高效液相色譜法測定環(huán)丙酰草胺原藥中有效成分的含量

陳迎麗，王永士，肖　飛，宋光林，楊鴻波

(1貴州大學，貴州　貴陽　55002；2貴州省分析測試研究院，貴州　貴陽　550002)

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高效液相色譜法測定環(huán)丙酰草胺原藥中有效成分的含量

陳迎麗1，2，王永士2，肖飛1，2，宋光林2，楊鴻波2

(1貴州大學，貴州貴陽55002；2貴州省分析測試研究院，貴州貴陽550002)

為了建立一種高效液相色譜測定環(huán)丙酰草胺含量的分析方法，為農(nóng)藥登記提供科學的評估數(shù)據(jù)。采用高效液相色譜法，使用ZORBAXSB-C18色譜柱，以甲醇+水(含2 %冰乙酸)=90+10(V/V)為流動相，流速為1mL/min，在255nm波長下對環(huán)丙酰草胺進行定量分析。結(jié)果表明當環(huán)丙酰草胺質(zhì)量濃度在25～400mg/L范圍內(nèi)，高效利用液相色譜法的線性相關(guān)系數(shù)為0.999 1，精密度試驗相對標準偏差為0.20 %，平均回收率為：99.2 %。該分析方法準確、快速，適用于環(huán)丙酰草胺定量分析。

環(huán)丙酰草胺，高效液相色譜，定量分析

環(huán)丙酰草胺化學結(jié)構(gòu)見圖1，純品為白色粉狀固體，通用名稱為Cyclanilide，化學名稱為：1-(2，4-二氯苯氨基羰基)環(huán)丙烷羧酸，分子式：C11H9Cl2NO3，CAS號：113136-77-9，熔點195.5℃，蒸汽壓<1×10-5Pa(25℃)、8×10-6Pa(50℃)，分配系數(shù)Kow lgP=3.25(21℃)。環(huán)丙酰草胺屬植物生長調(diào)節(jié)劑，即可以抑制頂端優(yōu)勢，促進植物側(cè)芽萌發(fā)、側(cè)枝的生長，對一些觀賞植物起到自然修剪的作用，如秋焰紅楓[1]，也可以增加一些觀賞花花朵的數(shù)量，如輪葉金雞菊[2]。從經(jīng)濟方面考慮，環(huán)丙酰草胺可以促進一些植物的成熟，縮短植物的收獲時間，如蘋果[3]，棉花[4]等。有文獻報道[5]，使用HPLC-MS / MS的方法可以檢測出水果中的環(huán)丙酰草胺含量，但近年來關(guān)于環(huán)丙酰草胺原藥中有效成分分離和定量分析的文獻報道很少，本文采用反相高效液相色譜法，使用C18色譜柱和紫外可變波長檢測器，對環(huán)丙酰草胺原藥中有效成分進行分離和定量分析。該方法具有操作簡單、準確度高，重現(xiàn)性好等特點，能為環(huán)丙酰草胺的生產(chǎn)質(zhì)量控制和分析方法提供參考。

圖1　環(huán)丙酰草胺結(jié)構(gòu)式Fig.1　The constitutional formula of Cyclanilide

1　實驗部分

1.1儀器與試劑

Agilent 1220 液相色譜儀；Agilent UV-Vis 8453紫外分光光度計；超聲波振蕩器；AL204電子天平；甲醇(色譜純，Honeywell Burdick Jackson Ulsan，680-160 Korea，批號：100296)；環(huán)丙酰草胺標準品(99.9 %，Dr.Ehrenstorfer GmbH)；蒸餾水為新蒸二次蒸餾水；環(huán)丙酰草胺原藥(四川國光農(nóng)化股份有限公司)。

1.2色譜條件

色譜柱：ZORBAX SB-C18，4.6×250 mm×5 μm；流動相：甲醇+水(含2 %冰乙酸)=90+10(V / V)；流速：1 mL / min；檢測波長：255 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：5 μL。在上述色譜操作條件下，環(huán)丙酰草胺的保留時間大約為3.9 min。

圖2　環(huán)丙酰草胺標樣色譜圖Fig.2　HPLC standard chromatogram of cyclanilide

圖3　環(huán)丙酰草胺原藥色譜圖Fig.3　HPLC chromatograms of cyclanilide

1.3試驗方法

1.3.1標準溶液的配制

稱取0.025 0 g環(huán)丙酰草胺標準品于25 mL容量瓶中，用甲醇溶解定得到環(huán)丙酰草胺標準品濃度為1 000 mg / L的儲備液，搖勻備用。稀釋1 000 mg / L的儲備液為以下濃度：25、50、100、200和400 mg / L，搖勻作為標準溶液。

神經(jīng)外科患者免疫力低,侵入性操作多,是醫(yī)院感染監(jiān)測的重點人群。通過主動性目標監(jiān)測,及時發(fā)現(xiàn)感染的危險因素,采取針對性的預(yù)防控制措施。

1.3.2試樣溶液的配制

準確稱取環(huán)丙酰草胺原藥0.010 3、0.010 1、0.010 2、0.010 2、0.010 0 g于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解定容，得到環(huán)丙酰草胺原藥濃度分別為103 mg / L、101 mg / L、102 mg / L、102 mg / L、100 mg / L的溶液，搖勻作為試樣溶液。

1.3.3樣品溶液的測定

在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定性后，連續(xù)注入數(shù)針標樣溶液，直至相鄰兩針環(huán)丙酰草胺的響應(yīng)值相對變化小于1.2 %后，按標準溶液、試樣溶液的順序進行測定。

1.3.4計算

樣品有效成分含量W(%)按下式(1)計算：

W=C×P×V×D×10-6/ M

(1)

式中：

W：樣品有效成分含量(%)；

C：測定濃度(mg·L-1)；

P：標準樣品純度(%)；

V：樣品定容體積(mL)；

D：樣品稀釋倍數(shù)；

M：樣品質(zhì)量(g)。

2　結(jié)果與討論

2.1流動相的選擇

色譜柱及流動相的選擇是決定液相色譜分離效果的關(guān)鍵，分別用甲醇和乙腈配制流動相進行實驗，甲醇在255 nm波長下吸光度值低，粘度小，分離效果和色譜峰形均較好，所以選擇甲醇作為流動相中的有機相。環(huán)丙酰草胺為弱酸性，因此當流動相呈弱酸性時，可以抑制待測組分的解離，延長各組分在固定相上的保留時間并改善峰形。為使其能得到完全分離，調(diào)節(jié)流動相中水溶液的pH進行實驗。同時分別用鹽酸、磷酸、甲酸和冰乙酸來調(diào)節(jié)流動相的酸度，由實驗得知用冰乙酸調(diào)節(jié)pH時，引起基線的漂移最小，靈敏度最佳，所以本實驗采用2 %冰乙酸調(diào)節(jié)流動相的pH值。

2.2檢測波長的選擇

使用紫外可見光分光光度儀對環(huán)丙酰草胺的標準溶液進行200～400 nm的全波長掃描(見圖4)得到其最大吸收波長為210 nm，但是在該波長處干擾峰多，不適合常量分析。在255nm為環(huán)丙酰草胺的第2個吸收峰，在該波長下，環(huán)丙酰草胺吸收值適中，線性范圍寬，可以滿足定量分析要求。

圖4　環(huán)丙酰草胺紫外吸收譜圖Fig.4　UV Absorbance of cyclanilide

2.3線性范圍

在1.2色譜條件下，分別注入不同質(zhì)量濃度的環(huán)丙酰草胺標準溶液，從而得到不同質(zhì)量濃度的環(huán)丙酰草胺的峰面積。峰面積(y)與濃度(x)之間表現(xiàn)良好的線性，線性方程為y=20.237 28x+ 32.366 42，相關(guān)系數(shù)為：0.999 1。具體數(shù)據(jù)見表1，校正曲線見圖5。

2.4精密度測定

在相同的色譜操作條件下，取同一原藥樣品平行測定6次，計算環(huán)丙酰草胺的濃度。結(jié)果見表2，方法的標準偏差為0.21 %，變異系數(shù)為0.20 %，表明該方法可用。

表1　環(huán)丙酰草胺標準品的濃度與峰面積Tab.1　The concentration and peak area of cyclanilide standard

圖5　環(huán)丙酰草胺標準曲線Fig.5　Calibration curve of cyclanilide 表2　環(huán)丙酰草胺精密度測定結(jié)果 Tab.2　The precision of the determination results of cyclanilide

樣品編號測定含/(μg·mL-1)平均值/%標準偏差/%變異系數(shù)/%1100.512100.903100.484100.475100.586100.27100.540.210.20

2.5準確度測定

取0.010 1 g樣品，用甲醇溶解并定容至100 mL，配制成100 μg / mL溶液；將100 μg / mL的環(huán)丙酸酰草胺標準品溶液按照體積比1∶1加入到上述樣品溶液中，配制成濃度為100.50 μg / mL的待測溶液。重復(fù)上述操作，配制6份與待測組分含量測定時濃度相同的待測溶液。按上述1.2條件重復(fù)測定6次，結(jié)果見表3，均回收率為 99.19 %，變異系數(shù)為0.22 %。表明本方法可用。具體數(shù)據(jù)見表3。

表3　環(huán)丙酰草胺準確度測定結(jié)果Tab.3　The accuracy of determination results of cyclanilide

3　結(jié)論

隨著高效液相色譜儀的發(fā)展，高效液相色譜儀已經(jīng)成為當今農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量檢測、環(huán)境檢測、化學品檢測以及農(nóng)藥殘留檢測的主要手段。實驗結(jié)果表明，本文所建立的檢測方法操作簡單，具有較高的準確度和精密度線性關(guān)系良好，是進行產(chǎn)品質(zhì)量檢測較理想的分析方法。

【REFERENCES】

[1]Mickelbart V M.Cyclanilide Differentially Affects Branching in Red Maple Cultivars and Hybrids[J].Journal of Environmental Horticulture，2011，29(1)：35-38.

[2]FARRIS M E，KEEVER G J，KESSLER J R，et al.Cyclanilide Promotes Shoot Production and Flowering of Coreopsis and Coneflower during Nursery Production[J].Journal of Environmental Horticulture， 2011，29(3)：108.

[3]EIFVING D C，VISSER D B.Cyclanilide Induces Lateral Branching in Apple Trees[J].Hort Science，2005，40(1)：119-122.

[4]BURTON J D，PEDERSEN M K，COBLE H D.Effect of Cyclanilide on Auxin Activity[J].Journal of Plant Growth Regulation，2008，27(4)：342-352.

[5]HUANG H H，ZHANG J，XU D M，et al.Determination of 21 plant growth regulator residues in fruits by QuEChERS-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J].Chinese Journal of Chromatography，2014，32(7)：707-716.

Determination of active ingredients content in cyclanilide by HPLC

CHEN Yingli1，2，WANG Yongshi2，XIAO Fei1，2，SONG Guanglin2，YANG Hongbo2

(1GuizhouUniversity，Guiyang550002；2GuizhouAcademyofTestingandAnalysis，Guiyang550002，China)

An HPLC method was developed for the quantitative determination of cyclanilide.The result would provide scientific data for pesticide registration.The content of active ingredients in cyclanilide was determined quantitatively by HPLC with ZORBAX SB C18 column at UV 255 nm，and methanol-water(90︰10，V / V) as mobile phase at a flow rate of 1 mL / min.The assay exhibited a good linearity when the cyclanilide concentration was from 25 to 400 mg / L with a coefficient of 0.9991.The relative standard deviation was 0.20 % and the average recovery was 99.2 %.The method is simple and accurate，and is suitable for the quantitative analysis of cyclanilide.

cyclanilide，HPLC，quantitative analysis

TQ450.7

A

1003-6563(2016)04-0061-04

2016-05-27；

2016-06-03

陳迎麗(1989-)，女，本科。研究方向：從事儀器分析。