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    正相高效液相色譜法測(cè)定L-蘋果酸中的對(duì)映異構(gòu)體D-蘋果酸

    2016-09-07 03:47:41段先哲譚凱旋謝焱石馮志剛韓世禮
    分析儀器 2016年2期
    關(guān)鍵詞:對(duì)映異構(gòu)蘋果酸精密度

    段先哲 李 南* 譚凱旋 謝焱石 陳 亮 胡 楊 馮志剛 韓世禮 馬 強(qiáng)

    (1. 南華大學(xué),衡陽(yáng) 421001; 2. 湖南省核燃料循環(huán)技術(shù)與裝備協(xié)同創(chuàng)新中心,衡陽(yáng) 421001)

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    正相高效液相色譜法測(cè)定L-蘋果酸中的對(duì)映異構(gòu)體D-蘋果酸

    段先哲1,2李南1,2*譚凱旋1謝焱石1陳亮1胡楊1馮志剛1韓世禮1馬強(qiáng)1

    (1. 南華大學(xué),衡陽(yáng) 421001; 2. 湖南省核燃料循環(huán)技術(shù)與裝備協(xié)同創(chuàng)新中心,衡陽(yáng) 421001)

    建立了測(cè)定L-蘋果酸中對(duì)映異構(gòu)體D-蘋果酸的的正相高效液相色譜檢測(cè)方法。色譜柱為手性色譜柱CHIRALPAK-IC(4.6×250mm;5μm),流動(dòng)相為正己烷∶異丙醇∶三氟乙酸=80∶20∶0.1,流速為0.5mL/min,進(jìn)樣量為100μL,檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm,柱溫為35℃。系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)中L-蘋果酸和D-蘋果酸的理論塔板數(shù)大于5000,L-蘋果酸與相鄰峰的分離度為2.6,D-蘋果酸與相鄰峰的分離度為2.9。此方法檢測(cè)L-蘋果酸中的D-蘋果酸敏度高,分離度良好。溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)中,在24小時(shí)內(nèi)測(cè)定D-蘋果酸含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.78%,溶液在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。精密度實(shí)驗(yàn)中6次重復(fù)進(jìn)樣D-蘋果酸含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.59%,精密度良好。L-蘋果酸的檢出限為0.22ng。該方法可用于分離L-蘋果酸及其對(duì)映異構(gòu)體D-蘋果酸。

    L-蘋果酸對(duì)映異構(gòu)體D-蘋果酸正相高效液相色譜法

    蘋果酸,又名2-羥基丁二酸,有兩種對(duì)映異構(gòu)體,即D-蘋果酸和L-蘋果酸。大自然中,蘋果酸以3種形式存在,即D-蘋果酸、L-蘋果酸及其混合物DL-蘋果酸。L-蘋果酸會(huì)在人體中自然產(chǎn)生并具有生物活性,是人體一種必須的有機(jī)酸,作為性能優(yōu)異的食品添加劑和功能性食品廣泛應(yīng)用于食品行業(yè)中;D-蘋果酸的生理活性低,生物體內(nèi)積累過量的 D-蘋果酸時(shí)會(huì)產(chǎn)生病變[1];美國(guó)糧食和藥物管理局(FDA)規(guī)定DL-蘋果酸不能用于嬰兒食品添加劑[2]。在醫(yī)藥行業(yè),蘋果酸常作為一種藥物成分添加在一些藥物制劑中,能明顯提高藥物主要成分的吸收率;蘋果酸還可以治療肝病、貧血、免疫力低下等多種疾病;在藥物研究中蘋果酸作為一種藥物成分,就必須嚴(yán)格控制其本身帶來(lái)的其它雜質(zhì),必須嚴(yán)格控制D-蘋果酸的限度,所以對(duì)L-蘋果酸及其中的D-蘋果酸的測(cè)定方法的研究具有重大意義。目前國(guó)內(nèi)對(duì)蘋果酸含量測(cè)定的方法有酶法[2]、生物傳感器法[3]、雙波長(zhǎng)分光光度法[4]、離子色譜法[5-8]、氣相色譜法[9,10]、毛細(xì)管電泳法[11,12]和高效液相色譜法[13-22]等方法。酶法雖操作簡(jiǎn)易,但由于催化反應(yīng)的酶本身特異性不高,易于催化其它底物,使測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生較大誤差。生物傳感器法,需要制作兩種電極,并且需要分別測(cè)定D-蘋果酸和L-蘋果酸,操作比較繁瑣。其它方法對(duì)蘋果酸的測(cè)定都只是針對(duì)D-蘋果酸和L-蘋果酸混合物的含量測(cè)定,并不能有效區(qū)分這兩種異構(gòu)體。而本研究通過采用手性色譜柱CHIRALPAK-IC和對(duì)分析方法的優(yōu)化所建立的正相高效液相色譜法,是一種分離并測(cè)定L-蘋果酸及其對(duì)映異構(gòu)體D-蘋果酸的準(zhǔn)確、靈敏、高效、便捷的方法。

    1 實(shí)驗(yàn)部分

    1.1儀器與試劑

    島津HPLC-2010C ;CPA225D型電子天平(賽多利斯)。

    L-蘋果酸標(biāo)準(zhǔn)品(中國(guó)藥品生物制品檢定所);DL-蘋果酸標(biāo)準(zhǔn)品(中國(guó)藥品生物制品檢定所); L-蘋果酸原料(中照力德化工有限公司;含量:99.31%)。

    1.2色譜條件

    色譜柱CHIRALPAK-IC (4.6×250mm;5μm);進(jìn)樣量100μL ; 測(cè)定波長(zhǎng)210nm ;柱溫:35oC;流動(dòng)相為正己烷∶異丙醇∶三氟乙酸=80∶20∶0.1;流速0.5mL/min。

    1.3溶液的配制

    稱取一定量的DL-蘋果酸標(biāo)準(zhǔn)品加流動(dòng)相配制成濃度為1mg/mL的DL-蘋果酸溶液;稱取一定量的L-蘋果酸原料加流動(dòng)相配制成濃度為1mg/mL的L-蘋果酸供試溶液;取L-蘋果酸供試溶液用流動(dòng)相稀釋100倍,得到其1%自身對(duì)照溶液。D-蘋果酸含量按照1%自身對(duì)照計(jì)算,其計(jì)算公式為:D-蘋果酸含量(%)=A1/A2(注:A1為供試液中D-蘋果酸峰面積,A2為1%自身對(duì)照溶液中L-蘋果酸峰面積)。

    2 結(jié)果與討論

    2.1檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

    用紫外分光光度計(jì)對(duì)L-蘋果酸溶液和DL-蘋果酸溶液進(jìn)行紫外全波長(zhǎng)掃描,最大吸收波長(zhǎng)為210nm,所以確定檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm。

    2.2色譜條件的優(yōu)化

    取上述DL-蘋果酸溶液按照上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定,對(duì)比了各條件下D-蘋果酸和L-蘋果酸的保留時(shí)間和分離情況,見表1。流速變化測(cè)定結(jié)果比較表明,流速越高,D-蘋果酸和L-蘋果酸保留時(shí)間越短,色譜柱壓力越大,在流速為1.0mL/min時(shí)色譜柱壓力為3.4MPa,其值較高,所以為了延長(zhǎng)色譜柱的壽命,選擇流速為0.5mL/min。通過調(diào)整流動(dòng)相三相的比例得知,異丙醇濃度越大,保留時(shí)間越短,D-蘋果酸與相鄰峰的分離度越小,當(dāng)流動(dòng)相為正己烷∶異丙醇∶三氟乙酸=90∶10∶0.1時(shí),保留時(shí)間太長(zhǎng);當(dāng)流動(dòng)相為正己烷∶異丙醇∶三氟乙酸=70∶30∶0.1時(shí),保留時(shí)間太短,D-蘋果酸和L-蘋果酸的出峰時(shí)間間隔太短,D-蘋果酸與相鄰峰的分離度為2.6;當(dāng)流動(dòng)相為正己烷∶異丙醇∶三氟乙酸=80∶20∶0.1時(shí),保留時(shí)間合適, D-蘋果酸峰無(wú)雜質(zhì)干擾,D-蘋果酸與相鄰峰的分離度為3.2,分離度良好;取L-蘋果酸供試液進(jìn)行測(cè)定,進(jìn)樣量50μL和100μL對(duì)比結(jié)果顯示,100μL時(shí),D-蘋果酸峰高比較合適。所以最終確定的色譜條件:進(jìn)樣量100uL, 測(cè)定波長(zhǎng)210nm,柱溫35℃,流動(dòng)相為正己烷∶異丙醇∶三氟乙酸=80∶20∶0.1,流速0.5mL/min。

    表1 色譜條件的優(yōu)化

    2.3系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)

    取空白溶劑、L-蘋果酸供試溶液在上述色譜條件下進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果見表2。結(jié)果顯示,空白溶劑對(duì)樣品測(cè)定不產(chǎn)生干擾,L-蘋果酸的保留時(shí)間為11.90min,D-蘋果酸的保留時(shí)間為13.52min, L-蘋果酸與相鄰峰的分離度為2.6,D-蘋果酸與相鄰峰的分離度為2.9,理論塔板數(shù)大于5000,此方法檢測(cè)L-蘋果酸中的D-蘋果酸敏度高,分離度良好。

    表2 方法的系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)

    2.4溶液穩(wěn)定性

    配制1mg/mL L-蘋果酸供試溶液、1%自身對(duì)照溶液,按照上述色譜方法分別在0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h、24h進(jìn)樣,結(jié)果見表3。結(jié)果表明,在24小時(shí)內(nèi)測(cè)定D-蘋果酸含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.78%,溶液在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

    表3 溶液穩(wěn)定性結(jié)果

    注:A為峰面積

    2.5精密度

    配制1mg/mL L-蘋果酸供試溶液、1%自身對(duì)照溶液,按照上述色譜方法重復(fù)進(jìn)樣6針,結(jié)果見表4。結(jié)果表明,6次重復(fù)進(jìn)樣D-蘋果酸含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.59%,精密度良好。

    表4 精密度結(jié)果

    注:A為峰面積

    2.6方法的檢出限

    配制1mg/mL的L-蘋果酸供試溶液,按照上述色譜方法,不斷的稀釋進(jìn)樣,當(dāng)信噪比S/N為3時(shí),即為L(zhǎng)-蘋果酸的檢出限,經(jīng)計(jì)算得出檢出限為0.22ng。

    3 結(jié)論

    本實(shí)驗(yàn)建立了一種簡(jiǎn)單有效的測(cè)定L-蘋果酸中的其對(duì)映異構(gòu)體D-蘋果酸的檢測(cè)方法。結(jié)果表明,系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)說(shuō)明此方法檢測(cè)L-蘋果酸中的D-蘋果酸靈敏度高,分離度良好。溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)中,在24小時(shí)內(nèi)測(cè)定D-蘋果酸含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.78,溶液在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。精密度實(shí)驗(yàn)中6次重復(fù)進(jìn)樣D-蘋果酸含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.59,精密度良好。L-蘋果酸的檢出限為0.22ng。該方法簡(jiǎn)便、快速、有效、靈敏、具有良好的精密度,可作為L(zhǎng)-蘋果酸中的對(duì)映異構(gòu)體D-蘋果酸的定量分析方法。

    [1]Fabio C,Umberto S,Claudio R. Optimization of the determination of organic acids and sugars in fruit juices by ion-exclusion liquid chromatography [J]. Journal of Food Compo and Anal.,2005,18(3):121-130.

    [2] 吳清平, 周小燕. L-蘋果酸研究進(jìn)展[J].微生物學(xué)通報(bào), 1990, (1):30-33.

    [3]蔣宏偉, 李建華, 姚敏杰,等. D-蘋果酸快速檢測(cè)方法的研究[J]. 陜西農(nóng)業(yè)科學(xué),2009, (3):32-34.

    [4]干 寧, 葛從辛. 無(wú)試劑二氧化鈦凝膠酶?jìng)鞲衅鳈z測(cè)蘋果酸對(duì)映異構(gòu)體研究[J].中國(guó)食品學(xué)報(bào),2006,6(6):105-111.

    [5]徐志利, 勞瑞珍,鄧兆勇,等. 雙波長(zhǎng)分光光度法測(cè)定心臟基礎(chǔ)液中L-蘋果酸的含量[J]. 廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)[J], 1997, 13 (4): 240-241.

    [6]朱巖, 徐素君, 王素芬.不完全抑制電導(dǎo)檢測(cè)離子色譜法測(cè)定飲料中的蘋果酸[J]. 分析化學(xué)研究簡(jiǎn)報(bào),1999, 27(9):1050-1053.

    [7]吳玉萍, 宋春滿, 雷麗萍,等. 梯度淋洗離子色譜法測(cè)定煙草中的蘋果酸、檸檬酸和陰離子[J]. 分析試驗(yàn)室,2006, 25(7):31-34.

    [8]王海藍(lán),李雪萍,陳維信. 離子色譜法測(cè)定貯藏期間菠蘿果實(shí)的有機(jī)酸變化[J]. 熱帶作物學(xué)報(bào), 2010,31(10):1720-1725.

    [9]閆巍, 焦霞, 葉明立,等. 離子色譜法測(cè)定威力酸中的有機(jī)酸[J]. 分析試驗(yàn)室,2008, 27(2):38-40.

    [10]施豐成, 鄧發(fā)達(dá), 朱立軍,等. 烤煙中草酸、蘋果酸和檸檬酸含量的分析研究[J]. 中國(guó)煙草學(xué)報(bào), 2010,16(1):6-10.

    [11] 羅 瓊, 薛 冬, 楊 俊,等. 不同卷煙和煙葉中主要非揮發(fā)性有機(jī)酸含量的差異[J]. 煙草科技, 2009, (12):33-37.

    [12]姚玉新, 翟 衡, 趙玲玲,等. 蘋果果實(shí)酸/低酸性狀的SSR分析[J]. 園藝學(xué)報(bào), 2006, 33 (2): 244-248.

    [13]孔紅星, 劉正西, 李利軍. 高效毛細(xì)管電泳—直接紫外檢測(cè)法的應(yīng)用研究[J]. 廣西工學(xué)院學(xué)報(bào), 2003, 14(2):31-33.

    [14]陸敏, 李路華, 馮俊霞,等. 高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定常見水果中的四種有機(jī)酸[J].食品工業(yè)科技, 2009, 30(7):312-316.

    [15]李康樂,吳梧桐, 宋祥珍,等. 高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定藥用蘋果酸中的馬來(lái)酸與富馬酸[J].中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào), 1994, 25(2): 106-108.

    [16]李昌曉,鐘章成,陶建平, 不同水分條件下池杉幼苗根系的蘋果酸、莽草酸含量及生物量[J]. 林業(yè)科學(xué), 2008, 44(10):1-7.

    [17]陳發(fā)興,劉星輝, 陳立松. 枇杷果肉有機(jī)酸組分及有機(jī)酸在果實(shí)內(nèi)的分布[J]. 熱帶亞熱帶植物學(xué)報(bào),2008, 16(3): 236-243.

    [18]唐慧慧,蔡清宇,毛 翼. HPLC法測(cè)定凈烏梅及烏梅炭中檸檬酸和蘋果酸的含量[J]. 中藥材, 2007, 30(1):52-54.

    [19]任建武,王 雁,彭鎮(zhèn)華,等. 3種石斛葉片蘋果酸含量日變化動(dòng)態(tài)研究[J]. 江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 2010, 32(3): 547 -552.

    [20]呂兆林,林西,鄧文紅,等. HPLC法測(cè)定蘋果灑中蘋果酸及乳酸含量[J]. 精細(xì)與專用化學(xué)品, 2012, 20(1):9-13.

    [21]羅陽(yáng), 賀曉光, 楊 軍, 等.HPLC法測(cè)定賀蘭山東麓釀酒葡萄中蘋果酸含量[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2011, 39(33):20541-20542.

    [22]張 聰, 金德慶, 張繼全. RP-HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地山茱萸中沒食子酸與蘋果酸的含量[J]. 上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 2004, 18(3):33-35.

    Determination of enantiomer D-malic acid in L-malic acid by normal-phase high performance liquid chromatography.

    Duan Xianzhe1,2, Li Nan1, 2*, Tan Kaixuan1, Xie Yanshi1, Chen Liang1, Hu Yang1, Feng Zhigang1,Han Shili1, Ma Qiang1

    (1.UniversityofSouthChina,Hengyang421001,China; 2.CooperativeInnovationCenterforNuclearFuelCycleTechnologyandEquipment,Hengyang421001,China)

    The chromatographic column was CHIRALPAK-IC ( 4.6×250mm;5um);the mobie phase was N-hexane∶isopropyl alcohol∶trifluoroacetic acid (80:20:0.1), the flow rate was 0.5ml/min, the injection volume was 100μL, the detection wavelength was at 210 nm, and the column temperature was 35℃. In the suitability experiment, the theoretical plate number of L-malic and D-malic acids were more than 5000, the resolution between L-malic acid and its adjacent peak was 2.6, and the resolution between D-malic acid and its adjacent peak was 2.9, indicating that this method had a high sensitivity and good resolution. In the solution stability experiment, the relative standard deviation of D-malic acid concentration was 5.78% within 24 hours, demonstrating that the solution was stable within 24 hours. In the precision experiment, the relative standard deviation of the D-malic acid concentrations in six repeated sampling was 3.59%, showing a satisfactory precision of this method. The detection limit of L-malic acid was 0.22ng. This method could be used for quantitative determination of D-malic acid in the L-malic acid.

    L-malic acid; enantiomer; D-malic acid; high performance liquid chromatography

    國(guó)家自然科學(xué)基金(41503016);湖南省教育廳優(yōu)秀青年項(xiàng)目(15B201);中國(guó)博士后科學(xué)基金(2015M582334);南華大學(xué)博士啟動(dòng)基金(2014XQD08);國(guó)防基礎(chǔ)科研計(jì)劃項(xiàng)目(B3720110004);南華大學(xué)“蒸湘學(xué)者計(jì)劃”。

    段先哲,男,1985年出生,博士,主要從事地球化學(xué)、儀器分析等方面的研究工作。

    李南,女,1985年出生,碩士,主要從事分析化學(xué)、儀器分析等方面的研究工作,E-mail:linan19851018@163.com。

    10.3936/j.issn.1001-232x.2016.02.006

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