山茱萸果核水溶性成分對(duì)實(shí)驗(yàn)性心律失常的影響

李永瑞，周培源，李 艷

·基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)·

山茱萸果核水溶性成分對(duì)實(shí)驗(yàn)性心律失常的影響

李永瑞1，周培源2，李 艷1

目的 觀察山茱萸果核水溶性成分對(duì)實(shí)驗(yàn)性心律失常模型心電圖的影響。方法 選用健康小鼠和大鼠，隨機(jī)分為模型組、陽(yáng)性藥對(duì)照組、山茱萸果核水溶性成分低劑量組和高劑量組，灌胃1次·d-1，連續(xù)5 d。比較山茱萸果核水溶性成分對(duì)CaCl2、氯仿誘發(fā)小鼠心律失常以及烏頭堿所誘發(fā)大鼠心律失常心電圖室性早搏(VE)、室性心動(dòng)過速(VT)、心室纖顫(VF)和心臟停搏(CA)潛伏期的影響。結(jié)果 ①果核高劑量組對(duì)氯化鈣誘發(fā)的小鼠室顫潛伏期延長(zhǎng)為(2.37±0.09)s，心律失常持續(xù)時(shí)間縮短為(150.9±51.2) s，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；②果核高劑量組對(duì)氯仿誘發(fā)的小鼠室顫發(fā)生率(70%)低于模型組(70%)，P<0.05；③高劑量組VE(8.20±0.84) s、VT (112.00±6.60) s、VF (19.5±1.29)s、CA (54.32±10.20) s潛伏期延長(zhǎng)，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 山茱萸果核水溶性成分對(duì)氯化鈣、氯仿及烏頭堿誘發(fā)的實(shí)驗(yàn)性心律失常有對(duì)抗作用，可能與鈉通道阻滯、鈣通道阻滯及降低機(jī)體對(duì)兒茶酚胺的敏感性有關(guān)。

山茱萸果核水溶性成分；心律失常；小鼠；氯化鈣；烏頭堿

山茱萸系落葉喬木或灌木，其果核含有大量對(duì)人體有益的有機(jī)物，包括脂溶性和水溶性成分等多種活性成分，如有機(jī)酸、酚類、多糖、環(huán)烯醚萜類、蛋白質(zhì)、氨基酸、黃酮、蒽醌、甾體、三萜、揮發(fā)油、維生素、脂肪酸等[1]。有研究表明，山茱萸果核水提取物對(duì)大鼠腎性高血壓有降壓作用[2]，其降壓作用與舒血管有關(guān)；其舒血管作用主要是內(nèi)皮依賴性的，通過NO-鳥苷酸環(huán)化酶途徑和環(huán)氧酶途徑[3]。為進(jìn)一步了解山茱萸果核水溶性成分的作用，本研究通過山茱萸果核水溶性成分對(duì)心律失常的實(shí)驗(yàn)研究，為山茱萸果核的開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 SD大白鼠、小鼠，由河南科技大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 藥品與儀器 烏頭堿(E.Merck，德國(guó))；烏拉坦、氯化鈣、氯仿(西安化學(xué)試劑廠)；山茱萸果核水溶性成分(山茱萸果核水溶性成分提取：稱取山茱萸果核500 g，清洗、烘干、粉碎，加入4倍量的蒸餾水，浸泡 24 h，加熱至100 ℃，30 min，過濾，回收濾液，濃縮至生藥量濃度為1 g·mL-1。)，河南科技大學(xué)藥學(xué)實(shí)驗(yàn)中心提供；BL-420E+生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司)；ECG-6511心電機(jī)(上海光電醫(yī)用電子儀器有限公司)；BT01-100A型蠕動(dòng)泵(保定蘭格計(jì)算機(jī)技術(shù)有限公司)。

1.3 方法 選用不同的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物心律失常模型，觀察不同濃度的山茱萸果核水溶性成分預(yù)處理對(duì)心律失常模型的潛伏期、心電圖的影響。

1.3.1 氯化鈣誘發(fā)小鼠室顫模型 氯化鈣所致小鼠心律失常實(shí)驗(yàn)KM小鼠40只，雌雄兼用，隨機(jī)分為4組，每組10只。陽(yáng)性對(duì)照組實(shí)驗(yàn)前30 min腹腔注射0.1 mg·mL-1鹽酸利多卡因10 mL·kg-1。實(shí)驗(yàn)前各組小鼠20%烏拉坦6 mL·kg-1腹腔注射麻醉，連接BL-420E+生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)記錄Ⅱ?qū)碾妶D，描記給藥前心電圖，尾靜脈10 s內(nèi)快速注射2.5%氯化鈣(3 mL·kg-1)，記錄心電圖，計(jì)算注射氯化鈣后小鼠心律失常潛伏期及心律失常持續(xù)時(shí)間。

1.3.2 氯仿誘發(fā)小鼠心律失常模型 健康小鼠40只，雌雄兼用，體質(zhì)量(33±3) g。按照隨機(jī)原則分為4組，每組10只。分別為：模型組(生理鹽水，10 mL·kg-1，灌胃)、陽(yáng)性藥組(鹽酸利多卡因，1 mg·kg-1腹腔注射)；果核低劑量組(200 mg·kg-1，灌胃)；果核高劑量組(400 mg·kg-1，灌胃)。造模前模型組、果核低劑量組、果核高劑量組連續(xù)給藥5 d，每日1次。末次給藥后1 h，給予氯仿造模。陽(yáng)性對(duì)照藥一次性腹腔注射0.1 mg·mL-1鹽酸利多卡因100 mL·kg-1，30 min后造模。將動(dòng)物依次放入裝有4 mL氯仿棉球的廣口瓶?jī)?nèi)，每換1只動(dòng)物就重新加入1 mL的氯仿，直到動(dòng)物停止呼吸，迅速開胸，暴露心臟，觀察心臟節(jié)律，并計(jì)算室顫的發(fā)生率。

1.3.3 烏頭堿誘發(fā)大鼠心律失常模型 SD大鼠32只，體質(zhì)量(220±20) g，雌雄兼用。隨機(jī)分為4組，每組8只。模型組(生理鹽水，10 mg·kg-1)、陽(yáng)性藥組(鹽酸利多卡因1 mg·kg-1)；果核低劑量組(200 mg·kg-1)；果核高劑量組(400 mg·kg-1)。造模前模型組、果核低劑量組、果核高劑量組連續(xù)給藥5 d，每次1次。受試物經(jīng)濾器過濾，滅菌，備用。在實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水12 h，20%的烏拉坦以6 mL·kg-1的劑量腹腔麻醉，連接心電導(dǎo)聯(lián)，描記標(biāo)Ⅱ?qū)?lián)心電圖。用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10 mg·L-1的烏頭堿以3.5 μg·min-1用蠕動(dòng)泵經(jīng)一側(cè)頸靜脈恒速灌入，記錄大鼠出現(xiàn)室性早搏(ventricular extrasystole,VE)、室性心動(dòng)過速(ventricular tachycardia,VT)、心室纖顫(ventricular fibrillation,VF)、心臟停搏(cardiac arrest,CA)的時(shí)間。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)氯化鈣誘發(fā)小鼠室顫的影響 山茱萸果核高劑量組小鼠發(fā)生心律失常的潛伏期延長(zhǎng)(2.37±0.09) s，心律失常持續(xù)時(shí)間縮短(150.9±51.2) s，與模型組比較P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

表1 對(duì)CaCl2所致心律失常的影響

注：①與模型組比較P<0.05；②與模型組比較P<0.05。

2.2 對(duì)氯仿誘發(fā)小鼠心律失常 山茱萸果核高劑量組小鼠室顫發(fā)生率降低，數(shù)量為7只，占70.00%，與模型組比較P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表2。

表2 對(duì)氯仿誘發(fā)心律失常的影響

注：①與模型組比較P<0.05；②與模型組比較P<0.05。

2.3 對(duì)烏頭堿誘發(fā)大鼠心律失常 山茱萸果核高劑量組心律失常潛伏期延長(zhǎng)VE(8.2±0.84) s，VT(112.0±6.60) s，VF(19.5±1.29) s，CA(54.3±10.20) s，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，見表3。

表3 對(duì)烏頭堿誘發(fā)心律失常的影響±s，n=10)

注：①與模型組比較P<0.05。VE：室性早搏；VT：室性心動(dòng)過速；VF：心室纖顫；CA：心臟停搏。

3 討論

張?zhí)m桐等[4]山茱萸提取液抗心律失常有效部位的研究表明，山茱萸提取液中的總有機(jī)酸和一種未知的微量成分具有明顯的抗心律失常作用，山茱萸的果肉與果核有許多化學(xué)成分相似，果核較果肉成分更加豐富且具有多種藥理作用，如李曉明等[5]山茱萸果核中多酚的抗氧化活性研究表明果核多酚具有體外抗氧化作用；楊暉等[6]采用HPLC法測(cè)定山茱萸果核中存在草酸、酒石酸、DL-蘋果酸、檸檬酸和沒食子酸這5 種有機(jī)酸存在于山茱萸果核中,其中 DL-蘋果酸和沒食子酸含量較高，說明山茱萸果核與果肉均含有有機(jī)酸。因此，推測(cè)山茱萸果核的水溶性也可能具有抗心律失常作用，為山茱萸果核進(jìn)一步開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

3.1 山茱萸與氯化鈣模型小鼠室顫 氯化鈣誘發(fā)心律失常的作用機(jī)制與Ca2+對(duì)心臟的直接作用、心臟受腎上腺素能神經(jīng)的影響有關(guān)[7-8]。心臟不同部位的心肌細(xì)胞對(duì)鈣有不同的敏感度，通過尾靜脈給小鼠注射氯化鈣后，小鼠體內(nèi)細(xì)胞外鈣離子濃度升高。當(dāng)細(xì)胞外鈣增加時(shí)，能降低心肌蒲氏纖維的興奮性，顯著增加普通心肌的去極化，導(dǎo)致局部傳導(dǎo)阻滯，并增加沖動(dòng)擴(kuò)散的紊亂，從而誘發(fā)心律失常[9-10]。研究結(jié)果顯示模型動(dòng)物心律失常潛伏期延長(zhǎng)和心律失常持續(xù)時(shí)間縮短，提示山茱萸果核水溶性成分抗心律失常作用可能與抑制鈣通道的開放以及抑制心肌細(xì)胞去極化有關(guān)。

3.2 山茱萸與氯仿模型小鼠心律失常 氯仿作用于心肌細(xì)胞，可直接導(dǎo)致心室不應(yīng)期不規(guī)則地延長(zhǎng)、復(fù)極不均一性增加，植物神經(jīng)及其釋放介質(zhì)或腎上腺髓質(zhì)釋放腎上腺素和去甲腎上腺素增加。在這一過程中，機(jī)體對(duì)腎上腺素的敏感性增加[10-12]，小鼠室顫的發(fā)生由上述兩者的相互作用而引起[13-14]。本研究中山茱萸果核水溶性成分高劑量組心律失常室顫發(fā)生潛伏期較模型組延長(zhǎng)，提示該成分不但對(duì)氯仿導(dǎo)致的心律失常有抵抗作用，而且可能還具有中樞抗心律失常作用。

3.3 山茱萸與烏頭堿模型大鼠心律失常 烏頭堿誘發(fā)大鼠心律失常是抗心律失常新藥研究時(shí)常用的模型[8]。過量的烏頭堿激活心肌細(xì)胞的快Na+通道，使Na+通道開放，心肌細(xì)胞內(nèi)流加速，細(xì)胞膜去極化加快，加速起搏點(diǎn)的自律性；提高房室束—浦肯野系統(tǒng)和心房傳導(dǎo)組織等快反應(yīng)細(xì)胞的自律性，進(jìn)而形成一源或多源性異位節(jié)律，縮短心肌不應(yīng)期，致心律失常[13-17]。高劑量組VE、VT、VF、CA的潛伏期明顯延長(zhǎng)。提示山茱萸果核水溶性成分可對(duì)抗烏頭堿導(dǎo)致的心律失常。

綜上所述，山茱萸果核水溶性成分對(duì)實(shí)驗(yàn)性心律失常有保護(hù)作用，但其機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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Effects of Fructus Corni Fruit Core Water-Soluble Components on Experimental Arrhythmia

LI Yong-rui1, ZHOU Pei-Yuan2, LI Yan1

(1.Department of Pharmacology of Medical College,Hennan University of Science and Technology,Luoyang 471003,China;2.Yiyang County People′s Hospital,Luoyang 471600,China)

ObjectiveTo study the effect of Fructus Corni fruit core water-soluble components on electrocardiogram(ECG) of experimental arrhythmia model.MethodsThe healthy Kunming mice and SD rats were randomly divided into control group,positive drug group,low and high dosage of the water-soluble constituents of Fructus Corni fruit core with drug intragastric administration once a day for 5days. ECG was recorded among different arrhythmia induced by CaCl2, chloroform and aconitine in each group.Results①Latency of mouse ventricular fibrillation induced by calcium chloride were extended in the core of high dose group (2.37±0.09) s , and the duration of ventricular arrhythmia were shortened(150.9±51.2) s, so there were statistically significant compared with the model group(allP<0.05).②The ventricular fibrillation ratio of Fructus Corni fruit core water-soluble components in high dose group decreased in mice induced by chloroform compared with the control group(P<0.05).③The latency of VE(8.20±0.84) s, VT(112.00±6.60) s, VF(19.5±1.29) s and CA(54.32±10.20) s were prolonged in high-dose group(P<0.05).ConclusionFructus Corni fruit core water-soluble components had a protective effect on arrhythmia model by CaCl2, chloroform and aconitine. The mechanism might be related to sodium channel blockade, calcium channel blockade and the body′s sensitivity of catecholamine reduced.

Fructus Corni；arrhythmia；mice；calcium chloride；aconitine

1672-688X(2016)04-0241-03

10.15926/j.cnki.issn1672-688x.2016.04.001

河南省科技廳科技攻關(guān)項(xiàng)目(082102310031)

2016-08-31

1.河南科技大學(xué)，河南洛陽(yáng) 471003 2.宜陽(yáng)縣人民醫(yī)院，河南宜陽(yáng) 471600

李永瑞(1989-)，女，河南濮陽(yáng)人，從事中藥藥理學(xué)研究。

李艷(1962-)，女，教授，Email：lyhkdly@163.com

R285.5;R965.2

A