• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    五羥色胺對(duì)體外培養(yǎng)山羊黃體細(xì)胞增殖的影響

    2016-08-15 07:54:14范艷樂馬菊紅李國紅雷琦敬殷玉鵬趙善廷陳樹林
    關(guān)鍵詞:羥色胺體細(xì)胞黃體

    楊 煥,張 華,陳 炯,范艷樂,馬菊紅,李國紅,雷琦敬,殷玉鵬,趙善廷, 陳樹林*

    (1.西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,陜西楊凌 712100;2.萊商銀行,山東萊蕪 271100)

    ?

    五羥色胺對(duì)體外培養(yǎng)山羊黃體細(xì)胞增殖的影響

    楊煥1,張華2,陳炯1,范艷樂1,馬菊紅1,李國紅1,雷琦敬1,殷玉鵬1,趙善廷1, 陳樹林1*

    (1.西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,陜西楊凌 712100;2.萊商銀行,山東萊蕪 271100)

    摘要:為了探討5-羥色胺(5-HT)與山羊黃體細(xì)胞的生長是否存在密切的關(guān)聯(lián)性,揭示其在黃體發(fā)育中的生物學(xué)作用,采用膠原酶Ⅱ消化法獲得原代山羊黃體細(xì)胞并用催產(chǎn)素(OT)染色對(duì)細(xì)胞進(jìn)行鑒定,四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法測(cè)定不同濃度5-HT對(duì)山羊黃體細(xì)胞的影響,免疫組織化學(xué)染色法(SP法)檢測(cè)山羊黃體細(xì)胞中增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)蛋白的表達(dá)。MTT法結(jié)果顯示,5-HT對(duì)山羊黃體細(xì)胞的增殖起到促進(jìn)作用,促增殖的濃度范圍在10-8mol/L~10-4mol/L,濃度越高,促增殖作用越明顯。免疫組織化學(xué)染色法證實(shí),5-HT能夠使山羊黃體細(xì)胞中PCNA蛋白的表達(dá)增多。結(jié)果提示,5-HT可能是通過促進(jìn)PCNA蛋白的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)對(duì)山羊黃體細(xì)胞的促增殖作用。5-HT在黃體發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮的重要作用及相關(guān)分子機(jī)制的初步揭示都為生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)的研究奠定了理論基礎(chǔ)。

    關(guān)鍵詞:山羊黃體細(xì)胞;5-羥色胺;細(xì)胞增殖;增殖細(xì)胞核抗原

    五羥色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)是一種吲哚衍生物,由色氨酸轉(zhuǎn)化而來,分子式為C10H12N2O。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中,松果體、下丘腦和中腦附近會(huì)產(chǎn)生大量5-HT[1];分布于消化道內(nèi)的嗜鉻細(xì)胞主要負(fù)責(zé)5-HT的合成,此外部分肥大細(xì)胞也會(huì)產(chǎn)生少量游離的5-HT[2-3]。作為內(nèi)源性神經(jīng)遞質(zhì),它與體溫調(diào)節(jié)、鎮(zhèn)痛疼痛、性活動(dòng)、焦慮睡眠以及精神疾病等相關(guān),借助信號(hào)激活傳遞、神經(jīng)功能發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)[4-7]。

    黃體形成于哺乳動(dòng)物排卵后,由2種不同類型的細(xì)胞分化而成,以分泌孕酮為主,也分泌少量雌激素[8],通過調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜的變化來適應(yīng)受精卵的著床和妊娠的早期維持,其生理功能的正常與否對(duì)生殖周期的更替起到重要的作用[9-11]。陳樹林等通過大量的研究證實(shí)黃體組織中存在一定數(shù)量的彌散性神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞,并闡述了其共同的細(xì)胞標(biāo)志物在黃體中的分布特點(diǎn),這些細(xì)胞標(biāo)志物主要有神經(jīng)特異性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)、S-100蛋白(S-100 protein)、5-羥色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)和突觸素(synaptophysin,SYP)。它們隨著黃體的發(fā)生、發(fā)展和退化而出現(xiàn)規(guī)律性的變化。綜合分析判斷,這些標(biāo)志物與黃體的發(fā)育必定有密切的關(guān)系[12-13]。本文擬在細(xì)胞培養(yǎng)水平上研究5-HT對(duì)山羊黃體細(xì)胞增殖的影響,為黃體的發(fā)育及成熟后發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)的機(jī)理提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1材料

    1.1.1試驗(yàn)用動(dòng)物健康且性成熟的雌性奶山羊10只,購自楊凌姚南養(yǎng)殖場。

    1.1.2主要儀器與試劑DMEM-F12培養(yǎng)基,Gibcobrl公司產(chǎn)品;胎牛血清(FBS),Hyclone公司產(chǎn)品;MTT、二甲基亞砜(dimethgl sulphoxide,DMSO)、5-HT,Sigma公司產(chǎn)品;OT單克隆抗體,武漢博士德生物工程有限公司產(chǎn)品;增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)多克隆抗體,Dako公司產(chǎn)品;SP二抗試劑盒,北京康為世紀(jì)生物科技有限公司產(chǎn)品;RT-2100C 酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀,Rayto產(chǎn)品;超凈工作室(SW-CT-IF),蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司產(chǎn)品;CO2恒溫培養(yǎng)箱,日本三洋工業(yè)株式會(huì)社產(chǎn)品;Moticam5000圖像信號(hào)采集與分析系統(tǒng),麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)公司產(chǎn)品。

    1.2方法

    1.2.1山羊黃體細(xì)胞的分離、體外培養(yǎng)與鑒定采用頸部放血法處理性成熟雌性奶山羊,并取出卵巢保證無菌,投入預(yù)先冷置的PBS液中,將卵巢表面血漬洗滌干凈,放入預(yù)冷的生理鹽水中,用冰瓶帶回實(shí)驗(yàn)室。于超凈工作臺(tái)內(nèi),從冰瓶中取出采集的新鮮卵巢,置于盛有無菌PBS液的培養(yǎng)皿中,用鑷子小心鈍性分離外層的卵巢膜,分離黃體組織,放入青霉素小瓶中(已事先加入少量PBS液),小心剪碎,移入已滅菌離心管中,加入少量PBS液小心清洗,靜置沉淀,棄去上清液,加入2 g/L膠原酶Ⅱ溶液,密封管口,于37 ℃水浴恒溫箱中消化40 min,100 mL/L胎牛血清DMEM-F12完全培養(yǎng)液終止消化后細(xì)胞計(jì)數(shù),調(diào)整細(xì)胞數(shù)目在4×105個(gè)/mL~5×105個(gè)/mL之間,吸取適量細(xì)胞懸液于無菌培養(yǎng)皿中,于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng),待細(xì)胞充分貼壁,傳代培養(yǎng)觀察,并采用OT染色鑒定細(xì)胞。

    1.2.25- HT誘導(dǎo)山羊黃體細(xì)胞增殖試驗(yàn)用胰酶消化法處理傳至第2代的細(xì)胞并用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),通過添加完全培養(yǎng)基對(duì)細(xì)胞數(shù)目進(jìn)行調(diào)整,將調(diào)整好的細(xì)胞懸液用移液器移入96孔板,控制接種密度大約為2×103個(gè)細(xì)胞/100μL/孔,培養(yǎng)24 h后,棄舊培養(yǎng)基后換成DMEM-F12無血清培養(yǎng)基持續(xù)培養(yǎng)12 h后,分別用含有10-4mol/L~10-9mol/L遞減濃度的5-HT培養(yǎng)液再做更換作為細(xì)胞處理組。細(xì)胞未處理組加入DMEM-F12無血清培養(yǎng)液,置37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中持續(xù)培養(yǎng)觀察4個(gè)時(shí)間點(diǎn),分別是24、48、72、96 h。每個(gè)待測(cè)培養(yǎng)孔移入MTT溶液總量為20μL,于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱持續(xù)孵育4 h,吸棄孔內(nèi)剩余培養(yǎng)液后,小心避光加入150 μL二甲基亞砜(DMSO),置于搖床緩慢振蕩10 min后,立即檢測(cè)吸光度值。

    1.2.3免疫組化試驗(yàn)在24孔培養(yǎng)板中放置蓋玻片,并事先在板孔中央滴1滴PBS溶液(通過液體表面張力牢固固定蓋玻片)。每孔接種細(xì)胞3×104個(gè)左右,加入含 mL/L胎牛血清的DMEM-F12完全培養(yǎng)液0.5 mL,置37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中持續(xù)培養(yǎng)24 h后,換成含10-4mol/L~10-6mol/L 3個(gè)不同濃度的5-HT培養(yǎng)液,細(xì)胞未處理組為DMEM-F12無血清培養(yǎng)液。置37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中持續(xù)培養(yǎng)24、48、72 h后用鑷子取出細(xì)胞玻片,PBS液充分沖洗后,40 g/L多聚甲醛溶液處理30 min,再用PBS液充分沖洗;1 g/L TritonX-100覆蓋細(xì)胞浸潤20 min,用PBS液沖洗,滴加內(nèi)源性過氧化物酶封閉液,室溫孵育12 min,PBS液沖洗,滴加正常羊血清工作液,室溫孵育12 min;滴加1∶400稀釋處理過的PCNA一抗,放入濕盒中4 ℃過夜。PBS液沖洗,滴加生物素標(biāo)記的二抗,室溫孵育12 min,PBS液沖洗,滴加HRP標(biāo)記的鏈霉親和素,室溫孵育12 min,PBS液沖洗,滴加DAB顯色工作液,達(dá)到最佳顯色時(shí)間后用蒸餾水沖洗終止顯色。正常兔血清是一抗的替代對(duì)照,PBS緩沖液是二抗的空白對(duì)照。

    1.2.4圖像分析于顯微鏡下觀察采集5個(gè)~8個(gè)視野圖,保存圖樣后載入采集分析系統(tǒng),計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞數(shù),并檢測(cè)平均灰度值。平均灰度值的高低代表圖像透光率的高低,一共分成256級(jí),最亮為256級(jí),最黑為0級(jí)。平均灰度值高對(duì)應(yīng)染色淺和蛋白表達(dá)量低;反之,平均灰度值低則對(duì)應(yīng)陽性細(xì)胞數(shù)目多和蛋白陽性表達(dá)強(qiáng)。

    2 結(jié)果

    2.1山羊黃體細(xì)胞的培養(yǎng)與鑒定

    膠原酶Ⅱ消化法培養(yǎng)原代山羊黃體細(xì)胞,可見黃體細(xì)胞貼壁伸展生長,多呈狹長梭邊形、橢圓形,少數(shù)出現(xiàn)多邊形。采用免疫組織化學(xué)染色法鑒定原代培養(yǎng)的細(xì)胞類型,結(jié)果顯示,原代培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)強(qiáng)烈的OT陽性表達(dá),可以確定所培養(yǎng)的細(xì)胞為山羊黃體細(xì)胞(圖1)。

    A.陰性對(duì)照;B.OT陽性細(xì)胞

    2.25-HT誘導(dǎo)山羊黃體細(xì)胞增殖試驗(yàn)

    分別用含有10-4mol/L~10-9mol/L遞減濃度的5-HT培養(yǎng)液更換舊培養(yǎng)液培養(yǎng)山羊黃體細(xì)胞。細(xì)胞處理組和細(xì)胞未處理組對(duì)比的結(jié)果顯示,細(xì)胞處理組(10-4mol/L~10-8mol/L組)組間OD值差異性顯著(P<0.05),表明5-HT對(duì)山羊黃體細(xì)胞的增殖在效應(yīng)濃度內(nèi)起到促進(jìn)作用,并隨著濃度的增加促增殖作用逐漸加強(qiáng)。然而10-4mol/L 與10-5mol/L 兩個(gè)濃度組間的OD值差異性不顯著,10-9mol/L濃度組對(duì)山羊黃體細(xì)胞的促增殖無明顯作用(圖2)。

    2.35-HT對(duì)體外培養(yǎng)黃體細(xì)胞PCNA表達(dá)的影響

    細(xì)胞未處理組和細(xì)胞處理組均為PCNA蛋白細(xì)胞核陽性染色(圖3)通過計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞,檢測(cè)平均灰度值得出,細(xì)胞處理組的PCNA蛋白表達(dá)量顯著高于細(xì)胞未處理組(P<0.05),表明細(xì)胞處理組可能通過促進(jìn)PCNA蛋白的表達(dá)進(jìn)而影響山羊黃體細(xì)胞的增殖(表1)。

    與對(duì)照組比較,*P<0.01;10-5mol/L組與10-4mol/L組比較,#P>0.05

    Compared with control group,*P<0.01 ;10-5mol/L compared with 10-4mol/L,#P>0.05

    圖2不同濃度5-HT對(duì)山羊黃體細(xì)胞增殖的影響

    Fig.2The effects of 5-HT concentrations on proliferation of goat corpus luteal cells

    A.對(duì)照組;B.5-HT組(10-5 mol/L)

    組別Groups24h陽性細(xì)胞數(shù)/mm2Positivecellnumber平均灰度值A(chǔ)veragegrayvalue48h陽性細(xì)胞數(shù)/mm2Positivecellnumber平均灰度值A(chǔ)veragegrayvalue72h陽性細(xì)胞數(shù)/mm2Positivecellnumber平均灰度值A(chǔ)veragegrayvalue對(duì)照組Control203±37221.2±7.7218±29207.3±10.6246±40195.2±5.810-6mol/L257±31a190.4±6.2a270±48a187.4±5.8a293±22a154.7±4.6a10-5mol/L278±27ab176.1±8.2ab292±29ab165.1±9.3ab313±34ab136.2±8.5ab10-4mol/L286±41abc170±4.3abc290±66abc168.5±6.9abc329±29abc129.8±7.7abc

    注:a.與對(duì)照組比較,P<0.05;b.與10-6mol/L 組比較,P<0.01;c.與10-5mol/L 組比較,P>0.05。

    Note:a.Compared with control group,P<0.05;b.Compared with 10-6mol/L,P<0.01;c.Compared with 10-5mol/L,P>0.05.

    3 討論

    5-HT是一種首先從人的血清中發(fā)現(xiàn)的活性肽類,也是一種單胺類神經(jīng)遞質(zhì)。已有研究在大鼠證實(shí)[14]5-HT在有效濃度范圍內(nèi)能引起體外培養(yǎng)血管平滑肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的增殖,5-HT的促增殖作用表現(xiàn)為隨其濃度的升高而加強(qiáng),但5-HT對(duì)于山羊黃體細(xì)胞體外生長影響的研究情況尚未報(bào)道。陳樹林等[12-13]研究證實(shí)山羊黃體細(xì)胞中存在5-HT的表達(dá)。本研究采用體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),通過添加不同濃度的5-HT來觀察其對(duì)山羊黃體細(xì)胞增殖的影響。

    本研究采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況,初步得出5-HT對(duì)于山羊黃體細(xì)胞生長增殖的影響規(guī)律。細(xì)胞處理組與細(xì)胞未處理組相比,處理組的OD值明顯高于未處理組數(shù)值,表明5-HT具有促增殖效應(yīng),并隨其濃度梯度的升高而增強(qiáng),在10-8mol/L~10-4mol/L的濃度范圍內(nèi)具有顯著性,但10-4mol/L與10-5mol/L 兩個(gè)濃度組間的OD值差異性不顯著,可以推出10-5mol/L濃度組對(duì)山羊黃體細(xì)胞的促增殖作用產(chǎn)生阻滯效應(yīng)。

    PCNA高表達(dá)于快速增殖細(xì)胞的細(xì)胞核中。參與細(xì)胞DNA的合成,并且啟動(dòng)細(xì)胞分裂增殖[14-15]。有學(xué)者研究表明,PCNA蛋白的表達(dá)主要發(fā)生在細(xì)胞周期的G1期和S期,在M期和靜止期其表達(dá)水平較低[16]。本研究結(jié)果顯示,對(duì)照組與各試驗(yàn)組中PCNA蛋白均成細(xì)胞核陽性染色。與對(duì)照組相比,5-HT不同濃度試驗(yàn)組染色結(jié)果陽性較強(qiáng),灰度值分析PCNA蛋白相對(duì)表達(dá)量較高,提示不同濃度的5-HT組與山羊黃體細(xì)胞的PCNA蛋白的表達(dá)存在關(guān)聯(lián)。

    綜合以上研究結(jié)果,能夠初步證明在離體培養(yǎng)的山羊黃體細(xì)胞中加入10-8mol/L~10-4mol/L濃度范圍的5-HT后,顯著促進(jìn)細(xì)胞增殖,外源性加入10-6mol/L~10-4mol/L的5-HT,能顯著增加PCNA蛋白的表達(dá)量。此試驗(yàn)結(jié)果在一定程度上表明,外源性加入不同濃度5-HT有助于山羊黃體細(xì)胞的增殖,這可能是通過與PCNA蛋白的表達(dá)進(jìn)程和水平建立了聯(lián)系,促使山羊黃體細(xì)胞的增殖周期由G1期向S期轉(zhuǎn)化來實(shí)現(xiàn)的,但其涉及的分子機(jī)制還不明確,需要深入研究。

    參考文獻(xiàn):

    [1]Devall A J,Santos J M,Fry J P.Elevation of brain all opregnanolone rather than 5-HT release by short term,low dose fluoxetine treatment prevents the estrous cycle-linked increase in stress sensitivity in female rats[J].Science,2015,25(1):113-123.

    [2]Bhattarai J P,Roa J,Herbison A E.Serotonin acts through 5-HT1 and 5-HT2 receptors to exert biphasic actions on GnRH neuron excitability in the mouse[J].Endocrinology,2014,155(2):513-524.

    [3]Goel N,Innala L,Viau V.Sex differences in serotonin (5-HT) 1A receptor regulation of HPA axis and dorsal raphe responses to acute restraint[J].Science,2014,40(6):232-241.

    [4]陳文玉,操高原,歐可群,等.大鼠松果體內(nèi)含5-羥色胺、血管活性腸多膚及P物質(zhì)纖維的免疫組化觀察[J].解剖學(xué)雜志,1996,19(3):213-216.

    [5]高振平,宋玉良,閻明鑒,等.成人腦干中縫外區(qū)5-羥色胺細(xì)胞的分布[J].白求恩醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),1994,20(1):23.

    [6]張華,彭貴成,翁嘉穎.大鼠海馬內(nèi)5-羥色胺免疫組化陽性纖維及終末的分布[J].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),1994,19(4):282-286.

    [7]陳耀星,滑靜,楊佐君,等.5 -羥色胺樣神經(jīng)元在下丘腦的分布-PAP法研究[J].中國獸醫(yī)學(xué)報(bào),1998,18(2):172- 174.

    [8]劉杰,顧竹影.5-羥色胺信號(hào)系統(tǒng)與腸易激綜合征[J].國際消化病雜志,2008,28(5):368-369.

    [9]宋清,張曉文,張絨.5-羥色胺受體及亞型的研究現(xiàn)狀[J].甘肅醫(yī)藥,2010,29(1):1-4.

    [10]景明來,張曉金.黃體分泌孕酮的分子調(diào)控機(jī)制[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2007,16(7):1005-1008.

    [11]卿素珠,陳樹林,沈霞芬.發(fā)情周期中奶山羊下丘腦-垂體-卵巢軸催產(chǎn)素的免疫組化的定位[J].中國獸醫(yī)學(xué)報(bào),2003,23(3):300-302.

    [12]陳樹林,蔣田園,雷治海,等.山羊黃體彌散性神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的分布[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào),2007,39(9):16-19.

    [13]陳樹林,段會(huì)娟,張寶,等.彌散性神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞標(biāo)志物在妊娠期山羊黃體細(xì)胞中的共存[J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2009,37(1):22-28.

    [14]宋景春,黃國明,涂曉文,等.五羥色胺誘導(dǎo)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖的作用與機(jī)制研究[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2009,19(2):199-202.

    [15]Seuwen K,Magnaldo I,Pouyssegyr J.Serotonin stimulates DNA synthesis in fibroblasts acting through 5-HTlB receptors coupled to a Gi.protein[J].Nature,1988,335:254-256.

    [16] Liu J,Cui Z S,Luo Y,et al.Experimental research of cyclin G2 inhibitory effect on gastric carcinoma cell[J].Chin J Mod Med,2007,17(1):36-43.

    收稿日期:2016-03-09

    基金項(xiàng)目:國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(30972151)

    作者簡介:楊煥(1989-),女,新疆烏魯木齊人,碩士,主要從事動(dòng)物免疫內(nèi)分泌調(diào)控研究。*通訊作者

    中圖分類號(hào):Q813.11

    文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

    文章編號(hào):1007-5038(2016)07-0053-05

    Effect of Serotonin on Proliferation in Cultured Goat's Luteal Cellsinvitro

    YANG Huan1,ZHANG Hua2,CHEN Jiong1,FAN Yan-le1,MA Ju-hong1,LI Guo-hong1,LEI Qi-jing1,YIN Yu-peng1,ZHAO Shan-ting1,CHEN Shu-lin1

    (1.CollegeofVeterinaryMedicine,NorthwestA&FUniversity,Yangling,Shaanxi,712100,China;2.LayCommercialBank,Laiwu,Shandong,271100,China)

    Abstract:The purpose of this study was to investigate that whether there is a close correlation between serotonin (5-HT) and the growth of goat luteal cells and to reveal the 5-HT in the corpus luteum of the biological effects of developing.In this study,the primary culture goat corpus luteal cells were obtained by collagenaseⅡ digestion and identified with OT immunostaining.The effect was studied using MTT assay and immunohistochemical staining assay-SP to obtain goat luteal cells PCNA protein.MTT assay showed that,5-HT on the proliferation of goat luteal cells play a role in promoting the proliferation in the concentration range of 10-8-10-4mol/L,the higher the concentration,the more obvious proliferation.Immunohistochemical staining confirmed that 5-HT enables goat luteal cells expressing PCNA protein increased.The results showed that 5-HT may be by promoting the expression of PCNA protein to achieve the effect of promoting proliferation of goat luteal cells.5-HT occurs in the corpus luteum,plays an important role in the development process and the initial revealing the molecular mechanisms associated reproductive endocrine system,and provides a theoretical basis.

    Key words:goat corpus luteum cell; 5-hydroxytryptamine; proliferation; proliferating cell nuclear antigen

    猜你喜歡
    羥色胺體細(xì)胞黃體
    5-羥色胺對(duì)腸道疾病的影響
    浙江:誕生首批體細(xì)胞克隆豬
    新型冠狀病毒入侵人體細(xì)胞之謎
    科學(xué)(2020年4期)2020-11-26 08:27:10
    CT增強(qiáng)掃描對(duì)卵巢黃體囊腫破裂的診斷價(jià)值
    5-羥色胺:肝癌的潛在分子標(biāo)志物?
    內(nèi)皮前體細(xì)胞亞型與偏頭痛的相關(guān)性分析
    非洲菊花托的體細(xì)胞胚發(fā)生及植株再生
    產(chǎn)后抑郁癥與雌二醇、催乳素、孕酮、五羥色胺水平的相關(guān)性研究
    中醫(yī)治療黃體功能不足循證評(píng)價(jià)
    中西醫(yī)結(jié)合治療卵巢黃體破裂的臨床觀察
    舔av片在线| 国产精品一及| 亚洲精品色激情综合| 天美传媒精品一区二区| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 91麻豆av在线| 天天一区二区日本电影三级| 中文亚洲av片在线观看爽| 精品国产亚洲在线| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 久久午夜亚洲精品久久| 亚洲欧美日韩高清在线视频| av在线蜜桃| 日韩欧美 国产精品| 国产爱豆传媒在线观看| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 国产成人影院久久av| 欧美极品一区二区三区四区| 国产探花在线观看一区二区| 日韩欧美在线乱码| 村上凉子中文字幕在线| 制服丝袜大香蕉在线| 操出白浆在线播放| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 一级黄片播放器| 免费在线观看日本一区| 亚洲专区中文字幕在线| 极品教师在线免费播放| 亚洲人成电影免费在线| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 一区二区三区高清视频在线| 久久精品国产清高在天天线| 日本一二三区视频观看| 黑人欧美特级aaaaaa片| 日本黄色视频三级网站网址| 国产高清视频在线观看网站| 久久午夜亚洲精品久久| 一区二区三区国产精品乱码| 91久久精品电影网| 一二三四社区在线视频社区8| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 伊人久久精品亚洲午夜| 国产色爽女视频免费观看| 又爽又黄无遮挡网站| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 又黄又粗又硬又大视频| 欧美区成人在线视频| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 成人欧美大片| 精品无人区乱码1区二区| 很黄的视频免费| 国产 一区 欧美 日韩| 亚洲在线观看片| 久久精品国产综合久久久| 757午夜福利合集在线观看| 久久香蕉精品热| 免费av不卡在线播放| 99热这里只有是精品50| 九色国产91popny在线| 成年女人毛片免费观看观看9| 亚洲av免费高清在线观看| 三级毛片av免费| 欧美丝袜亚洲另类 | 亚洲人成网站在线播| 亚洲在线观看片| 中文资源天堂在线| 日本成人三级电影网站| 国产男靠女视频免费网站| 在线观看av片永久免费下载| 久久欧美精品欧美久久欧美| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 男女下面进入的视频免费午夜| 亚洲无线在线观看| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 亚洲精品在线观看二区| www.色视频.com| 亚洲内射少妇av| 久久久国产精品麻豆| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 哪里可以看免费的av片| 国产精品精品国产色婷婷| 亚洲av电影在线进入| 天天添夜夜摸| 乱人视频在线观看| 九色国产91popny在线| 亚洲成av人片在线播放无| 在线观看免费视频日本深夜| 国产一级毛片七仙女欲春2| 精华霜和精华液先用哪个| 97超视频在线观看视频| 久久久久久久精品吃奶| 一级黄片播放器| 亚洲av成人精品一区久久| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 三级国产精品欧美在线观看| 午夜福利高清视频| 亚洲一区二区三区色噜噜| 国产成人系列免费观看| 国产精品av视频在线免费观看| 丰满乱子伦码专区| 久久九九热精品免费| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 中出人妻视频一区二区| 国产成人啪精品午夜网站| 成人鲁丝片一二三区免费| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 国产亚洲精品av在线| 欧美日韩黄片免| 精品国产三级普通话版| 听说在线观看完整版免费高清| 亚洲成av人片免费观看| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 久久性视频一级片| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| a级一级毛片免费在线观看| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 91av网一区二区| 黄色视频,在线免费观看| 禁无遮挡网站| 老司机午夜福利在线观看视频| 最新美女视频免费是黄的| 在线观看舔阴道视频| 欧美日韩黄片免| 一区二区三区高清视频在线| 五月伊人婷婷丁香| 国产真人三级小视频在线观看| 在线免费观看的www视频| 91在线精品国自产拍蜜月 | 成年版毛片免费区| 村上凉子中文字幕在线| 淫秽高清视频在线观看| 午夜福利在线观看吧| 免费看十八禁软件| 亚洲男人的天堂狠狠| 国产伦一二天堂av在线观看| 亚洲专区中文字幕在线| 九色成人免费人妻av| 日韩av在线大香蕉| 亚洲国产色片| 高清在线国产一区| 白带黄色成豆腐渣| 精品人妻偷拍中文字幕| 一二三四社区在线视频社区8| 中国美女看黄片| 色视频www国产| 中文资源天堂在线| 日韩欧美精品v在线| 免费观看人在逋| 欧美日韩福利视频一区二区| 国产av一区在线观看免费| 亚洲精品日韩av片在线观看 | 中文亚洲av片在线观看爽| 久久国产精品影院| 亚洲精品亚洲一区二区| 波多野结衣高清作品| 亚洲最大成人手机在线| 欧美中文日本在线观看视频| 丁香六月欧美| 婷婷精品国产亚洲av| 欧美日本亚洲视频在线播放| 天堂√8在线中文| 18美女黄网站色大片免费观看| 一级作爱视频免费观看| 真实男女啪啪啪动态图| 免费看光身美女| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 美女大奶头视频| 亚洲av免费在线观看| 久久精品91无色码中文字幕| 俺也久久电影网| 国产单亲对白刺激| 一个人看视频在线观看www免费 | 俺也久久电影网| 最近最新中文字幕大全电影3| 一个人看视频在线观看www免费 | 午夜激情欧美在线| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 日本免费一区二区三区高清不卡| 午夜福利欧美成人| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 日本 欧美在线| 99久久综合精品五月天人人| a级一级毛片免费在线观看| 日本熟妇午夜| 波多野结衣高清无吗| 亚洲内射少妇av| 免费观看的影片在线观看| 女人被狂操c到高潮| 黑人欧美特级aaaaaa片| 日韩国内少妇激情av| 国产单亲对白刺激| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 亚洲片人在线观看| 在线视频色国产色| 一二三四社区在线视频社区8| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 真人一进一出gif抽搐免费| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 国产在视频线在精品| 国产午夜精品论理片| 九九在线视频观看精品| 成人av一区二区三区在线看| 日本五十路高清| 国产不卡一卡二| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产伦人伦偷精品视频| 午夜精品在线福利| www.熟女人妻精品国产| 手机成人av网站| 中文字幕av成人在线电影| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 成熟少妇高潮喷水视频| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美 | 国产一区二区在线观看日韩 | 国产一区二区亚洲精品在线观看| 黄色视频,在线免费观看| 青草久久国产| 亚洲欧美精品综合久久99| 窝窝影院91人妻| 国产精品亚洲一级av第二区| 久久久久亚洲av毛片大全| 久久精品国产自在天天线| www.www免费av| 亚洲在线观看片| 亚洲真实伦在线观看| 我要搜黄色片| av黄色大香蕉| 99国产极品粉嫩在线观看| 日日干狠狠操夜夜爽| 午夜久久久久精精品| 女警被强在线播放| 国产欧美日韩一区二区精品| 国产毛片a区久久久久| 哪里可以看免费的av片| 国产又黄又爽又无遮挡在线| av国产免费在线观看| 99精品久久久久人妻精品| 一个人看视频在线观看www免费 | 黑人欧美特级aaaaaa片| 亚洲乱码一区二区免费版| 精品久久久久久久末码| 淫妇啪啪啪对白视频| 久久久久亚洲av毛片大全| 两个人视频免费观看高清| svipshipincom国产片| 精品国产亚洲在线| 久久久久久久精品吃奶| 18+在线观看网站| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 成人无遮挡网站| 国产 一区 欧美 日韩| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 欧美最新免费一区二区三区 | 国产男靠女视频免费网站| 色精品久久人妻99蜜桃| 久久久久免费精品人妻一区二区| 99精品欧美一区二区三区四区| 午夜激情福利司机影院| 欧美三级亚洲精品| 超碰av人人做人人爽久久 | 身体一侧抽搐| 欧美zozozo另类| 免费观看精品视频网站| 国内揄拍国产精品人妻在线| 美女高潮的动态| 国内精品美女久久久久久| 91久久精品国产一区二区成人 | 九色成人免费人妻av| www.熟女人妻精品国产| 久久精品国产自在天天线| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 嫩草影院入口| 免费无遮挡裸体视频| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 黑人欧美特级aaaaaa片| 18禁国产床啪视频网站| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 男女午夜视频在线观看| 国内精品久久久久久久电影| 国产极品精品免费视频能看的| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 9191精品国产免费久久| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 久久久久久久亚洲中文字幕 | АⅤ资源中文在线天堂| 日韩高清综合在线| 在线观看66精品国产| 俄罗斯特黄特色一大片| 日日夜夜操网爽| 黄色女人牲交| 成人18禁在线播放| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 老司机福利观看| 18禁美女被吸乳视频| 人人妻人人看人人澡| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 制服人妻中文乱码| 色吧在线观看| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 一区福利在线观看| 欧美成人免费av一区二区三区| 99国产极品粉嫩在线观看| 99精品久久久久人妻精品| 日韩中文字幕欧美一区二区| 国模一区二区三区四区视频| h日本视频在线播放| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 日韩国内少妇激情av| 乱人视频在线观看| 中文资源天堂在线| 叶爱在线成人免费视频播放| 在线观看舔阴道视频| 久久久久久久午夜电影| 波多野结衣巨乳人妻| 长腿黑丝高跟| 国产探花在线观看一区二区| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 九色国产91popny在线| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 国产精品永久免费网站| 久久这里只有精品中国| 欧美另类亚洲清纯唯美| 久久6这里有精品| 中文字幕高清在线视频| 九色成人免费人妻av| 国产成人a区在线观看| www.色视频.com| 亚洲国产中文字幕在线视频| 亚洲美女视频黄频| 成年女人毛片免费观看观看9| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产69精品久久久久777片| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 老司机午夜十八禁免费视频| 最好的美女福利视频网| 国内精品久久久久久久电影| 男女午夜视频在线观看| 又爽又黄无遮挡网站| 人人妻人人澡欧美一区二区| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 久久久久久人人人人人| 国产真实乱freesex| 人妻夜夜爽99麻豆av| 亚洲av免费高清在线观看| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 男人的好看免费观看在线视频| 精品福利观看| 久久久久国内视频| 动漫黄色视频在线观看| 1024手机看黄色片| 欧美一区二区精品小视频在线| 最近在线观看免费完整版| 999久久久精品免费观看国产| 性色avwww在线观看| 小说图片视频综合网站| 国产精华一区二区三区| 欧美三级亚洲精品| 免费观看的影片在线观看| 在线天堂最新版资源| 日韩欧美精品免费久久 | 3wmmmm亚洲av在线观看| 成熟少妇高潮喷水视频| 99久久精品热视频| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 日本a在线网址| 狂野欧美激情性xxxx| 国产真实伦视频高清在线观看 | 久久午夜亚洲精品久久| 我的老师免费观看完整版| 午夜福利视频1000在线观看| 国产免费一级a男人的天堂| 最近在线观看免费完整版| 1000部很黄的大片| 黄色片一级片一级黄色片| 成人国产一区最新在线观看| 日本黄色片子视频| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 国产久久久一区二区三区| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 亚洲avbb在线观看| 他把我摸到了高潮在线观看| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 国产淫片久久久久久久久 | 国产真实伦视频高清在线观看 | 99热6这里只有精品| 99国产极品粉嫩在线观看| xxxwww97欧美| 亚洲成人中文字幕在线播放| 色尼玛亚洲综合影院| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 亚洲不卡免费看| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 色av中文字幕| 91麻豆精品激情在线观看国产| 午夜久久久久精精品| 久久久久久久久久黄片| av专区在线播放| 有码 亚洲区| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| av在线天堂中文字幕| 又黄又粗又硬又大视频| 一个人观看的视频www高清免费观看| 波野结衣二区三区在线 | 久久精品国产亚洲av涩爱 | 成熟少妇高潮喷水视频| 国产欧美日韩一区二区三| 观看免费一级毛片| 有码 亚洲区| 日韩欧美在线乱码| 亚洲七黄色美女视频| 成人国产综合亚洲| 嫁个100分男人电影在线观看| 亚洲中文字幕日韩| 成人av在线播放网站| 日韩人妻高清精品专区| 国产精华一区二区三区| 九色国产91popny在线| www.999成人在线观看| 窝窝影院91人妻| 欧美性猛交黑人性爽| 91九色精品人成在线观看| 男女之事视频高清在线观看| 精品福利观看| 一本一本综合久久| 97碰自拍视频| 婷婷丁香在线五月| 国产精品,欧美在线| 淫妇啪啪啪对白视频| 成年女人永久免费观看视频| 香蕉久久夜色| 69av精品久久久久久| 婷婷精品国产亚洲av| 男插女下体视频免费在线播放| 我的老师免费观看完整版| 国产中年淑女户外野战色| 2021天堂中文幕一二区在线观| 欧美成人免费av一区二区三区| 久久99热这里只有精品18| 亚洲人成网站高清观看| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 免费观看精品视频网站| 黄色视频,在线免费观看| www日本在线高清视频| 中国美女看黄片| 免费在线观看影片大全网站| 免费在线观看成人毛片| 欧美bdsm另类| 亚洲人成网站高清观看| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 亚洲成av人片在线播放无| 亚洲av熟女| 全区人妻精品视频| 在线免费观看不下载黄p国产 | 伊人久久大香线蕉亚洲五| 国产视频内射| 草草在线视频免费看| 欧美一级a爱片免费观看看| or卡值多少钱| 成年版毛片免费区| 久久久色成人| 2021天堂中文幕一二区在线观| 亚洲久久久久久中文字幕| 在线免费观看的www视频| 一级毛片高清免费大全| 欧美zozozo另类| 亚洲电影在线观看av| 国产亚洲av嫩草精品影院| 97碰自拍视频| 内地一区二区视频在线| 在线免费观看的www视频| 波多野结衣巨乳人妻| 亚洲七黄色美女视频| 午夜两性在线视频| 在线免费观看不下载黄p国产 | 精品人妻1区二区| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 99热只有精品国产| 欧美日本视频| 国模一区二区三区四区视频| 亚洲 国产 在线| 99久久综合精品五月天人人| 日韩欧美精品v在线| 欧美一区二区亚洲| 免费av不卡在线播放| 成人av在线播放网站| 亚洲成人精品中文字幕电影| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美 | 麻豆国产97在线/欧美| 久久精品国产综合久久久| 一个人观看的视频www高清免费观看| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 一级黄片播放器| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 高潮久久久久久久久久久不卡| 18禁在线播放成人免费| 欧美日韩综合久久久久久 | 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 欧美精品啪啪一区二区三区| tocl精华| 成人三级黄色视频| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 可以在线观看的亚洲视频| 村上凉子中文字幕在线| 观看免费一级毛片| 俄罗斯特黄特色一大片| 99视频精品全部免费 在线| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 最新中文字幕久久久久| 国产色婷婷99| 黄色视频,在线免费观看| 亚洲专区国产一区二区| 操出白浆在线播放| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 欧美最黄视频在线播放免费| 欧美日韩乱码在线| 一区二区三区激情视频| 很黄的视频免费| 午夜a级毛片| 国产高清三级在线| 免费观看人在逋| 成人特级黄色片久久久久久久| 国产成人aa在线观看| 亚洲成人中文字幕在线播放| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 香蕉丝袜av| 亚洲电影在线观看av| 成年免费大片在线观看| 99热只有精品国产| 国产免费男女视频| 午夜福利视频1000在线观看| 日韩欧美精品v在线| 99热这里只有是精品50| 精品免费久久久久久久清纯| 人妻夜夜爽99麻豆av| 色综合欧美亚洲国产小说| 天堂√8在线中文| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 精品熟女少妇八av免费久了| 国产一区二区在线观看日韩 | 18禁国产床啪视频网站| 欧美日韩国产亚洲二区| www.www免费av| 国产精品影院久久| 久久久久精品国产欧美久久久| 亚洲av电影在线进入| 日本成人三级电影网站| 两人在一起打扑克的视频| 黄片小视频在线播放| 91九色精品人成在线观看| 日本一二三区视频观看| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 国产高清有码在线观看视频| 久久久久久人人人人人| 日本三级黄在线观看| 色综合站精品国产| 婷婷精品国产亚洲av| 亚洲人成伊人成综合网2020| 18禁国产床啪视频网站| 搞女人的毛片| 国产真实乱freesex| 久久亚洲精品不卡| netflix在线观看网站| 啪啪无遮挡十八禁网站| 日本免费一区二区三区高清不卡| www.熟女人妻精品国产| 18禁在线播放成人免费| 老汉色∧v一级毛片| 国产精品久久久久久久久免 | 狠狠狠狠99中文字幕| 国产爱豆传媒在线观看| 高清在线国产一区| 我要搜黄色片| 美女高潮的动态| 久久精品国产清高在天天线| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 一区二区三区免费毛片| 亚洲成人精品中文字幕电影| 一级毛片女人18水好多| 嫩草影院入口| 久久人人精品亚洲av| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 久久6这里有精品| 又粗又爽又猛毛片免费看| 亚洲第一电影网av| 听说在线观看完整版免费高清| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 国产亚洲欧美98| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 成年版毛片免费区| 亚洲成a人片在线一区二区| 国产高清视频在线观看网站| 手机成人av网站| xxxwww97欧美| 长腿黑丝高跟| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 又爽又黄无遮挡网站| 国产精品三级大全| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 少妇的丰满在线观看| 国产精品日韩av在线免费观看| av天堂中文字幕网| 桃色一区二区三区在线观看| АⅤ资源中文在线天堂| 久久国产精品影院| 免费看日本二区| 国产黄a三级三级三级人| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 一二三四社区在线视频社区8|