金盞菊不同提取液體外抑菌作用初步研究

鄭佳，盧先明，鄧晶晶

金盞菊不同提取液體外抑菌作用初步研究

鄭佳1，盧先明2，鄧晶晶2

目的：考察金盞菊水提物和醇提物的體外抑菌作用。方法：采用2倍遞增稀釋濃度法檢測金盞菊對金色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、沙門氏菌5種菌最低抑菌濃度（MIC）。結(jié)果：金盞菊醇提物在10倍稀釋濃度時對大腸桿菌、金色葡萄球菌、表皮葡萄球菌有抑菌作用，最低抑菌濃度（MIC）為0.1 g·mL-1；金盞菊水提物在10倍稀釋濃度時對大腸桿菌有抑菌作用，最低抑菌濃度（MIC）為0.1 g·mL-1，其余稀釋倍數(shù)均無抑菌作用。結(jié)論：金盞菊提取液對這5種細(xì)菌的抑制效果較差，可能與金盞菊藥用部位、提取溶劑及生長環(huán)境有關(guān)。

金盞菊；體外抑菌作用；醇提取液；水提取液

金盞菊為菊科金盞花屬植物金盞菊Calendula officinalis L.的干燥全草。具有清熱解毒、活血調(diào)經(jīng)的功效，主治中耳炎、月經(jīng)不調(diào)等癥［1］。金盞菊不僅作為民間藥收載于《云南中草藥》、《中華本草》等著作中，更作為一種國際傳統(tǒng)藥廣泛應(yīng)用于歐洲。據(jù)文獻記載，早在歐洲12世紀(jì)的《簡單藥物》（歐洲草藥第一部準(zhǔn)藥典）以及《關(guān)于不同植物和草藥的特性的書》著作中就有關(guān)于金盞菊藥用價值的記載［2］。國外學(xué)者對其做了大量研究，表明金盞菊的花、葉均具有抗菌、消炎等藥理作用［3～4］，金盞菊花在國外更是被制成各種藥膏用于皮膚病如外傷、感染等的治療［2］。課題組前期已對金盞菊抗炎、止血藥理作用方面做了基礎(chǔ)研究［5］，其全草是否具有和花相同的抗菌作用目前并未見文獻報道。為了考察這一點，本實驗對金盞菊水提物和醇提物進行了體外抑菌實驗研究，為其資源開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1藥材

實驗用金盞菊于2013年3月21日采自四川省彭州市麗春鎮(zhèn)合江村，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)盧先明教授鑒定為菊科金盞花屬植物金盞菊Calendula officinalis L.的干燥全草。

1.2菌種

金色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、沙門氏菌5種菌均由成都中醫(yī)藥大學(xué)病原微生物與免疫學(xué)實驗室提供。

2 實驗原理與方法

2.1實驗原理

分別將一定濃度的金色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、沙門氏菌5種菌接種到不同濃度的含藥平板上，于37℃溫箱中培養(yǎng)24 h，觀察各種細(xì)菌的生長情況，從而判斷供試藥的體外抑菌效果。

2.2實驗方法與步驟

2.2.1實驗方法 首先用紙片擴散法進行粗篩，取直徑6 mm濾紙在各供試原液中浸泡后，分別接種在涂布有各種供試菌的平板中，于37℃溫箱中培養(yǎng)24 h，培養(yǎng)后抑菌圈無或較小（d≤10 mm），說明抑菌作用較弱；進一步采用2倍遞增稀釋濃度法檢測金盞菊最低抑菌濃度。

2.2.2實驗步驟

（1） 供試液的制備

稱取金盞菊藥材適量，平均分為2份，分別用水、60％乙醇回流提取，濃縮制成含生藥1 g·mL-1的原藥液，備用。

（2） 菌種的活化

各供試菌種需要在營養(yǎng)肉湯中轉(zhuǎn)種、活化2～3代備用。

（3） 供試菌液的制備

取活化后的5種菌種營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)物，用滅菌生理鹽水稀釋到104～105b CFU·mL-1菌液備用。

（4） 含藥平板的制備

設(shè)定含藥平板含藥濃度分別為0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625 g·mL-1，即取2 mL、1 mL、0.5 mL、0.25 mL、0.125 mL供試原藥液分別與0、1、1.5、1.75、1.875 mL營養(yǎng)肉湯混合置于滅菌空白平皿中，將已滅菌營養(yǎng)瓊脂冷卻至50℃左右，注入18 mL/皿，充分混勻，分別得到10倍、20倍、40倍、80倍、160倍稀釋含藥平板。

（5） 接種方法

用移液槍量取20 μL菌液點種在普通營養(yǎng)瓊脂平板及含藥平板上，做三個重復(fù)。

（6） 培養(yǎng)與觀察

于37℃溫箱中培養(yǎng)24 h，觀察并記錄各類細(xì)菌的生長情況。

3 實驗結(jié)果

金盞菊體外抑菌結(jié)果見表1、表2。

表1　金盞菊水提液體外抑菌效果

表2　金盞菊醇提液體外抑菌效果

上述結(jié)果顯示金盞菊提取液對這5種細(xì)菌的抑制效果較差。金盞菊醇提物在10倍稀釋時對大腸桿菌、金色葡萄球菌和表皮葡萄球菌有抑菌作用，最低抑菌濃度（MIC）為0.1 g·mL-1；金盞菊水提物在10倍稀釋時對大腸桿菌有抑菌作用，最低抑菌濃度（MIC）為0.1 g·mL-1，其余稀釋倍數(shù)均無抑菌作用。

4 討論

從結(jié)果可知，金盞菊提取液對這5種細(xì)菌的抑制效果較差。金盞菊醇提物僅對大腸桿菌、金色葡萄球菌和表皮葡萄球菌有較弱抑菌作用；金盞菊水提物僅對大腸桿菌有較弱抑菌作用。國外文獻報道金盞菊花、葉有較強的抑菌作用，并被制成各種軟膏用于抗菌、消炎。本次試驗所用藥材為金盞菊全草，并非單一的花和葉，且批次單一，其抑菌效果差，可能與藥用部位選擇、提取所用溶劑以及金盞菊所處生長環(huán)境等有關(guān)，具體原因有待進一步研究。

［1］ 國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會.中華本草［M］.上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1998：751.

［2］ 江首彥.歐洲德語區(qū)草藥文獻整理及奧地利中藥處方分析［D］.北京：北京中醫(yī)藥大學(xué)，2008：39.

［3］ Efstratiou E，Hussain AI，Nigam PS，et al.Antimicrobial activity of Calendula officinalis petal extracts against fungi， as well as Gram-negative and Gram-positive clinical pathogens［J］. Complement Ther Clin Pract，2012（18）：173.

［4］ 洪文旭.止血消炎金盞菊［N］.中國中醫(yī)藥報，2009-7-16（010）.

［5］ 鄭佳，盧先明，徐利，等.金盞菊的安全性評價及藥效學(xué)研究［J］.成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2013，36（1）：63.

（責(zé)任編輯：陳思敏）

Study on the bacteriostatic effects of Jinzhanju extract in vitro /

ZHENG Jia1， LU Xian-ming2， DENG Jing-jing2//（1.Leshan Vocational and Technical College， Leshan 614000， Sichuan；2.Chengdu University of Traditional Chinese Medicine， Chengdu 611137， Sichuan）

Objective: To study the bacteriostatic effects of water extract and alcohol extract of Jinzhanju in vitro. Method: Minimal inhibitory concentrations of Jinzhanju extract were determined by double-fold dilution method on staphylococcus aureus，staphylococcus epidermidis， escherichia coli， pseudomonas aeruginosa and salmonella typhimurium. Result: The MIC of alcohol extract were 0.1 g·mL-1for E. coli， S. Aureus and S.epidermidis at 10 times diluted concentration. The MIC of water extract was 0.1 g·mL-1for E. coli at 10 times diluted concentration.Conclusion: Jinzhanju extract shows poor bacteriostatic effects on the tested bacterium which may be related to the medicinal part， extraction solvent and growth environment.

Jinzhanju； bacteriostatic effects in vitro； alcohol extract；water extract

R 285.5

A

1674-926X（2016）03-015-02

1.樂山職業(yè)技術(shù)學(xué)院，四川 樂山 614000 2.成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都 611137

鄭佳 （1987-），女，碩士研究生，主要從事中藥品種、品質(zhì)與資源開發(fā)研究Tel：13980270251 Email：623432246@qq.com

鄧晶晶（1982-），女，實驗師，主要從事中藥品種、品質(zhì)與資源開發(fā)研究Tel：13880652682 Email：16640545@qq.com

2015-08-08