天津地區(qū)豬口蹄疫免疫抗體水平監(jiān)測及分析

孫玉霜，李　穎，李秀梅，梁智選，郭立力，朱亞寧，石　瑜,關建軍

(1.天津市動物疫病預防控制中心，天津 300402 ；2.天津市靜海縣動物疫病預防控制中心，天津 301600)

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天津地區(qū)豬口蹄疫免疫抗體水平監(jiān)測及分析

孫玉霜1，李穎1，李秀梅1，梁智選1，郭立力1，朱亞寧1，石瑜1,關建軍2

(1.天津市動物疫病預防控制中心，天津 300402 ；2.天津市靜?？h動物疫病預防控制中心，天津 301600)

摘要：為摸清天津地區(qū)豬口蹄疫免疫抗體水平，2014年1月至12月，共采集天津市10個區(qū)縣種豬場、規(guī)模場和散養(yǎng)戶的豬血清樣品7 639份，采用液相阻斷ELISA方法，對免疫抗體水平進行檢測，結果抗體水平合格的6 491份，合格率84.97%。種豬場、規(guī)模場、散養(yǎng)戶合格率分別為93.37%、84.89%、82.68%，全年中5月份免疫抗體合格率最高89.91%，經(jīng)產(chǎn)母豬、育肥豬、仔豬、保育豬的免疫抗體合格率分別為95.58%、88.13%、80.16%、75.38%。

關鍵詞：口蹄疫；抗體水平；監(jiān)測；分析

口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)傳播迅速、發(fā)病率高，可引起幼畜死亡，成年畜生產(chǎn)性能下降，并且嚴重影響動物及動物產(chǎn)品流通貿易等[1-2]。強制免疫是我國防控口蹄疫等重大動物疫病防控的主要手段，免疫效果好壞直接關系到口蹄疫防控效果。開展免疫動物的抗體水平監(jiān)測，能及時了解疫苗的免疫效果,有效地進行科學防控和風險評估工作[3]。本研究采用O型口蹄疫液相阻斷ELISA檢測試劑盒對2014年隨機從天津市不同地區(qū)的種豬場、規(guī)模場和散養(yǎng)戶定期采集的7 639份豬血清樣品進行免疫抗體水平監(jiān)測，以了解不同地區(qū)豬群的口蹄疫免疫狀況，評估免疫效果，為制定口蹄疫綜合防控措施提供依據(jù)[4-5]。

1　材料與方法

1.1材料

按比例隨機采集天津市10個區(qū)縣的種豬場、規(guī)模場、散養(yǎng)戶免疫28 d以上臨床健康豬的血清樣品7 639份(表1)。按常規(guī)方法分離血清后置-20 ℃冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2方法

1.2.1檢測試劑口蹄疫O型液相阻斷ELISA檢測試劑盒，分批購于中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所，批號:2013021001、2013051501、2013062701、2013102001，在有效期內使用。

1.2.2檢測方法按照口蹄疫O型液相阻斷ELISA試劑盒產(chǎn)品說明書進行操作[6]。

1.2.3判定標準每塊板設病毒抗原對照，陰性血清和陽性血清對照。病毒抗原對照至少2個孔的OD 492 nm值在1.5±0.5范圍內；陽性血清對照抗體效價應是1∶1 024±1滴度以內；陰性血清對照抗體滴度應小于1∶8。

臨界值計算方法：抗原對照為4孔，棄去最高和最低兩孔，計算剩余2孔的OD 492 nm值之和再除以2，即50%對照值稱為臨界值。陰性孔即被檢血清稀釋孔OD 492 nm值大于臨界值的孔，小于或等于臨界值的孔為陽性孔。被檢血清的抗體滴度即陽性孔的OD 492 nm值等于臨界值時所對應的稀釋度。豬抗體效價大于等于6log2(1∶64)判為免疫抗體合格，免疫抗體合格率按農(nóng)業(yè)部文件規(guī)定判定。

2　結果

全年抽檢血清樣品7 639份，免疫抗體水平合格的6 491份，合格率84.97%；其中種豬場樣品664份，免疫抗體水平合格的620份，合格率93.37%；規(guī)模養(yǎng)殖場樣品4 718份，免疫抗體水平合格的4 005份，合格率84.89%；散養(yǎng)戶樣品2 257份，免疫抗體水平合格的1 866份，合格率82.68%。

2.1各地區(qū)免疫抗體監(jiān)測結果

全市10個區(qū)縣共抽樣7 639份血清樣品，除津南區(qū)因無種豬場未抽樣外，其他區(qū)縣種豬場、規(guī)模場、散養(yǎng)戶均進行抽樣(表1)，總體上種豬場樣品合格率最高，為93.37%，其次是規(guī)模場的，為84.49%，散養(yǎng)戶的最低，為82.68%。各區(qū)縣中國樣品總合格率最高的是北辰區(qū)，合格率90.52%；種豬場樣品合格率最高的是東麗區(qū)和北辰區(qū)，都達到100%，規(guī)模場樣品合格率最高的是武清區(qū)，合格率91.05%，散養(yǎng)戶樣品合格率最高的是北辰區(qū)，合格率89.66%。

2.2不同月份免疫抗體檢測結果

共抽樣7 639份樣品，按月份匯總，樣品合格率最高的月份是5月，其次為11月，樣品合格率均達到89%以上，最低的月份是10月，樣品合格率僅71.43%(表2)，上半年抗體合格率整體水平比較穩(wěn)定且高于下半年，7月份的樣品合格率整體呈下降趨勢。種豬場全年免疫抗體水平相對穩(wěn)定，均保持在85%以上，規(guī)模場5月、6月和11月樣品合格率較高，均達89%以上，散養(yǎng)戶樣品的抗體水平經(jīng)歷7月份最低之后呈上升趨勢，到11月份達到全年的最高水平93.67%。

2.3不同日齡豬免疫抗體監(jiān)測結果

按豬只日齡進行統(tǒng)計，抗體水平合格率依次為經(jīng)產(chǎn)母豬>育肥豬>仔豬>保育豬(表3)。保育豬的合格率最低，僅75.38%，育肥豬、經(jīng)產(chǎn)母豬的抗體水平合格率明顯高于仔豬、保育豬的，保育豬與經(jīng)產(chǎn)母豬的抗體水平合格率相差較大，達20.2%。

表1　各區(qū)(縣)豬O型口蹄疫免疫抗體監(jiān)測結果統(tǒng)計

表2　豬O型口蹄疫免疫抗體監(jiān)測全年結果統(tǒng)計

表3　不同日齡豬O型口蹄疫免疫抗體監(jiān)測結果統(tǒng)計

3　討論

免疫抗體監(jiān)測是反映動物免疫狀況的一項指標，強化群體免疫抗體監(jiān)測工作，及時發(fā)現(xiàn)免疫力低下動物，進行補免，能有效提高群體抗感染能力[7-8]。從檢測結果看,在檢測的7 639份樣品中,口蹄疫抗體效價達到1∶64以上的陽性樣品數(shù)量6 491份,陽性合格率為84.97%，低于孫彬彬等[8]監(jiān)測的閻良區(qū)2013年和2014免口蹄疫免疫抗體合格率88.5%和88.3%，考慮地區(qū)差異以及監(jiān)測數(shù)量和監(jiān)測場規(guī)模不同是造成差異的主要原因。該結果表明天津市口蹄疫疫苗有較為理想的免疫效果,抗體水平能夠達到有效保護,達到了農(nóng)業(yè)部要求的免疫抗體合格率70%以上的要求,抗體保護力能抵御病毒的攻擊[9]?？谔阋叩姆乐涡Ч硐?能有效抵制大規(guī)模O型口蹄疫疫情的暴發(fā)。

3.1從不同類型養(yǎng)殖場分析抗體檢測水平

種豬場、規(guī)模場和散養(yǎng)戶的合格率分別是93.37%、84.89%、82.68%，種豬場的免疫抗體合格率遠遠高于散養(yǎng)戶的檢測結果。天津市共有種豬場20家分布于9個區(qū)縣，飼養(yǎng)條件較好，防疫意識較強，每個種豬場都配備了職業(yè)技術水平較高的專業(yè)獸醫(yī)人員，一般都制定自身豬場的免疫程序，除春秋防之外，都會定期進行抽樣檢測，能做到及時補免，因此種豬場的整個豬群各階段抗體水平都較高。

而抗體合格率最低的散養(yǎng)戶也是防控工作中的重點和難點，原因在于散養(yǎng)戶防病意識相對淡薄，多停留在發(fā)病治病、無病不防的階段，另外飼養(yǎng)條件和管理水平超差，除接受村級動物防疫人員春秋季集中免疫和固定免疫日補免外，基本無制定免疫程序概念，所以散養(yǎng)戶整體免疫抗體水平偏低，處于抗口蹄疫發(fā)生風險薄弱環(huán)節(jié)，病原入侵威脅較大。從規(guī)模場的免疫抗體合格率分析，低于種豬場而高于散養(yǎng)戶，正體現(xiàn)出其疫病綜合防控能力和養(yǎng)殖環(huán)境也處于種豬場和散養(yǎng)戶之間。目前天津市生豬養(yǎng)殖以規(guī)模場為主，本次監(jiān)測抗體合格率而規(guī)模場免疫合格率與梁晟[10]等研究廣西部分地區(qū)規(guī)模場免疫抗體合格率89.02%相比仍存在差異，表明天津市規(guī)模場應加強日常飼養(yǎng)管理，提升綜合防控水平，以應對集中飼養(yǎng)密度增加給疫病防控帶來的挑戰(zhàn)。

3.2從不同區(qū)域分析口蹄疫抗體檢測水平

薊縣、武清區(qū)、寶坻區(qū)、寧河縣、靜?？h5個區(qū)縣平均水平低于東麗區(qū)、西青區(qū)、津南區(qū)、北辰區(qū)和濱海新區(qū)5個區(qū)平均水平。薊縣、寶坻區(qū)、武清區(qū)、寧河縣、靜?？h屬于養(yǎng)殖大縣，生豬存欄數(shù)量與另外5個區(qū)相比數(shù)量較大,但經(jīng)濟狀況相對薄弱，特別是免疫抗體合格率最低的薊縣。由于處于半山區(qū)自然環(huán)境中，散養(yǎng)戶相對較多，且各鄉(xiāng)鎮(zhèn)獸醫(yī)站人員配備不足，特別是春秋防集中免疫期間，造成補免不及時現(xiàn)象存在，該現(xiàn)象與黃學寶等[11]研究不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)免疫條件、防疫人員服務地域面積、防疫人員受教育程度等影響免疫效果的觀點一致。而東麗區(qū)、西青區(qū)、津南區(qū)、北辰區(qū)、濱海新區(qū)5個近郊區(qū)縣養(yǎng)殖量較小，養(yǎng)殖規(guī)模比較集中，經(jīng)濟相對發(fā)達，基層防疫人員配備充足，基層防疫條件較好，因此防疫任務相對較小。所以東麗等5個近郊區(qū)縣從養(yǎng)殖場戶防控水平、政府支持力度等養(yǎng)殖大環(huán)境都顯著優(yōu)于薊縣等5個養(yǎng)殖較大區(qū)縣，同是造成免疫抗體合格率差距的重要原因之一。

3.3從不同月份分析口蹄疫抗體檢測水平

種豬場、規(guī)模場和散養(yǎng)戶均呈現(xiàn)不同月份抗體的合格率相差較大現(xiàn)象?？傮w來看5月和11月的合格率較高，分別達到89.91%和89.48%，而上半年最低為3月，下半年最低是7月，全年抗體水平中最高月份與最低月份相差15.16%，與楊本勇[12]研究不同月份抗體合格率差異較大結果一致。究其原因主要在于免疫所處階段不同抗體水平不同。天津地區(qū)春秋季集中免疫分別于3月15日和9月初開始，1個月左右結束。因此5月和11月處于春秋兩季集中免疫后抗體應答水平較高階段，而3月和7月處于春秋防集中免疫前1個月且距上次免疫抗體處于下降階段，因此出現(xiàn)不同月份抗體水平顯著上升或下降的現(xiàn)象。

3.4從不同日齡豬分析免疫抗體檢測水平

經(jīng)產(chǎn)母豬抗體合格率最高達95.58%，其后依次是育肥豬、仔豬、保育豬。經(jīng)產(chǎn)母豬由于常年免疫,總體保持較高的抗體水平,育肥豬階段抗體水平高于保育豬階段主要在于免疫次數(shù)差別，經(jīng)過二次免疫階段會好于首免后抗體水平。而仔豬處于15日齡～25日齡期間采血抗體水平主要源于母源抗體作用，而保育豬雖進行了首免可正處于抗病能力較為薄弱的飼養(yǎng)階段因此抗體水平較低。檢測結果與謝翠松等[13]研究二免免疫應答水平優(yōu)于首免免疫效果結果相符。

口蹄疫防控工作是關系國家聲譽和畜牧業(yè)持續(xù)健康發(fā)展的大事，需要各級政府部門、養(yǎng)殖單位和畜主共同努力以確?？谔阋咭咔榉€(wěn)定。今后要在做好當前預防為主的防控措施基礎上，著力破解制約動物疫病防控的關鍵性因素仍存在需完善和解決的問題，如高效安全口蹄疫疫苗的研制，免疫接種方式方法的改進，快速準確診斷方法的建立等，為實現(xiàn)全國口蹄疫凈化乃至消滅目標奠定基礎[14-15]。

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收稿日期：2015-12-23

基金項目：天津市農(nóng)業(yè)科技成果轉化與推廣項目(201304040)

作者簡介：孫玉霜(1982-)，女，天津寶坻人，獸醫(yī)師，碩士，主要從事動物疫病預防與動物防疫體系建設工作。

中圖分類號:S852.659.6；S858.28

文獻標識碼:B

文章編號:1007-5038(2016)07-0127-04

Monitoring and Analysis of Immune Antibody Level for Swine FMD in Tianjin City

SUN Yu-shuang1，LI Ying1,LI Xiu-mei1,LIANG Zhi-xuan1，GUO Li-li1,ZHU Ya-ning1,SHI Yu1，GUAN Jian-jun2

(1.TianjinCenterforAnimalDiseasePreventionandControl,Tianjin300402,China;2.JinghaiCountyCenterforAnimalDiseasePreventionandControl,Tianjin,301600,China)

Abstract:In order to understand the antibody level of FMDV in Tianjin city,7 639 serum samples were collected from January to December in 2014.The results showed that 6 491 samples(84.97%) were antibod qualified by using Liquid Blocking ELISA Kit of FMDV.The antibody qualified rate from breeding farms,scale farms to scatter-feed farms were 93.37%,84.89% and 82.68%,respectively.The highest antibody level of 89.91% was detected in May.The antibody qualified rate of sows,fattening pigs,piglets and nursing pigs were 95.58%,88.13%,80.16% and 75.38%,respectively.

Key words:Foot-and-mouth disease; antibody; monitoring; analysis