甲酸（6：3：1）［2］為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1％三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無干擾，結(jié)果見圖1。

圖1　1～3.供試品 4.地榆對(duì)照藥材 5.地榆陰性對(duì)照

圖2　1～3.供試品 4.黃柏對(duì)照藥材 5.黃柏陰性對(duì)照

2.2黃柏的TLC鑒別［3］

取本品1貼，除去蓋襯，剪碎，加氯仿50 mL，水浴加熱攪拌，濾過，殘?jiān)陨倭柯确路?次洗滌，揮干氯仿液，殘?jiān)B同濾紙置錐形瓶中，加甲醇30 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL，作為供試品溶液。另取黃柏對(duì)照藥材1 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。按處方比例，稱取缺黃柏的其它各藥材，按制備工藝制成不含黃柏的陰性樣品，再按供試品溶液制備方法制成缺黃柏陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法［2010年版《中華人民共和國(guó)藥典》（一部）附錄VIB］試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液、對(duì)照藥材溶液和陰性對(duì)照溶液各3 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水（7：1：2）為展開劑，展開，取出晾干，置紫外燈下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，結(jié)果見圖2。

3 沒食子酸的含量測(cè)定

3.1色譜條件

色譜柱：Kromasil C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：流動(dòng)相為甲醇-0.05％磷酸緩沖液（6：94）；流速為1 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)為272 nm；柱溫25 ℃。

3.2對(duì)照品溶液的制備

精密稱取沒食子酸對(duì)照品置量瓶中，加甲醇制成每1 mL含沒食子酸16.68 μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.3供試品溶液的制備

取本品半貼，除去蓋襯，剪碎，加10％鹽酸溶液60 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液用鹽酸飽和的乙醚萃取2次，每次10 mL，合并乙醚溶液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。

3.4陰性對(duì)照溶液的制備

將處方中除去地榆，按制劑工藝制備供試品陰性對(duì)照品，按“3.3”項(xiàng)下方法制得陰性對(duì)照溶液。

3.5線性關(guān)系考察

精密量取沒食子酸對(duì)照品儲(chǔ)備液（16.68 μg·mL-1）各0.5 mL、1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL，分別置5 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL含沒食子酸1.668 μg、3.336 μg、6.672 μg、10.008 μg、13.344 μg、16.680 μg的對(duì)照品溶液。精密吸取上述對(duì)照品溶液各5 μL注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=10.2098X-0.0104（r=0.9998），結(jié)果表明，沒食子酸在進(jìn)樣量為8.34～83.40 ng范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.6精密度試驗(yàn)

精密吸取上述對(duì)照品溶液5 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，按“3.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。結(jié)果，沒食子酸峰面積的RSD為0.38％，表明儀器精密度良好。

3.7穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液（批號(hào)： 20140912），分別于0 h、3 h、6 h 、12 h、18 h 、24 h，進(jìn)樣5 μL，按“3.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。結(jié)果，沒食子酸峰面積的RSD為0.32％，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3.8重復(fù)性試驗(yàn)

按擬定的含量測(cè)定方法，取同一批樣品（批號(hào)：20141015）6份，分別按“3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“3.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積并計(jì)算含量。結(jié)果，沒食子酸平均含量的RSD分別為0.88％，表明該方法重現(xiàn)性良好。

3.9回收率試驗(yàn)

取已知含量的樣品（批號(hào)： 20141112）6份，分別精密加入一定量的沒食子酸對(duì)照品，按“3.3”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，按“3.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1　沒食子酸加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

3.10樣品含量測(cè)定

取3批樣品，分別按“3.3”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，按“3.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，進(jìn)樣量為5 μL，測(cè)定峰面積，計(jì)算樣品含量。結(jié)果見表2。

表2　樣品中含量測(cè)定結(jié)果（n=3）

4 討論

在薄層定性研究時(shí)，鑒別黃柏曾以苯-乙酸乙酯-甲醇-異丙醇-濃氨試液（12：6：5：3：1）為展開劑［4］，結(jié)果分離效果欠佳，色譜斑點(diǎn)不清晰，經(jīng)過不斷摸索試驗(yàn)，改用正丁醇-冰醋酸-水（7：1：2）為展開劑，結(jié)果分離效果較好，色譜斑點(diǎn)清晰，可作為黃柏的TLC鑒別方法。

在研究沒食子酸的含量測(cè)定過程中，筆者進(jìn)行流動(dòng)相的選擇時(shí)，曾以乙腈-0.01 mol/L磷酸溶液（5：100）［5］作為流動(dòng)相進(jìn)行試驗(yàn)，處方中的其他成分與沒食子酸分離效果欠佳，采用甲醇-0.05％磷酸緩沖液為流動(dòng)相，分離效果較好，然后經(jīng)過不斷調(diào)整兩者的比例，最后確定甲醇-0.05％磷酸緩沖液（6：94），使沒食子酸與其他成分完全分離，達(dá)到較佳的效果。

綜上所述，本文所建標(biāo)準(zhǔn)可用于香元消痔巴布貼的質(zhì)量控制。

［1］ 陳淑映，黃健，莊學(xué)潮，等. 新型熱熔壓敏膠制備的傷科貼膏的薄層鑒別［J］. 云南中醫(yī)中藥雜志， 2013，34（2）：44-46.

［2］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：231.

［3］ 喬 莉，焦正花，張小華，等. 鐵箍膏巴布劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］. 中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志， 2012，19（5）：56-58.

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（責(zé)任編輯：傅舒）

Studies on quality control standard of Xiangyuan Xiaozhi cataplasm/

LI Wen-bing， WANG Luo-lin， LI Zhi-yong， ZHANG Cheng-guang ，F(xiàn)AN Song-lin//（GuangDong Second Traditional Chinese Medicine Hospital， Guangzhou 510095， Guangdong）

Objective: To study quality control standard of Xiangyuan Xiaozhi cataplasm. Method: Diyu and Huangbo in preparation were identified by TLC. The content of Diyu， the main active medicine in cataplasm was determined by HPLC. Result: The TLC spots were clear and negative control showed no interference. Linearity was found in the range of 8.34～83.40 ng for gallic acid with average recovery of 99.14％ （RSD=1.06％， n=6）. Conclusion: The method is sensitive， simple with good precise and reproducible， and can be used for the quality control of the cataplasm.

Xiangyuan Xiaozhi cataplasm； quality control standard； HPLC； gallic acid

R 284.1

A

1674-926X（2016）03-012-03

廣東省中醫(yī)藥局立項(xiàng)資助科研課題（編號(hào)：20131117）

廣東省第二中醫(yī)院，廣東 廣州 510095

李文兵（1972-），男，碩士，主要研究方向：醫(yī)院藥學(xué)Tel：13660305488 Email：liwenbing312@163.com

2015-06-10