• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    正相高效液相色譜法測(cè)定L-蘋果酸中的對(duì)映異構(gòu)體D-蘋果酸

    2016-09-07 03:47:41段先哲譚凱旋謝焱石馮志剛韓世禮
    分析儀器 2016年2期
    關(guān)鍵詞:對(duì)映異構(gòu)蘋果酸精密度

    段先哲 李 南* 譚凱旋 謝焱石 陳 亮 胡 楊 馮志剛 韓世禮 馬 強(qiáng)

    (1. 南華大學(xué),衡陽(yáng) 421001; 2. 湖南省核燃料循環(huán)技術(shù)與裝備協(xié)同創(chuàng)新中心,衡陽(yáng) 421001)

    ?

    正相高效液相色譜法測(cè)定L-蘋果酸中的對(duì)映異構(gòu)體D-蘋果酸

    段先哲1,2李南1,2*譚凱旋1謝焱石1陳亮1胡楊1馮志剛1韓世禮1馬強(qiáng)1

    (1. 南華大學(xué),衡陽(yáng) 421001; 2. 湖南省核燃料循環(huán)技術(shù)與裝備協(xié)同創(chuàng)新中心,衡陽(yáng) 421001)

    建立了測(cè)定L-蘋果酸中對(duì)映異構(gòu)體D-蘋果酸的的正相高效液相色譜檢測(cè)方法。色譜柱為手性色譜柱CHIRALPAK-IC(4.6×250mm;5μm),流動(dòng)相為正己烷∶異丙醇∶三氟乙酸=80∶20∶0.1,流速為0.5mL/min,進(jìn)樣量為100μL,檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm,柱溫為35℃。系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)中L-蘋果酸和D-蘋果酸的理論塔板數(shù)大于5000,L-蘋果酸與相鄰峰的分離度為2.6,D-蘋果酸與相鄰峰的分離度為2.9。此方法檢測(cè)L-蘋果酸中的D-蘋果酸敏度高,分離度良好。溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)中,在24小時(shí)內(nèi)測(cè)定D-蘋果酸含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.78%,溶液在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。精密度實(shí)驗(yàn)中6次重復(fù)進(jìn)樣D-蘋果酸含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.59%,精密度良好。L-蘋果酸的檢出限為0.22ng。該方法可用于分離L-蘋果酸及其對(duì)映異構(gòu)體D-蘋果酸。

    L-蘋果酸對(duì)映異構(gòu)體D-蘋果酸正相高效液相色譜法

    蘋果酸,又名2-羥基丁二酸,有兩種對(duì)映異構(gòu)體,即D-蘋果酸和L-蘋果酸。大自然中,蘋果酸以3種形式存在,即D-蘋果酸、L-蘋果酸及其混合物DL-蘋果酸。L-蘋果酸會(huì)在人體中自然產(chǎn)生并具有生物活性,是人體一種必須的有機(jī)酸,作為性能優(yōu)異的食品添加劑和功能性食品廣泛應(yīng)用于食品行業(yè)中;D-蘋果酸的生理活性低,生物體內(nèi)積累過量的 D-蘋果酸時(shí)會(huì)產(chǎn)生病變[1];美國(guó)糧食和藥物管理局(FDA)規(guī)定DL-蘋果酸不能用于嬰兒食品添加劑[2]。在醫(yī)藥行業(yè),蘋果酸常作為一種藥物成分添加在一些藥物制劑中,能明顯提高藥物主要成分的吸收率;蘋果酸還可以治療肝病、貧血、免疫力低下等多種疾病;在藥物研究中蘋果酸作為一種藥物成分,就必須嚴(yán)格控制其本身帶來(lái)的其它雜質(zhì),必須嚴(yán)格控制D-蘋果酸的限度,所以對(duì)L-蘋果酸及其中的D-蘋果酸的測(cè)定方法的研究具有重大意義。目前國(guó)內(nèi)對(duì)蘋果酸含量測(cè)定的方法有酶法[2]、生物傳感器法[3]、雙波長(zhǎng)分光光度法[4]、離子色譜法[5-8]、氣相色譜法[9,10]、毛細(xì)管電泳法[11,12]和高效液相色譜法[13-22]等方法。酶法雖操作簡(jiǎn)易,但由于催化反應(yīng)的酶本身特異性不高,易于催化其它底物,使測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生較大誤差。生物傳感器法,需要制作兩種電極,并且需要分別測(cè)定D-蘋果酸和L-蘋果酸,操作比較繁瑣。其它方法對(duì)蘋果酸的測(cè)定都只是針對(duì)D-蘋果酸和L-蘋果酸混合物的含量測(cè)定,并不能有效區(qū)分這兩種異構(gòu)體。而本研究通過采用手性色譜柱CHIRALPAK-IC和對(duì)分析方法的優(yōu)化所建立的正相高效液相色譜法,是一種分離并測(cè)定L-蘋果酸及其對(duì)映異構(gòu)體D-蘋果酸的準(zhǔn)確、靈敏、高效、便捷的方法。

    1 實(shí)驗(yàn)部分

    1.1儀器與試劑

    島津HPLC-2010C ;CPA225D型電子天平(賽多利斯)。

    L-蘋果酸標(biāo)準(zhǔn)品(中國(guó)藥品生物制品檢定所);DL-蘋果酸標(biāo)準(zhǔn)品(中國(guó)藥品生物制品檢定所); L-蘋果酸原料(中照力德化工有限公司;含量:99.31%)。

    1.2色譜條件

    色譜柱CHIRALPAK-IC (4.6×250mm;5μm);進(jìn)樣量100μL ; 測(cè)定波長(zhǎng)210nm ;柱溫:35oC;流動(dòng)相為正己烷∶異丙醇∶三氟乙酸=80∶20∶0.1;流速0.5mL/min。

    1.3溶液的配制

    稱取一定量的DL-蘋果酸標(biāo)準(zhǔn)品加流動(dòng)相配制成濃度為1mg/mL的DL-蘋果酸溶液;稱取一定量的L-蘋果酸原料加流動(dòng)相配制成濃度為1mg/mL的L-蘋果酸供試溶液;取L-蘋果酸供試溶液用流動(dòng)相稀釋100倍,得到其1%自身對(duì)照溶液。D-蘋果酸含量按照1%自身對(duì)照計(jì)算,其計(jì)算公式為:D-蘋果酸含量(%)=A1/A2(注:A1為供試液中D-蘋果酸峰面積,A2為1%自身對(duì)照溶液中L-蘋果酸峰面積)。

    2 結(jié)果與討論

    2.1檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

    用紫外分光光度計(jì)對(duì)L-蘋果酸溶液和DL-蘋果酸溶液進(jìn)行紫外全波長(zhǎng)掃描,最大吸收波長(zhǎng)為210nm,所以確定檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm。

    2.2色譜條件的優(yōu)化

    取上述DL-蘋果酸溶液按照上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定,對(duì)比了各條件下D-蘋果酸和L-蘋果酸的保留時(shí)間和分離情況,見表1。流速變化測(cè)定結(jié)果比較表明,流速越高,D-蘋果酸和L-蘋果酸保留時(shí)間越短,色譜柱壓力越大,在流速為1.0mL/min時(shí)色譜柱壓力為3.4MPa,其值較高,所以為了延長(zhǎng)色譜柱的壽命,選擇流速為0.5mL/min。通過調(diào)整流動(dòng)相三相的比例得知,異丙醇濃度越大,保留時(shí)間越短,D-蘋果酸與相鄰峰的分離度越小,當(dāng)流動(dòng)相為正己烷∶異丙醇∶三氟乙酸=90∶10∶0.1時(shí),保留時(shí)間太長(zhǎng);當(dāng)流動(dòng)相為正己烷∶異丙醇∶三氟乙酸=70∶30∶0.1時(shí),保留時(shí)間太短,D-蘋果酸和L-蘋果酸的出峰時(shí)間間隔太短,D-蘋果酸與相鄰峰的分離度為2.6;當(dāng)流動(dòng)相為正己烷∶異丙醇∶三氟乙酸=80∶20∶0.1時(shí),保留時(shí)間合適, D-蘋果酸峰無(wú)雜質(zhì)干擾,D-蘋果酸與相鄰峰的分離度為3.2,分離度良好;取L-蘋果酸供試液進(jìn)行測(cè)定,進(jìn)樣量50μL和100μL對(duì)比結(jié)果顯示,100μL時(shí),D-蘋果酸峰高比較合適。所以最終確定的色譜條件:進(jìn)樣量100uL, 測(cè)定波長(zhǎng)210nm,柱溫35℃,流動(dòng)相為正己烷∶異丙醇∶三氟乙酸=80∶20∶0.1,流速0.5mL/min。

    表1 色譜條件的優(yōu)化

    2.3系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)

    取空白溶劑、L-蘋果酸供試溶液在上述色譜條件下進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果見表2。結(jié)果顯示,空白溶劑對(duì)樣品測(cè)定不產(chǎn)生干擾,L-蘋果酸的保留時(shí)間為11.90min,D-蘋果酸的保留時(shí)間為13.52min, L-蘋果酸與相鄰峰的分離度為2.6,D-蘋果酸與相鄰峰的分離度為2.9,理論塔板數(shù)大于5000,此方法檢測(cè)L-蘋果酸中的D-蘋果酸敏度高,分離度良好。

    表2 方法的系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)

    2.4溶液穩(wěn)定性

    配制1mg/mL L-蘋果酸供試溶液、1%自身對(duì)照溶液,按照上述色譜方法分別在0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h、24h進(jìn)樣,結(jié)果見表3。結(jié)果表明,在24小時(shí)內(nèi)測(cè)定D-蘋果酸含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.78%,溶液在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

    表3 溶液穩(wěn)定性結(jié)果

    注:A為峰面積

    2.5精密度

    配制1mg/mL L-蘋果酸供試溶液、1%自身對(duì)照溶液,按照上述色譜方法重復(fù)進(jìn)樣6針,結(jié)果見表4。結(jié)果表明,6次重復(fù)進(jìn)樣D-蘋果酸含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.59%,精密度良好。

    表4 精密度結(jié)果

    注:A為峰面積

    2.6方法的檢出限

    配制1mg/mL的L-蘋果酸供試溶液,按照上述色譜方法,不斷的稀釋進(jìn)樣,當(dāng)信噪比S/N為3時(shí),即為L(zhǎng)-蘋果酸的檢出限,經(jīng)計(jì)算得出檢出限為0.22ng。

    3 結(jié)論

    本實(shí)驗(yàn)建立了一種簡(jiǎn)單有效的測(cè)定L-蘋果酸中的其對(duì)映異構(gòu)體D-蘋果酸的檢測(cè)方法。結(jié)果表明,系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)說(shuō)明此方法檢測(cè)L-蘋果酸中的D-蘋果酸靈敏度高,分離度良好。溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)中,在24小時(shí)內(nèi)測(cè)定D-蘋果酸含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.78,溶液在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。精密度實(shí)驗(yàn)中6次重復(fù)進(jìn)樣D-蘋果酸含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.59,精密度良好。L-蘋果酸的檢出限為0.22ng。該方法簡(jiǎn)便、快速、有效、靈敏、具有良好的精密度,可作為L(zhǎng)-蘋果酸中的對(duì)映異構(gòu)體D-蘋果酸的定量分析方法。

    [1]Fabio C,Umberto S,Claudio R. Optimization of the determination of organic acids and sugars in fruit juices by ion-exclusion liquid chromatography [J]. Journal of Food Compo and Anal.,2005,18(3):121-130.

    [2] 吳清平, 周小燕. L-蘋果酸研究進(jìn)展[J].微生物學(xué)通報(bào), 1990, (1):30-33.

    [3]蔣宏偉, 李建華, 姚敏杰,等. D-蘋果酸快速檢測(cè)方法的研究[J]. 陜西農(nóng)業(yè)科學(xué),2009, (3):32-34.

    [4]干 寧, 葛從辛. 無(wú)試劑二氧化鈦凝膠酶?jìng)鞲衅鳈z測(cè)蘋果酸對(duì)映異構(gòu)體研究[J].中國(guó)食品學(xué)報(bào),2006,6(6):105-111.

    [5]徐志利, 勞瑞珍,鄧兆勇,等. 雙波長(zhǎng)分光光度法測(cè)定心臟基礎(chǔ)液中L-蘋果酸的含量[J]. 廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)[J], 1997, 13 (4): 240-241.

    [6]朱巖, 徐素君, 王素芬.不完全抑制電導(dǎo)檢測(cè)離子色譜法測(cè)定飲料中的蘋果酸[J]. 分析化學(xué)研究簡(jiǎn)報(bào),1999, 27(9):1050-1053.

    [7]吳玉萍, 宋春滿, 雷麗萍,等. 梯度淋洗離子色譜法測(cè)定煙草中的蘋果酸、檸檬酸和陰離子[J]. 分析試驗(yàn)室,2006, 25(7):31-34.

    [8]王海藍(lán),李雪萍,陳維信. 離子色譜法測(cè)定貯藏期間菠蘿果實(shí)的有機(jī)酸變化[J]. 熱帶作物學(xué)報(bào), 2010,31(10):1720-1725.

    [9]閆巍, 焦霞, 葉明立,等. 離子色譜法測(cè)定威力酸中的有機(jī)酸[J]. 分析試驗(yàn)室,2008, 27(2):38-40.

    [10]施豐成, 鄧發(fā)達(dá), 朱立軍,等. 烤煙中草酸、蘋果酸和檸檬酸含量的分析研究[J]. 中國(guó)煙草學(xué)報(bào), 2010,16(1):6-10.

    [11] 羅 瓊, 薛 冬, 楊 俊,等. 不同卷煙和煙葉中主要非揮發(fā)性有機(jī)酸含量的差異[J]. 煙草科技, 2009, (12):33-37.

    [12]姚玉新, 翟 衡, 趙玲玲,等. 蘋果果實(shí)酸/低酸性狀的SSR分析[J]. 園藝學(xué)報(bào), 2006, 33 (2): 244-248.

    [13]孔紅星, 劉正西, 李利軍. 高效毛細(xì)管電泳—直接紫外檢測(cè)法的應(yīng)用研究[J]. 廣西工學(xué)院學(xué)報(bào), 2003, 14(2):31-33.

    [14]陸敏, 李路華, 馮俊霞,等. 高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定常見水果中的四種有機(jī)酸[J].食品工業(yè)科技, 2009, 30(7):312-316.

    [15]李康樂,吳梧桐, 宋祥珍,等. 高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定藥用蘋果酸中的馬來(lái)酸與富馬酸[J].中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào), 1994, 25(2): 106-108.

    [16]李昌曉,鐘章成,陶建平, 不同水分條件下池杉幼苗根系的蘋果酸、莽草酸含量及生物量[J]. 林業(yè)科學(xué), 2008, 44(10):1-7.

    [17]陳發(fā)興,劉星輝, 陳立松. 枇杷果肉有機(jī)酸組分及有機(jī)酸在果實(shí)內(nèi)的分布[J]. 熱帶亞熱帶植物學(xué)報(bào),2008, 16(3): 236-243.

    [18]唐慧慧,蔡清宇,毛 翼. HPLC法測(cè)定凈烏梅及烏梅炭中檸檬酸和蘋果酸的含量[J]. 中藥材, 2007, 30(1):52-54.

    [19]任建武,王 雁,彭鎮(zhèn)華,等. 3種石斛葉片蘋果酸含量日變化動(dòng)態(tài)研究[J]. 江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 2010, 32(3): 547 -552.

    [20]呂兆林,林西,鄧文紅,等. HPLC法測(cè)定蘋果灑中蘋果酸及乳酸含量[J]. 精細(xì)與專用化學(xué)品, 2012, 20(1):9-13.

    [21]羅陽(yáng), 賀曉光, 楊 軍, 等.HPLC法測(cè)定賀蘭山東麓釀酒葡萄中蘋果酸含量[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2011, 39(33):20541-20542.

    [22]張 聰, 金德慶, 張繼全. RP-HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地山茱萸中沒食子酸與蘋果酸的含量[J]. 上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 2004, 18(3):33-35.

    Determination of enantiomer D-malic acid in L-malic acid by normal-phase high performance liquid chromatography.

    Duan Xianzhe1,2, Li Nan1, 2*, Tan Kaixuan1, Xie Yanshi1, Chen Liang1, Hu Yang1, Feng Zhigang1,Han Shili1, Ma Qiang1

    (1.UniversityofSouthChina,Hengyang421001,China; 2.CooperativeInnovationCenterforNuclearFuelCycleTechnologyandEquipment,Hengyang421001,China)

    The chromatographic column was CHIRALPAK-IC ( 4.6×250mm;5um);the mobie phase was N-hexane∶isopropyl alcohol∶trifluoroacetic acid (80:20:0.1), the flow rate was 0.5ml/min, the injection volume was 100μL, the detection wavelength was at 210 nm, and the column temperature was 35℃. In the suitability experiment, the theoretical plate number of L-malic and D-malic acids were more than 5000, the resolution between L-malic acid and its adjacent peak was 2.6, and the resolution between D-malic acid and its adjacent peak was 2.9, indicating that this method had a high sensitivity and good resolution. In the solution stability experiment, the relative standard deviation of D-malic acid concentration was 5.78% within 24 hours, demonstrating that the solution was stable within 24 hours. In the precision experiment, the relative standard deviation of the D-malic acid concentrations in six repeated sampling was 3.59%, showing a satisfactory precision of this method. The detection limit of L-malic acid was 0.22ng. This method could be used for quantitative determination of D-malic acid in the L-malic acid.

    L-malic acid; enantiomer; D-malic acid; high performance liquid chromatography

    國(guó)家自然科學(xué)基金(41503016);湖南省教育廳優(yōu)秀青年項(xiàng)目(15B201);中國(guó)博士后科學(xué)基金(2015M582334);南華大學(xué)博士啟動(dòng)基金(2014XQD08);國(guó)防基礎(chǔ)科研計(jì)劃項(xiàng)目(B3720110004);南華大學(xué)“蒸湘學(xué)者計(jì)劃”。

    段先哲,男,1985年出生,博士,主要從事地球化學(xué)、儀器分析等方面的研究工作。

    李南,女,1985年出生,碩士,主要從事分析化學(xué)、儀器分析等方面的研究工作,E-mail:linan19851018@163.com。

    10.3936/j.issn.1001-232x.2016.02.006

    猜你喜歡
    對(duì)映異構(gòu)蘋果酸精密度
    水液相下二價(jià)鎂纈氨酸配合物(Val·Mg2+)對(duì)映異構(gòu)的密度泛函理論
    Phosphatidylinositol-3,4,5-trisphosphate dependent Rac exchange factor 1 is a diagnostic and prognostic biomarker for hepatocellular carcinoma
    副波長(zhǎng)對(duì)免疫比濁法檢測(cè)尿微量清蛋白精密度的影響
    淺談化學(xué)構(gòu)型異構(gòu)研究性學(xué)習(xí)教學(xué)
    海水U、Th長(zhǎng)壽命核素的高精密度MC-ICP-MS測(cè)定方法
    高效液相色譜法檢測(cè)苯甲酸阿格列汀對(duì)映異構(gòu)體的含量
    2014年全國(guó)452家實(shí)驗(yàn)室全血銅、鋅、鈣、鎂、鐵檢驗(yàn)項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不精密度分析
    降冰片烷—氯代物種類的探究
    鴨心蘋果酸脫氫酶的分離純化及酶學(xué)性質(zhì)
    殼聚糖和氯化鈣處理對(duì)采后黃冠梨蘋果酸代謝酶和相關(guān)基因表達(dá)的影響
    人人妻人人澡欧美一区二区| 一边摸一边抽搐一进一小说| 国产亚洲欧美98| 99精品在免费线老司机午夜| 国产99白浆流出| 国产av一区二区精品久久| 国产伦人伦偷精品视频| 久久久久性生活片| 怎么达到女性高潮| 三级国产精品欧美在线观看 | 国模一区二区三区四区视频 | 欧美不卡视频在线免费观看 | 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 特级一级黄色大片| 婷婷精品国产亚洲av在线| 午夜免费观看网址| 国产亚洲av嫩草精品影院| 成人亚洲精品av一区二区| 成人永久免费在线观看视频| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 精品免费久久久久久久清纯| 精品欧美一区二区三区在线| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 天天添夜夜摸| 两人在一起打扑克的视频| 怎么达到女性高潮| 亚洲全国av大片| 99精品欧美一区二区三区四区| 精品久久久久久久末码| 一本精品99久久精品77| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 91麻豆精品激情在线观看国产| 最近最新中文字幕大全免费视频| 国产成人啪精品午夜网站| 天堂av国产一区二区熟女人妻 | 一二三四社区在线视频社区8| 国产高清视频在线观看网站| 嫁个100分男人电影在线观看| 精品久久久久久久久久久久久| 国产乱人伦免费视频| 搡老岳熟女国产| 欧美日韩乱码在线| 狂野欧美激情性xxxx| 成人永久免费在线观看视频| 搡老岳熟女国产| 国产伦人伦偷精品视频| 人妻久久中文字幕网| 在线观看舔阴道视频| 好男人电影高清在线观看| 久久午夜综合久久蜜桃| 人妻夜夜爽99麻豆av| 岛国视频午夜一区免费看| 桃红色精品国产亚洲av| 精品国产乱子伦一区二区三区| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 18禁国产床啪视频网站| www.www免费av| 高清在线国产一区| 国产视频一区二区在线看| 一区福利在线观看| 久久亚洲真实| 亚洲在线自拍视频| 久久久久久九九精品二区国产 | 欧美日韩瑟瑟在线播放| av欧美777| 久久久久久久精品吃奶| 成人18禁在线播放| 色哟哟哟哟哟哟| АⅤ资源中文在线天堂| aaaaa片日本免费| 99久久99久久久精品蜜桃| 国产男靠女视频免费网站| 99国产综合亚洲精品| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 曰老女人黄片| 久久亚洲精品不卡| 在线观看午夜福利视频| 日日夜夜操网爽| 精品电影一区二区在线| 久久久精品欧美日韩精品| 免费在线观看成人毛片| 超碰成人久久| 国产欧美日韩一区二区三| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 亚洲精品色激情综合| 亚洲欧美日韩高清专用| 国产亚洲精品av在线| 人人妻人人澡欧美一区二区| 亚洲国产欧美一区二区综合| 黄色a级毛片大全视频| 人妻夜夜爽99麻豆av| av有码第一页| 两人在一起打扑克的视频| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 在线永久观看黄色视频| 91国产中文字幕| 午夜精品一区二区三区免费看| 老汉色∧v一级毛片| 亚洲精品粉嫩美女一区| xxxwww97欧美| 一二三四在线观看免费中文在| 免费av毛片视频| 国产精华一区二区三区| 国产亚洲精品一区二区www| 亚洲国产精品sss在线观看| 亚洲激情在线av| tocl精华| 成人一区二区视频在线观看| 国产精品久久久av美女十八| 男人的好看免费观看在线视频 | 香蕉丝袜av| 成人三级做爰电影| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 亚洲18禁久久av| 精品欧美国产一区二区三| 日日夜夜操网爽| 日韩免费av在线播放| 亚洲av电影在线进入| 国产亚洲欧美98| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 国产精品久久视频播放| 久久久精品大字幕| 国产三级中文精品| 国产成人精品无人区| 亚洲国产精品久久男人天堂| 国产午夜福利久久久久久| 国产黄a三级三级三级人| 最近在线观看免费完整版| 窝窝影院91人妻| 国产三级在线视频| 国产亚洲av嫩草精品影院| 丁香六月欧美| 国产不卡一卡二| 国模一区二区三区四区视频 | 欧美一区二区精品小视频在线| 国产一区二区三区在线臀色熟女| www国产在线视频色| 在线观看66精品国产| 欧美黑人欧美精品刺激| 久99久视频精品免费| 中文资源天堂在线| 一进一出好大好爽视频| 国产区一区二久久| 精品不卡国产一区二区三区| 精品久久久久久久毛片微露脸| 国产精品亚洲av一区麻豆| 曰老女人黄片| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 亚洲精品国产一区二区精华液| 国产精品久久久久久久电影 | 亚洲18禁久久av| 很黄的视频免费| 日韩精品中文字幕看吧| 久久久水蜜桃国产精品网| 亚洲免费av在线视频| 欧美不卡视频在线免费观看 | 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 五月玫瑰六月丁香| 少妇的丰满在线观看| 一级黄色大片毛片| 露出奶头的视频| 婷婷丁香在线五月| 女同久久另类99精品国产91| 俄罗斯特黄特色一大片| 精品久久久久久久久久免费视频| 国产在线观看jvid| 一级片免费观看大全| 在线看三级毛片| 特级一级黄色大片| 亚洲片人在线观看| 欧美黑人巨大hd| 精品国产乱子伦一区二区三区| 国产亚洲精品第一综合不卡| 青草久久国产| 一级毛片高清免费大全| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆 | 变态另类成人亚洲欧美熟女| 亚洲人成77777在线视频| 人妻久久中文字幕网| 亚洲一区二区三区色噜噜| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 欧美国产日韩亚洲一区| 国产精品影院久久| 午夜免费激情av| 中文字幕高清在线视频| 国产欧美日韩一区二区三| 午夜激情福利司机影院| 国产视频一区二区在线看| 国产精品爽爽va在线观看网站| 国产久久久一区二区三区| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 91大片在线观看| 97碰自拍视频| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 久久久国产欧美日韩av| 好男人在线观看高清免费视频| 日韩国内少妇激情av| 欧美黄色片欧美黄色片| 精品午夜福利视频在线观看一区| 欧美一区二区精品小视频在线| 国产成人精品久久二区二区91| 国产成人av激情在线播放| 日韩欧美精品v在线| 亚洲成av人片免费观看| 国产精品亚洲美女久久久| 99热只有精品国产| 成熟少妇高潮喷水视频| www.自偷自拍.com| 91国产中文字幕| 老司机深夜福利视频在线观看| 国产精品免费一区二区三区在线| 国产成人欧美在线观看| 一区二区三区激情视频| 免费人成视频x8x8入口观看| 国产亚洲精品av在线| 久久中文看片网| 亚洲欧美激情综合另类| 12—13女人毛片做爰片一| 性色av乱码一区二区三区2| 观看免费一级毛片| avwww免费| 午夜激情福利司机影院| 黄色 视频免费看| 亚洲av第一区精品v没综合| 亚洲av成人精品一区久久| www日本黄色视频网| 在线观看日韩欧美| 国产视频一区二区在线看| 精品国产乱码久久久久久男人| 国产在线精品亚洲第一网站| 日本 av在线| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 久热爱精品视频在线9| a级毛片a级免费在线| 国产高清videossex| 国产精品影院久久| av福利片在线| 亚洲电影在线观看av| 搡老妇女老女人老熟妇| netflix在线观看网站| 亚洲男人天堂网一区| 精品欧美一区二区三区在线| 人人妻人人澡欧美一区二区| 制服诱惑二区| 日本成人三级电影网站| 欧美成人性av电影在线观看| 国产午夜精品论理片| 亚洲激情在线av| 久久草成人影院| 亚洲专区中文字幕在线| 好男人在线观看高清免费视频| 亚洲av五月六月丁香网| 香蕉丝袜av| 成人欧美大片| 男女视频在线观看网站免费 | 老鸭窝网址在线观看| 亚洲成av人片在线播放无| 亚洲成人国产一区在线观看| 美女扒开内裤让男人捅视频| 99国产极品粉嫩在线观看| 午夜福利视频1000在线观看| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 丝袜美腿诱惑在线| 黄色a级毛片大全视频| 国产主播在线观看一区二区| 人妻久久中文字幕网| 日韩欧美国产一区二区入口| 男人的好看免费观看在线视频 | 真人一进一出gif抽搐免费| www日本在线高清视频| 亚洲国产欧美人成| 精品国产乱子伦一区二区三区| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| av天堂在线播放| 亚洲成av人片免费观看| 午夜两性在线视频| 久久精品成人免费网站| 手机成人av网站| 最近视频中文字幕2019在线8| 免费观看精品视频网站| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 国产成人啪精品午夜网站| 日韩欧美精品v在线| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 精品国产亚洲在线| 桃红色精品国产亚洲av| 午夜两性在线视频| a在线观看视频网站| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 久久精品国产亚洲av高清一级| 99国产精品99久久久久| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 午夜久久久久精精品| 美女免费视频网站| 久久久久国产一级毛片高清牌| 大型黄色视频在线免费观看| 久99久视频精品免费| 久久久久久免费高清国产稀缺| 麻豆av在线久日| 国产精品乱码一区二三区的特点| 一个人免费在线观看电影 | 午夜福利在线在线| 黄色片一级片一级黄色片| 身体一侧抽搐| 一本一本综合久久| 欧美三级亚洲精品| 两性夫妻黄色片| 国产精品亚洲一级av第二区| 丝袜人妻中文字幕| 国产精品免费视频内射| 1024视频免费在线观看| 女同久久另类99精品国产91| a在线观看视频网站| 国产精品一区二区精品视频观看| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 麻豆一二三区av精品| 国产成年人精品一区二区| 国产高清videossex| 国产高清激情床上av| 成年女人毛片免费观看观看9| 国产三级中文精品| 在线看三级毛片| 国产三级中文精品| 99久久精品国产亚洲精品| 嫩草影视91久久| 99精品久久久久人妻精品| 亚洲精品中文字幕在线视频| 精品欧美国产一区二区三| 日本黄色视频三级网站网址| 亚洲成av人片免费观看| 999精品在线视频| 青草久久国产| 999精品在线视频| 久久九九热精品免费| 变态另类成人亚洲欧美熟女| www.www免费av| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 最近最新中文字幕大全免费视频| 亚洲一区中文字幕在线| 亚洲黑人精品在线| 精品福利观看| 中亚洲国语对白在线视频| 欧美不卡视频在线免费观看 | 身体一侧抽搐| 欧美日韩一级在线毛片| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 亚洲一区二区三区不卡视频| 免费观看人在逋| 国产亚洲精品av在线| 精品久久久久久久毛片微露脸| 一区二区三区国产精品乱码| 亚洲性夜色夜夜综合| 9191精品国产免费久久| 久久中文字幕一级| 老司机深夜福利视频在线观看| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 日本熟妇午夜| а√天堂www在线а√下载| 欧美日韩国产亚洲二区| 亚洲七黄色美女视频| 欧美日韩国产亚洲二区| 久久精品国产亚洲av高清一级| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 男女之事视频高清在线观看| 曰老女人黄片| 又大又爽又粗| 在线观看www视频免费| 久久久久九九精品影院| 国产精品亚洲一级av第二区| 午夜精品在线福利| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 两性夫妻黄色片| 999久久久精品免费观看国产| 香蕉国产在线看| 欧美日韩黄片免| 青草久久国产| 日本免费一区二区三区高清不卡| 无人区码免费观看不卡| 亚洲美女黄片视频| 精品欧美一区二区三区在线| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 高清在线国产一区| 五月玫瑰六月丁香| 一区二区三区国产精品乱码| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 国产精品国产高清国产av| 人成视频在线观看免费观看| 日本熟妇午夜| 叶爱在线成人免费视频播放| 少妇熟女aⅴ在线视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 久久久精品欧美日韩精品| 久久精品国产综合久久久| 久久中文字幕一级| 免费无遮挡裸体视频| 夜夜爽天天搞| 日韩中文字幕欧美一区二区| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 精品电影一区二区在线| 成年免费大片在线观看| 村上凉子中文字幕在线| 91麻豆av在线| 香蕉av资源在线| 精品第一国产精品| 国产亚洲欧美在线一区二区| 9191精品国产免费久久| 亚洲av熟女| 国产午夜精品论理片| 亚洲七黄色美女视频| 曰老女人黄片| 日本一二三区视频观看| 白带黄色成豆腐渣| 高清毛片免费观看视频网站| 久久婷婷成人综合色麻豆| 亚洲成人久久爱视频| 久久久久亚洲av毛片大全| 成人国语在线视频| avwww免费| 久久午夜综合久久蜜桃| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 一区二区三区国产精品乱码| 18禁美女被吸乳视频| 欧美激情久久久久久爽电影| 黄片大片在线免费观看| 大型黄色视频在线免费观看| 久久草成人影院| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 中文在线观看免费www的网站 | 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 亚洲精华国产精华精| 在线观看www视频免费| 可以在线观看的亚洲视频| 人人妻人人澡欧美一区二区| 欧美中文综合在线视频| 波多野结衣高清作品| 一区二区三区国产精品乱码| 久久精品国产亚洲av高清一级| av福利片在线观看| 一级作爱视频免费观看| 无遮挡黄片免费观看| 国产精品久久电影中文字幕| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 欧美av亚洲av综合av国产av| 精品日产1卡2卡| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆 | 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 国产精品 欧美亚洲| 深夜精品福利| 中文资源天堂在线| 欧美黑人巨大hd| 久久精品91蜜桃| 99在线视频只有这里精品首页| 日韩欧美国产一区二区入口| 亚洲av电影不卡..在线观看| 五月玫瑰六月丁香| 搡老熟女国产l中国老女人| cao死你这个sao货| 日本黄大片高清| 国产日本99.免费观看| 男人舔女人下体高潮全视频| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 99国产综合亚洲精品| 亚洲色图av天堂| 在线观看免费日韩欧美大片| 91字幕亚洲| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 91大片在线观看| 色综合站精品国产| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 亚洲成av人片免费观看| 男女午夜视频在线观看| 国产av一区在线观看免费| 床上黄色一级片| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 在线观看午夜福利视频| 97碰自拍视频| 午夜成年电影在线免费观看| 国产一区二区在线av高清观看| 国产伦一二天堂av在线观看| 中国美女看黄片| 日韩免费av在线播放| 老司机午夜福利在线观看视频| 免费电影在线观看免费观看| 成人精品一区二区免费| 亚洲黑人精品在线| 国产高清视频在线播放一区| 特大巨黑吊av在线直播| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 亚洲一区二区三区不卡视频| 久久久久九九精品影院| 国产av在哪里看| 国产久久久一区二区三区| 日韩三级视频一区二区三区| 少妇熟女aⅴ在线视频| 久久性视频一级片| 久久久久亚洲av毛片大全| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 亚洲熟妇熟女久久| 亚洲国产精品合色在线| 麻豆国产av国片精品| 在线视频色国产色| 国产精品一区二区免费欧美| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲成人久久爱视频| 色噜噜av男人的天堂激情| 国产精品一区二区免费欧美| 免费观看人在逋| 女同久久另类99精品国产91| 在线看三级毛片| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 日日夜夜操网爽| 国产成人精品无人区| 老司机靠b影院| 婷婷丁香在线五月| 哪里可以看免费的av片| 色老头精品视频在线观看| 久久香蕉激情| 五月伊人婷婷丁香| 午夜精品一区二区三区免费看| 国产亚洲精品久久久久5区| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 久久久国产成人精品二区| 91麻豆精品激情在线观看国产| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 91字幕亚洲| 国产成人啪精品午夜网站| av有码第一页| 亚洲专区国产一区二区| 免费在线观看成人毛片| 18禁国产床啪视频网站| 国产成+人综合+亚洲专区| 成人手机av| 国产野战对白在线观看| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 亚洲性夜色夜夜综合| 亚洲成人免费电影在线观看| 女人被狂操c到高潮| 丰满人妻一区二区三区视频av | 色av中文字幕| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 白带黄色成豆腐渣| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 婷婷六月久久综合丁香| 一级毛片高清免费大全| 亚洲精品久久国产高清桃花| 精品人妻1区二区| 久久人妻av系列| 我要搜黄色片| 老司机靠b影院| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 国产精品日韩av在线免费观看| 亚洲av五月六月丁香网| 精品无人区乱码1区二区| 1024香蕉在线观看| 欧美乱色亚洲激情| 久久香蕉激情| 国产精品av视频在线免费观看| 人人妻人人看人人澡| 丝袜人妻中文字幕| 欧美av亚洲av综合av国产av| 啦啦啦韩国在线观看视频| 免费搜索国产男女视频| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 18禁美女被吸乳视频| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产久久久一区二区三区| 久久久精品欧美日韩精品| 日本黄色视频三级网站网址| 精品午夜福利视频在线观看一区| 亚洲中文av在线| 小说图片视频综合网站| 亚洲成a人片在线一区二区| 男女床上黄色一级片免费看| 手机成人av网站| 精品无人区乱码1区二区| 日韩欧美三级三区| 亚洲一区中文字幕在线| 99热6这里只有精品| 午夜免费观看网址| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 精品熟女少妇八av免费久了| 国产欧美日韩一区二区三| 一本大道久久a久久精品| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 国产av一区二区精品久久| 免费在线观看日本一区| 久久久精品欧美日韩精品| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 在线看三级毛片| 一二三四社区在线视频社区8| 搡老熟女国产l中国老女人| 亚洲国产欧美一区二区综合| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 欧美中文综合在线视频| 国产精品av久久久久免费| 日本黄大片高清| svipshipincom国产片| 我要搜黄色片| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 身体一侧抽搐| 成人18禁在线播放| 搡老妇女老女人老熟妇| 成人国产一区最新在线观看| 精品第一国产精品| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 人人妻人人澡欧美一区二区| 亚洲 欧美一区二区三区|