不同溶劑絞股藍(lán)提取物清除自由基性能

王　蕾,甘美嬌,劉澤宏,王依楠,朱妙琴

(浙江外國語學(xué)院科技學(xué)院，浙江　杭州　310012)

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不同溶劑絞股藍(lán)提取物清除自由基性能

王蕾,甘美嬌,劉澤宏,王依楠,朱妙琴

(浙江外國語學(xué)院科技學(xué)院，浙江杭州310012)

分別以80℃水和25℃ 50%的乙醇溶液為提取溶劑,固液比1:30,以普通震蕩法提取絞股藍(lán)中黃酮類(包括兒茶素、原花青素)物質(zhì)，紫外顯色法測定兩種提取液中黃酮類物質(zhì)含量。結(jié)果表明：提取液中黃酮類物質(zhì)含量分別為18.0 mg/g和6.00 mg/g，提取液溫度對絞股藍(lán)中黃酮類物質(zhì)的提取效果影響較大。80℃水提取液比25℃ 50%的乙醇提取液清除DPPH自由基的能力更強(qiáng);清除自由基能力與提取物中黃酮類物質(zhì)含量并不完全呈正比。

絞股藍(lán);黃酮類物質(zhì);清除自由基

絞股藍(lán)，又名七葉膽、五葉參、甘茶曼等，是屬于葫蘆科絞股藍(lán)多年生草本類植物。絞股藍(lán)含有絞股藍(lán)皂苷、糖類、黃酮類、氨基酸等[1-3]。研究表明，植物黃酮類物質(zhì)具有較強(qiáng)的清除自由基能力和抗氧化活性，可使機(jī)體免受代謝過程中產(chǎn)生的自由基和過氧化物的損害。目前對于絞股藍(lán)黃酮、多糖提取以及藥理研究較多[4-5]，但對于不同溶劑的絞股藍(lán)黃酮類提取物清除自由基性能比較研究不多。作者分別以80℃純水(模擬人們喝茶溫度)和25℃ 50%的乙醇為提取溶劑，用普通震蕩法對絞股藍(lán)中黃酮類物質(zhì)進(jìn)行提取和分析，并對兩種方法的提取物清除DPPH自由基性能進(jìn)行了量效研究，以期為絞股藍(lán)提取物的經(jīng)濟(jì)提取及利用提供參考依據(jù)。

1　儀器與材料

HY-3A多功能振蕩器，江蘇金壇市金南儀器廠；UV-2550PC紫外可見分光光度計(jì)，日本。

絞股藍(lán)，產(chǎn)自浙江麗水。將絞股藍(lán)60℃烘干，粉碎過40目篩，樣品密閉避光保存，備用。蘆丁對照品,二苯基苦基苯肼(DPPH),其他試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1絞股藍(lán)中黃酮類物質(zhì)的提取

[6-8]的提取方法。準(zhǔn)確稱取1.0 g的絞股藍(lán)樣品，于250 mL錐形瓶中,分別加入30 mL 80℃的蒸餾水和30 mL 25℃ 50%的乙醇溶液(固液比1:30)，設(shè)置一定溫度浸取10 min，置于多功能振蕩器上振蕩30 min，抽濾得提取液，密閉、避光儲存,備用。

2.2蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

準(zhǔn)確吸取不同體積的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液于7支25.00 mL比色管中，加入5%亞硝酸鈉溶液1.0 mL，10%硝酸鋁溶液1.0 mL混勻，室溫靜置6 min，最后加入4%氫氧化鈉溶液10 mL，蒸餾水定容至25.00 mL，室溫靜置15 min，510 nm波長處測得其吸光度，繪制A-C標(biāo)準(zhǔn)曲線。

如圖1所示，得線性回歸方程:y=12.162x+0.0002,R=0.9993。

圖1　蘆丁溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.3提取液中黃酮類物質(zhì)含量的測定

參考文獻(xiàn)[9]測定提取液中總黃酮含量。分別用吸量管準(zhǔn)確吸取50%乙醇絞股藍(lán)提取液和80℃水絞股藍(lán)提取液各1 mL于25 mL比色管中，加入5%亞硝酸鈉溶液1 mL混勻，室溫靜置6 min，然后加入10%硝酸鋁溶液1 mL混勻，室溫靜置6 min，最后加入4%氫氧化鈉溶液10 mL，加蒸餾水定容至25.00 mL，室溫靜置15 min，510 nm波長處測得其吸光度分別為0.1473和0.4390。由線性回歸方程知，25℃ 50%乙醇絞股藍(lán)提取液和80℃水絞股藍(lán)提取液中黃酮類物質(zhì)的濃度分別為0.012 mg/mL和0.036 mg/mL。計(jì)算得到兩種不同絞股藍(lán)提取液中黃酮的含量分別為0.6%和1.8%，即6.00 mg/g和18.0 mg/g。

2.4提取液清除DPPH自由基的能力與黃酮類物質(zhì)量效關(guān)系

在1號試管中依次加入2.5 mL 6.5×10-5mol/L DPPH溶液和1.5 mL體積分?jǐn)?shù)為50%的乙醇溶液,純水稀釋至10.00 mL,混勻,室溫靜置20 min,于517 nm處測定其吸光度記為A0，在2號和3號試管中分別加入2.5 mL 6.5×10-5mol/L 的DPPH溶液和相同體積的兩種絞股藍(lán)提取液,純水稀釋至10.00 mL混勻,室溫靜置20 min后,于517 nm處測定其吸光度記為As1和As2；在4號和5號試管中分別加入2.5 mL 50%的乙醇溶液和等體積的兩種絞股藍(lán)提取液,純水稀釋至10.00 mL混勻，室溫靜置20 min,于517 nm處測定其吸光度記為Ar1和As2。

按以下公式計(jì)算提取液對DPPH自由基的清除率，結(jié)果見表1，表2。

消除率

從表1可以看出：80℃水絞股藍(lán)提取液對DPPH自由基有清除效果，且效果很明顯。測定液中黃酮類物質(zhì)含量在 0.09～0.27 mg/10 mL范圍內(nèi)對DPPH清除率隨濃度上升明顯提高。但當(dāng)測定液中黃酮類物質(zhì)濃度達(dá)到0.36 mg/10 mL時(shí),清除率逐漸降低。這與有關(guān)報(bào)道相符[10-11]，一些天然抗氧化劑在高濃度時(shí)會表現(xiàn)促氧化作用，對自由基清除能力下降。

表2　50%乙醇絞股藍(lán)提取液對DPPH自由基的消除率

從表2可以看出：25℃ 50%乙醇絞股藍(lán)提取液對DPPH自由基有清除效果，測定液中黃酮類物質(zhì)濃度0.15 mg/10 mL時(shí)，清除率可達(dá)40.70%。測定液中黃酮濃度在 0.03～0.15 mg/10 mL范圍內(nèi)對DPPH清除率隨濃度上升而提高。比較表1和表2可以看出，80℃水絞股藍(lán)提取液比50%乙醇絞股藍(lán)提取液對DPPH自由基的清除效果明顯要好。說明提取液溫度對提取效果影響明顯；隨著提取液溫度升高，絞股藍(lán)中水溶性黃酮類物質(zhì)含量較多。

3　結(jié)　論

以80℃純水和25℃ 50%的乙醇溶液為提取溶劑，以普通震蕩法提取絞股藍(lán)中黃酮類(包括兒茶素、原花青素)物質(zhì)，80℃純水提取液中黃酮類物質(zhì)含量較25℃ 50%的乙醇溶液高得多，說明提取液溫度對黃酮類物質(zhì)提取效果影響較大。固液比均為1:30的80℃純水絞股藍(lán)提取液比25℃ 50%的乙醇溶液絞股藍(lán)提取液，清除DPPH自由基能力明顯要好。說明80℃水絞股藍(lán)提取液中水溶性黃酮類物質(zhì)含量較多，符合人們平時(shí)喝茶保健習(xí)慣。清除自由基能力與提取物中黃酮類物質(zhì)含量并不完全呈正比。因此，食品工業(yè)生產(chǎn)過程提取絞股藍(lán)中黃酮類物質(zhì)，可以用75～80℃普通純水作為提取溶劑，既節(jié)約提取成本也便于規(guī)模化生產(chǎn)。

參考文獻(xiàn)

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[4]歐陽輝,田啟建,余佶,等.酶法輔助提取絞股藍(lán)中總黃酮工藝優(yōu)化[J].中草藥，2011,42(5):886-889.

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[11]姜麗燕.三類天然抗氧化劑的化學(xué)研究[D].杭州:浙江大學(xué),2011.

Ability of Free Radical Scavenging by Different Gynostemma Extracts

WANG Lei，GAN Mei-jiao，LIU Ze-hong，WANG Yi-nan，ZHU Miao-qin

(School of Science and Technology，Zhejiang International Studies University，Zhejiang Hangzhou 310012，China)

To optimize the extracting total flavonoids,80℃ water and 25℃ 50% ethanol were used to extract the flavanolin Gynostemma,include catechin and polyprocyanidin.The contents of flavanols were determined in two extracts.The contents of flavanol were 18.0 mg/g by 80℃ water and 6.00 mg/g by 50% ethanol.The 80℃ water was batter than 50% ethanol on extracting the contents of flavanol in Gynostemma.The 80℃ water extracts were more batter on scavenging of DPPH (1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl) than 50% ethanol.It was no effective on free radical scavenging activity to contents of flavanols.

Gynostemma;flavanol;free radical scavenging

王蕾(1994-)，女；甘美嬌(1994-)，女；劉澤宏(1994-)，男；王依楠(1994-)，女;分別為浙江外國語學(xué)院科學(xué)技術(shù)學(xué)院化學(xué)系2012級，2013級學(xué)生。

朱妙琴(1963-)，女，教授，理學(xué)碩士，主要從事天然藥植物有效成分提取與應(yīng)用研究。

TQ914.1

B

1001-9677(2016)04-0061-02