• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    無定形介孔磷酸鋯固定葡萄糖氧化酶的直接電化學(xué)

    2016-08-22 02:46:16于志輝黃鵬飛汪夏燕
    化工學(xué)報(bào) 2016年5期
    關(guān)鍵詞:葡萄糖氧化酶無定形伏安

    于志輝,黃鵬飛,汪夏燕

    (北京工業(yè)大學(xué)環(huán)境與能源工程學(xué)院,北京 100124)

    ?

    無定形介孔磷酸鋯固定葡萄糖氧化酶的直接電化學(xué)

    于志輝,黃鵬飛,汪夏燕

    (北京工業(yè)大學(xué)環(huán)境與能源工程學(xué)院,北京 100124)

    利用無定形介孔磷酸鋯(ZrP)為載體,通過吸附法固定葡萄糖氧化酶(GOD),修飾玻碳(GC)電極得到GOD/ZrP/GC電極。在0.1 mol·L-1磷酸鹽緩沖溶液中,利用循環(huán)伏安法研究了GOD/ZrP/GC電極的直接電化學(xué)行為和對(duì)葡萄糖的催化性能。結(jié)果表明,無定形磷酸鋯ZrP為載體修飾的電極GOD/ZrP/GC其電化學(xué)反應(yīng)電子轉(zhuǎn)移速率快、表觀覆蓋量大;對(duì)葡萄糖的檢測(cè)表現(xiàn)出較快的電流響應(yīng)和較高的靈敏度,說明無定形磷酸鋯更有利于GOD的固定和酶電極的直接電化學(xué)。

    葡萄糖氧化酶;電催化性能;催化劑載體;電化學(xué);穩(wěn)定性

    DOI:10.11949/j.issn.0438-1157.20151475

    磷酸鋯類作為一類多功能材料近年被廣泛關(guān)注,其主要原因在于該材料既有離子交換樹脂一樣的離子交換性能,又具有很好的擇形吸附性能和催化性能,同時(shí)磷酸鋯類材料的熱穩(wěn)定性、耐酸堿性以及生物親和性也優(yōu)于其他很多載體材料,所以合成及應(yīng)用磷酸鋯類材料的研究受到了廣泛的關(guān)注[8-10]。目前報(bào)道的合成磷酸鋯類材料大多數(shù)為α-ZrP,主要是由于α型磷酸鋯具有較好的催化及插層等性能[11-13];與其層狀同系物相比,介孔磷酸鹽的研究報(bào)道較少。介孔磷酸鋯類材料的一個(gè)優(yōu)越性在于其具有較大的表面積、可調(diào)變的介孔孔道結(jié)構(gòu)以及豐富的骨架活性位,介孔磷酸鹽材料被期望于在催化、吸附等領(lǐng)域得到更廣闊的應(yīng)用[14-18],所以介孔磷酸鹽材料的合成及催化行為研究在該領(lǐng)域具有重要的意義。

    本研究合成了無定形介孔磷酸鋯載體材料,通過掃描電鏡、透射電鏡、BET等方法分析載體的形貌結(jié)構(gòu);以無定形介孔磷酸鋯為載體固定葡萄糖氧化酶,在無任何電子媒介體存在條件下,對(duì)葡萄糖氧化酶的直接電化學(xué)性能以及其催化性能進(jìn)行了研究。

    1 實(shí)驗(yàn)部分

    1.1試劑和儀器

    葡萄糖氧化酶(GOD,20 U·mg-1,Type Ⅱ,Aspergillus niger,Sigma),β-D(+)葡萄糖(β-D(+)-glucose,Sigma),Nafion 溶液(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 5%,Aldrich),0.1 mol·L-1磷酸鹽緩沖液(PBS),無機(jī)試劑均為分析純。葡萄糖溶液需放置24 h后使用以保證其不同異構(gòu)體之間達(dá)到平衡。

    電化學(xué)性能測(cè)試均采用三電極體系、在PARSTAT2273電化學(xué)分析工作站(美國PAR公司)上進(jìn)行,分別以無定形磷酸鋯修飾玻碳(GC)電極為工作電極,飽和甘汞電極(SCE)為參比電極,鉑黑電極為對(duì)電極,電化學(xué)測(cè)試溫度為室溫。

    1.2無定形介孔磷酸鋯的制備

    將一定量的十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)溶于15ml乙醇溶液中,待其溶解后加入磷酸(摩爾比:P/CTAB=1),靜置半小時(shí)后,在攪拌過程中逐滴加入一定量的正丙醇鋯作為鋯源(摩爾比:P/Zr=2),室溫?cái)嚢?8 h后將得到的白色沉淀用去離子水和乙醇洗滌過濾以除去CTAB,在烘箱中80℃真空干燥,即得到無定形介孔磷酸鋯[12]。

    1.3工作電極的制備

    分別用砂紙、0.3 μm和 0.05 μm Al2O3將直徑為4 mm的GC電極進(jìn)行拋光至鏡面,先后在無水乙醇和二次蒸餾水中超聲清洗1 min,晾干備用。將4 mg ZrP超聲分散于1ml 0.1%的十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)水溶液中,形成白色的懸濁液,加入4 mg GOD,室溫下攪拌30 min;用微量進(jìn)樣器取5 μl混合物均勻覆蓋在GC電極表面,室溫下待溶劑揮發(fā)后,再將1 μl Nafion溶液滴在電極表面,溶劑揮發(fā)后得到的電極為GOD/ZrP/GC電極,該電極置于0.1 mol·L-1PBS(pH=7.0)中保存于4℃冰箱中。用同樣的方法制得ZrP/GC電極。

    1.4介孔磷酸鋯的結(jié)構(gòu)表征及GOD/ZrP/GC電極的電化學(xué)性能測(cè)試

    采用HITACHI S-4300掃描電子顯微鏡對(duì)ZrP載體材料進(jìn)行表面形貌表征;BET測(cè)試在MicromeriticsASAP 2010(美國麥克儀器公司)上進(jìn)行;傅里葉紅外(FT-IR)光譜測(cè)量在Nicolet 360 FT-IR紅外光譜儀上進(jìn)行。電化學(xué)測(cè)試在室溫下進(jìn)行,采用三電極系統(tǒng):以鉑電極為對(duì)電極、飽和甘汞電極(SCE)為參比電極,分別以ZrP/GC、GOD/ZrP/GC電極(直徑4 mm)為工作電極。在不同pH的PBS溶液中測(cè)定GOD/ZrP/GC的循環(huán)伏安曲線。循環(huán)伏安掃描的電壓范圍為-0.68~-0.28 V(vs SCE)。在pH=7.0的緩沖體系中,利用循環(huán)伏安法測(cè)定不同葡萄糖濃度中GOD/ZrP/GC電極對(duì)葡萄糖的催化性能。

    2 結(jié)果與討論

    2.1磷酸鋯的結(jié)構(gòu)表征

    圖1是磷酸鋯樣品的大角XRD圖。圖中在2θ為10°~40°和40°~70°范圍內(nèi)分別出現(xiàn)了一個(gè)寬峰,并且沒有明顯的晶體磷酸鋯的峰出現(xiàn),顯示了磷酸鋯樣品無定形的特點(diǎn)[19]。

    圖2為磷酸鋯的掃描電鏡圖和透射電鏡圖。從SEM圖可以看出,磷酸鋯樣品顆粒比較小,形狀類似小球且表面光滑,很多小顆粒聚集在一起。由TEM測(cè)試結(jié)果可以看出磷酸鋯為蠕蟲狀孔道結(jié)構(gòu),由許多球狀的介孔籠通過窗口相互連接排列而成,圖的邊緣可以直接觀察到磷酸鋯的介孔籠,孔徑為2~3 nm。

    2.2GOD在無定形磷酸鋯表面吸附的表征

    圖3為GOD、ZrP和 GOD-ZrP的 FT-IR光譜。GOD的 FT-IR 光譜中,在1651和1541 cm-1處出現(xiàn)的吸收峰分別為GOD中酰胺Ⅰ和酰胺Ⅱ的吸收峰。酰胺Ⅰ是由葡萄糖氧化酶肽鏈骨架中的肽段連接處的伸縮振動(dòng)引起的,酰胺Ⅱ來源于彎曲和伸縮振動(dòng),蛋白質(zhì)的酰胺Ⅰ和酰胺Ⅱ處的紅外吸收帶提供了多肽鏈二級(jí)結(jié)構(gòu)的信息[20-21]。圖3曲線c為GOD吸附在ZrP表面后的FT-IR 光譜圖,可以看出GOD仍保持了酰胺Ⅰ和酰胺Ⅱ的吸收峰,但峰位有所移動(dòng),分別為1657和1544 cm-1處,其原因在于GOD的肽鏈上的基團(tuán)與ZrP上的含氧基團(tuán)之間形成的氫鍵可能會(huì)引起位移,另外由于ZrP上含氧基團(tuán)的吸收峰與GOD的吸收峰有一定重疊也會(huì)引起位移,該結(jié)果表明GOD已吸附在ZrP上。

    圖1 合成的無定形磷酸鋯樣品的XRD圖Fig.1 XRD patterns of synthesized amorphous ZrP

    圖2 無定形磷酸鋯樣品的SEM圖和TEM圖Fig.2 SEM (a) and TEM (b, c) micrographs of synthesized amorphous ZrP

    圖3 GOD、ZrP和 GOD-ZrP的 FT-IR 光譜Fig.3 FT-IR spectra of GOD (a), ZrP (b), and GOD-ZrP (c)

    2.3葡萄糖氧化酶的直接電化學(xué)

    圖4 ZrP/GC電極和GOD/ZrP/GC電極的循環(huán)伏安曲線Fig.4 CV curves of ZrP/GC (a) and GOD/ZrP/GC (b) electrodes

    圖4是ZrP/GC電極和GOD/ZrP/GC電極在0.1 mol·L-1PBS溶液(pH=7.0)中掃速為100 mV·s-1時(shí)的循環(huán)伏安曲線。圖4曲線a表明,ZrP/GC電極的循環(huán)伏安曲線中沒有任何氧化還原峰,說明該電極在此電勢(shì)范圍內(nèi)無電活性;而在GOD/ZrP/GC電極的循環(huán)伏安曲線(圖4曲線b)中,分別在Epa=-0.385 V,Epc=-0.453 V處出現(xiàn)了一對(duì)明顯且可逆的氧化還原峰,說明電極上的酶發(fā)生了氧化還原反應(yīng),其表觀式電位為E0′=-0.419 V,這與一些文獻(xiàn)[22-24]報(bào)道的表觀式電位很接近,峰位差ΔEp=68 mV,并且氧化還原峰電流基本相等,說明葡萄糖氧化酶在電極表面進(jìn)行的氧化還原反應(yīng)是一個(gè)可逆過程,表明葡萄糖氧化酶固定在電極表面并保持生物活性進(jìn)行可逆的電子轉(zhuǎn)移。

    圖5(a)為GOD/ZrP/GC電極在Ar氣飽和的0.1 mol·L-1PBS(pH=7.0)中,不同掃描速率下的循環(huán)伏安曲線。當(dāng)掃描速率從75 mV·s-1增加到200 mV·s-1氧化還原峰電流與掃描速率呈線性關(guān)系[圖5(b)],證明GOD的電化學(xué)反應(yīng)為表面控制過程[28]。隨著掃描速率的增加,氧化峰和還原峰峰電位分別向正、負(fù)方向產(chǎn)生較小的偏移,pEΔ增加,但幾乎不變。根據(jù)Laviron[29]電極表面異相反應(yīng)動(dòng)力學(xué)常數(shù)的計(jì)算方法,利用掃描速率與峰位差的關(guān)系,可得到GOD的電化學(xué)反應(yīng)的電子轉(zhuǎn)移速率常數(shù)ks為1.82 s-1,這一數(shù)值與Jiang等[25]修飾在自組裝單分子層上的GOD直接電子轉(zhuǎn)移反應(yīng)速率常數(shù)ks(0.026 s-1)相比大了兩個(gè)數(shù)量級(jí),說明無定形磷酸鋯更有效地促進(jìn)了GOD與電極表面之間的電子傳遞過程。

    圖6為GOD/ZrP/GC電極在Ar飽和和空氣飽和的0.1 mol·L-1PBS中、掃速為50 mV·s-1下的循環(huán)伏安圖。由圖可見,在這兩種氣氛下的PBS溶液中測(cè)得的CV曲線中均有一對(duì)明顯、可逆的氧化還原峰出現(xiàn)。在氧氣存在的條件下,酶的還原態(tài)(GOD-FADH2)會(huì)在電極表面被溶解氧快速地進(jìn)一步氧化,反應(yīng)如下[30]

    圖5 GOD/ZrP/GC電極在不同掃速下的循環(huán)伏安曲線及氧化還原峰峰電流與掃描速率的關(guān)系曲線Fig.5 Cyclic voltammograms of GOD/ZrP/GC electrodes at different scanrates (75, 100, 125, 150, 175, 200 mV·s-1)(a) and plots of redox peak currents vs scan rates (b)

    酶的氧化態(tài)形式的催化再生導(dǎo)致了反應(yīng)可逆性的降低以及還原峰的增加,因此如圖6所示在有O2存在的PBS中測(cè)得的CV曲線與相同條件下Ar飽和的PBS中的CV曲線相比,還原峰要大,氧化峰要小,說明GOD(FADH2)可以催化溶解氧的還原[31-32]。

    圖 7(a)為GOD/ZrP/GC電極在 0.1 mol·L-1不同 pH 的 PBS 中的循環(huán)伏安圖。由圖可見,在pH 6.0~8.0范圍內(nèi),均能觀察到一對(duì)可逆的氧化還原峰。GOD 的氧化還原峰峰電位隨 pH的增加明顯負(fù)向移動(dòng),表觀式量電位與 pH 呈線性關(guān)系[圖7(b)],其斜率為-39.31 mV·pH-1,這一結(jié)果與先前文獻(xiàn)報(bào)道的吸附在溶膠金納米顆粒上的 GOD電極過程的結(jié)果(斜率為-43.7 mV·pH-1)[26]以及利用分子組裝技術(shù)在 SWCNT 修飾并電沉積羥基磷灰石的電極上固定的GOD的電極過程的結(jié)果(斜率-39 mV·pH-1)[33]很相似,表明在GOD/ZrP/GC電極上發(fā)生了直接電化學(xué)反應(yīng):GOD-FADH2(FAD 為黃素腺嘌呤二核苷酸),該反應(yīng)伴隨有兩電子兩質(zhì)子的轉(zhuǎn)移,且GOD在電極表面的直接電子轉(zhuǎn)移反應(yīng)具有較好的可逆性,含兩個(gè)FAD 中心的GOD 分子的直接電化學(xué)過程符合電子-質(zhì)子轉(zhuǎn)移數(shù)相等的機(jī)理。

    圖6 GOD/ZrP/GC電極在Ar飽和和空氣飽和的0.1 mol·L-1PBS中掃速為50 mV·s-1下的循環(huán)伏安曲線Fig.6 Cyclic voltammograms of GOD/ZrP/GC electrode in Ar- and air-saturated 0.1mol·L-1PBS solution with scan rate of 50 mV·s-1

    圖7 GOD/ZrP/GC電極在不同pH的PBS中的循環(huán)伏安曲線及E0′與溶液 pH 的關(guān)系曲線Fig.7 Cyclic voltammograms of GOD/ZrP/GC electrode at various pH values solution (0.1 mol·L-1PBS, pH 6.0, 6.5, 7.0,7.5, 8.0, scan rate: 50 mV·s-1) (a) and plot of E0′ vs pH of PBS (b)

    2.4GOD/ZrP/GCE對(duì)葡萄糖的催化性能

    圖8是酶電極在0.1 mol·L-1pH=7.0的PBS中掃速為20 mV·s-1時(shí)催化氧化葡萄糖的循環(huán)伏安曲線。由圖可見,未加入葡萄糖時(shí),CV曲線中有一對(duì)氧化還原峰出現(xiàn),當(dāng)加入1 mmol·L-1的葡萄糖后,CV曲線中氧化峰電流增大而還原峰電流減小,說明葡萄糖在電極表面發(fā)生了催化氧化反應(yīng)且無定形磷酸鋯在酶和電極之間起到了傳遞電子的作用。

    圖8 GOD/ZrP/GC電極在無葡萄糖和有1 mmol·L-1葡萄糖的空氣飽和、pH=7.0的0.1 mol·L-1PBS中的循環(huán)伏安圖(掃速為:20 mV·s-1)Fig.8 Cyclic voltammograms of GOD/ZrP/GC electrode in absence and presence of 1 mmol·L-1glucose in 0.1 mol·L-1PBS, pH=7.0 (scan rate: 20 mV·s-1)

    GOD/ZrP/GC修飾電極對(duì)葡萄糖的安培響應(yīng)見圖9(a),在0.1 mol·L-1pH7.0 PBS緩沖溶液中連續(xù)加入一定量的葡萄糖溶液,電流響應(yīng)出現(xiàn)跳躍性增大,電極的電流響應(yīng)時(shí)間小于15 s,與文獻(xiàn)[34]中報(bào)道的響應(yīng)時(shí)間相近,電極響應(yīng)隨著葡萄糖的濃度增大出現(xiàn)飽和平臺(tái),該結(jié)果是Michaelis-Menten酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)特征的充分表現(xiàn)。電極的響應(yīng)電流在0.4~2.0 mmol·L-1的范圍內(nèi)與葡萄糖濃度呈線性關(guān)系,見圖9(b),其線性回歸方程為i=1.52Cglucose-3.304(μA,mmol·L-1,R=-0.99878,n=5)。修飾電極的靈敏度是12.1 μA·(mmol·L-1)-1·cm-2,信噪比為3時(shí)的檢測(cè)限是0.3 mmol·L-1。結(jié)果表明GOD/ZrP/GC電極具有較高的靈敏度和較低檢測(cè)限。

    圖9 葡萄糖傳感器對(duì)不同濃度葡萄糖溶液的響應(yīng)曲線Fig.9 Amperometric response to successive addition of 0.4 mmol·L-1glucose

    圖10是GOD/ZrP/GC電極在pH=7.0的0.1 mol·L-1PBS中在100 mV·s-1的掃速下循環(huán)第1圈和第90圈的CV曲線。從圖中可以觀察到該電極在100 mV·s-1的掃速下連續(xù)進(jìn)行90圈循環(huán)伏安測(cè)試之后,氧化還原峰電流及其電位都沒有明顯改變,表明該修飾電極具有較好的操作穩(wěn)定性。圖11為將GOD/ZrP/GC電極在4℃條件下貯存7 d后和30 d后在含有1 mmol·L-1葡萄糖的0.1 mol·L-1pH=7的PBS中的循環(huán)伏安曲線。由圖可得,該電極貯存7 d后其葡萄糖氧化峰峰電流維持了初始電流的95%左右,而貯存30 d后其氧化峰峰電流仍能維持初始電流的85%,表明該電極具有較好的儲(chǔ)備穩(wěn)定性,即電極使用壽命較長;用同樣的方法連續(xù)制備5個(gè)電極并在上述溶液中相同條件下進(jìn)行循環(huán)伏安測(cè)試,其氧化峰峰電流值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差僅為4.7%,表明該電極具有較好的重現(xiàn)性。以上結(jié)果說明,GOD/ZrP/GC電極具有良好的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性,同時(shí)也說明ZrP有利于葡萄糖氧化酶生物活性的保持。

    圖10 GOD/ZrP/GC電極在pH=7.0的0.1 mol·L-1PBS中在100 mV·s-1的掃速下第1圈和第90圈的CV曲線Fig.10 The first (a) and 90th (b) cyclic voltammograms of GOD/ZrP/GC electrode in 0.1 mol·L-1PBS with pH=7.0,scan rate 100 mV·s-1

    圖11 GOD/ZrP/GC電極在4℃下貯存7 d后和30 d后在含有1 mmol·L-1葡萄糖的pH=7.0的0.1 mol·L-1PBS中50 mV·s-1掃速下的CV曲線Fig.11 Cyclic voltammograms of GOD/ZrP/GC electrode before (a) and after placement for 7 d (b) and 30 d (c) in 0.1 mol·L-1PBS with pH=7.0, scan rate 50 mV·s-1

    3 結(jié) 論

    研究結(jié)果表明,無定形ZrP載體材料的介孔結(jié)構(gòu)有利于葡萄糖氧化酶的負(fù)載且負(fù)載量較大,以ZrP為載體可以很好地固定GOD并保持其生物活性。GOD/ZrP/GC電極的循環(huán)伏安曲線中氧化還原峰的電流與掃速呈線性關(guān)系,說明電極反應(yīng)為表面控制過程;GOD的電化學(xué)反應(yīng)的電子轉(zhuǎn)移速率常數(shù)ks為1.82 s-1,GOD/ZrP/GC電極對(duì)葡萄糖檢測(cè)的靈敏度為12.1 μA·(mmol·L-1)-1·cm-2,檢測(cè)限為0.3 mmol·L-1。研究結(jié)果說明無定形磷酸鋯利于GOD的固定和酶電極的直接電化學(xué),該研究為無機(jī)載體在酶固定研究方面打下了一個(gè)很好的基礎(chǔ)。

    References

    [1]GALANT L, KAUFMAN R C, WILSON J D. Glucose: detection and analysis [J]. Food Chemistry, 2015, (188): 149-160 DOI:10.1016/ j.foodchem.2015.04.071.

    [2]WANG J. Electrochemical glucose biosensors [J]. Chemical Reviews,2008, 108 (2): 814-825 DOI: 10.1021/cr068123a.

    [3]ALWARAPPAN S, BOYAPALLE S, KUMAR A, et al. Comparative study of single-, few-, and multilayered graphene [J]. Phys. Chem. C,2012, 116 (11): 6556. doi: 10.1021/jp211201b.

    [4]GU T, ZHANG Y, DENG F, et al. Direct electrochemistry of glucose oxidase and biosensing for glucose based on DNA/chitosan film [J]. Environ. Sci., 2011, 23 (Supplement): S66. DOI: 10.1016/S1001-0742(11)61080-2.

    [5]LUO Z M, YUWEN, L H, HAN Y J, et al. Reduced graphene oxide/PAMAM-silver nanoparticles nanocomposite modified electrode for direct electrochemistry of glucose oxidase and glucose sensing [J]. Biosens. Bioelectron., 2012, 36 (1): 179. DOI:10.1016/ j.bios.2012.04.009.

    [6]WANG Y, YUAN R, CHAIA Y, et al. Direct electron transfer:electrochemical glucose biosensor based on hollow Pt nanosphere functionalized multiwall carbon nanotubes [J]. Mol. Catal. B: Enzym.,2011, 71 (3/4):146. DOI:10.1016/j.molcatb.2011.04.011.

    [7]于志輝, 宿婷婷, 任翠華, 等. 炭氣凝膠納米顆粒固定葡萄糖氧化酶的直接電化學(xué) [J].物理化學(xué)學(xué)報(bào), 2012, 28 (12): 2867-2873. DOI:10.3866/PKU.WHXB201209201. YU Z H, SU T T, REN C H, et al. Direct electrochemistry and immobilization of glucose oxidase on nano-carbon aerogels [J]. Acta Phys.-Chim. Sin., 2012, 28 (12): 2867-2873. DOI: 10.3866/PKU. WHXB201209201.

    [8]DONG J, WEN Y, MIAO Y, et al. A nanoporous zirconium phytate film for immobilization of redox protein and the direct electrochemical biosensor [J]. Sensors and Actuators B, 2010, 150 (1):141-147. DOI: 10.1016/j.snb.2010.07.029.

    [9]LIU L M, SHEN B, SHI J J, et al. A novel mediator-free biosensor based on co-intercalation of DNA and hemoglobin in the interlayer galleries of α-zirconium phosphate [J]. Biosensors and Bioelectronics,2010, 25 (12): 2627-2632. DOI: 10.1016/j.bios.2010.04.031.

    [10]LIU L M, WEN J, LIU L, et al. A mediator-free glucose biosensor based on glucose oxidase/chitosan/α-zirconium phosphate ternary biocomposite [J]. Analytical Biochemistry, 2014, 445: 24-29. DOI:10.1016/j.ab.2013.10.005.

    [11]LIU L, ZHANG H T, SHEN B, et al. pH-induced fabrication of DNA/chitosan/alpha-ZrP nanocomposite and DNA release [J]. Nanotechnology, 2010, 21 (10): 105102. DOI: 10.1088/0957-4484/ 21/10/105102.

    [12]BHAMBHANI A, KUMAR C V. Protein/DNA/inorganic materials:DNA binding to layered alpha-zirconium phosphate enhances bound protein structure and activity [J]. Adv. Mater., 2006, 18 (7): 939-942. DOI: 10.1002/adma.200502230.

    [13]JONES D J, APTEL G, BRANDHORST M, et al. High surface area mesoporous titanium phosphate: synthesis and surface acidity determination [J]. J. Mater. Chem., 2000, 10 (8): 1957-1963. DOI:10.1039/b002474k.

    [14] BHAUMIK A, INAGAKI S J. Mesoporous titanium phosphate molecular sieves with ion-exchange capacity [J]. J. Am. Chem. Soc.,2001, 123 (4): 691-696. DOI: 10.1021/ja002481s.

    [15]TIEMANN M, FROBA M. Mesoporous aluminophosphates from a single-source precursor [J]. Chem. Commun., 2002, (5): 406-407. DOI: 10.1039/b110662g.

    [16]TIAN B Z, LIU X Y, TU B, et al. Self-adjusted synthesis of ordered stable mesoporous minerals by acid-base pairs [J]. Nat. Mater., 2003,2 (3): 159-163. DOI: 10.1038/nmat838.

    [17]MAL N K, ICHIKAWA S, FUJIWARA M. Synthesis of a novel mesoporous tin phosphate, SnPO4[J]. Chem. Commun., 2002, (2):112-113. DOI: 10.1039/B109948E.

    [18]CHRISTIAN S, ALINE S, ANTONELLA G, et al. Hexagonal and cubic thermally stable mesoporous Tin(IV) phosphates with acidic and catalytic properties [J]. Angew. Chem. Int. Ed., 2002, 41 (9):1594-1597. DOI: 10.1002/1521-3773(20020503)41:9<1594:AIDANIE1594>3.0.CO;2-W.

    [19]SINHAMAHAPATRA A, SUTRADHAR N, ROY B, et al. Mesoporous zirconium phosphate catalyzed reactions: synthesis of industrially important chemicals in solvent-free conditions [J]. Applied Catalysis A: General, 2010, 385 (1): 22-30. DOI: 10.1016/ j.apcata.2010.06.016.

    [20]NIWA K, FURUKAWA M, NIKI K. Ir reflectance studies of electron-transfer ptomoters for cutochrome-c on a gold electrode [J]. J. Electroanal. Chem., 1988, 245 (1): 275-285. DOI: 10.1016/0022-0728(88)80074-3.

    [21]IRACE G, BISMUTO E, SAVY F, et al. Unfolding pathway of myoglobin-molecular-properties of intermediate froms [J]. Arch. Biochem. Biophys., 1986, 244 (2): 459-469. DOI: 10.1016/0003-9861(86)90614-4.

    [22]PERIASAMY A P. Amperometric glucose sensor based on glucose oxidase immobilized on gelatin-multiwalled carbon nanotube modified glassy carbon electrode [J]. Bioelectrochemistry, 2011, 80(2): 114-120. DOI: 10.1016/j.bioelechem.2010.06.009.

    [23]SHAN C, YANG H, SONG S, et al. Direct electrochemistry of glucose oxidase and biosensing for glucose based on graphene [J]. Anal. Chem.,2009, 81 (6): 2378-2382. DOI: 10.1021/ac802193c.

    [24]YAO Y, SHIU K. Direct electrochemistry of glucose oxidase at carbon nanotube-gold colloid modified electrode with poly(diallyldimethylammonium chloride) coating [J]. Electroanalysis,2008, 20 (14): 1542-1548. DOI: 10.1002/elan.200804209.

    [25]JIANG L, MCNEIL C J, COOPER J M. Direct electron-transfer reactions of glucose-oxidase immobilized at a self-assembled monolayer [J]. J. Chem. Soc. Chem. Commun., 1995, (12): 1293-1295. DOI: 10.1039/C39950001293.

    [26]LIU S Q, JU H X. Reagentless glucose biosensor based on direct electron transfer of glucose oxidase immobilized on colloidal gold modified carbon paste electrode [J]. Biosens. Bioelectron., 2003, 19(9): 177-183. DOI: 10.1016/S0956-5663(03)00172-6.

    [27]HUANG Y X, ZHANG W J, XIAO H, et al. An electrochemical investigation of glucose oxidase at a CdS nanoparticles modified electrode [J]. Biosens. Bioelectron., 2005, 21 (5): 817-821. DOI:10.1016/j.bios.2005.01.012.

    [28]BARD A J, FAULKNER L R. Electrochemical Methods, Fundamentaland Applications [M]. 2nd ed. New York: John Wiley & Sons Inc.,2001:594.

    [29]LAVIRON E. General expression of the linear potential sweep voltammogram in the case of diffusionless electrochemical systems[J]. Electroanal. Chem., 1979, 101 (1): 19-28. DOI: 10.1016/ S0022-0728(79)80075-3.

    [30]WU Y H, HU S S. Direct electrochemistry of glucose oxidase in a colloid Au-dihexadecylphosphate composite film and its application to develop a glucose biosensor [J]. Bioelectrochem., 2007, 70 (2):335-341. DOI: 10.1016/j.bioelechem.2006.05.001.

    [31]MCKENZIE K J, MARKEN F. Accumulation and reactivity of the redox protein cytochrome c in mesoporous films of TiO2phytate [J]. Langmuir, 2003, 19 (10): 4327-4331. DOI: 10.1021/la0267903.

    [32]TAO Y, KANOH H, KANEKO K. ZSM-5 monolith of uniform mesoporous channels [J]. J. Am. Chem. Soc., 2003, 125 (20):6044-6045. DOI: 10.1021/ja0299405.

    [33]朱瓊,魏雅,吳霞琴. 用羥基磷灰石和單壁碳納米管制備葡萄糖傳感器的研究 [J].化學(xué)研究與應(yīng)用, 2011, 23 (4): 413-417. DOI:1004-1656(2011)23:4<413:YQJLHS>2.0.TX;2-9. ZHU Q, WEI Y, WU X Q. Glucose sensor based on hydroxyapatite and single-wall carbon nanotube composite [J]. Chemical Research and Application, 2011, 23 (4): 413-417. DOI: 1004-1656(2011)23:4<413:YQJLHS>2.0.TX;2-9.

    [34]CHEN W, DING Y, AKHIGBE J, et al. Enhanced electrochemical oxygen reduction-based glucose sensing using glucose oxidase on nanodendritic poly[meso-tetrakis(2-thienyl)porphyrinato]cobalt(Ⅱ)-SWNTs composite electrodes [J]. Biosensors and Bioelectronics,2010, 26 (2): 504-510. DOI: 10.1016/j.bios.2010.07.062.

    Direct electrochemistry of immobilized glucose oxidase on amorphous mesoporous zirconium phosphate

    YU Zhihui, HUANG Pengfei, WANG Xiayan
    (College of Environmental and Energy Engineering, Beijing University of Technology, Beijing 100124, China)

    Glucose oxidase (GOD)/zirconium phosphate(ZrP)/glassy carbon(GC) electrode was prepared by adsorbing GOD on the amorphous mesoporous zirconium phosphate. The electrocatalytic properties of GOD/ZrP/GC electrode were characterized by cyclic voltammetric method at the medium of phosphate buffer (0.1 mol·L-1). The results showed that there were quicker electron transfer rate and larger surface coverage when GOD was supported on zirconium phosphate. At the same time, the electrochemical device with this electrode showed faster current response and higher sensitivity in detection of glucose, indicating that zirconium phosphate could be more suitable support for immobilization of GOD and achieve better performance of direct electrochemistry. Key words: glucose oxidase; electro-catalytic performance; catalyst support; electrochemistry; stability

    引 言

    葡萄糖含量的檢測(cè)被廣泛應(yīng)用于醫(yī)療、食品等眾多領(lǐng)域。利用具有良好的導(dǎo)電性能和生物性能的酶載體固定葡萄糖氧化酶并實(shí)現(xiàn)酶的直接電化學(xué)是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)之一。固定酶所使用的載體從其組成上可以分為無機(jī)載體、高分子載體、復(fù)合載體等,目前有關(guān)載體研究報(bào)道中主要是關(guān)于高分子載體、復(fù)合載體的研究[1-7]。而無機(jī)納米載體具有穩(wěn)定性好、機(jī)械強(qiáng)度高、對(duì)酶和微生物無毒性、不易被酶和微生物分解、耐酸堿、壽命長等優(yōu)點(diǎn),所以無機(jī)納米介孔材料作為固定化酶的新型載體的研究對(duì)于實(shí)現(xiàn)酶的直接電化學(xué)、提高葡萄糖氧化酶的催化性能具有重要的意義。

    date: 2015-09-21.

    YU Zhihui, yuzhihui@bjut.edu.cn

    supported by the National High Technology Research and Development Program of China (2012AA052201).

    O 646

    A

    0438—1157(2016)05—2161—08

    2015-09-21收到初稿,2015-12-03收到修改稿。

    聯(lián)系人及第一作者:于志輝(1961—),女,教授。

    國家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2012AA052201);北京市教育委員會(huì)科技發(fā)展計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目(KZ201310005001);北京市教委科研計(jì)劃面上項(xiàng)目(KM201210005008);新世紀(jì)優(yōu)秀人才支持計(jì)劃項(xiàng)目(NCET-12-0603)。

    猜你喜歡
    葡萄糖氧化酶無定形伏安
    用伏安法測(cè)電阻
    無定形碳酸鈣的穩(wěn)定性和結(jié)晶轉(zhuǎn)化過程研究進(jìn)展
    固體推進(jìn)劑用無定形硼粉高溫提純工藝研究
    火工品(2019年3期)2019-09-02 05:48:00
    葡萄糖氧化酶的研究進(jìn)展及其在豬生產(chǎn)中的應(yīng)用分析
    飼料博覽(2019年7期)2019-02-12 22:28:15
    齒輪狀SBA-15的制備及其對(duì)葡萄糖氧化酶的吸附行為研究
    差示掃描量熱法研究無定形硝苯地平的穩(wěn)定性
    葡萄糖氧化酶在斷奶仔豬日糧上的應(yīng)用研究進(jìn)展
    一種快速大量制備無定形碳酸鹽礦物的方法
    基于LABVIEW的光電池伏安特性研究
    電子制作(2016年23期)2016-05-17 03:53:41
    通過伏安特性理解半導(dǎo)體器件的開關(guān)特性
    嫁个100分男人电影在线观看| 成人无遮挡网站| 99久久无色码亚洲精品果冻| 亚洲黑人精品在线| 村上凉子中文字幕在线| 最近最新中文字幕大全电影3| 99久久国产精品久久久| 国产精品,欧美在线| 日本黄色视频三级网站网址| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 一级毛片女人18水好多| 国产精品 欧美亚洲| 国产日本99.免费观看| 一个人免费在线观看的高清视频| 欧美午夜高清在线| 亚洲成人免费电影在线观看| 69av精品久久久久久| 国产精品久久久久久精品电影| 日韩成人在线观看一区二区三区| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 香蕉久久夜色| 日本黄色片子视频| 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产成人影院久久av| 听说在线观看完整版免费高清| 99re在线观看精品视频| 久久精品91蜜桃| 久久人妻av系列| 夜夜夜夜夜久久久久| 午夜福利在线观看吧| 一区二区三区激情视频| 欧美日韩国产亚洲二区| 观看免费一级毛片| 首页视频小说图片口味搜索| 在线免费观看不下载黄p国产 | 国产蜜桃级精品一区二区三区| 国产免费男女视频| 国产高清三级在线| 九色国产91popny在线| 性欧美人与动物交配| 十八禁人妻一区二区| 免费电影在线观看免费观看| 97碰自拍视频| 欧美一区二区精品小视频在线| 成人特级黄色片久久久久久久| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 久久久国产成人免费| 国产精品影院久久| 9191精品国产免费久久| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产成人啪精品午夜网站| 国产日本99.免费观看| 欧美在线一区亚洲| 88av欧美| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 国产精品精品国产色婷婷| 在线观看一区二区三区| 日本免费在线观看一区| 亚洲中文字幕日韩| 网址你懂的国产日韩在线| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 99热全是精品| 51国产日韩欧美| 亚洲国产欧美在线一区| 国产成年人精品一区二区| 亚洲av成人精品一区久久| 成人亚洲精品av一区二区| 高清毛片免费看| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 中文在线观看免费www的网站| 免费一级毛片在线播放高清视频| 波多野结衣巨乳人妻| 亚洲性久久影院| 白带黄色成豆腐渣| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 亚洲色图av天堂| 插逼视频在线观看| 三级经典国产精品| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 深夜a级毛片| 欧美一区二区国产精品久久精品| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 免费观看人在逋| 久久99热这里只频精品6学生 | 亚州av有码| 国国产精品蜜臀av免费| 日韩强制内射视频| 亚洲欧洲国产日韩| 国产男人的电影天堂91| 长腿黑丝高跟| 深爱激情五月婷婷| 久久99热这里只频精品6学生 | 午夜精品在线福利| 午夜精品在线福利| 色视频www国产| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 欧美高清性xxxxhd video| 乱码一卡2卡4卡精品| 天堂影院成人在线观看| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 99久久精品一区二区三区| 日韩在线高清观看一区二区三区| kizo精华| h日本视频在线播放| 亚洲中文字幕日韩| 我的老师免费观看完整版| 欧美成人午夜免费资源| 国产日韩欧美在线精品| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 高清午夜精品一区二区三区| 日本黄大片高清| 在线观看一区二区三区| 色综合站精品国产| 一级毛片我不卡| 嘟嘟电影网在线观看| 国产精品电影一区二区三区| 亚洲最大成人中文| 永久免费av网站大全| 男女下面进入的视频免费午夜| 亚洲内射少妇av| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 别揉我奶头 嗯啊视频| 亚洲人成网站高清观看| av在线老鸭窝| av天堂中文字幕网| 深夜a级毛片| 国产精品爽爽va在线观看网站| 亚洲va在线va天堂va国产| 精品欧美国产一区二区三| 国产av一区在线观看免费| 久久鲁丝午夜福利片| 男人舔奶头视频| av免费在线看不卡| 97超视频在线观看视频| 嫩草影院入口| 在现免费观看毛片| 亚洲人成网站在线播| 搞女人的毛片| 婷婷色麻豆天堂久久 | 久久久午夜欧美精品| 午夜精品国产一区二区电影 | 国产av在哪里看| 精品久久久久久久久av| 午夜免费激情av| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 日韩成人伦理影院| 纵有疾风起免费观看全集完整版 | 99久久成人亚洲精品观看| 天天躁日日操中文字幕| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 欧美bdsm另类| 久久精品影院6| 一本久久精品| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 可以在线观看毛片的网站| 在线观看66精品国产| 国产真实伦视频高清在线观看| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 国产亚洲5aaaaa淫片| 欧美精品国产亚洲| 国产成年人精品一区二区| 男插女下体视频免费在线播放| 久久精品久久久久久久性| 色尼玛亚洲综合影院| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 精品人妻偷拍中文字幕| 美女黄网站色视频| 男插女下体视频免费在线播放| av黄色大香蕉| 中文资源天堂在线| 1000部很黄的大片| av国产免费在线观看| 少妇的逼好多水| 国产免费视频播放在线视频 | 超碰97精品在线观看| 成人一区二区视频在线观看| 久久久久久久久久久免费av| 日本免费一区二区三区高清不卡| 国产伦精品一区二区三区视频9| 听说在线观看完整版免费高清| 老司机影院成人| 中文字幕亚洲精品专区| 亚洲不卡免费看| 一个人看视频在线观看www免费| ponron亚洲| 婷婷六月久久综合丁香| 亚洲精品国产成人久久av| 国产片特级美女逼逼视频| 亚洲不卡免费看| 国产精品99久久久久久久久| 麻豆久久精品国产亚洲av| 日韩精品有码人妻一区| 最近中文字幕高清免费大全6| 三级毛片av免费| 亚洲国产精品久久男人天堂| 赤兔流量卡办理| 国产午夜福利久久久久久| 国产高清有码在线观看视频| 国产免费视频播放在线视频 | 久久午夜福利片| 国产精品伦人一区二区| 亚洲人成网站在线观看播放| 日本-黄色视频高清免费观看| 欧美日韩精品成人综合77777| 一级毛片电影观看 | 91精品国产九色| 国产又色又爽无遮挡免| 成人毛片a级毛片在线播放| 精品久久久久久久久亚洲| 舔av片在线| av女优亚洲男人天堂| 欧美极品一区二区三区四区| 欧美日本视频| 日韩av在线免费看完整版不卡| 97超视频在线观看视频| 精品久久久久久久末码| 国产精品久久久久久久久免| 欧美变态另类bdsm刘玥| 国内精品美女久久久久久| 草草在线视频免费看| 在线观看美女被高潮喷水网站| 嫩草影院入口| 亚洲国产成人一精品久久久| 国产在线男女| 高清午夜精品一区二区三区| 少妇丰满av| 国产黄片视频在线免费观看| 色视频www国产| 国产伦在线观看视频一区| 久久精品人妻少妇| 国产一区亚洲一区在线观看| 久久久色成人| 在线播放国产精品三级| 少妇熟女aⅴ在线视频| 蜜臀久久99精品久久宅男| 久久久精品94久久精品| 午夜爱爱视频在线播放| 天堂网av新在线| 精品国产露脸久久av麻豆 | 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 久久国产乱子免费精品| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 人妻系列 视频| 中文资源天堂在线| 午夜日本视频在线| 久久久久久久午夜电影| 国产成人aa在线观看| 国产精品不卡视频一区二区| 村上凉子中文字幕在线| 深爱激情五月婷婷| 久久精品国产亚洲网站| 午夜免费男女啪啪视频观看| 亚洲精品亚洲一区二区| 色综合站精品国产| 久久99热6这里只有精品| 国产伦理片在线播放av一区| 午夜福利在线在线| 一级二级三级毛片免费看| 久久精品国产亚洲网站| 国产亚洲精品av在线| 蜜臀久久99精品久久宅男| 观看美女的网站| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 老司机影院毛片| 国产精品一区二区三区四区久久| av女优亚洲男人天堂| 中文字幕av在线有码专区| 国产三级中文精品| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 欧美丝袜亚洲另类| 看免费成人av毛片| 亚州av有码| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 亚洲国产精品成人综合色| 欧美极品一区二区三区四区| 国语自产精品视频在线第100页| 日本wwww免费看| 男插女下体视频免费在线播放| 国产日韩欧美在线精品| 纵有疾风起免费观看全集完整版 | av播播在线观看一区| 一区二区三区四区激情视频| 亚洲久久久久久中文字幕| 久久精品91蜜桃| 亚洲自偷自拍三级| 日韩av在线大香蕉| 又爽又黄a免费视频| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 在线观看一区二区三区| 最后的刺客免费高清国语| 观看免费一级毛片| 国产成人精品久久久久久| 精品一区二区免费观看| 老司机影院成人| 国产探花在线观看一区二区| av天堂中文字幕网| АⅤ资源中文在线天堂| 麻豆成人午夜福利视频| 日韩在线高清观看一区二区三区| 哪个播放器可以免费观看大片| 免费观看人在逋| 久久精品国产亚洲av天美| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 国产精品三级大全| 免费看日本二区| 国内精品美女久久久久久| 欧美性猛交黑人性爽| 欧美3d第一页| .国产精品久久| 99在线人妻在线中文字幕| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 亚洲成人av在线免费| 男女国产视频网站| 国产精品久久电影中文字幕| 中文亚洲av片在线观看爽| 91久久精品国产一区二区三区| 亚洲人成网站在线播| 我的老师免费观看完整版| 日本爱情动作片www.在线观看| 乱码一卡2卡4卡精品| 人人妻人人澡欧美一区二区| 天天躁日日操中文字幕| 99热精品在线国产| 精品久久久久久久久亚洲| 国产亚洲av嫩草精品影院| 婷婷色av中文字幕| 少妇熟女aⅴ在线视频| 高清日韩中文字幕在线| 最近的中文字幕免费完整| 亚洲最大成人av| 又爽又黄无遮挡网站| 国产伦理片在线播放av一区| 日本色播在线视频| 插阴视频在线观看视频| 在线播放无遮挡| 亚洲av成人精品一二三区| 亚洲最大成人手机在线| 丝袜喷水一区| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 淫秽高清视频在线观看| 老司机福利观看| 成年女人看的毛片在线观看| 国产精品日韩av在线免费观看| 婷婷色av中文字幕| 国产精品1区2区在线观看.| 亚洲欧洲日产国产| 欧美成人免费av一区二区三区| 国内精品美女久久久久久| 99九九线精品视频在线观看视频| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 日韩人妻高清精品专区| 99国产精品一区二区蜜桃av| 丝袜喷水一区| 久久国产乱子免费精品| 好男人视频免费观看在线| 亚洲无线观看免费| 99久久中文字幕三级久久日本| 亚洲精品456在线播放app| 日本黄大片高清| 一个人观看的视频www高清免费观看| 国产激情偷乱视频一区二区| www.色视频.com| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 久久久亚洲精品成人影院| 亚洲va在线va天堂va国产| 亚洲,欧美,日韩| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 国产精品国产三级国产av玫瑰| 日韩一区二区三区影片| 久久久久免费精品人妻一区二区| 高清日韩中文字幕在线| 国产乱来视频区| 中文亚洲av片在线观看爽| 嫩草影院精品99| 天堂影院成人在线观看| 2021天堂中文幕一二区在线观| 午夜福利在线观看吧| 中国美白少妇内射xxxbb| 日日撸夜夜添| 精品无人区乱码1区二区| 夫妻性生交免费视频一级片| 色哟哟·www| 国产69精品久久久久777片| av福利片在线观看| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 久久精品91蜜桃| 视频中文字幕在线观看| 久久久久久久久久久丰满| 亚洲av中文av极速乱| 一级毛片我不卡| 免费观看精品视频网站| 深夜a级毛片| 国产人妻一区二区三区在| 三级经典国产精品| 亚洲最大成人av| 国产 一区 欧美 日韩| 免费看a级黄色片| 一本一本综合久久| 伊人久久精品亚洲午夜| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 亚洲图色成人| 国产 一区精品| 国产精品一二三区在线看| 国产爱豆传媒在线观看| 午夜老司机福利剧场| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 免费av毛片视频| 99热这里只有是精品在线观看| 在线天堂最新版资源| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 久久久精品大字幕| 3wmmmm亚洲av在线观看| 乱系列少妇在线播放| 人体艺术视频欧美日本| 偷拍熟女少妇极品色| 男女那种视频在线观看| 美女大奶头视频| 精品欧美国产一区二区三| 岛国毛片在线播放| 一级毛片电影观看 | 波野结衣二区三区在线| 国产高清国产精品国产三级 | 欧美激情国产日韩精品一区| 国产av不卡久久| 内地一区二区视频在线| 久久欧美精品欧美久久欧美| 午夜免费激情av| 欧美激情久久久久久爽电影| 久久久久久国产a免费观看| 国产 一区 欧美 日韩| 免费观看a级毛片全部| 午夜爱爱视频在线播放| 老司机影院毛片| 综合色丁香网| 99久久精品一区二区三区| 日韩制服骚丝袜av| 亚洲一区高清亚洲精品| 日本-黄色视频高清免费观看| 亚洲av熟女| 在线播放无遮挡| 国产一区二区在线av高清观看| videos熟女内射| 免费观看a级毛片全部| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 中文亚洲av片在线观看爽| 综合色丁香网| a级一级毛片免费在线观看| 久久久久久伊人网av| a级毛色黄片| 中文天堂在线官网| videossex国产| 亚洲在久久综合| 九九热线精品视视频播放| 我的女老师完整版在线观看| 久久草成人影院| 国产综合懂色| 日韩欧美 国产精品| 久久久久九九精品影院| 国内精品一区二区在线观看| or卡值多少钱| 免费人成在线观看视频色| 国产精品久久久久久精品电影| 婷婷色av中文字幕| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 国内精品宾馆在线| av天堂中文字幕网| 日韩av在线大香蕉| 久久久久久久久久成人| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 国产男人的电影天堂91| 国产乱人偷精品视频| 黄片wwwwww| 干丝袜人妻中文字幕| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 午夜老司机福利剧场| 亚洲经典国产精华液单| 一夜夜www| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 观看免费一级毛片| 日本wwww免费看| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 国产三级在线视频| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 日韩av不卡免费在线播放| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 免费观看在线日韩| 日日干狠狠操夜夜爽| 国产精品99久久久久久久久| 日韩强制内射视频| 久久这里有精品视频免费| 亚洲av福利一区| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 久久这里只有精品中国| 午夜福利成人在线免费观看| 中文欧美无线码| 欧美丝袜亚洲另类| 久久欧美精品欧美久久欧美| 国产人妻一区二区三区在| 边亲边吃奶的免费视频| 国产亚洲精品久久久com| 国产精品久久久久久久电影| 午夜免费激情av| 网址你懂的国产日韩在线| av在线播放精品| 国产毛片a区久久久久| 免费观看性生交大片5| 免费看光身美女| 一夜夜www| 国产成人freesex在线| 亚洲av一区综合| 中文资源天堂在线| 一级二级三级毛片免费看| 国产伦理片在线播放av一区| 最近视频中文字幕2019在线8| 看片在线看免费视频| 麻豆国产97在线/欧美| 欧美潮喷喷水| 有码 亚洲区| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 亚洲内射少妇av| 亚洲丝袜综合中文字幕| 丰满人妻一区二区三区视频av| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | h日本视频在线播放| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 国产精品乱码一区二三区的特点| 青青草视频在线视频观看| av在线亚洲专区| 综合色丁香网| 久久久久久久久久成人| 视频中文字幕在线观看| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 人人妻人人看人人澡| 国产黄a三级三级三级人| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | av卡一久久| 国语自产精品视频在线第100页| 美女内射精品一级片tv| 国产av码专区亚洲av| 美女cb高潮喷水在线观看| 高清午夜精品一区二区三区| 卡戴珊不雅视频在线播放| 看免费成人av毛片| 色播亚洲综合网| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 女人久久www免费人成看片 | 免费看光身美女| 岛国在线免费视频观看| 99久久九九国产精品国产免费| 最近中文字幕高清免费大全6| 黄色一级大片看看| 天天躁日日操中文字幕| 亚洲成人av在线免费| 免费观看的影片在线观看| 国内精品美女久久久久久| 精品人妻熟女av久视频| 亚洲精品亚洲一区二区| 欧美3d第一页| eeuss影院久久| 直男gayav资源| 爱豆传媒免费全集在线观看| 国产探花在线观看一区二区| 久久久久久大精品| 91精品一卡2卡3卡4卡| 成人特级av手机在线观看| 久久久久久久久中文| 一级二级三级毛片免费看| 少妇熟女aⅴ在线视频| 丝袜美腿在线中文| 亚洲成色77777| 一本久久精品| 寂寞人妻少妇视频99o| 在线免费十八禁| 男人舔奶头视频| 国产精品一二三区在线看| 免费观看a级毛片全部| 直男gayav资源| av又黄又爽大尺度在线免费看 | 人体艺术视频欧美日本| 亚洲四区av| 边亲边吃奶的免费视频| 麻豆成人午夜福利视频| 波多野结衣高清无吗| 成人二区视频| 亚洲美女视频黄频| 国产一区有黄有色的免费视频 | 婷婷色麻豆天堂久久 | 久久欧美精品欧美久久欧美| 超碰97精品在线观看| 亚洲美女视频黄频| 真实男女啪啪啪动态图| 亚洲内射少妇av| 麻豆成人av视频| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 精品一区二区三区人妻视频| 99热6这里只有精品| 日本午夜av视频| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 精品午夜福利在线看| 国产精品人妻久久久久久| 免费观看性生交大片5| 小说图片视频综合网站| 成人av在线播放网站| 中文欧美无线码| 国产在线一区二区三区精 | 好男人在线观看高清免费视频| 婷婷色麻豆天堂久久 | 村上凉子中文字幕在线| 日本三级黄在线观看|