白藜蘆醇對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)活性的影響

劉英博，付 越，郝 璐，李敬雙，于 洋（遼寧醫(yī)學(xué)院畜牧獸醫(yī)學(xué)院，遼寧錦州121001）

白藜蘆醇對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)活性的影響

劉英博，付 越，郝 璐，李敬雙，于 洋*
（遼寧醫(yī)學(xué)院畜牧獸醫(yī)學(xué)院，遼寧錦州121001）

研究了白藜蘆醇（Res）對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)活性的影響。無(wú)菌分離小鼠脾，制備淋巴細(xì)胞，并用含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)，在培養(yǎng)液中分別加入刀豆蛋白A（ConA）、脂多糖（LPS）以及5、10、20、40 μg/mL不同濃度的Res，經(jīng)過(guò)不同時(shí)間培養(yǎng)后，采用MTT法檢測(cè)淋巴細(xì)胞的增殖，ELISA法檢測(cè)淋巴細(xì)胞分泌IL-4和IL-12的水平，流式細(xì)胞儀檢測(cè)淋巴細(xì)胞的細(xì)胞周期和細(xì)胞膜表面標(biāo)志。結(jié)果表明：Res能夠促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖，能與ConA協(xié)同促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖，不能與LPS協(xié)同促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖；能增強(qiáng)IL-4和IL-12的分泌；能提高小鼠脾淋巴細(xì)胞CD4+/CD8+的比值；能提高脾淋巴細(xì)胞周期中細(xì)胞進(jìn)入S期細(xì)胞的百分率。綜上，Res能增強(qiáng)小鼠脾淋巴細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)活性。

白藜蘆醇，淋巴細(xì)胞，增殖，細(xì)胞因子，細(xì)胞周期，細(xì)胞膜表面標(biāo)志

白藜蘆醇（resveratrol，Res）是一種非黃酮類多酚化合物，化學(xué)名為芪三酚（3，4，5-三羥基二苯乙烯trihydroxystilbene），廣泛存在于花生、紅葡萄和漿果類等植物果實(shí)中，是植物為抵抗外來(lái)侵害時(shí)產(chǎn)生的一種植物抗毒素（phytoalexin）［1］。1940年首次發(fā)現(xiàn)該成分以來(lái)，人們開始對(duì)Res生物活性及作用機(jī)制進(jìn)行廣泛深入的研究。迄今為止的研究表明，Res具有抗炎、抗腫瘤、抗菌、抗氧化、抗自由基、心血管保護(hù)、免疫調(diào)節(jié)、植物雌激素等多種生物學(xué)功能［2-3］。其中抗腫瘤作用研究最為廣泛，近年來(lái)，Res的免疫調(diào)節(jié)作用逐漸受到重視，特別是近年來(lái)Res調(diào)節(jié)細(xì)胞信號(hào)通路發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用已成為研究熱點(diǎn)。俞瑜等［4］研究表明Res對(duì)IL-2的分泌具有抑制作用，并呈劑量依賴性，同時(shí)Res也能抑制T細(xì)胞表面活化分子。安利峰

等［5］研究表明，Res能增加免疫抑制小鼠NK細(xì)胞殺傷力、T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化、抗體釋放量、CH50活性，提高IL-2分泌，減少IL-8分泌。張敏等［6］研究表明，Res作用后，IFN-γ、1L-10及T-bet mRNA、GATA-3 mRNA的表達(dá)均明顯降低，具有濃度和時(shí)間依賴性。邢永華等［7］對(duì)137Cs 4Gy輻射損傷小鼠研究表明，Res能提高白細(xì)胞、骨髓有核細(xì)胞的數(shù)量，降低胸腺指數(shù)與脾臟指數(shù)，說(shuō)明Res對(duì)輻射損傷小鼠的免疫功能的穩(wěn)定有積極作用。上述對(duì)免疫指標(biāo)的研究都比較單一，本課題組通過(guò)對(duì)Res對(duì)脾淋巴細(xì)胞增殖、細(xì)胞亞群、細(xì)胞周期和分泌細(xì)胞因子的影響進(jìn)行系統(tǒng)研究，探討Res對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)活性，闡明其免疫學(xué)效應(yīng)，為進(jìn)一步說(shuō)明Res的藥理作用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

BALB/C小鼠 雄性，體重18～22 g，購(gòu)自遼寧醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，飼養(yǎng)于環(huán)境溫度（20±2）℃，濕度50%±10%，按照12 h光照/12 h黑暗，自由攝食、飲水的飼養(yǎng)條件喂養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)1周；白藜蘆醇成都曼斯特生物科技有限公司（生產(chǎn)批號(hào)：MUST-12032106）；RPMI-1640培養(yǎng)基粉末 美國(guó)GIBCO公司；脂多糖（LPS）、刀豆蛋白A（ConA）、MTT 美國(guó)Sigma公司；胎牛血清 四季青生物工程有限公司；小鼠IL-4和IL-12細(xì)胞因子檢測(cè)試劑盒 武漢博士德公司；Anti-CD4、anti-CD8單克隆抗體 美國(guó)eBioscience；Hepes、青霉素、鏈霉素 上海生物技術(shù)服務(wù)公司；二甲基亞砜（DMSO）、細(xì)胞周期檢測(cè)試劑盒 上海碧云天生物技術(shù)有限公司。

FACS Calibur流式細(xì)胞儀 美國(guó)Becton Dickinson公司；Varioskan FlashT多功能酶標(biāo)儀 Thermo Fisher Scientific；3110 SeriesⅡ細(xì)胞培養(yǎng)箱 Thermo Electron Corporation；3K15冷凍離心機(jī) Sigma Corporation；Milli-Q50超純水凈化系統(tǒng) Millipore公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 制備小鼠脾淋巴細(xì)胞 頸椎脫臼法處死小鼠，用75%酒精浸泡消毒3 min。于超凈臺(tái)內(nèi)分離脾，將脾放于含有PBS的培養(yǎng)皿中，用PBS沖洗2次，將沖洗后的脾放入RPMI-1640培養(yǎng)液中，用5 mL注射器吸取RPMI-1640培養(yǎng)液，將培養(yǎng)液輕輕打入脾內(nèi)將細(xì)胞吹出，重復(fù)上述操作數(shù)次，直至脾外膜透明，余下脾臟用注射器活塞頭磨碎后過(guò)100目篩。收集所有的細(xì)胞懸液以1500 r/min的速度離心5 min后將上清棄掉，加Tris-NH4Cl約3 mL，輕輕吹勻后靜置5 min，去除紅細(xì)胞，再同樣離心去上清，重復(fù)上述步驟，直至紅細(xì)胞完全裂解。細(xì)胞沉淀用RPMI-1640培養(yǎng)液重懸，以清除細(xì)胞中含有的Tris-NH4Cl，并輕輕吹勻，同樣離心棄上清。細(xì)胞沉淀用含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液懸浮，Trypan Blue染色，細(xì)胞計(jì)數(shù)，活細(xì)胞數(shù)大于95%，將細(xì)胞密度調(diào)整為為5×106個(gè)/mL，最后制成脾細(xì)胞懸液。

1.2.2 MTT法檢測(cè)脾淋巴細(xì)胞增殖 細(xì)胞按每孔5×106個(gè)加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，分別設(shè)對(duì)照組、Res組、Res+ConA組（5 μg/mL ConA）和Res+LPS組（1μg/mL LPS），每孔再分別加入含不同濃度Res的含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液，使Res終濃度分別5、10、20、40 μg/mL。37℃，5%CO2培養(yǎng)44 h后每孔加入50 μL MTT（5 mg/mL），繼續(xù)培養(yǎng)4 h。之后每孔加入200 μL DMSO，用微量振蕩器混勻，檢測(cè)570 nm的OD值。結(jié)果以刺激指數(shù)（SI）反映小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖率的高低：SI=藥物刺激孔OD值/陰性對(duì)照孔OD值。

1.2.3 ELISA法檢測(cè)細(xì)胞因子 細(xì)胞按1×106每孔加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔再分別加入含不同濃度Res的含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液，使Res終濃度分別為5、10、20、40 μg/mL，培養(yǎng)48 h后，根據(jù)小鼠IL-4和IL-12細(xì)胞因子檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書檢測(cè)IL-4 和IL-12細(xì)胞因子的含量。

1.2.4 流式細(xì)胞儀檢測(cè)脾淋巴細(xì)胞膜表面標(biāo)志 細(xì)胞按每孔1×106個(gè)加入24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔再分別加入含不同濃度Res的含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液，使Res終濃度分別5、10、20、40 μg/mL，培養(yǎng)48 h后，棄培養(yǎng)基，用PBS洗兩次，與anti-CD4、anti-CD8抗體4℃避光反應(yīng)60 min，用PBS洗兩次后，500 μL PBS重懸，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞膜表面標(biāo)志CD4和CD8表達(dá)量的變化。設(shè)定488 nm氬激光強(qiáng)度進(jìn)行測(cè)定，利用數(shù)據(jù)分析軟件（ModFit LT）分析檢測(cè)結(jié)果，每個(gè)樣品計(jì)數(shù)104個(gè)細(xì)胞，結(jié)果以CD4+CD8-、CD4-CD8+、CD4+CD8+的百分率和CD4+/CD8+比值表示Res對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞亞群的影響。

1.2.5 流式細(xì)胞儀檢測(cè)脾淋巴細(xì)胞周期 取按上述方法處理過(guò)的脾淋巴細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞周期檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期，設(shè)定488 nm氬激光強(qiáng)度進(jìn)行測(cè)定，利用數(shù)據(jù)分析軟件（ModFit LT）分析檢測(cè)結(jié)果，每個(gè)樣品計(jì)數(shù)104個(gè)細(xì)胞，結(jié)果用細(xì)胞進(jìn)入G0/G1期、S期及G2/M期的細(xì)胞百分率表示，用S期脾淋巴細(xì)胞所占的百分率表示Res對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞周期的影響。

1.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 各組數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析和t檢驗(yàn)。用數(shù)據(jù)分析軟件（ModFit LT）分析流式細(xì)胞儀結(jié)果。Res各濃度組與對(duì)照組比較：*表示差異顯著（p＜0.05），**表示差異極顯著（p＜0.01）。

2 結(jié)果與分析

2.1 白藜蘆醇對(duì)脾淋巴細(xì)胞增殖的影響

2.1.1 白藜蘆醇單獨(dú)刺激對(duì)脾淋巴細(xì)胞增殖的影響

Res單獨(dú)刺激脾淋巴細(xì)胞，各劑量組均能促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞的增殖，結(jié)果見圖1。Res各劑量組與對(duì)照組比較脾淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)均極顯著提高（p＜0.01），各劑量組之間比較差異均極顯著（p＜0.01）。Res對(duì)脾淋巴細(xì)胞的增殖能力呈現(xiàn)明顯的劑量依賴關(guān)系，Res在低劑量時(shí)隨著劑量的升高，刺激指數(shù)隨之升高，當(dāng)劑量達(dá)到一定濃度，刺激指數(shù)隨濃度升高而降低，表明Res對(duì)脾淋巴細(xì)胞增殖呈現(xiàn)出雙重調(diào)節(jié)作用。

圖1 白藜蘆醇對(duì)脾細(xì)胞增殖的影響Fig.1 The influence of resveratrol on splenocyte proliferation

2.1.2 白藜蘆醇與脂多糖同時(shí)刺激對(duì)脾淋巴細(xì)胞增殖的影響 Res與LPS同時(shí)刺激脾淋巴細(xì)胞，各劑量組均能促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞的增殖，結(jié)果見圖1。Res各劑量組與對(duì)照組比較脾淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)均極顯著提高（p＜0.01），各劑量組之間比較差異均極顯著（p＜0.01）。Res與LPS同時(shí)刺激對(duì)脾淋巴細(xì)胞的增殖能力有明顯的劑量依賴關(guān)系，呈現(xiàn)出雙重調(diào)節(jié)的作用。但Res與LPS同時(shí)刺激比Res單獨(dú)刺激各劑量組刺激指數(shù)均降低，表明Res不能協(xié)同LPS刺激脾淋巴細(xì)胞的增殖。

2.1.3 白藜蘆醇與刀豆蛋白A同時(shí)刺激對(duì)脾淋巴細(xì)胞增殖的影響 Res與ConA同時(shí)刺激脾淋巴細(xì)胞，各劑量組均能促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞的增殖，結(jié)果見圖1。各劑量組與對(duì)照組比較刺激指數(shù)均極顯著提高（p＜0.01）；除了10 μg/mL和20 μg/mL兩組之間差異不顯著（p＞0.05）外，其他各組之間差異均極顯著（p＜0.01）。Res與ConA同時(shí)刺激比Res單獨(dú)刺激各劑量組刺激指數(shù)均提高，表明Res能夠協(xié)同ConA刺激脾淋巴細(xì)胞的增殖。

2.2 白藜蘆醇對(duì)脾淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響

2.2.1 白藜蘆醇對(duì)脾淋巴細(xì)胞分泌IL-4的影響 Res能刺激脾淋巴細(xì)胞分泌IL-4，結(jié)果見圖2。Res各劑量與對(duì)照組比較IL-4分泌均極顯著提高（p＜0.01），各劑量組之間比較差異均極顯著（p＜0.01）。呈現(xiàn)明顯的劑量依賴關(guān)系，IL-4的分泌在Res低劑量時(shí)，隨著Res劑量的升高而升高，當(dāng)Res劑量達(dá)到一定量時(shí)，隨著Res劑量升高而降低，表明Res對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞IL-4分泌呈現(xiàn)雙重調(diào)節(jié)作用。

2.2.2 白藜蘆醇對(duì)脾淋巴細(xì)胞分泌IL-12的影響 Res能刺激脾淋巴細(xì)胞分泌IL-12，結(jié)果見圖2。Res各劑量與對(duì)照組比較IL-12分泌均極顯著提高（p＜0.01），各劑量組之間比較差異均極顯著（p＜0.01）。呈現(xiàn)明顯的劑量依賴關(guān)系，IL-12的分泌隨著Res劑量的升高而升高，呈現(xiàn)正向調(diào)節(jié)作用。

圖2 白藜蘆醇對(duì)脾淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響Fig.2 He influence of resveratrol on splenic lymphocyte secretion of cytokines

2.3 白藜蘆醇對(duì)脾淋巴細(xì)胞膜表面標(biāo)志的影響

Res各劑量組均能提高小鼠脾淋巴細(xì)胞中CD4+CD8-、CD4-CD8+和CD4+CD8+表型的T淋巴細(xì)胞亞群百分率，結(jié)果見表1和圖3。

Res對(duì)CD4+CD8-的影響：Res能提高CD4+CD8-百分率，各劑量組與對(duì)照組比較均能極顯著（p＜0.01）提高CD4+CD8-百分率。隨劑量的升高而升高，呈正向調(diào)節(jié)作用。

Res對(duì)CD4+CD8+的影響：Res能提高CD4+CD8+百分率，Res濃度為40 μg/mL劑量組與對(duì)照組比較能極顯著（p＜0.01）提高CD4+CD8+百分率，Res濃度為5、10、20 μg/mL各劑量組與對(duì)照組比較能提高CD4+CD8+百分率，差異不顯著（p＞0.05）。隨劑量的升高而升高，呈正向調(diào)節(jié)作用。

Res對(duì)CD4-CD8+的影響：Res能提高CD4-CD8+百分率，Res濃度為20 μg/mL劑量組與對(duì)照組比較能極顯著（p＜0.01）提高CD4-CD8+百分率，Res濃度為10 μg/mL劑量組與對(duì)照組比較能顯著（p＜0.05）提高CD4-CD8+百分率，Res濃度為5、40 μg/mL劑量組與對(duì)照組比較對(duì)提高CD4-CD8+百分率差異不顯著（p＞0.05）。呈現(xiàn)明顯的劑量依賴關(guān)系，呈現(xiàn)出雙重調(diào)節(jié)作用。

Res對(duì)CD4+/CD8+的比值的影響：CD4+/CD8+的比值可反映機(jī)體的免疫狀況，結(jié)果顯示Res各劑量組均能極顯著（p＜0.01）提高CD4+/CD8+比值，隨劑量的升高而升高，呈正向調(diào)節(jié)作用。表明Res可以正向調(diào)節(jié)機(jī)體免疫。

2.4 白藜蘆醇對(duì)脾淋巴細(xì)胞周期的影響

Res能促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞周期由G0/G1期向S期過(guò)度，結(jié)果見圖4和圖5。Res各劑量組與對(duì)照組比較均能極顯著（p＜0.01）提高脾淋巴細(xì)胞進(jìn)入S期的百分率，表明Res能夠促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞由G0/G1期向S期轉(zhuǎn)化。細(xì)胞周期呈現(xiàn)明顯的劑量依賴關(guān)系，呈雙重調(diào)節(jié)作用。

表1 白藜蘆醇對(duì)脾淋巴細(xì)胞CD4+/CD8+表達(dá)的影響Table1 The influence of resveratrol on CD4+/CD8+expression of splenic lymphocyte

圖3 白藜蘆醇對(duì)脾淋巴細(xì)胞CD4+/CD8+表達(dá)的影響Fig.3 The influence of resveratrol on CD4+/CD8+expression of splenic lymphocyte

圖4 白藜蘆醇對(duì)脾淋巴細(xì)胞進(jìn)入S期的百分率的影響Fig.4 The influence of resveratrol on the percentage of splenic lymphocyte entering S phase

3 討論

圖5 白藜蘆醇對(duì)脾淋巴細(xì)胞周期的影響Fig.5 The influence of resveratrol on splenic lymphocyte cycle

3.1 淋巴細(xì)胞是機(jī)體的免疫活性細(xì)胞，是獲得性免疫系統(tǒng)的重要組成部分。而脾臟是機(jī)體最大的免疫器官，含有大量的淋巴細(xì)胞，是機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫的樞紐。機(jī)體免疫功能情況可由淋巴細(xì)胞的增殖能力間接反映，如淋巴細(xì)胞的活化以及分化為免疫活性細(xì)胞，進(jìn)而增強(qiáng)機(jī)體的免疫應(yīng)答能力［8］。B細(xì)胞

主要負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)機(jī)體的體液免疫，T細(xì)胞主要負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)機(jī)體的細(xì)胞免疫。T細(xì)胞還可以進(jìn)一步分為CD4+T細(xì)胞（輔助T淋巴細(xì)胞）和CD8+T細(xì)胞（毒性T淋巴細(xì)胞）。CD4+T和CD8+T細(xì)胞之間能夠相互影響，兩者功能的動(dòng)態(tài)平衡對(duì)維持機(jī)體免疫狀況穩(wěn)定十分重要。CD4+/CD8+細(xì)胞的比值被認(rèn)為是衡量機(jī)體免疫水平的關(guān)鍵指標(biāo)之一［9］。它們能夠釋放促炎細(xì)胞因子，負(fù)責(zé)招募不同的效應(yīng)細(xì)胞，包括巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞等。識(shí)別抗原后，激活的Th細(xì)胞根據(jù)功能和分泌細(xì)胞因子的差異分為Th1、Th2細(xì)胞［10］。Th1和Th2細(xì)胞可以分泌不同類型的細(xì)胞因子，這也決定了它們的功能差異［11］。IL-4是由Th1細(xì)胞分泌的，主要介導(dǎo)體液免疫反應(yīng)，對(duì)B細(xì)胞的活化、增殖、分化等不同階段起重要作用。IL-12是由樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、B細(xì)胞及其他抗原遞呈細(xì)胞產(chǎn)生，能促進(jìn)Th1的增殖，誘導(dǎo)NK細(xì)胞和T細(xì)胞產(chǎn)生γ干擾素，提高NK細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，促進(jìn)T細(xì)胞的形成，是一種多功能免疫調(diào)節(jié)因子［12］。細(xì)胞周期由G0/G1期向S期過(guò)度，使細(xì)胞由靜止的G0/G1期向DNA合成期即S期轉(zhuǎn)化，并為細(xì)胞由S期向活躍的有絲分裂期G2/M期轉(zhuǎn)變提供了必要的條件，從而增強(qiáng)脾淋巴細(xì)胞的增殖。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Res可通過(guò)促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞增殖、細(xì)胞因子分泌、提高脾淋巴細(xì)胞CD4+/CD8+的比值、提高脾淋巴細(xì)胞周期中細(xì)胞進(jìn)入S期細(xì)胞的百分率來(lái)增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫功能。但對(duì)其免疫調(diào)節(jié)作用機(jī)制尚不清楚，還有待進(jìn)一步深入研究。

3.2 在研究多糖對(duì)T細(xì)胞增殖能力的影響時(shí)，一般使用多糖與ConA共同刺激，因?yàn)镃onA是小鼠T細(xì)胞特異性有絲分裂刺激物，可促進(jìn)細(xì)胞代謝，增加蛋白質(zhì)合成，加速細(xì)胞分裂。體液免疫是指由B細(xì)胞被激活后釋放特異性抗體從而消除細(xì)胞外病原體的免疫反應(yīng)。LPS能夠刺激B細(xì)胞的增殖、分化及分泌免疫球蛋白。刺激劑ConA和LPS可使細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)化，其機(jī)制主要是通過(guò)與淋巴細(xì)胞膜上的受體結(jié)合，進(jìn)而誘導(dǎo)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)［13］。本研究表明Res能夠協(xié)同ConA刺激脾淋巴細(xì)胞的增殖，Res不能協(xié)同LPS刺激脾淋巴細(xì)胞的增殖，與多糖作用效果不同，作用機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

Res在一定濃度范圍內(nèi)能夠促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖，增強(qiáng)細(xì)胞因子IL-4和IL-12的分泌，提高小鼠脾淋巴細(xì)胞CD4+/CD8+的比值，提高脾淋巴細(xì)胞周期中細(xì)胞進(jìn)入S期細(xì)胞的百分率。結(jié)果表明Res具有一定的免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)，為其作為免疫佐劑和免疫增強(qiáng)劑提供理論依據(jù)，為Res的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展提供技術(shù)支持。

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The influence of resveratrol on immunoregulatory activity of mouse splenic lymphocyte

LIU Ying-bo，F(xiàn)U Yue，HAO Lu，LI Jing-shuang，YU Yang*
（College of Animal Husbandry&Veterinary Liaoning Medical University，Jinzhou 121001，China）

In order to analyze the influence of resveratrol（Res）on immunoregulatory activity of mouse splenic lymphocyte.Aseptic isolation of mouse spleen to prepare lymphocytes which were cultured in RPMI 1640 supplemented with10% fetal calf serum.The culture media was added ConcanavalinA（ConA），lipopolysaccharide（LPS）as well as Res with different concentration，including 5，10，20，40 μg/mL.After being cultured for different time，MTT method was adopted to detect the proliferation of lymphocytes.ELISA method was used to detect the level of lymphocytes secrete IL-4 and IL-12.The flow cytometry was used to detect the cell cycle and cytomembrane surface markers of lymphocytes.Res could promote the proliferation of mouse splenic lymphocyte.The mixture of Res and ConA could promote the proliferation of mouse splenic lymphocyte together，but the mixture of Res and LPS could not promote the proliferation of mouse splenic lymphocyte together.Res could increase the secretion of IL-4 and IL-12 and enhance the ratio of CD4+/CD8+of mouse splenic lymphocyte as well as improve the percentage that the cells in cycle of splenic lymphocyte enter of the cells in S phase.Res could enhance the immunoregulatory activity of mouse splenic lymphocyte.

resveratrol；lymphocyte；proliferation；cytokines；cell cycle；cytomembrane surface markers

TS255.1

A

1002-0306（2016）08-0335-05

10.13386/j.issn1002-0306.2016.08.062

2015－09－15

劉英博（1992-），男，在讀碩士研究生，研究方向：獸醫(yī)藥理學(xué)與免疫學(xué)，食品營(yíng)養(yǎng)與安全，E-mail：478194158@qq.com。

*通訊作者：于洋（1962-），男，博士，教授，研究方向：獸醫(yī)藥理學(xué)與免疫學(xué)，E-mail：spyuyang@163.com。

遼寧省科技攻關(guān)計(jì)劃（2014214016）。