分散固相萃取凈化-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定魚(yú)體中地克珠利殘留量

邢麗紅，孫偉紅*，孫曉杰，李兆新，郭江濤（中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)部水產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)與評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)，農(nóng)業(yè)部水產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室（青島），山東 青島 266071）

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分散固相萃取凈化-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定魚(yú)體中地克珠利殘留量

邢麗紅，孫偉紅*，孫曉杰，李兆新，郭江濤
（中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)部水產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)與評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)，農(nóng)業(yè)部水產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室（青島），山東 青島 266071）

建立分散固相萃取凈化-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定魚(yú)體中地克珠利殘留量的分析方法。樣品經(jīng)無(wú)水硫酸鈉脫水，乙腈超聲提取并減壓濃縮，正己烷去脂，基質(zhì)分散固相萃取凈化，以電噴霧離子源負(fù)離子掃描模式進(jìn)行質(zhì)譜分析，內(nèi)標(biāo)法定量。結(jié)果表明，地克珠利在1～100 μg/L范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)R2大于0.999。地克珠利添加水平為1.00～50.0 μg/kg時(shí)，平均回收率在95.4%～108%之間，批內(nèi)和批間變異系數(shù)均小于15%。地克珠利的檢出限為0.50 μg/kg。本方法靈敏、高效、簡(jiǎn)單、重復(fù)性好，能滿(mǎn)足魚(yú)體中地克珠利殘留量的檢測(cè)要求。

分散固相萃取；高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜；魚(yú)；地克珠利

地克珠利是20世紀(jì)80年代由比利時(shí)楊森制藥公司開(kāi)發(fā)研制的非聚醚類(lèi)化學(xué)合成抗球蟲(chóng)藥，屬三嗪苯乙腈化合物，具有高效、低毒、廣譜的特點(diǎn)，常被用于養(yǎng)禽業(yè)和養(yǎng)兔業(yè)抗球蟲(chóng)病的預(yù)防和治療［1-3］。地克珠利對(duì)水生動(dòng)物孢子蟲(chóng)等有抑制或殺滅作用，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中主要用于防治鯉科魚(yú)類(lèi)粘孢子蟲(chóng)、碘泡蟲(chóng)、尾孢子、四極蟲(chóng)、單極蟲(chóng)等孢子蟲(chóng)病。由于地克珠利具有低毒、廣譜、用量小等特點(diǎn)，在使用過(guò)程中存在濫用藥物、不遵守休藥期等情況，因此帶來(lái)了一系列獸藥殘留問(wèn)題，對(duì)人體健康存在潛在的危害。

地克珠利的殘留標(biāo)示物是其本身。各國(guó)政府和國(guó)際組織均制定了動(dòng)物源性食品中地克珠利的最大殘留限量（maximum residue limits，MRLs）［4-6］。我國(guó)農(nóng)業(yè)部公告第235號(hào)規(guī)定地克珠利在綿羊/禽/兔的肌肉、脂肪、肝和腎組織中的MRLs分別為500、1 000、3 000、2 000 μg/kg［7］。由于缺少地克珠利在有鰭魚(yú)類(lèi)肌肉中殘留量的檢測(cè)方法，因此，目前國(guó)內(nèi)外均沒(méi)有制定地克珠利在魚(yú)體組織中的MRLs［8］。

地克珠利殘留量的檢測(cè)方法主要有氣相色譜-質(zhì)譜法［9］、高效液相色譜法［8，10-11］、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法［12-22］及高分辨質(zhì)譜法［23-24］，檢測(cè)對(duì)象以畜禽組織為主，目前鮮見(jiàn)測(cè)定魚(yú)體中地克珠利殘留量的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法?，F(xiàn)有的樣品前處理方法復(fù)雜，樣品凈化步驟操作繁瑣，檢測(cè)效率低下。本研究對(duì)樣品提取和凈化方式進(jìn)行優(yōu)化，采用與地克珠利化學(xué)結(jié)構(gòu)和性質(zhì)相似的Diclazuril-methyl作為內(nèi)標(biāo)，利用分散固相萃取凈化結(jié)合高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜，建立了一種操作快速、簡(jiǎn)便且高靈敏度的檢測(cè)魚(yú)體中地克珠利殘留量的分析方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

地克珠利標(biāo)準(zhǔn)品（CAS:101831-37-2）、Diclazurilmethyl內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥98.0%） 美國(guó)Sigma公司。

乙腈、甲醇、正己烷（均為色譜純） 德國(guó)Merck公司；無(wú)水硫酸鈉（分析純，經(jīng)650 ℃灼燒4 h，置于干燥器內(nèi)備用） 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；N-丙基乙二胺（N-propylethylendiamine，PSA）、十八烷基鍵合硅膠吸附劑（C18）、硅膠（Cleanert Silica）天津博納艾杰爾科技有限公司；強(qiáng)陰離子交換層析填料（LC-SAX）、石墨化炭黑（ENVI-Carb） 美國(guó)Sigma-Aldrich公司；酸性氧化鋁（LC-Alumina-A）、弗羅里硅土（Florisil）、中性氧化鋁（LC-Alumina-N）、堿性氧化鋁（LC-Alumina-B）、強(qiáng)陽(yáng)離子交換層析填料（LCSCX） 美國(guó)Supelco公司；N-乙烯吡咯烷酮-二乙烯基苯聚合物（HLB） 德國(guó)CNW公司。

1.2 儀器與設(shè)備

TSQ Quantum Access高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（配電噴霧離子源）、高速離心機(jī)（6 000 r/min） 美國(guó)Thermo Fisher科技公司；分析天平（感量0.01 g）德國(guó)賽多利斯集團(tuán)；離心機(jī)（14 000 r/min） 德國(guó)Sigma公司；渦旋混合器 美國(guó)Talboys公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 德國(guó)Heidoplh公司；超聲波清洗儀 昆山市超聲儀器有限公司；Gradient A10 Mill-Q超純水儀 美國(guó)Millipore公司。

1.3 方法

1.3.1 樣品處理

稱(chēng)取樣品2 g（精確到0.01 g）于50 mL具塞離心管中，準(zhǔn)確加入內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液100 μL，渦旋混合30 s，避光放置10 min。加入無(wú)水硫酸鈉2 g，渦旋振蕩1 min使其分散均勻，再加入乙腈10 mL，渦旋混合1 min，超聲提取10 min，6 000 r/min離心5 min，將上清液轉(zhuǎn)移至50 mL梨形瓶中。乙腈10 mL加入到50 mL離心管中重復(fù)提取一次，合并提取液，40 ℃減壓濃縮至干。準(zhǔn)確加入80%甲醇溶液1 mL，渦旋混勻，充分溶解殘余物，待凈化。

在上述待凈化液中，先加入正己烷2 mL，充分渦旋混合1 min，6 000 r/min離心5 min，棄去正己烷層，再加入C18吸附劑50 mg，充分渦旋混合1 min，14 000 r/min離心5 min，取清液過(guò)0.22 μm有機(jī)相濾膜后，供高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)的制作

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配制：稱(chēng)取適量地克珠利及其內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品，先用1 mL N，N-二甲基甲酰胺將其溶解，再用甲醇稀釋并定容，配制成1.0 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，-18 ℃避光保存，有效期6 個(gè)月。地克珠利標(biāo)準(zhǔn)使用液：準(zhǔn)確移取適量1 mg/mL地克珠利標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用甲醇稀釋?zhuān)渲瞥? μg/mL標(biāo)準(zhǔn)使用液，-18 ℃避光保存。

內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)使用液的配制：準(zhǔn)確移取適量1 mg/mL Diclazuril-methyl內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用甲醇逐級(jí)稀釋?zhuān)渲瞥?00 ng/mL內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)使用液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

準(zhǔn)確移取適量地克珠利標(biāo)準(zhǔn)使用液，用流動(dòng)相稀釋成質(zhì)量濃度分別為1、2、5、10、20、50、100 μg/L、內(nèi)標(biāo)質(zhì)量濃度為10 μg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作液，供高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。

1.3.3 色譜及質(zhì)譜條件

1.3.3.1 色譜條件

色譜柱：Waters XTerra C18柱（2.1 mm×150 mm，5 μm）；柱溫：室溫；流速：0.2 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL；流動(dòng)相：A為5 mmol/L醋酸銨溶液，B為甲醇；梯度洗脫程序見(jiàn)表1。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫程序Table 1 Gradient eluti on program of mobilep hase

1.3.3.2 質(zhì)譜條件

離子化模式：電噴霧離子源（e l e c t r o s p r a y ionization，ESI），負(fù)離子模式；噴霧電壓：3 500 V；霧化氣壓力：12 L/min；輔助氣流量：2 L/min；離子傳輸管溫度：300 ℃；源內(nèi)碰撞誘導(dǎo)解離電壓：10 V；掃描模式：選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)，選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)母離子、子離子和碰撞能量見(jiàn)表2；Q1半峰寬：0.7 D；Q3半峰寬：0.7 D；碰撞氣（氬氣）壓力：0.2 Pa。

表2 選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)母離子、子離子和碰撞能量Table 2 Precursor i on s，p roducti on s and c ollisi on energy of diclazuril and its in ter nalst and a rd u nd er S RM m od e

2 結(jié)果與分析

2.1 線(xiàn)性范圍和檢出限

用地克珠利標(biāo)準(zhǔn)工作液配制質(zhì)量濃度分別為1、2、5、10、20、50、100 μg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液，內(nèi)標(biāo)添加質(zhì)量濃度均為10 μg/L，進(jìn)樣后繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)。結(jié)果表明，地克珠利在1～100 μg/L范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，線(xiàn)性方程Y=0.015 554 8+0.015 072 8X，相關(guān)系數(shù)R2大于0.999。方法的檢出限理論上為地克珠利豐度較弱子離子的信噪比不小于3。將加標(biāo)質(zhì)量濃度逐級(jí)稀釋添加于空白樣品中測(cè)定信噪比，最終確定該方法的檢出限為0.50 μg/kg。

2.2 回收率和精密度

準(zhǔn)確稱(chēng)取2.00 g陰性鯉魚(yú)、草魚(yú)、鳊魚(yú)樣品，添加水平分別為1.00、5.00、50.0 μg/kg，每個(gè)添加水平平行測(cè)定6 次，共測(cè)定3 個(gè)批次，計(jì)算回收率和精密度，見(jiàn)表3。結(jié)果表明，本方法在1.00～50.0 μg/kg添加水平的平均回收率在95.4%～108%之間，批內(nèi)變異系數(shù)在5.68%～12.8%之間，批間變異系數(shù)在7.26%～10.2%之間，符合殘留檢測(cè)要求。地克珠利標(biāo)準(zhǔn)、空白樣品及加標(biāo)樣品特征質(zhì)量離子色譜圖見(jiàn)圖1～3。

表3 地克珠利的平均回收率和變異系數(shù)（n=6）Table 3 Averager ecoveries and coefficients of v ariati on of diclazuril（n= 6）

圖1 地克珠利標(biāo)準(zhǔn)特征離子質(zhì)量色譜圖（1μ g / L ）Fig.1 Characteristic ion mass chromatogram of diclazuril standard

圖2 鯉魚(yú)空白樣品特征離子質(zhì)量色譜圖Fig.2 Characteristic ion mass chromatogram of blank sample of common carp meat

圖3 鯉魚(yú)加標(biāo)樣品特征離子質(zhì)量色譜圖 （0.50 μ g / k g ）Fig.3 Characteristic ion mass chromatogram of spiked sample of common carp meat

2.3 實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化

2.3.1 提取溶劑的選擇

實(shí)驗(yàn)分別選擇乙腈、乙酸乙酯、N，N-二甲基甲酰胺、乙腈-氯仿（10∶1，V/V）、氯仿-乙腈（9∶1，V/V）作為提取溶劑。結(jié)果表明，不論采用哪種提取溶劑，地克珠利的回收率均較低。比較這幾種提取溶劑，乙腈和N，N-二甲基甲酰胺的回收率最高，樣品平行性最好，乙酸乙酯不及乙腈的回收率高，乙腈與氯仿混合液的提取回收率最低，且樣品之間的平行性差。綜合考慮，乙腈與魚(yú)肉組織的兼容性較好，兼有去除部分脂肪的功能，是藥物殘留檢測(cè)的常規(guī)試劑，因此本實(shí)驗(yàn)選用乙腈作為提取溶劑。地克珠利在不同提取溶劑中的回收率見(jiàn)表4。Szilard等［18］研究了乙腈、甲醇、乙酸乙酯等提取劑對(duì)地克珠利的提取回收率，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果相近。

表4 地克珠利在不同提取溶劑中的提取回收率Table 4 Extracti on recoveries of diclazuril in differentsolvents

乙腈不僅將目標(biāo)化合物提取出來(lái)，同時(shí)也將樣品基質(zhì)中的水分一起提取出來(lái)，因此在樣品提取液中加入無(wú)水硫酸鈉脫除水分，有利于下一步的濃縮操作。本實(shí)驗(yàn)對(duì)加入無(wú)水硫酸鈉前后的提取液進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)無(wú)水硫酸鈉對(duì)地克珠利沒(méi)有吸附作用。

2.3.2 凈化方式的選擇

由于地克珠利的回收率較低，因此凈化過(guò)程盡可能選擇簡(jiǎn)單又能保證靈敏度和專(zhuān)一性的方式。本實(shí)驗(yàn)首先選擇液液萃取凈化，再采用基質(zhì)分散固相萃取方式進(jìn)行凈化。水產(chǎn)樣品種類(lèi)繁多，樣品基質(zhì)復(fù)雜，有些樣品含脂量較高，嚴(yán)重影響地克珠利的靈敏度，因此實(shí)驗(yàn)首先采用正己烷去除脂肪。常規(guī)的固相萃取凈化方式既費(fèi)時(shí)又費(fèi)力，而基質(zhì)分散固相萃取方法是一種簡(jiǎn)便、快捷的前處理方式，在獸藥殘留檢測(cè)方面的應(yīng)用也越來(lái)越多。本實(shí)驗(yàn)分別對(duì)C18、PSA、HLB、LC-Alumina-A、LC-Alumina-B、LC-Alumina-N、LC-SAX、LC-SCX、Florisil、ENVI-Carb、Cleanert Silica 這11 種吸附劑在不同添加量時(shí)對(duì)地克珠利回收率的影響進(jìn)行研究，其結(jié)果見(jiàn)圖4。

圖4 不同吸附劑對(duì)地克珠利回收率的影響Fig.4 Influence of different sorbents on the recovery of diclazuril

通過(guò)比較不同吸附劑的加標(biāo)回收率數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，C18、LC-SAX、LC-SCX、Florisil和Cleanert Silica這幾種吸附劑隨著用量的增加，地克珠利的回收率并沒(méi)有顯著下降，表明這幾種吸附劑對(duì)地克珠利的吸附作用較差。相反，PSA、HLB、LC-Alumina-A、LC-Alumina-B、LCAlumina-N和ENVI-Carb這6 種吸附劑則隨著用量的增加，地克珠利的回收率與之呈負(fù)相關(guān)，表明這6 種吸附劑對(duì)地克珠利有較強(qiáng)的吸附作用。C18填料既具有較高且較穩(wěn)定的回收率，又具有很好的除雜效果，通過(guò)添加不同用量的C18發(fā)現(xiàn)，雖然地克珠利的回收率隨添加量的增加有所下降，但即使添加量達(dá)到200 mg時(shí)，回收率仍然大于80%，當(dāng)添加量為50 mg時(shí)，即可達(dá)到理想的除雜效果。因此本實(shí)驗(yàn)選擇在基質(zhì)中添加50 mg的C18填料作為吸附劑。

2.3.3 內(nèi)標(biāo)的選擇

通過(guò)查閱文獻(xiàn)［18］及實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，地克珠利的絕對(duì)回收率較低。由于沒(méi)有商品化的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，因此需選擇與地克珠利結(jié)構(gòu)和化學(xué)性質(zhì)比較相似的化合物作為內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。分別實(shí)驗(yàn)了地克珠利內(nèi)標(biāo)1和地克珠利內(nèi)標(biāo)2兩種物質(zhì)作內(nèi)標(biāo)。地克珠利、地克珠利內(nèi)標(biāo)1和地克珠利內(nèi)標(biāo)2結(jié)構(gòu)式如圖5所示。

圖5 地克珠利及其內(nèi)標(biāo)結(jié)構(gòu)Fig.5 Structures of diclazuril and its internal standard

地克珠利內(nèi)標(biāo)1（m/z 422.7＞351.8）結(jié)構(gòu)如圖5b所示，雖然內(nèi)標(biāo)1和地克珠利的化學(xué)結(jié)構(gòu)比較相似，但其化學(xué)性質(zhì)仍然存在差異。內(nèi)標(biāo)1的極性比地克珠利大，在色譜柱上的保留時(shí)間與地克珠利相差較大，以水產(chǎn)品為基質(zhì)進(jìn)行添加回收率實(shí)驗(yàn)，效果并不理想。實(shí)驗(yàn)選擇Diclazuril methyl作為內(nèi)標(biāo)（圖5c）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。結(jié)果表明，Diclazuril methyl化學(xué)結(jié)構(gòu)及性質(zhì)與地克珠利相似，色譜保留時(shí)間及提取回收率均比較接近，通過(guò)反復(fù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，選擇該物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)進(jìn)行添加回收率實(shí)驗(yàn)，可以取得較好的實(shí)驗(yàn)效果。

2.3.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

地克珠利的化學(xué)性質(zhì)幾乎不溶于水，微溶于乙醇、乙醚，溶于N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜和四氫呋喃。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，地克珠利在甲醇和乙腈中的溶解性較差，因此在配制標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液時(shí)，需先用N，N-二甲基甲酰胺將其溶解，再用甲醇稀釋效果較理想。在配制地克珠利標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液時(shí)，大多數(shù)使用N，N-二甲基甲酰胺的量較大，本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，先用1 mL N，N-二甲基甲酰胺溶解地克珠利，再加入甲醇定容，既能將地克珠利溶解，又能避免大量使用N，N-二甲基甲酰胺對(duì)質(zhì)譜系統(tǒng)造成的損害。

2.3.5 定容溶液的選擇

地克珠利幾乎不溶于水，因此定容溶劑中水相所占比例對(duì)其靈敏度和回收率有至關(guān)重要的影響。分別實(shí)驗(yàn)了5%、50%、80%、100%甲醇溶液作為定容溶劑對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響，結(jié)果表明，隨著有機(jī)相比例的加大，靈敏度也隨之提高，二者呈正相關(guān)。但定容溶劑采用100%甲醇，會(huì)導(dǎo)致峰形變差。經(jīng)過(guò)前處理的樣品如果用水相比例較高的溶液定容，因溶解性的原因也會(huì)導(dǎo)致其回收率大幅降低。綜合考慮靈敏度和峰形的影響，最終決定采用80%甲醇溶液作為定容溶劑。

2.3.6 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

圖6 地克珠利的同位素峰質(zhì)譜圖Fig.6 Isotope peak spectrum of diclazuril

地克珠利及其內(nèi)標(biāo)在負(fù)離子模式下解離生成（M-H-）。分別對(duì)噴霧電壓、鞘氣、輔助氣、碰撞能量等質(zhì)譜參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化。按照歐盟委員會(huì)2002/657/EC［25］對(duì)殘留鑒定的技術(shù)文件規(guī)定，采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法判定動(dòng)物源性食品中的禁用化合物必須獲得4 個(gè)鑒定分，即1 個(gè)母離子為1.0分，1 個(gè)子離子為1.5 分。對(duì)于高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜而言，1 個(gè)母離子和2 個(gè)碎片離子即可滿(mǎn)足定性要求。但對(duì)于地克珠利而言，只生成1 個(gè)碎片離子。由于地克珠利分子結(jié)構(gòu)中包含3 個(gè)氯分子，氯在自然界中有兩個(gè)同位素35Cl和37Cl。地克珠利在負(fù)離子模式下可監(jiān)測(cè)到分子離子峰m/z 411、409、407、405（圖6），分別代表氯同位素37Cl3、35Cl37Cl2、35Cl237Cl和35Cl3形態(tài)的地克珠利。m/z 411、409、407、405在串聯(lián)質(zhì)譜模式下的碎片離子分別為m/z 340、338、336、334。根據(jù)天然同位素所占比例，地克珠利包含1.4%37Cl3、13.3%35Cl37Cl2、41.7%35Cl237Cl、43.5%35Cl3。

歐盟委員會(huì)2002/657/EC決議一方面它允許使用同位素峰，另一方面它要求不能所有的同位素碎片源于同一分子。地克珠利只產(chǎn)生1個(gè)碎片離子，只能選擇同位素峰來(lái)滿(mǎn)足判定要求。因此實(shí)驗(yàn)選擇豐度最高的m/z 405 和m/z 407兩個(gè)離子為母離子，以各自的子離子m/z 334和m/z 336作為子離子，共獲得5 個(gè)確證分，符合歐盟對(duì)殘留物的確證檢測(cè)要求。m/z 407、405具有相同的豐度，本實(shí)驗(yàn)以m/z 407＞336和m/z 405＞334作為定性離子對(duì)，以m/z 407＞336作為定量離子對(duì)。

2.3.7 色譜條件的優(yōu)化

地克珠利采用負(fù)離子模式掃描，因此流動(dòng)相的選擇對(duì)其峰形及靈敏度有較大的影響。實(shí)驗(yàn)分別比較了乙酸銨-甲醇、乙酸銨-乙腈、甲酸-甲醇作為流動(dòng)相，并實(shí)驗(yàn)了不同的梯度條件。結(jié)果表明，采用乙酸銨-甲醇作為流動(dòng)相，在負(fù)離子掃描模式下，既有較高的靈敏度，又能獲得良好的峰形。而有機(jī)相采用乙腈，其峰形會(huì)變差，且靈敏度也不及甲醇。水相采用0.1%甲酸，峰形也會(huì)變差，且在負(fù)離子掃描模式下，其靈敏度會(huì)降低約31%～49%。色譜柱分別實(shí)驗(yàn)了Waters XTerra C18（2.1 mm×150 mm，3.5 μm）和Agilent XDB C18（2.1 mm×150 mm，5 μm）及Venusil ASB C18（2.1 mm×150 mm，5 μm）3 種色譜柱，結(jié)果表明，Waters XTerra C18（2.1 mm×150 mm，3.5 μm）峰形尖銳、對(duì)稱(chēng)，分離效果最好。

3 結(jié) 論

通過(guò)乙腈提取樣品中的地克珠利殘留量，無(wú)水硫酸鈉脫除水分，正己烷去脂，基質(zhì)分散固相萃取凈化，以及優(yōu)化高效液相色譜及質(zhì)譜條件，建立了一種測(cè)定魚(yú)體中地克珠利殘留量的方法。該方法前處理簡(jiǎn)單，無(wú)需固相萃取柱凈化，降低了成本，準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好，是一種簡(jiǎn)便、快速、高效的測(cè)定方法，適用于魚(yú)體中地克珠利殘留量的測(cè)定，同時(shí)也為制定魚(yú)體中地克珠利的MRLs提供了技術(shù)支持。

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Determination of Diclazuril in Fish by High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry with Dispersive Solid Phase Extraction

XING Lihong， SUN Weihong*， SUN Xiaojie， LI Zhaoxin， GUO Jiangtao
（Yellow Sea Fisheries Research Institute， Key Laboratory of Testing and Evaluation for Aquatic Product Safety and Quality，Ministry of Agriculture， Laboratory of Quality and Safety Risk Assessment for Aquatic Products （Qingdao）， Ministry of Agriculture，Chinese Academy of Fishery Sciences， Qingdao 266071， China）

A method has been developed for the determination of diclazuril in fish by high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry （HPLC-MS/MS） with dispersive solid phase extraction.Samples were dehydrated with anhydrous sodium sulfate， and extracted with acetonitrile.Then the extracts were concentrated under vacuum condition.The samples were degreased with hexane and cleaned up by dispersive solid phase extraction， analyzed by HPLC-MS/MS and quantified with internal standard method.Electrospray ionization was applied and operated in the negative ion mode.The calibration curve showed good linearity between peak area and the concentration of diclazuril in the range of 1-100 μg/L with a correlation coefficient over 0.999.The average recoveries from spiked sample at the three concentrations of 1.00， 5.00 and 50.0 μg/kg ranged from 95.4% to 108% with intra- and inter-batch relative standard deviations below 15%.The limit of detection （LOD） for diclazuril was 0.50 μg/kg.This efficient and simple method could be used to identify and quantify diclazuril in fish with satisfactory sensitivity and repeatability.

dispersive solid phase extraction； high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry （HPLC-MS/MS）； fish； diclazuril

10.7506/spkx1002-6630-201614031

O657.63

A

1002-6630（2016）14-0174-06

邢麗紅， 孫偉紅， 孫曉杰， 等.分散固相萃取凈化-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定魚(yú)體中地克珠利殘留量［J］.食品科學(xué)，2016， 37（14）: 174-179.DOI:10.7506/spkx1002-6630-201614031. http://www.spkx.net.cn

XING Lihong， SUN Weihong， SUN Xiaojie， et al.Determination of diclazuril in fish by high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry with dispersive solid phase extraction［J］.Food Science， 2016， 37（14）: 174-179.（in Chinese with English abstract） DOI:10.7506/spkx1002-6630-201614031. http://www.spkx.net.cn

2015-11-15

2015年國(guó)家水產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估項(xiàng)目（GJFP201501001）；國(guó)家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金項(xiàng)目（21207162）

邢麗紅（1981—），女，助理研究員，碩士，主要從事水產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)研究。E-mail：xinglh@ysfri.ac.cn

*通信作者：孫偉紅（1977—），女，高級(jí)工程師，博士，主要從事水產(chǎn)品質(zhì)量安全及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估研究。E-mail：sunwh@ysfri.ac.cn