肝細(xì)胞生長因子、堿性成纖維細(xì)胞生長因子及血管源性生長因子在成人煙霧病不同階段的變化

吳凌峰 曹文鋒 屈新輝 任 玥 張昆南 吳曉牧,.江西省人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，江西南昌 330006；江西省神經(jīng)病學(xué)研究所，江西南昌 330006

肝細(xì)胞生長因子、堿性成纖維細(xì)胞生長因子及血管源性生長因子在成人煙霧病不同階段的變化

吳凌峰1曹文鋒1屈新輝1任 玥2張昆南1吳曉牧1,2
1.江西省人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，江西南昌 330006；2江西省神經(jīng)病學(xué)研究所，江西南昌 330006

目的 探討成人煙霧病不同階段中肝細(xì)胞生長因子（HGF）、堿性成纖維細(xì)胞生長因子（b-FGF）及血管源性生長因子（VEGF）的變化。 方法 回顧性分析2013年11月～2014年12月江西省人民醫(yī)院（以下簡(jiǎn)稱“我院”）神經(jīng)內(nèi)科住院的行全腦血管造影檢查確診為煙霧病的41例患者臨床資料，根據(jù)Suzuki分期，8例患者為早期（Suzuki分期1～2期），17例為中期（Suzuki分期3～4期），16例為晚期（Suzuki分期5～6期），同時(shí)選擇在我院診治的40例腦動(dòng)脈粥樣硬化患者為陽性對(duì)照，另選擇我院20例健康體檢者為正常對(duì)照。采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法）檢測(cè)上述人群血清中HGF、b-FGF及VEGF濃度。 結(jié)果 煙霧病早、中、晚期患者的HGF與動(dòng)脈粥樣硬化患者、健康人比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。煙霧病晚期患者b-FGF與動(dòng)脈粥樣硬化患者、健康人比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）煙霧病早期患者VEGF與動(dòng)脈粥樣硬化患者、健康人比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 結(jié)論 煙霧病的發(fā)生發(fā)展過程HGF、b-FGF及VEGF均有參與，但三者作用并不相同，HGF可能在煙霧病整個(gè)發(fā)生發(fā)展過程中均發(fā)揮作用，而b-FGF可能在煙霧病晚期發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了作用，VEGF則可能在煙霧病早期發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了作用。

煙霧??；肝細(xì)胞生長因子；堿性成纖維細(xì)胞生長因子；血管源性生長因子

側(cè)支循環(huán)是近年來國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)問題［1-2］，通過側(cè)支循環(huán)，可以維持病變血管的遠(yuǎn)端血液供應(yīng)，從而避免出現(xiàn)腦梗死，當(dāng)側(cè)支循環(huán)好時(shí)，預(yù)后較好。故其在缺血性腦血管病的發(fā)生、發(fā)展、治療、預(yù)后中都起到了十分關(guān)鍵的作用，更為重要方面其還是一條可干預(yù)的途徑［3］。因此需要加強(qiáng)側(cè)支循環(huán)建立的基礎(chǔ)和臨床方面的研究，從而為缺血性腦血管病的治療開啟新的方向。煙霧病是一種以雙側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈末端及大腦前、中動(dòng)脈起始部狹窄或閉塞，并在顱底有異常增生血管網(wǎng)的腦血管?。?］，其突出特征之一便是出現(xiàn)顱外向顱內(nèi)代償?shù)膫?cè)支循環(huán)和新生的毛細(xì)血管網(wǎng)，其分別代表次級(jí)及三級(jí)側(cè)支循環(huán)。隨著病情的發(fā)展，新生的毛細(xì)血管網(wǎng)會(huì)發(fā)生不斷地變化，呈現(xiàn)出增生、旺盛及衰減的過程，而次級(jí)側(cè)支循環(huán)也會(huì)逐漸建立并起主要代償供血作用，是目前研究側(cè)支循環(huán)變化最好的途徑［5］。目前很多國內(nèi)外研究已提示多種細(xì)胞因子在煙霧病患者中表達(dá)明顯增加［6-9］，其中，肝細(xì)胞生長因子（HGF）、堿性成纖維細(xì)胞生長因子（b-FGF）及血管源性生長因子（VEGF）最具有代表性［10］，但煙霧病毛細(xì)血管網(wǎng)的增生、旺盛和衰減的具體過程及次級(jí)側(cè)支循環(huán)變化與上述細(xì)胞因子的相關(guān)性尚不清楚，本研究探討HGF、b-FGF、VEGF）在成人煙霧病不同階段的變化，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2013年11月～2014年12月江西省人民醫(yī)院（以下簡(jiǎn)稱“我院”）神經(jīng)內(nèi)科住院的行全腦血管造影檢查確診為煙霧病的41例患者臨床資料，其中男15例，女26例，平均年齡為（51.34±8.71）歲，上述患者行相關(guān)檢查排除相關(guān)疾病，同時(shí)行全腦血管造影檢查確診為煙霧病，影像學(xué)評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)選擇Suzuki分期，2位神經(jīng)內(nèi)科醫(yī)師分別單獨(dú)進(jìn)行判定，8例患者為早期（Suzuki分期1～2期），17例為中期（Suzuki分期3～4期），16例為晚期（Suzuki分期5～6期）。同時(shí)選擇在我院診治40例腦動(dòng)脈粥樣硬化患者為陽性對(duì)照，另選擇我院20例健康體檢者為正常對(duì)照。所選健康對(duì)照人員均為血象、血生化、常規(guī)心電圖、胸片、腹部B超、經(jīng)顱多普勒超聲檢查等上述檢查項(xiàng)目正常的健康成人。

煙霧病診斷標(biāo)準(zhǔn)：①頸內(nèi)動(dòng)脈（internal carotid artery，ICA）末端和/或大腦中動(dòng)脈（middle cerebral artery，MCA）、大腦前動(dòng)脈（anterior cerebral artery，ACA）起始端狹窄或閉塞；②其顱底可見煙霧狀異常血管網(wǎng)；③病變?yōu)殡p側(cè)性。

腦動(dòng)脈粥樣硬化診斷標(biāo)準(zhǔn)：①全腦血管檢查發(fā)現(xiàn)血管管腔有狹窄；②排外肌纖維發(fā)育不良等其他原因所致血管管腔變化。

煙霧病Suzuki分期的標(biāo)準(zhǔn)［11］：第1期，雙側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈末端分叉處狹窄。第2期，頸內(nèi)動(dòng)脈末端分叉處狹窄，ACA和MCA起始部狹窄并分支擴(kuò)張，顱底有煙霧血管形成，但無顱外至顱內(nèi)側(cè)支循環(huán)形成。第3期，ACA和MCA主要分支閉塞，煙霧血管非常明顯，形成煙霧血管團(tuán)，但大腦后動(dòng)脈（PCA）或后交通不受影響，仍無顱外至顱內(nèi)側(cè)支循環(huán)形成。第4期，顱底煙霧狀血管開始減少，ICA閉塞已經(jīng)發(fā)展到與后交通動(dòng)脈的聯(lián)合處。從顱外到顱內(nèi)的側(cè)支循環(huán)逐漸形成，或有異常增生的新生血管吻合支。第5期，從ICA發(fā)出的全部主要?jiǎng)用}完全閉塞，煙霧血管比第4期更少，從顱外到顱內(nèi)的側(cè)支供血進(jìn)一步增多。第6期，煙霧狀血管完全消失，ICA主干閉塞，僅見到從顱外進(jìn)入顱內(nèi)的側(cè)支循環(huán)。

1.2 檢測(cè)方法

煙霧病和動(dòng)脈粥樣硬化組在入院后第2天，正常對(duì)照組在當(dāng)天即采取空腹靜脈血6 mL，常溫放置30 min，以3000 r/min離心15 min，取血清并將其置于-70℃冰箱備檢。各組血清中HGF、b-FGF及VEGF濃度均采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法）檢測(cè)。檢測(cè)試劑盒采用武漢博士德生物工程有限公司，檢測(cè)步驟嚴(yán)格按操作說明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 13.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，正態(tài)分布計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 煙霧病患者、腦動(dòng)脈粥樣硬化患者、健康人一般資料比較

煙霧病患者、腦動(dòng)脈粥樣硬化患者、健康人的一般資料，煙霧病患者、腦動(dòng)脈粥樣硬化患者危險(xiǎn)因素比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 煙霧病患者、動(dòng)脈粥樣硬化患者、健康人一般資料比較［n（%）］

2.2 煙霧病患者、動(dòng)脈粥樣硬化患者、健康人血清中HGF、b-FGF、VEGF比較

煙霧病早期、中期、晚期患者的HGF與動(dòng)脈粥樣硬化患者、健康人比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），煙霧病早期、中期、晚期患者之間HGF相比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。煙霧病晚期患者b-FGF與其他各組比較，表達(dá)最為明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其余各組間b-FGF差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。煙霧病早期患者VEGF與其它各組比較，表達(dá)最為明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其余各組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 煙霧病患者、動(dòng)脈粥樣硬化患者、健康人血清中HGF、b-FGF、VEGF比較（ng/mL，±s）

表2 煙霧病患者、動(dòng)脈粥樣硬化患者、健康人血清中HGF、b-FGF、VEGF比較（ng/mL，±s）

疾病 例數(shù) HGF b-FGF VEGF煙霧病煙霧病早期煙霧病中期煙霧病晚期動(dòng)脈粥樣硬化健康人41 8 17 16 40 20 4.65±0.86 4.75±0.98 4.52±0.81 4.74±0.91 4.08±0.43 4.02±0.33 0.22±0.10 0.16±0.03 0.18±0.09 0.30±0.11 0.19±0.03 0.17±0.05 0.51±0.05 0.76±0.14 0.47±0.04 0.42±0.04 0.49±0.38 0.46±0.07

3 討論

根據(jù)國內(nèi)外相關(guān)研究報(bào)道［6-9］，HGF、b-FGF、VEGF均在煙霧病患者病變處的頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段及其分支血管中層和增厚的內(nèi)膜中廣泛表達(dá)，另外在患者腦脊液中檢測(cè)含量明顯增高，而正常對(duì)照組則未發(fā)現(xiàn)，表明這些相關(guān)病變組織中含有上述細(xì)胞因子，提示與煙霧病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。

煙霧病的病變血管不同于動(dòng)脈粥樣硬化病變，其以內(nèi)膜增厚為主要表現(xiàn)，從而造成了血管管腔變細(xì)、狹窄，直至閉塞，同時(shí)周圍逐漸出現(xiàn)新生毛細(xì)血管網(wǎng)，上述病理過程均與血管內(nèi)皮細(xì)胞增生有相關(guān)性［12］。隨著病程的進(jìn)展，新生毛細(xì)血管會(huì)逐漸衰減，而次級(jí)側(cè)支循環(huán)則起主要代償供血作用，根據(jù)這些影像學(xué)變化可行Suzuki分期，8例早期，17例中期，16例晚期，分別代表了不同的次級(jí)和三級(jí)側(cè)支循環(huán)變化階段。

HGF是一種很強(qiáng)的促血管再生因子［13-14］，它不僅促進(jìn)血管的生成，而且可調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞的生長、運(yùn)動(dòng)。本實(shí)驗(yàn)揭示血清中HGF濃度在煙霧病各個(gè)階段均有明顯的升高，既使煙霧病后期毛細(xì)血管網(wǎng)減少時(shí)，HGF濃度仍未下降，提示其從始至終一直參與新生毛細(xì)血管網(wǎng)及次級(jí)側(cè)支循環(huán)的形成，可能是一種主要的促側(cè)支循環(huán)開放的細(xì)胞因子。

b-FGF在體內(nèi)分布很廣，可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和增殖，并促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的黏附和形成血管腔［15］，臨床試驗(yàn)也進(jìn)一步證明其具有強(qiáng)大的血管再生作用［16］。本研究發(fā)現(xiàn)煙霧病晚期患者血清中b-FGF含量明顯增加，此時(shí)煙霧病變的血管閉塞達(dá)到最高峰，而新生毛細(xì)血管網(wǎng)已處于衰減期，但第二級(jí)側(cè)支循環(huán)逐漸出現(xiàn)并起主要作用，故推測(cè)其在煙霧病側(cè)支循環(huán)變化的后期病變中發(fā)揮了重要作用。

VEGF是一種血管生長因子，主要作用不但可刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞增生，調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長，而且還可促進(jìn)血管形成［17-19］，臨床試驗(yàn)顯示通過特異性VEGF納米抗體能抑制血管的生長，反證其具有促進(jìn)血管再生作用［20］。本研究提示煙霧病早期組血清中VEGF含量明顯增加，此時(shí)煙霧病患者病變血管尚處于病變?cè)缙冢律?xì)血管處于增生期，推測(cè)其在煙霧病的側(cè)支循環(huán)早期的變化發(fā)揮了重要作用。

綜上所述，根據(jù)影像學(xué)分期和上述結(jié)果，HGF、b-FGF、VEGF均與煙霧病的側(cè)支循環(huán)變化發(fā)展有關(guān)，但HGF可能參與了煙霧病新生毛細(xì)血管網(wǎng)和次級(jí)側(cè)支循環(huán)建立的整個(gè)病變過程，煙霧病晚期次級(jí)側(cè)支循環(huán)增加時(shí)FGF可能起了作用，而煙霧病早期毛細(xì)血管網(wǎng)增殖過程中VEGF可能發(fā)揮了作用。由于本研究采用了血清學(xué)檢測(cè)，而非患者直接病變組織，另外所選擇樣本量少，有可能造成實(shí)驗(yàn)的偏倚，今后將在需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)行研究。

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Changes of HGF，F(xiàn)GF and VEGF in different pathological stages of adult moyamoya disease

WU Lingfeng1CAO Wenfeng1QU Xinhui1REN Yue2ZHANG Kunnan1WU Xiaomu1,2
1.Department of Neurology，People's Hospital of Jiangxi Province，Jiangxi Province，Nanchang 330006，China；2.Institute of Neurology of Jiangxi Province，Jiangxi Province，Nanchang 330006，China

［Abtract］Objective To investigate the changes of hepatocyte growth factor（HGF），basic fibroblast growth factor（b-FGF）and blood vessels origin of growth factor（VEGF）in the different pathological stages of adult moyamoya disease （MMD）.Methods The clinical data of 41 patients with MMD were retrospectively analyzed from November 2013 to December 2014 in the People's Hospital of Jiangxi Province，all patients received examinations of Digital Subtraction Angiography，according to Suzuki diagnostic criteria，8 patients were early stage（Suzuki 1-2 stage），17 cases were middle stage（Suzuki 3-4 stage），16 cases were late stage（Suzuki 5-6 stage）.At same time，40 patients with cerebral atherosclerosis were selected as positive control，and 20 normal people were selected as normal control.HGF，b-FGF and VEGF concentration in serum measured by using enzyme-linked immunosorbent（ELISA）.Results HGF in the early，middle and late stage of MMD patients were compared to atherosclerosis patients and healthy persons，the differences were statistically significant （P＜0.05）.b-FGF in the late stage of MMD were compared with atherosclerosis patients and healthy persons，the differences were statistically significant（P＜0.05）.VEGF in the early stage of MMD were compared with atherosclerosis patients and healthy persons，the differences were statistically significant（P＜0.05）.Conclusion HGF，b-FGF and VEGF are involved in the development process of MMD，HGF may play a role in the whole development process in MMD，b-FGF may play a role at the late MMD developing，and VEGF may play a role in early development in MMD.

Moyamoya disease；Hepatocyte growth factor；Basic fibroblast growth factor；Blood vessels origin of growth factor

R743.3

A

1673-7210（2016）06（a）-0046-04

2016-03-01本文編輯：蘇 暢）

江西省衛(wèi)生廳科技計(jì)劃（20141016）。

吳凌峰（1972-），男，博士，主任醫(yī)師；研究方向：腦血管病基礎(chǔ)與臨床研究。

吳曉牧（1958-），男，博士，主任醫(yī)師，教授，博士研究生導(dǎo)師；研究方向：腦血管病和神經(jīng)免疫。