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    消痰通腑方對肥胖小鼠體重及脂代謝的影響

    2016-09-14 01:51:16顧雨芳李勇進(jìn)修麗娟張映城魏品康上海長征醫(yī)院中醫(yī)科上海200003
    中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào) 2016年16期
    關(guān)鍵詞:體脂通腑脂聯(lián)素

    顧雨芳 劉 煊 李勇進(jìn) 修麗娟 張映城 魏品康上海長征醫(yī)院中醫(yī)科,上海 200003

    消痰通腑方對肥胖小鼠體重及脂代謝的影響

    顧雨芳 劉 煊 李勇進(jìn) 修麗娟 張映城 魏品康
    上海長征醫(yī)院中醫(yī)科,上海 200003

    目的 觀察消痰通腑方對肥胖小鼠體重及脂代謝的影響,探討其作用機(jī)制。 方法 將34只小鼠隨機(jī)分成正常對照組(n=12)和肥胖造模組(n=22)。用高脂飼料建肥胖模型,11周后,兩組各處死6只小鼠,檢測體重、體脂、三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)及脂聯(lián)素(ADP)水平。將剩余的肥胖造模組小鼠(n=16)剔除體重最輕的4只小鼠后,隨機(jī)分為肥胖模型組(n=6)及消痰通腑方組(n=6),消痰通腑方小鼠組予消痰通腑方灌胃,正常對照組及肥胖模型組均灌胃等體積蒸餾水,每日1次,時間為4周。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后分別檢測小鼠體重、體脂、TG、TC、IL-6及ADP水平。 結(jié)果 肥胖造模組小鼠第11周體重、體脂及TC、IL-6水平均顯著高于正常對照組,血清ADP水平顯著低于正常對照組(P<0.01)。消痰通腑方組小鼠體重、體脂顯著低于肥胖模型組(P<0.05),TC及IL-6水平低于肥胖模型組(P<0.05),血清ADP水平高于肥胖模型組(P<0.05)。 結(jié)論 消痰通腑方能降低肥胖模型小鼠的體重、體脂、TC及IL-6水平,其機(jī)制可能與增加血清ADP水平有關(guān)。

    消痰通腑方;總膽固醇;三酰甘油;白細(xì)胞介素-6;脂聯(lián)素

    隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展,高脂飲食增多,體力勞動減少,肥胖人口逐年增加。肥胖癥人群的高血壓、冠心病、糖尿病及惡性腫瘤的發(fā)生率都高于普通人群[1]。肥胖的危險性越來越受重視,已成為威脅人類健康的難題[2-3]。尋找一種安全有效的治療方案有重要意義,臨床發(fā)現(xiàn),消痰通腑方有一定減肥、降脂的作用。本研究采用消痰通腑方干預(yù)高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖模型小鼠,觀察其體重及脂代謝的改變,為進(jìn)一步探討消痰通腑方減肥降脂作用機(jī)制提供客觀依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)動物

    健康清潔級C57BL/6小鼠,34只,雄性,體重(20± 2)g,4周齡,由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限責(zé)任公司提供,實(shí)驗(yàn)動物使用許可證:SYXK(滬)2012-0003。自由進(jìn)食、飲水,環(huán)境溫度為(22±3)℃,相對濕度為40%~55%,每天光照12 h。小鼠飼料及40%高脂飼料由上海普路騰生物科技有限公司提供,許可證號碼:滬飼證:(2014)04001。小鼠飼料配方:基礎(chǔ)飼料為47%,水分為10%,粗蛋白質(zhì)為20.5%,粗脂肪為4%,粗纖維為5%,粗灰分為8%,鈣為1.8%,總磷為1.2%,賴氨酸為1.32%,蛋氨酸+胱氨酸為0.78%,氯化鈉為0.4%。高脂飼料配方:基礎(chǔ)飼料為41.79%,豬油為40%,膽固醇為1%,蛋黃粉為12%,膽鹽為0.2%,蔗糖為5%,甲基硫氧嘧啶為0.01%。

    1.2 藥物

    消痰通腑方,主要由制半夏、制大黃、白芍、細(xì)辛等組成,由第二軍醫(yī)大學(xué)長征醫(yī)院監(jiān)制、江陰天江藥業(yè)有限公司生產(chǎn),批號:1011370。

    1.3 試劑與儀器

    試劑:總膽固醇(TC)試劑盒及三酰甘油(TG)試劑盒均購自北京北化康泰臨床試劑有限公司,生產(chǎn)批號:20130119;白介素(IL)-6 ELISA試劑盒購自美國Rapidbio公司,批號:DRE30044;脂聯(lián)素(ADP)試劑盒購自美國RB公司,生產(chǎn)批號:201412。儀器:離心機(jī)由上海安亭科學(xué)儀器廠制造,型號:TDL80-2C;電子分析天平由上海精天電子儀器有限公司制造,型號:JA2003A;移液器、離心管由Eppendorf公司提供。

    1.4 分組造模及給藥

    34只小鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法,選取12只作為正常對照組,以基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng);另外22只作為肥胖造模組,以高脂飼料喂養(yǎng),每周測體重1次并記錄。當(dāng)肥胖造模組小鼠平均體重超過正常對照組小鼠平均體重的20%定義為肥胖模型建成[4],剔除體重最輕的4只小鼠。正常對照組及肥胖造模組各隨機(jī)處死6只小鼠,檢測相關(guān)指標(biāo)。將剩余的12只肥胖小鼠隨機(jī)分為肥胖模型組及消痰通腑方組,各6只;剩余的6只正常對照組小鼠仍為正常對照組。正常對照組小鼠以基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng),肥胖模型組小鼠及消痰通腑方組小鼠以高脂飼料喂養(yǎng)。消痰通腑方組小鼠予消痰通腑方0.4 mL/只灌胃,每日1次,時間為4周,正常對照組及肥胖模型組均灌胃等體積蒸餾水。每周測體重1次并記錄。

    1.5 標(biāo)本處理及檢測指標(biāo)

    肥胖模型建成時,正常對照組及肥胖造模組各隨機(jī)選取6只小鼠,空腹6 h,測體重,眼眶取血,處死。血標(biāo)本靜置20 min后,3000 r/min離心20 min,分離血清,-80℃保存。ELISA法檢測血清IL-6和ADP水平,酶法檢測TC和TG水平。小鼠打開腹腔,提取生殖器附近脂肪組織,稱取濕重,計(jì)算體重凈增量(體重凈增量=動物死亡時體重-實(shí)驗(yàn)初始體重)、體重增長率(體重增長率=體重凈增量/實(shí)驗(yàn)初始體重×100%)、體脂率(體脂率=體脂總重/動物死亡時體重×100%)。

    1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    應(yīng)用 SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,多組間比較采用單因素方差分析,方差齊時,組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn),方差不齊時,組間兩兩比較采用Dunnett's T3檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 正常對照組與肥胖造模組小鼠體重及體脂水平比較

    正常對照組與肥胖造模組小鼠初始體重差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),至第11周時喂養(yǎng)高脂飼料的肥胖造模組小鼠體重超過正常對照組20%,肥胖模型建成。肥胖造模組在第11周時體重、體重凈增量、體重增長率、體脂總量及體脂率均顯著高于正常對照組,差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表1。

    表1 正常對照組及肥胖造模組小鼠體重及體脂水平比較(±s)

    注:與正常對照組比較,**P<0.01

    組別 只數(shù) 第1周體重(g) 第11周體重(g) 體重凈增量(g) 體重增長率(%) 體脂總重(g) 體脂率(%)正常對照組肥胖造模組12 22 20.13±0.68 19.80±0.37 25.42±1.28 30.75±1.29**5.29±1.39 10.96±1.24**26.40±7.27 55.38±6.37**0.09±0.01 0.31±0.05**0.34±0.04 1.00±0.15**

    2.2 正常對照組與肥胖造模組小鼠血脂及脂聯(lián)素水平比較

    在11周時,肥胖造模組小鼠TC及IL-6水平顯著高于正常對照組,差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);兩組TG水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);肥胖造模組小鼠血清ADP水平顯著低于正常對照組,差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表2。

    2.3 消痰通腑方對肥胖小鼠體重及體脂的影響

    在15周時,肥胖模型組小鼠體重、體脂總量及體脂率較正常對照組顯著升高(P<0.01),兩組體重凈增量及體重增長率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P>0.05),但從肥胖模型組小鼠體重凈增量數(shù)據(jù)看仍可見增長趨

    勢。經(jīng)消痰通腑方干預(yù)4周后,消痰通腑方組小鼠體重及體脂總量均顯著低于肥胖模型組 (P<0.01),體重凈增量、體重增長率及體脂率均低于肥胖模型組(P<0.05)。見表3。

    表2 正常對照組與肥胖造模組小鼠血脂及脂聯(lián)素水平比較(±s)

    注:與正常對照組比較,**P<0.01

    組別 只數(shù) TC(mg/dL)TG(mg/dL) IL-6(ng/L) ADP(ng/mL)正常對照組肥胖造模組66 1.77±0.24 6.82±0.87**0.80±0.23 1.11±0.25 94.63±9.89 122.18±14.07**117.50±8.58 96.70±5.65**

    表3 三組小鼠體重和體脂水平比較(±s)

    表3 三組小鼠體重和體脂水平比較(±s)

    注:與正常對照組比較,**P<0.01;與肥胖模型組比較,#P<0.05;TC:總膽固醇;TG:三酰甘油;IL-6:白細(xì)胞介素-6;ADP:脂聯(lián)素

    組別 只數(shù) 第11周體重(g) 第15周體重(g) 體重凈增量(g) 體重增長率(%) 體脂總重(g) 體脂率(%)正常對照組肥胖模型組消痰通腑方組666 25.58±1.39 30.97±1.03**30.77±0.60 27.53±0.79 33.72±0.50**32.08±0.69##1.95±1.06 2.75±0.76 1.32±0.80#0.08±0.05 0.09±0.03 0.04±0.03#0.15±0.02 0.41±0.10**0.25±0.08##0.55±0.09 1.22±0.30**0.77±0.25#

    2.4 消痰通腑方對肥胖小鼠血脂及脂聯(lián)素的影響

    在15周時,肥胖模型組小鼠TC及IL-6水平均顯著高于正常對照組(P<0.01),TG水平高于正常對照組(P<0.05),血清ADP水平顯著低于正常對照組(P<0.01)。經(jīng)消痰通腑方干預(yù)后,消痰通腑方組小鼠TC及IL-6水平低于肥胖模型組 (P<0.05),血清ADP水平高于肥胖模型組(P<0.05)。見表4。

    表4 三組小鼠血脂及脂聯(lián)素水平比較(±s)

    表4 三組小鼠血脂及脂聯(lián)素水平比較(±s)

    注:與正常對照組比較,*P<0.05,**P<0.01;與肥胖模型組比較,#P<0.05;TC:總膽固醇;TG:三酰甘油;IL-6:白細(xì)胞介素-6;ADP:脂聯(lián)素

    組別 只數(shù)TC(mg/dL)TG(mg/dL) IL-6(ng/L) ADP(ng/mL)正常對照組肥胖模型組消痰通腑方組666 1.90±0.46 7.77±0.13**6.31±1.41#0.90±0.15 1.71±0.70*1.24±0.26 98.87±9.44 137.86±11.46**123.86±4.87#119.33±7.93 94.00±8.93**103.67±2.98#

    3 討論

    消痰通腑方是以魏品康教授消痰散結(jié)八法中消痰散結(jié)導(dǎo)滯法為指導(dǎo),以二陳湯和小承氣湯化裁而來。筆者前期臨床及實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),消痰通腑方可以降低患者體內(nèi)IL-6及C反應(yīng)蛋白(CRP)水平[5],減輕危重患者的炎性反應(yīng);降低腸道內(nèi)炎癥因子IL-6及活化誘導(dǎo)胞嘧啶核苷脫氨酶(AICD)的表達(dá),防治結(jié)直腸癌前病變[6];下調(diào)結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移組織中胰島素樣生長因子-Ⅰ及其受體蛋白、基因的表達(dá),抑制小鼠結(jié)腸癌CT26原位移植瘤的生長,抑制肝臟轉(zhuǎn)移[7-8]。

    魏品康教授認(rèn)為“痰”是消化道腫瘤的主要致病因素。這種“痰”是廣義的“痰”,包括“痰”和“飲”,指臟腑功能失調(diào)或疾病狀態(tài)下津液水濕代謝障礙產(chǎn)生的病理產(chǎn)物,痰生成后,蓄積于體內(nèi),日久可致局部微環(huán)境發(fā)生變化,此即“痰濁”。在某些因素如“氣”和“火”的作用下,痰聚成結(jié),化生痰核,萌生痰絡(luò),生為“惡痰”即消化道腫瘤[9]。而肥胖及高脂血癥在中醫(yī)亦屬于“痰”的范疇,根據(jù)中醫(yī)“異病同治”的原則,消痰通腑方可能也具有減肥降脂的作用。為擴(kuò)大消痰通腑方的應(yīng)用范圍,本研究采用消痰通腑方干預(yù)高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖模型小鼠,通過觀察消痰通腑方對小鼠體重及脂代謝的改變,說明其對肥胖及高脂血癥的可能作用,為進(jìn)一步探討消痰通腑方減肥降脂作用機(jī)制提供客觀依據(jù)。

    高脂飲食與肥胖的發(fā)生密切相關(guān),高脂飼料喂養(yǎng)小鼠造成的肥胖模型是目前最常用的方法,并與《素問·奇病論》中“此肥美之所發(fā)也,此人必?cái)?shù)食甘美而多肥也”相符,故本文采用高脂飲食誘導(dǎo)肥胖模型。很多肥胖小鼠模型都顯示出血脂水平升高[10-11],本實(shí)驗(yàn)亦發(fā)現(xiàn),肥胖造模組TC水平顯著高于正常對照組,說明高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖模型與高膽固醇血癥相關(guān)。而經(jīng)消痰通腑方干預(yù)后肥胖模型組小鼠的體重、體脂比及血脂水平均有所下降,說明消痰通腑方確實(shí)具有一定的減肥降脂作用。

    肥胖的實(shí)質(zhì)是體內(nèi)脂肪的過量積累,導(dǎo)致脂肪組織超過了維持正常生理功能所需的比例。脂肪組織不僅是能量儲存組織,還具有強(qiáng)大的內(nèi)分泌功能,能分泌多種脂肪細(xì)胞因子,如瘦素、脂聯(lián)素、抵抗素、腫瘤壞死因子-α等。脂肪細(xì)胞可通過其分泌的多種信號物質(zhì),分別與內(nèi)分泌神經(jīng)中樞、腎上腺、胰島、肌、肝、心肌及血管內(nèi)皮等細(xì)胞進(jìn)行相互作用,形成復(fù)雜的神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)[12]。超重或肥胖狀態(tài)下,脂肪組織分泌的多種脂肪因子可以引發(fā)、介導(dǎo)或參與炎性反應(yīng),而脂肪組織被巨噬細(xì)胞浸潤,產(chǎn)生并釋放多種炎癥因子,如白介素、腫瘤壞死因子等,故有學(xué)者提出肥胖是一種慢性低度炎癥狀態(tài),這種狀態(tài)是高脂血癥、冠心病、2型糖尿病及腫瘤等多種疾病的重要危險因素[13-15]。

    IL-6是一種多功能炎癥細(xì)胞因子,具有致炎和抗炎的雙向功能,它的作用與組織中的含量有關(guān),正常水平對機(jī)體有利,產(chǎn)生過多會引起一系列炎性損害[16]。肥胖患者血清IL-6濃度增加[17],高脂血癥亦與IL-6關(guān)

    系密切,特別是TC和低密度脂蛋白膽固醇與IL-6呈正相關(guān)[18]。IL-6能刺激肝臟產(chǎn)生急性期蛋白,參與動脈粥樣硬化的過程[19]。

    ADP具有胰島素增敏、抗炎和抗動脈粥樣硬等作用[20]。血清ADP水平降低是代謝綜合征的一個獨(dú)立于肥胖、胰島素抵抗及炎癥標(biāo)志物的危險因素[21]。ADP具有強(qiáng)烈的調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的作用,能夠通過激活A(yù)MPK途徑及抑制TNF-α促脂解作用等方面發(fā)揮調(diào)節(jié)血脂代謝的作用[22-23]。另外,ADP也可以結(jié)合脂聯(lián)素受體2激活PPARα和PPARγ,使脂肪進(jìn)行β-氧化,降低血清TG和TC水平,改善肥胖[24]?;谝陨侠碚摷把芯拷Y(jié)果,本研究假設(shè)ADP處于痰濁環(huán)境的對立面,提出消痰通腑方通過提高ADP水平對抗痰濁環(huán)境的影響,清除痰濁環(huán)境,達(dá)到減肥降脂的目的。本研究顯示,肥胖小鼠的血清ADP水平顯著低于正常對照組,消痰通腑方干預(yù)后,ADP水平明顯升高。提示消痰通腑方減肥降脂的作用機(jī)制可能與ADP水平的改變相關(guān)。

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    Effects of Xiaotan Tongfu Prescription on body weight and lipid metabolism of obese mice

    GU Yufang LIU Xuan LI Yongjin XIU Lijuan ZHANG Yingcheng WEI Pinkang
    Department of Traditional Chinese Medicine,Shanghai Changzheng Hospital,Shanghai200003,China

    Objective To observe the effect of Xiaotan Tongfu Prescription on weight and lipid metabolism in obese mice,and to explore its mechanism.Methods 34 mice were randomly divided into the normal control group(n=12)and the obese model group (n=22).High-fat diet was given to establish obese modeling.After 11 weeks,6 mice of each group were sacrificed,to test body weight,body fat,triglyceride(TG),total cholesterol(TC),interleukin-6(IL-6)and adiponectin(ADP).The remaining obese model group mice(n=16)to eliminate the lightest weight of 4 mice were randomly divided into the obese model group (n=6)and Xiaotan Tongfu Prescription treatment group (n=6).Drugs were given to the mice in Xiaotan Tongfu Prescription treatment group once a day for 4 weeks,the mice in other groups were given the same volume of distilled water.In the ending,the mice were killed and body weight,body fat,TG,TC,IL-6 and ADP were all detected and analyzed.Results IN 11 weeks,the body weight,body fat and TC,IL-6 of the obese model group were significantly higher than those of the normal control group,serum ADP level was significantly lower than that of the normal control group(P<0.01).The body weight,body fat of the Xiaotan Tongfu Prescription treatment group were significantly lower than those of the obese model group(P<0.05),TC and IL-6 levels were lower than those of the obese model group(P<0.05),serum ADP level was significantly higher than that of the obese model group(P<0.05).Conclusion Xiaotan Tongfu Prescription can reduce the body weight,body fat,TC and IL-6 levels of the obese model mice,the mechanism may be associated with the increased ADP level.

    Xiaotan Tongfu Prescription;Total cholesterol;Triglyceride;Interleukin-6;Adiponectin

    R285.5

    A

    1673-7210(2016)06(a)-0015-04

    2016-03-01本文編輯:程 銘)

    上海市衛(wèi)生局名老中醫(yī)學(xué)術(shù)經(jīng)驗(yàn)研究工作室建設(shè)項(xiàng)目(ZYSNXD-CC-MZY054)。

    顧雨芳(1982.7-),女,碩士;研究方向:消化道腫瘤的中西醫(yī)結(jié)合防治。

    魏品康(1949.12-),男,主任醫(yī)師;研究方向:消化道腫瘤的中西醫(yī)結(jié)合防治。

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