益氣活血保心湯對急性心肌梗死大鼠的保護(hù)作用*

王維浩　邢之華　劉衛(wèi)平　彭偉軍　聶課朝（中南大學(xué)湘雅醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合研究所，湖南 長沙 410008）

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益氣活血保心湯對急性心肌梗死大鼠的保護(hù)作用*

王維浩邢之華△劉衛(wèi)平彭偉軍聶課朝
（中南大學(xué)湘雅醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合研究所，湖南 長沙 410008）

目的 探討益氣活血保心湯對急性心肌梗死大鼠的保護(hù)作用。方法 SD大鼠50只隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、益氣活血保心湯低劑量組、益氣活血保心湯高劑量組和復(fù)方丹參滴丸組。采用結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支的方法建立急性心肌梗死大鼠模型，造模成功后于不同時(shí)間點(diǎn)分別比較大鼠心電圖的變化情況，采用TTC染色法記錄心肌梗死面積，并測乳酸脫氫酶（LDH）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、C反應(yīng)蛋白（CRP）的血清濃度。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)過程中大鼠先后死亡共計(jì)5只，死亡原因?yàn)閻盒孕穆墒С＃渲心Ｐ徒M、益氣活血低劑量組各2只，益氣活血低劑量組1只，符合急性心肌梗死死亡率高的特點(diǎn)。與結(jié)扎前比較，在結(jié)扎即刻模型組、益氣活血保心湯高劑量組、益氣活血保心湯低劑量組以及復(fù)方丹參滴丸組J點(diǎn)抬高均≥0.1 mV，提示造模成功。與假手術(shù)組比較，模型組結(jié)扎24 h后ΔJ明顯抬高（P<0.01）；與模型組比較，藥物組ΔJ明顯降低（P<0.01或P<0.05），其中益氣活血保心湯高劑量組、復(fù)方丹參滴丸組最為明顯（P< 0.01）。與假手術(shù)組比較，模型組LDH、CK-MB水平顯著升高（P<0.01）；與模型組比較，益氣活血保心湯高劑量組與復(fù)方丹參滴丸組均顯著降低LDH、CK-MB的血清濃度 （P<0.01）；益氣活血保心湯低劑量組可降低CK-MB濃度（P<0.05），但LDH濃度無明顯差異（P>0.05）。與假手術(shù)組比較，模型組TNF-α、CRP水平顯著升高（P<0.01）；與模型組比較，各治療組均顯著降低血清TNF-α、CRP的濃度（P<0.01或P<0.05）。與假手術(shù)組比較，模型組心梗面積明顯增大（P<0.01）；與模型組比較，各給藥組心梗面積明顯減?。≒<0.01或P< 0.05）。益氣活血保心湯高劑量組與復(fù)方丹參滴丸組相比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 急性心肌梗死大鼠心電圖J點(diǎn)出現(xiàn)異常變化，血清心肌酶學(xué)明顯升高。益氣活血保心湯能夠有效抑制急性心肌梗死對大鼠造成的損傷，其作用機(jī)制可能與其抑制炎癥反應(yīng)，降低TNF-α、CRP水平有關(guān)。

急性心肌梗死益氣活血保心湯ECG心肌酶學(xué)炎癥因子

【Abstract】Objective：To discuss the effects of Yiqi huoxue baoxin Decoction on acute myocardial infarction（AMI）in rats.Methods：50 healthy SD rats were randomly divided into sham operation group，the model group，lower dosage group of Yiqi huoxue baoxin Decoction，higher dosage group of Yiqi huoxue baoxin Decoction and the Compound Danshen Pill group.Acute myocardial infarct（AMI）model was established by coronary artery ligation.After successful modeling，the electrocardiogram ECG was recorded and the Myocardial infarct area was detected by TTC stain.Blood was collected to determine the contents of lactate dehydrogenase（LDH），creatine kinase isoenzymes（CK-MB），tumor necrosis factor-α（TNF-α），and C-reactive protein（CRP）.Results：In comparison with the model group，the treatment groups can improve the abnormal changes of ECG induced by acute myocardial infarct，reduce myocardial infarction size and lower the level of myocardial enzyme，CRP and TNF-α. Conclusion：J wave of rats with acute myocardium infarct drifts evidently，and myocardial enzyme was significantly higher.In this experiment，Yiqi huoxue baoxin Decoction plays an effective role in alleviating the injuries in AMI rats.The mechanisms may be through decreasing anti-inflammation reaction and reducing contents of TNF-α and CRP.

【Key words】Acute myocardial infarction；Yiqi huoxue therapy；ECG；Myocardial enzyme；Related inflammatory molecules

急性心肌梗死（AMI）是目前全球發(fā)病率和病死率較高的疾病，其發(fā)病機(jī)制為冠狀動(dòng)脈供血減少或中斷導(dǎo)致心肌的急劇缺血，從而使相應(yīng)心肌發(fā)生缺血性壞死，其最為顯著特征是心電圖（ECG）的進(jìn)行性改變和血清酶學(xué)明顯升高［1］。前期研究已證實(shí)以保心湯為代表的益氣活血法對冠心病心絞痛患者有較好的臨床療效［2］。本研究擬通過結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈復(fù)制急性心肌梗死模型，觀察益氣活血保心湯對急性心肌梗死大鼠ECG、心肌酶學(xué)、心肌梗死面積及血清腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、C反應(yīng)蛋白（CRP）的影響，探討其可能的作用機(jī)制。現(xiàn)報(bào)告如下。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康雄性SD大鼠50只，體質(zhì)量（200±20）g，由中南大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（動(dòng)物合格證號(hào)：SYXK（湘）2011-0001），動(dòng)物最終來源于湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。實(shí)驗(yàn)前置動(dòng)物于室溫（22～24）℃，保持相對濕度為40%～60%，自然光線，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。

1.2藥物與試劑益氣活血保心湯：黨參15 g，黃芪15 g，白術(shù)10 g，茯苓10 g，山楂15 g，葛根15 g，丹參15 g，桃仁12 g，川芎10 g，紅花5 g（由湘雅醫(yī)院中藥房提供）。原藥材經(jīng)洗凈后煎煮2次，去渣留取藥液，使每毫升濃縮液中含生藥量的濃度為2.5 g/mL。復(fù)方丹參滴丸：劑量規(guī)格25 mg/丸，天津天士力股份有限公司產(chǎn)品。TTC1號(hào)粉劑（南京建成科技有限公司）；TTC1號(hào)溶劑（南京建成科技有限公司）；戊巴比妥（美國Sigma公司）；多聚甲醛粉劑（南京建成科技有限公司）。乳酸脫氫酶（LDH）試劑盒、肌酸激酶MB同工酶（CK-MB）試劑盒、TNF-α試劑盒、CRP試劑盒（南京建成生物工程有限公司）。

1.3主要儀器多道生理信號(hào)采集系統(tǒng)（成都泰盟公司，批號(hào)RM6240BD）；小動(dòng)物呼吸機(jī)（成都儀器廠，批號(hào)DHX-500B）；手術(shù)無影燈（成都儀器廠）；普通低溫離心機(jī) （上海中科生物醫(yī)藥公司）；-80℃超低溫冰箱（日本三洋），電子天平 （A&D公司），Image-Pro Plus version 6.0（美國IPP圖像分析軟件有限公司）。

1.4分組與給藥將50只心電圖正常的健康雄性SD大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為5組，每組10只。分別為假手術(shù)組、空白模型組、益氣活血保心湯低劑量組、益氣活血保心湯高劑量組、復(fù)方丹參滴丸組。其用藥劑量以成人用藥劑量為標(biāo)準(zhǔn)，按人與大鼠體表面積換算。益氣活血保心湯低、高劑量組分別為12、36 g/kg。復(fù)方丹參滴丸組為80 mg/kg，假手術(shù)組和模型組均予以1 mL/100 g蒸餾水灌胃。連續(xù)灌胃給藥7 d，各組每日給藥2次。

1.5模型制備術(shù)前禁食12 h，末次給藥30 min后，予1%戊巴比妥按36 mg/kg腹腔注射麻醉大鼠，仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)上。常規(guī)消毒，行經(jīng)口行氣管插管，接呼吸機(jī)（潮氣量2～3 mL/100 g，頻率60次/min，吸呼比為1∶2），將針狀電極連接于四肢皮下，記錄肢體Ⅱ?qū)?lián)ECG。在胸骨左緣第4、5肋間打開胸腔，分離心包，在左心耳和肺動(dòng)脈圓錐間找到與左冠狀動(dòng)脈伴行的冠狀靜脈，在左心耳下方2～3 mm處用4-0線結(jié)扎左冠脈左室支。記錄ECG，T波高聳者、J點(diǎn)抬高≥0.1 mV者為模型復(fù)制成功標(biāo)志。假手術(shù)組操作只穿線不結(jié)扎，其余同以上步驟。

1.6觀察指標(biāo)1）大鼠心電圖J點(diǎn)變化：大鼠仰面固定于手術(shù)臺(tái)上，穩(wěn)定后接心電圖機(jī)觀察結(jié)扎前、結(jié)扎即刻、結(jié)扎后24 h大鼠ECG（10 mm/mV，25 mm/s）。分別測量記錄肢體Ⅱ?qū)?lián)（右上肢及左下肢）心電圖J點(diǎn)位移（反應(yīng)ST段變化）。J點(diǎn)位移以P-R段為基線，每時(shí)間點(diǎn)測5個(gè)連續(xù)波形，取其平均值。記錄并計(jì)算J點(diǎn)位移的變化值 （ΔJ=結(jié)扎冠脈后各時(shí)間點(diǎn)J點(diǎn)值-結(jié)扎前J點(diǎn)值）。2）血清指標(biāo)檢測：于術(shù)后24 h，行腹主動(dòng)脈采血5 mL，以3000 r/min離心10 min后分離血清，分別測定血清LDH、CK-MB、TNF-α、CRP水平。3）計(jì)算心肌梗死面積 造模后的24 h收集大鼠心臟，予0.9%氯化鈉注射液沖洗，放入-40℃冰箱中冰凍。取左心室沿縱軸方向切成厚度約0.2 cm薄片，放入1%TTC染色液中于37.0℃恒溫水浴箱溫浴30 min，梗死心肌因脫氫酶的缺失而無法染色，顏色呈灰白色，而有活性的心肌組織呈暗紅色。用Image ProPlus 6.0軟件計(jì)算心肌梗死面積。

1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。計(jì)量資料以（±s）表示，定量資料多組間兩兩比較采用方差分析（方差齊采用LSD檢驗(yàn)，方差不齊者采用Dunnett t檢驗(yàn)）。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)　果

2.1大鼠一般情況實(shí)驗(yàn)過程中大鼠先后死亡共計(jì)5只，死亡原因?yàn)閻盒孕穆墒С?，其中模型組、益氣活血低劑量組各2只，益氣活血低劑量組1只，符合急性心肌梗死死亡率高的特點(diǎn)。

2.2各組心電圖J點(diǎn)、心梗大鼠血清LDH、CK-MB水平比較見表1。與結(jié)扎前比較，在結(jié)扎即刻模型組、益氣活血保心湯高劑量組、益氣活血保心湯低劑量組以及復(fù)方丹參滴丸組J點(diǎn)抬高均≥0.1 mV，提示造模成功。與假手術(shù)組比較，模型組結(jié)扎24 h后ΔJ明顯抬高（P<0.01）；與模型組比較，藥物組ΔJ明顯降低（P<0.01或P<0.05），其中益氣活血保心湯高劑量組、復(fù)方丹參滴丸組最為明顯（P<0.01）。與假手術(shù)組比較，模型組LDH、CK-MB水平顯著升高（P<0.01）；與模型組比較，益氣活血保心湯高劑量組與復(fù)方丹參滴丸組均顯著降低LDH、CK-MB的血清濃度（P<0.01）；益氣活血保心湯低劑量組可降低CK-MB濃度 （P<0.05），但LDH濃度無明顯差異（P>0.05）。

表1　各組大鼠ΔJ及血清LDH、CK-MB水平比較（±s）

表1　各組大鼠ΔJ及血清LDH、CK-MB水平比較（±s）

與假手術(shù)組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

組別　n　CK-MB（U/L）假手術(shù)組　10　289.3161±58.6465模型組　8　785.1060±64.3445**益氣活血保心湯低劑量組　8　343.8577±96.2191△ΔJ（mV）　LDH（U/L）0.0230±0.0059　324.2813±40.1632 0.2735±0.0064**　608.5046±57.1194**0.1947±0.0624△　583.7018±80.1457益氣活血保心湯高劑量組　9　336.7626±62.4741△△0.1313±0.0315△△384.3627±63.7202△△復(fù)方丹參滴丸組　10 0.1161±0.0237△△383.1196±51.6820△△321.1685±71.8867△△

2.3各組大鼠血清TNF-α、CRP水平比較見表2。與假手術(shù)組比較，模型組TNF-α、CRP水平顯著升高（P<0.01）；與模型組比較，各治療組均顯著降低血清TNF-α、CRP的濃度（P<0.01或P<0.05）。

表2　各組大鼠血清TNF-α、CRP水平比較（ng/mL，±s）

表2　各組大鼠血清TNF-α、CRP水平比較（ng/mL，±s）

組別　n假手術(shù)組　10模型組　8益氣活血保心湯低劑量組　8 TNF-α　CRP 1.4369±0.9817　0.0389±0.0084 26.0463±6.5239**　0.0713±0.0169**21.9864±7.8242△　0.0592±0.0261△益氣活血保心湯高劑量組　9　18.6896±6.3781△△　0.0516±0.0313△復(fù)方丹參滴丸組　10　18.2679±5.1489△△　0.0497±0.0286△

2.4各組急性心肌缺血大鼠心梗面積比較見表3。與假手術(shù)組比較，模型組心梗面積明顯增大 （P< 0.01）；與模型組比較，各給藥組心梗面積明顯減?。≒< 0.01或P<0.05）。益氣活血保心湯高劑量組與復(fù)方丹參滴丸組相比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

表3　各組大鼠心梗面積比較（%，±s）

表3　各組大鼠心梗面積比較（%，±s）

組別　n假手術(shù)組　10模型組　8益氣活血保心湯低劑量組　8梗死區(qū)面積/心臟全面積3.5213±0.9817 39.8901±7.0237**36.5159±10.5364△益氣活血保心湯高劑量組　9　32.1046±9.6029△△復(fù)方丹參滴丸組　10　31.9350±11.1724△△

3　討　論

冠心病心肌梗死可歸屬于中醫(yī)學(xué)“胸痹”“真心痛”范疇，其基本病機(jī)是本虛標(biāo)實(shí)，本虛主要為氣虛，標(biāo)實(shí)重點(diǎn)在血瘀。因此在治療中常采用“行氣活血、活血化痰、補(bǔ)氣養(yǎng)血”等方法。本研究中以益氣活血法為治療原則的保心湯是在傳統(tǒng)中醫(yī)理論指導(dǎo)下，由黨參、黃芪、白術(shù)、茯苓、山楂、葛根、丹參、桃仁、川芎、紅花等組成，諸藥配伍有益氣活血之效。臨床研究亦證實(shí)益氣活血保心湯具有促進(jìn)缺血區(qū)側(cè)支循環(huán)的建立，保護(hù)受損心肌，抑制炎癥反應(yīng)，保護(hù)內(nèi)皮功能，促進(jìn)心功能的恢復(fù)作用［3-5］。

目前誘導(dǎo)大鼠急性心肌梗死最常用方法為結(jié)扎動(dòng)物的冠狀動(dòng)脈前降支，由于該模型和人類臨床心肌梗死病理生理過程最為接近，因此本實(shí)驗(yàn)同樣采用該模型來評估益氣活血保心湯的抗心肌梗死作用［6］。在急性心肌缺血及心肌梗死的臨床診斷中，ECG特異性強(qiáng)、敏感性高，且操作方便快捷，能多次重復(fù)，但由于大鼠S-T段不明顯，所以本實(shí)驗(yàn)選用ECG的J點(diǎn)位移（ΔJ）來評估益氣活血保心湯對于AMI的療效［7］。心肌缺血過程中心肌細(xì)胞膜破裂，導(dǎo)致LDH和CK-MB釋放入血，其活性反應(yīng)了心肌細(xì)胞損傷程度。TNF-α和CRP是臨床常用評價(jià)機(jī)體炎癥的敏感指標(biāo)，在心肌嚴(yán)重缺血時(shí)，其水平顯著上升［8-9］。結(jié)果示益氣活血保心湯能夠有效抑制冠脈結(jié)扎所導(dǎo)致心肌缺血，降低J點(diǎn)的位移值，減少心梗面積，減輕冠脈缺血所引起的大鼠心肌細(xì)胞損傷時(shí)LDH和CK-MB溢出，使血清中LDH 和CK-MB表達(dá)水平明顯降低，同時(shí)降低血清中THF-α與CRP的水平。

本研究表明，益氣活血保心湯對大鼠冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎所致心肌梗死具有明顯的改善作用，能保護(hù)心肌、減輕心肌梗死范圍以及心肌酶譜變化，其中以高劑量組效果最為顯著，其作用的機(jī)制可能與其抑制炎癥反應(yīng)，降低THF-α、CRP的水平有關(guān)。

［1］沈衛(wèi)峰，張奇，張瑞巖.2015年急性ST段抬高型心肌梗死診斷和治療指南解析［J］.國際心血管病雜志，2015，55（4）：217-219.

［2］邢之華，林展增.保心湯對氣虛血瘀型冠心病心絞痛患者生活質(zhì)量的影響［J］.安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，22（3）：19-21.

［3］張雙旗，陳良細(xì)，方顯明.中醫(yī)藥治療急性心肌梗死的臨床研究進(jìn)展［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2012，10（10）：1239-1241.

［4］王永剛，齊婧，鐘偉，等.冠心病中醫(yī)病因病機(jī)的認(rèn)識(shí)與探索［J］.中醫(yī)雜志，2015，65（17）：1449-1452.

［5］邢之華，林展增.保心湯對冠心病心絞痛氣虛血瘀證血漿內(nèi)皮素的影響［J］.湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，27（3）：38-39.

［6］邢之華，易亮，劉衛(wèi)平，等.保心湯對冠心病穩(wěn)定型心絞痛的臨床療效及對血漿bFGF的影響［J］.湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，27（6）：43-44.

［7］彭偉軍，邢之華，廖翔，等.益氣活血法對冠心病穩(wěn)定型心絞痛氣虛血瘀證患者血清IL-6、TNF-α及ICAM-1的影響［J］.湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，33（7）：49-51.

［8］ 卓莉莎，高云華，徐亞麗，等.大鼠心肌梗死模型的建立與評價(jià)［J］.臨床超聲醫(yī)學(xué)雜志，2009，22（9）：577-580.

［9］Naruse Y，Nogami A，Harimura Y，et al.Difference in the clinical characteristics of ventricular fibrillation occurrence in the early phase of an acute myocardial infarction between patients with and without J waves［J］.J Cardiovasc Electrophysiol，2015，26（8）：872-878.

［10］Li GL，Yang L，Cui CC，et al.J wave syndromes：a decade of progress［J］.Chin Med J（Engl），2015，128（7）：969-975.

［11］Bruins SM，van der Heijden GJ，Stelpstra SD，et al.Point-ofcare tests in suspected acute myocardial infarction：a systematic review［J］.Int J Cardiol，2013，168（6）：5355-5362.

［12］張新超.心血管生物標(biāo)記物與即時(shí)檢驗(yàn)［J］.中國心血管雜志，2015，30（2）：81-84.

［13］劉虹.常見心肌標(biāo)志物診斷急性冠狀動(dòng)脈綜合征的應(yīng)用探討［J］.實(shí)用醫(yī)技雜志，2014，（12）：1306-1307.

［14］Wang J，Tang B，Liu X，et al.Increased monomeric CRP levels in acute myocardial infarction：a possible new and specific biomarker for diagnosis and severity assessment of disease［J］. Atherosclerosis，2015，239（2）：343-349.

［15］Wang J，Li C，Cao Y，et al.Mechanism of QSYQ on antiapoptosis mediated by different subtypes of cyclooxygenase in AMI induced heart failure rats［J］.BMC Complement Altern Med，2015，15：352.

［16］Cho E，Kim M，Ko YS，et al.Role of inflammation in the pathogenesis of cardiorenal syndrome in a rat myocardial infarction model［J］.Nephrol Dial Transplant，2013，28（11）：2766-2778.

Effect of Yiqi Huoxue Baoxin Decoction on Rats with Acute Myocardial Infarct

WANG Weihao，XING Zhihua，LIU Weiping，et al. Institute of Intergrated Chinese and Western Medicine，Xiangya Hospital，Central Souh University，Hunan，Changsha 410008，China.

R285.5文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

1004-745X（2016）06-997-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2016.06.015

湖南省長沙市科技計(jì)劃項(xiàng)目（No.K1205018-31）

△（電子郵箱：xzh_56@163.com）

（2016-01-06）