遼西傳統(tǒng)發(fā)酵食品中抗單增李斯特菌乳酸菌的篩選與鑒定

呂欣然,李　瑩,馬歡歡,繆璐歡,杜靜芳,白鳳翎,李　春,勵建榮

(渤海大學食品科學與工程學院,遼寧省食品安全重點實驗室,生鮮農(nóng)產(chǎn)品貯藏加工及安全控制技術(shù)國家地方聯(lián)合工程研究中心,遼寧錦州 121013)

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遼西傳統(tǒng)發(fā)酵食品中抗單增李斯特菌乳酸菌的篩選與鑒定

呂欣然,李瑩,馬歡歡,繆璐歡,杜靜芳,白鳳翎*,李春,勵建榮

(渤海大學食品科學與工程學院,遼寧省食品安全重點實驗室,生鮮農(nóng)產(chǎn)品貯藏加工及安全控制技術(shù)國家地方聯(lián)合工程研究中心,遼寧錦州 121013)

目的:從傳統(tǒng)遼西發(fā)酵食品中篩選對單增李斯特菌具有良好拮抗作用的乳酸菌菌株。方法:采用雙層瓊脂擴散法篩選乳酸菌優(yōu)良菌株。采用酸性實驗、熱處理實驗、蛋白酶敏感性實驗分析拮抗特性,利用生長曲線分析拮抗物質(zhì)形成過程,掃描電鏡分析細胞結(jié)構(gòu)完整性。通過生理生化實驗和16S rRNA序列進行菌株鑒定。結(jié)果:從13株乳酸菌中篩選出1株抗單增李斯特菌活性較強的菌株DL3,抗菌物質(zhì)存在于無細胞上清液中。經(jīng)胃蛋白酶處理后抑菌活性喪失了27.50%,胰蛋白酶和木瓜蛋白酶可使抑菌活性完全喪失,經(jīng)121 ℃處理15 min后,抑菌活性仍保留 96.88%,在pH2.5～6.5時具有抑菌活性,表明菌株DL3產(chǎn)生的抑菌物質(zhì)可能為細菌素。添加菌株DL3無細胞上清液可使單增李斯特菌的生長曲線延遲期和穩(wěn)定期延長4 h,顯著地縮短了其生長期。掃描電鏡結(jié)果表明經(jīng)菌株DL3無細胞上清液處理的單增李斯特菌菌體變小且邊緣模糊不清,其中一端細胞原生質(zhì)發(fā)生泄漏。經(jīng)鑒定菌株DL3為植物乳桿菌。結(jié)論:獲得1株對單增李斯特菌有較強拮抗活性的植物乳桿菌DL3,該菌的拮抗活性物質(zhì)可能為細菌素,可作為食品防腐劑潛在的應用菌株。

傳統(tǒng)發(fā)酵食品,乳酸菌,拮抗,單增李斯特菌,篩選與鑒定

乳酸菌(lactic acid bacteria,LAB)通過生態(tài)位競爭、形成酸性環(huán)境、產(chǎn)生拮抗性代謝產(chǎn)物和細菌素等方式控制食品中的腐敗和致病微生物[1],傳統(tǒng)發(fā)酵食品如發(fā)酵乳制品、泡菜、發(fā)酵香腸、酵頭和發(fā)酵魚制品[2-6]等都是拮抗性乳酸菌的重要來源。

乳酸菌素是乳酸菌在生長代謝過程中通過自身核糖體合成的一類具有抑菌活性的蛋白類物質(zhì),具有高效、安全、無毒等特點[7]。通常分為四類:Ⅰ類羊毛硫細菌素,分子量小于5 ku,帶有特殊的氨基酸,nisin就屬于這一類[8];Ⅱ類細菌素分子量小于10 ku,對熱穩(wěn)定且無修飾的肽段[9];Ⅲ類細菌素分子量大于30 ku,為不耐熱的蛋白質(zhì)[8];Ⅳ類細菌素可與其他基團形成復雜的大分子化合物[10]。乳酸菌素是與食品發(fā)酵密切相關(guān)的次級代謝產(chǎn)物,現(xiàn)已成為天然防腐劑研究的熱點。

單增李斯特菌(Listeriamonocytogenes)是一種廣泛存在于乳制品、水產(chǎn)品和肉制品等食品中的嗜冷菌,能在1～45 ℃和低pH條件下生長,還具有耐鹽能力。因此,由單增李斯特菌導致的食物中毒非常普遍[11]?？刂剖称分袉卧隼钏固鼐奈廴臼鞘称钒踩^為突出的問題之一。目前篩選抗單增李斯特菌的乳酸菌菌株所產(chǎn)生的乳酸菌素包括乳桿菌素sakacin、乳酸片球菌素和明串珠菌素[12]。Chahad等[13]從鱸魚和海鯉中分離84株乳酸菌,鑒定為腸球菌屬,其無細胞上清液經(jīng)蛋白酶和熱處理后對單增李斯特菌仍具有抑菌活性,抑菌活性物質(zhì)為Ⅱ型細菌素。Kingcha等[14]研究發(fā)現(xiàn)產(chǎn)細菌素的PediococcuspentosaceusBCC 3772對單增李斯特菌有較強的抑菌活性,可接種到傳統(tǒng)發(fā)酵香腸Nahm作為發(fā)酵劑及改善產(chǎn)品的品質(zhì)。目前,由于Nisin殺菌機制與應用比較清楚,已被很多國家批準應用于食品工業(yè)[15]。而對于其他類型的乳酸菌素的研究還很有限,分離和篩選產(chǎn)乳酸菌素的優(yōu)良菌株,并對其抑菌作用和機理進行深入研究,為研發(fā)高效的生物防腐劑具有重要的理論和應用價值。

本文從遼西地區(qū)腌制的酸菜、泡菜、芥菜、黃豆醬和酸黃瓜中分離7株乳酸菌和保藏的6株標準乳酸菌為供試菌,以標準單增李斯特菌為指示菌,采用雙層平板瓊脂擴散法篩選產(chǎn)細菌素的乳酸菌,并對其抑菌活性和抑菌物質(zhì)的特性及生理特性進行初步研究,為開發(fā)乳酸菌生物防腐劑奠定基礎。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

實驗供試菌株見表1,其中7株從遼西地區(qū)傳統(tǒng)發(fā)酵酸菜、朝鮮泡菜、芥菜、黃豆醬和酸黃瓜中分離,6株標準乳酸菌由渤海大學食品科學研究院保藏提供。指示菌株單增李斯特菌(L.monocytogenesATCC19115),上海北諾生物科技有限公司。

表1　分離菌株和標準菌株一覽表Table 1　List of strains with isolate and standard

MRS培養(yǎng)基,胰酪蛋白胨培養(yǎng)基(TSB)北京奧博星生物技術(shù)有限公司;胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶華藍化學有限公司;其他化學試劑北京奧博星生物技術(shù)有限公司。乳酸菌生化鑒定管杭州天和微生物試劑有限公司;細菌基因組DNA快速抽提試劑盒、DNA marker-D、Taq PCR Master mix上海生工生物工程有限公司。

SPX-250生化培養(yǎng)箱寧波海曙賽福實驗儀器廠;5804R高速冷凍離心機德國Eppendorf公司;GI54DS高壓滅菌鍋至微儀器有限公司;DL-CJ-2N超級潔凈工作臺北京市東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司;VICTORTMX3酶標儀美國珀金埃爾墨股份有限公司,E-1045鍍金儀日本日立公司;S-4800掃描電鏡日本日立公司;PCR儀,德國Eppendorf公司;Quantity one凝膠成像系統(tǒng)美國Bio-Rad公司;IKA Vortex GENIUS 3振蕩器德國IKA公司。

1.2實驗方法

1.2.1無細胞上清液(cell free supernatants,CFS)、菌體和菌懸液的制備

1.2.1.1乳酸菌CFS和菌體將-80 ℃保存的菌株接種于MRS液體培養(yǎng)基,37 ℃?zhèn)鞔囵B(yǎng)2次后,以2%的接種量接種于500 mL MRS培養(yǎng)基,靜置37 ℃培養(yǎng)12 h。4 ℃下 6000 r/min離心15 min,上清液用0.45 μm濾菌器過濾除菌,得CFS 425 mL,菌體用無菌生理鹽水洗滌3次,重懸于生理鹽水中使菌濃度約106CFU/mL,4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.1.2單增李斯特菌菌懸液將-80 ℃保存的菌株接種于TSB培養(yǎng)基37 ℃培養(yǎng)12 h,以1.0%的接種量傳代培養(yǎng)1次后,用無菌生理鹽水進行10倍梯度稀釋,制成約106CFU/mL菌懸液,冰箱4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2菌株抑菌作用測定以乳酸菌為供試菌,單增李斯特菌為指示菌,乳酸菌CFS和菌體的抑菌作用參照文獻[16]采用雙層瓊脂擴散法進行測定。

1.2.3乳酸菌CFS抑菌作用的影響因素實驗

1.2.3.1pH的影響將乳酸菌CFS用1.0 mol/L的NaOH和1.0 mol/L乳酸分別調(diào)pH為2.5、3.5、4.0、4.5、5.5、6.5,同時將MRS液體培養(yǎng)基調(diào)制相同的pH為對照,按1.2.2的方法進行測定。

1.2.3.2熱處理的影響將乳酸菌CFS在50 ℃和100 ℃下作用30 min,在121 ℃下作用15 min,同時以乳酸菌CFS作為對照,按1.2.2的方法進行測定。

1.2.3.3酶處理的影響將乳酸菌CFS分別用1.0 mol/L NaOH或1.0 mol/L HCl調(diào)至酶的最佳pH(胃蛋白酶pH2.0,木瓜蛋白酶pH7.0,胰蛋白酶pH7.5),分別添加至乳酸菌CFS使其終濃度為1.0 mg/mL。在37 ℃下孵育4 h,調(diào)pH至代謝產(chǎn)物初始pH,同時以乳酸菌CFS為對照,按1.2.2的方法進行測定。

1.2.4乳酸菌CFS對單增李斯特菌生長的影響

1.2.4.1最小抑菌濃度MIC的測定采用液體二倍稀釋法,用TSB液體培養(yǎng)基將濃縮100倍的乳酸菌CFS稀釋至終濃度分別為32.0、16.0、8.0、4.0、2.0、1.0、0.5、0.25、0.125 mg/mL。分別取5.0 mL為實驗組,以不加CFS的TSB培養(yǎng)基為對照組,分別加入200 μL指示菌菌懸液,30 ℃ 150 r/min培養(yǎng)24 h,以肉眼觀察,沒有變渾濁的最低濃度為CFS的最小抑菌濃度,每組重復3次。

1.2.4.2乳酸菌CFS對單增李斯特菌生長的影響在106CFU/mL指示菌菌懸液中加入乳酸菌CFS,使其終濃度為0.4 MIC,置于30 ℃下150 r/min振蕩培養(yǎng)24 h。每隔2 h用酶標儀在590 nm測OD值,同時用不加CFS的菌懸液作對照,以時間為橫坐標,以OD值為縱坐標制作乳酸菌生長抗菌活性曲線。

1.2.5掃描電鏡分析乳酸菌CFS對單增李斯特菌細胞結(jié)構(gòu)的影響按照文獻[17]的方法稍微調(diào)整。以加入0.4倍MIC濃度的CFS為實驗組,以不加CFS為對照組。兩組各取5 mL分別加入200 μL濃度為106CFU/mL單核增生李斯特菌菌懸液,30 ℃下,150 r/min培養(yǎng)12 h。6000 r/min離心10 min收集菌體,菌體用無菌水洗滌3次。菌體在2.5%戊二醛0.1 mol/L(pH7.2)磷酸緩沖液中4 ℃ 固定12 h,用0.1 mol/L(pH7.2)磷酸緩沖液洗滌3次洗去殘留的戊二醛,洗滌后的菌體用無菌水懸浮,懸浮時菌體密度不要過大。取適量滴于潔凈蓋玻片上,真空干燥12 h,噴金,用掃描電鏡進行觀察。

1.2.6乳酸菌菌株鑒定

1.2.6.1生理生化實驗參照東秀珠的《常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊》和凌代文的《乳酸細菌分類鑒定及實驗方法》進行生理生化鑒定[18-19]。

1.2.6.2分子生物學鑒定乳酸菌DNA采用細菌基因組試劑盒提取。PCR擴增引物為:27f:5′-AGAG TTTGATCCTGGCTCAG-3′,1492r:5′-TACGGYTACC TTTGTTACGACTT-3′。PCR擴增反應體系(25 μL):上下游引物各1.0 μL,DNA模板1.0 μL,Taq PCR Master mix 12.5 μL,ddH2O 9.5 μL。PCR擴增反應程序:94 ℃ 2 min,94 ℃ 1 min,60 ℃ 1 min,72 ℃ 90 s,循環(huán)30次,4 ℃保溫。PCR純化產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳分析后送上海生工生物工程股份有限公司測序。測得序列登陸GenBank進行BLAST同源性比較,應用MEGA 5.0軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進化樹。

1.2.7數(shù)據(jù)處理所有實驗均重復測定 3 次,數(shù)據(jù)采用平均值±標準差表示。采用SPSS 18.0軟件對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計和顯著性分析,采用Origin 8.0軟件進行制圖。

2　結(jié)果與討論

2.1乳酸菌對單增李斯特菌的抑制作用

13株乳酸菌對單增李斯特菌抑菌作用結(jié)果見表2,從中可以看出,菌株DL1、DL3、DL10、C10、CH-2、D400、LP-B和LH-9均具有抑菌活性,而DL6、DL11、DL12、DL15和RH11均無抑菌效果,菌株DL10的抑菌直徑最大達到14.66 mm。13株乳酸菌菌體對單增李斯特菌均沒有抑菌活性。結(jié)果表明菌株的抑菌活性物質(zhì)存在于乳酸菌的無細胞代謝產(chǎn)物中。

表2　乳酸菌對單增李斯特菌的抑制作用結(jié)果Table 2　Antagonistic effect of LAB against L. monocytogenes

注:“-” 表示無抑菌活性。

2.2乳酸菌CFS抑菌作用的影響因素實驗結(jié)果

2.2.1 pH的影響圖1是8株對單增李斯特菌有抑菌活性的乳酸菌株在不同pH條件下的抑菌活性變化情況,從圖中可看出,乳酸菌CFS的抑菌活性隨著pH的升高呈現(xiàn)逐漸降低趨勢,其中,當pH2.5時,總體抑菌效果最好;當pH4.0時,總體抑菌活性明顯降低,此時,對照組則完全失去抑菌活性,表明菌株CFS中除含有乳酸等酸性代謝物質(zhì),還具有其他抑菌活性產(chǎn)物。當pH4.5～6.5時,只有菌株DL3還具有抑菌活性,表明該菌株的抑菌活性成分在弱堿性條件下仍具有抑菌作用。據(jù)Tramer等[20]研究發(fā)現(xiàn)Nisin在pH2.0時抑菌穩(wěn)定性很好,在pH5.0時失去40%活性,在pH6.0時失去90%的活性。菌株DL3可能產(chǎn)生類似Nisin抑菌物質(zhì),因此,選擇DL3為后續(xù)研究菌株。

圖1　pH對菌株DL3拮抗單增李斯特菌活性的影響Fig.1　Effect of pH on the antagonistic activity of strain DL3 against L. monocytogenes

2.2.2熱處理的影響不同溫度熱處理后,菌株DL3 CFS的抑菌活性變化結(jié)果如表3所示,從中可以看出,菌株DL3的代謝產(chǎn)物經(jīng)50 ℃ 30 min、100 ℃ 30 min和121 ℃處理15 min后,對單增李斯特菌的抑菌活性仍保留原活性的98.96%、98.64%和96.88%,表明其代謝產(chǎn)物對熱具有較強的穩(wěn)定性。

表3　熱處理對菌株DL3抗單增李斯特菌活性的影響Table 3　Effect of thermal treatment on the antagonistic activity of strain DL3 against L. monocytogenes

2.2.3酶處理的影響表4是菌株DL3 CFS經(jīng)胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶處理后抗單增李斯特菌的抑菌結(jié)果,從中可以看出,菌株代謝產(chǎn)物經(jīng)胃蛋白酶處理后對單增李斯特菌的抑菌活性丟失了27.50%,經(jīng)胰蛋白酶和木瓜蛋白酶處理后的抑菌活性完全喪失,表明菌株DL3的抑菌活性物質(zhì)對胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶均敏感,而對胃蛋白酶仍保留一定活性,可能是胃蛋白酶的最適pH偏低的緣故。實驗結(jié)果可進一步證實菌株DL3的抑菌活性物質(zhì)可能是細菌素類物質(zhì)。

表4　酶處理對菌株DL3抗單增李斯特菌活性的影響Table 4　Effect of proteases treatment on the antagonistic activity of strain DL3 against L. monocytogenes

注:“-”代表無抑菌活性。

2.3乳酸菌CFS對單增李斯特菌生長的影響

通過肉眼觀察,菌株DL3對單增李斯特菌的最小抑菌濃度MIC為4 mg/mL。在單增李斯特菌菌懸液添加菌株DL3 CFS后的時間生長曲線如圖2所示,從圖中可以看出,添加乳酸菌CFS實驗組的單增李斯特菌的生長曲線相對滯后,其中進入延遲期和穩(wěn)定期的時間比對照組延長4 h,明顯縮短了單增李斯特菌的對數(shù)期的生長速率和生長期,平均的細菌OD值與對照組呈現(xiàn)顯著性下降,表明乳酸菌CFS對單增李斯特菌生長具有較強的抑制作用。Saraoui等[21]研究表明,單增李斯特菌與菌株LactococcuspisciumCNCMI-4031混合培養(yǎng)24 h后,數(shù)量減少了3～4 log CFU/g,表明菌株Lc.pisciumCNCMI-4031能抑制單增李斯特菌的生長速率。本研究結(jié)果與其結(jié)果相類似。

圖2　菌株DL3 CFS對單增李斯特菌生長的影響Fig.2　Effect of DL3 CFS on the growth curve of L. monocytogenes

2.4乳酸菌CFS對單增李斯特菌細胞結(jié)構(gòu)作用的掃描電鏡結(jié)果

圖3是單增李斯特菌細胞與菌株DL3 CFS共同作用后掃描電鏡觀察菌體細胞的結(jié)果,從圖中可以看出,未處理單增李斯特菌細胞形態(tài)完整,呈桿狀,兩端圓鈍,且表面圓潤較光滑。經(jīng)CFS處理的菌體細胞結(jié)構(gòu)不完整,菌體變小且邊緣模糊不清,其中一端發(fā)生細胞原生質(zhì)泄漏。說明乳酸菌CFS對單增李斯特菌細胞結(jié)構(gòu)具有較強的損傷破壞作用。

圖3　乳酸菌DL3 CFS對單增李斯特菌細胞結(jié)構(gòu)的影響Fig.3　Effect of DL3 CFS on the cells structure of L. monocytogenes注:a:對照組,b:實驗組。

2.5乳酸菌菌株鑒定結(jié)果

表5為菌株DL3的生理生化鑒定結(jié)果。通過結(jié)果可以看出菌株DL3可發(fā)酵蔗糖、甘露醇、甘露糖、山梨醇、纖維二糖、麥芽糖、水楊苷、葡萄糖、蜜二糖、阿拉伯糖、乳糖、半乳糖、果糖、七葉苷等多種糖類,不是以氧化葡萄糖作為唯一的碳源,明膠不液化。查閱文獻[18-19]可初步斷定菌株為植物乳桿菌(Lb.plantarum)。

表5　菌株DL3的生理生化鑒定結(jié)果Table 5　Physiological and biochemical results of strain DL3

注:“+”表示生理生化反應呈陽性,“-” 表示生理生化反應呈陰性。

圖4是菌株DL3的16S rRNA基因擴增電泳圖,從圖中可以看到在1500 bp處出現(xiàn)特異性亮帶,表明目標片段被成功擴增。將菌株測序結(jié)果與NCBI數(shù)據(jù)庫中已知序列進行比對,構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹,結(jié)果見圖5,由圖5可以看出,菌株DL3與Lb.plantarum(GU 138604)在同一個分支上,同源性為98%,結(jié)合菌株的初步鑒定結(jié)果,菌株DL3鑒定為植物乳桿菌(Lb.plantarum)。

圖4　菌株DL3的16S rRNA基因擴增電泳圖Fig.4　PCR amplification of 16S rRNA gene of strain DL3

圖5　菌株DL3的16S rRNA系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.5　The phylogenetic tree for sequences of strain DL3

3　結(jié)論

從傳統(tǒng)遼西發(fā)酵酸菜中篩選到1株具有良好抗單增李斯特菌的乳酸菌菌株DL3,其抗菌作用來自于CFS中。在低酸性條件下,菌株DL3表現(xiàn)較強抗菌活性,且在pH4.5～6.5時仍具有抑菌活性。菌株CFS經(jīng)胃蛋白酶處理后對單增李斯特菌抑菌活性丟失了27.50%,胰蛋白酶和木瓜蛋白酶可使抑菌活性完全丟失,在121 ℃處理15 min后抑菌活性仍保留96.88%,表明菌株DL3產(chǎn)生的抑菌活性物質(zhì)可能為細菌素。添加乳酸菌CFS可使單增李斯特菌的生長曲線延遲期和穩(wěn)定期延長4 h,顯著地縮短了單增李斯特菌的生長期,表明乳酸菌CFS較強地抑制單增李斯特菌的生長。掃描電鏡結(jié)果表明經(jīng)乳酸菌CFS處理的單增李斯特菌菌體細胞結(jié)構(gòu)不完整,菌體變小且邊緣模糊不清,其中一端發(fā)生細胞原生質(zhì)泄漏。經(jīng)鑒定菌株DL3為植物乳桿菌(Lb.plantarum)。

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Screening and identification of lactic acid bacteria with anti-Listeriamonocytogenesfrom traditional fermented food in western Liaoning province

LV Xin-ran,LI Ying,MA Huan-huan,MIAO Lu-huan,DU Jing-fang,BAI Feng-ling*,LI Chun,LI Jian-rong

(College of Food Science and Technology,Bohai University;Food Safety Key Lab of Liaoning Province;National & Local Joint Engineering Research Center of Storage,Processing and Safety Control Technology for Fresh Agricultural and Aquatic Products,Jinzhou 121013,China)

Objective:To isolate lactic acid bacteria(LAB)from traditional fermented foods in western Liaoning province,with outstanding inhibitory activity againstListeriamonocytogenes. Methods:LAB with anti-L.monocytogeneswere screened by double agar diffusion methods. The antibacterial substance was analyzed using acid test,heat-treated test and protease sensitivity test,the forming process of antibacterial substance was analyzed by growth curve,the integrity of cellular structure was observed by scanning electron microscope. The strains were identified by biochemical characteristics and 16S rRNA sequence analysis. Results:Strain DL3 with outstanding inhibitory activity againstL.monocytogeneswas screened from 13 strains LAB,and the antibacterial substance mainly existed in cell-free supernatants(CFS). The inhibitory activity of CFS lost 27.50% by treating with pepsin,and inhibitory activity entirely lost by treating with trypsin and papain. The antibacterial activity of CFS still remained 96.88% by thermal treatment under 121 ℃ for 15 min,and was effective within pH2.5～pH6.5. The inhibitory substance of strain DL3 produced was preliminary determined as bacteriocin. The growth curve ofL.monocytogeneslag phase and stationary phase were extended four hours by mixing CFS of LAB,which significantly shorted the logarithmic growth ofL.monocytogenes. Observation under scanning electron microscope revealed that cell ofL.monocytogenesbecame smaller and edge blur,and an apparent hole at one of the cell poles with intracellular component leakage. Strain DL3 was identified asLactobacillusplantarum. Conclusion:Lb.plantarumDL3 with outstanding inhibitory activity againstL.monocytogeneswas screened,and its antibacterial substance was preliminary determined as bacteriocin. The strain DL3 had great application prospects on the development of natural bio-preservative.

traditional fermented foods;lactic acid bacteria;antagonism;Listeriamonocytogenes;screening and identification

2015-04-29

呂欣然(1990-)，女，碩士研究生，研究方向：食品質(zhì)量與安全控制，E-mail:lvxinran1990@163.com。

白鳳翎(1964-)，男，博士，教授，研究方向：食品質(zhì)量與安全控制和食品微生物學,E-mail:baifling1990@163.com。

“十二五”國家科技支撐計劃課題(2012BAD29B06)；遼寧省高等學校創(chuàng)新團隊課題(LT2014024)。

TS201.3

A

1002-0306(2016)03-0143-06

10.13386/j.issn1002-0306.2016.03.022