腦鈉肽前體A、B基因變異和蒙古族、漢族原發(fā)性高血壓的相關(guān)性

常培葉　趙　平　劉志躍　秦　莉

(內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科，內(nèi)蒙古　呼和浩特　010050)

?

腦鈉肽前體A、B基因變異和蒙古族、漢族原發(fā)性高血壓的相關(guān)性

常培葉趙平1劉志躍2秦莉2

(內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科，內(nèi)蒙古呼和浩特010050)

〔摘要〕目的探討人類脂聯(lián)素(hANP)基因與腦鈉肽前體(NPP)基因變異在蒙古族、漢族原發(fā)性高血壓中的作用。方法采集蒙古族高血壓標(biāo)本212例，正常血壓標(biāo)本217例，漢族高血壓標(biāo)本200例，正常血壓標(biāo)本216例，用高溫連接酶檢測反應(yīng)進(jìn)行基因分型。結(jié)果①蒙古族和漢族高血壓組體質(zhì)指數(shù)明顯高于正常血壓組；兩民族血漿總膽固醇和高密度脂蛋白膽固醇的水平在高血壓組和正常血壓組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。②根據(jù)block選擇tagSNP，從NPPA基因的常見SNPs中篩選出1個tagSNP，從NPPB篩選出1個tagSNP，蒙古族和漢族候選位點的等位基因和基因型頻率在高血壓組和正常血壓組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論NPPA基因rs5063和蒙古族、漢族原發(fā)性高血壓均無相關(guān)性，NPPB基因rs198389和蒙古族、漢族原發(fā)性高血壓均無相關(guān)性。

〔關(guān)鍵詞〕高血壓；單體型；腦鈉肽前體A基因；腦鈉肽前體B基因；蒙古族

原發(fā)性高血壓是由遺傳和環(huán)境因素共同作用而引起的復(fù)雜性疾病，其中遺傳性因素占30%～40%〔1〕。在血壓的調(diào)節(jié)機(jī)制中，腦鈉肽(BNP)通過調(diào)節(jié)血管張力和鈉平衡在血壓的調(diào)節(jié)中起重要作用〔2〕。脂聯(lián)素(ANP)和BNP作用于腎小球和集合管，通過增加腎小球濾過率，抑制集合管對鈉的重吸收，進(jìn)而增加鈉的排泄；同時ANP和BNP還可以通過抑制腎素、血管緊張素Ⅱ和醛固酮的分泌來調(diào)節(jié)血壓，如果ANP和BNP功能障礙將影響血壓。研究顯示，腦鈉肽前體(NPP)A、NPPB基因變異和高血壓發(fā)生相關(guān)〔3〕。新近研究發(fā)現(xiàn)涉及這些遺傳機(jī)制在不同人群結(jié)果不同，本文探討這2個基因變異在蒙古族、漢族原發(fā)性高血壓發(fā)病機(jī)制中的作用，需要在不同的種族人群中進(jìn)一步研究。

1材料和方法

1.1研究對象于2010年、2011年在錫林郭勒盟多倫縣和東烏旗開展高血壓流行病學(xué)調(diào)查，共采集蒙古族牧民樣本429例，其中高血壓212例，正常血壓者217例；漢族農(nóng)民樣本416例，其中高血壓200例，正常血壓者216例。所有研究對象均無血緣關(guān)系，無異族通婚史，年齡20～70歲，至少三代從小生活在調(diào)查所在地。所有參與者均知情同意。根據(jù)美國心臟病協(xié)會(AHA)推薦的標(biāo)準(zhǔn)方法給調(diào)查對象測量血壓。 高血壓的入選標(biāo)準(zhǔn)：3次測量血壓，平均收縮壓(SBP)≥140 mmHg和(或)平均舒張壓(DBP)≥90 mmHg，或研究對象正在接受抗高血壓藥物治療。正常對照組入選標(biāo)準(zhǔn)：查體健康者，3次測量血壓，平均收縮壓<140 mmHg和(或)平均舒張壓<90 mmHg，無服用降壓藥史，研究中排除了有繼發(fā)性高血壓、過量飲酒、冠心病、糖尿病、腦卒中、嚴(yán)重肝腎疾病、甲狀腺疾病病史以及惡性腫瘤的對象。

1.2方法

1.2.1人基因組DNA樣品的制備采用北京天根有限公司的血液基因組DNA提取試劑盒提取血液標(biāo)本DNA并進(jìn)行DNA濃度、純度檢測。

1.2.2SNP位點的選取從HapMap數(shù)據(jù)庫(http：//www.hap map.org)下載包含中國人的基因型數(shù)據(jù)庫，使用Haploview軟件根據(jù)block選擇tagSNP，設(shè)置條件為較少等位基因頻率≥ 0.05，r2≥0.8。從NPPA基因中篩選出1個tagSNP，rs5063，從NPPB基因中篩選出1個tagSNP，rs198389。

1.2.3候選基因分型目的基因引物序列：rs198389：正義鏈5'AGACACAGACAAGTCCCCGT3'，反義鏈5'AGGAAGAAAGC-GCCAACCTA3',擴(kuò)增長度98 bp；rs5063：正義鏈5′AGGTCAGACCAGAGCTAATC3′，反義鏈5'GCCCTACCTTGAAATCCATC3'，擴(kuò)增長度91 bp。PCR系統(tǒng)，20 μl體系：1 μl模板DNA,2 μl PCR10倍緩沖液,0.6 μl Mg2+(100 mmol/L),2 μl dNTP(20 mmol/L),0.2 μl Taq(5 U/μl),2 μl引物(5 pmol/L),12.2 μl ddH2O。PCR方案：起始95℃變性2 min，然后94℃ 30 s，53℃ 1 min，65℃ 30 s，反應(yīng)35個循環(huán)，最后65℃延伸10 min。高溫連接酶檢測反應(yīng)10 μl：1 μl 10倍緩沖液,1 μl 探針混合物,0.05 μl連接酶，4 μl ddH2O，4 μl PCR產(chǎn)物。反應(yīng)條件：95℃ 2 min，94℃ 30 s，60℃ 2 min，反應(yīng)35個循環(huán)。

1.3統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS17.0軟件進(jìn)行t及χ2檢驗。

2結(jié)果

2.1臨床相關(guān)指標(biāo)比較兩個民族高血壓組與正常血壓組比較平均年齡、體質(zhì)指數(shù)(BMI)、SBP、DBP、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)。見表1。

2.2基因多態(tài)性位點和高血壓的關(guān)聯(lián)研究在蒙古族人群，NPPA基因的rs5068位點的基因型頻率和等位基因頻率在高血壓組和正常血壓組之間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);NPPB基因的rs198389位點的基因型頻率和等位基因頻率在高血壓組和正常血壓組之間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。在漢族人群，NPPA基因的rs5068位點的基因型頻率和等位基因頻率在高血壓組和正常血壓組之間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);NPPB基因的rs198389位點的基因型頻率和等位基因頻率在高血壓組和正常血壓組之間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表1　兩組臨床相關(guān)指標(biāo)比較±s)

表2　基因型和等位基因分布頻率〔n(%)〕

3討論

高血壓屬于多基因遺傳病，到目前為止，已發(fā)現(xiàn)的遺傳變異僅僅能解釋1%～2%人口的血壓變異。這表明，還有較多的高血壓遺傳變異未被發(fā)現(xiàn)。最近，高血壓全基因組基因表達(dá)Meta分析發(fā)現(xiàn)NPPA、NPPB和高血壓發(fā)生相關(guān)〔3〕，NPPA基因位于1p36.2，與NPPB基因結(jié)構(gòu)很相似，NPPA與NPPB都包含3個外顯子和2個內(nèi)含子。在轉(zhuǎn)基因小鼠的實驗研究中發(fā)現(xiàn)NPPA低表達(dá)會導(dǎo)致血壓增高〔4〕，相反，NPPA或者NPPB過表達(dá)會導(dǎo)致血壓降低〔5〕。在婦女的基因組研究以及Meta分析中，發(fā)現(xiàn)NPPA基因多態(tài)性與高血壓的發(fā)生相關(guān)〔6，7〕。Kotoko等〔8〕在日本人群的研究中，發(fā)現(xiàn)NPPB基因多態(tài)性和日本女性高血壓相關(guān)，是日本女性高血壓的遺傳標(biāo)記，但是之后在日本人群的高血壓全基因組關(guān)聯(lián)研究中，發(fā)現(xiàn)NPPB基因多態(tài)性與血壓無明顯相關(guān)性〔9〕。

研究發(fā)現(xiàn)hANP基因C-664G、T1766C、T2238C 均與哈薩克族原發(fā)性高血壓無相關(guān)性〔10～12〕。Liu等〔13〕在漢族人群的研究中發(fā)現(xiàn) NPRC 基因的多態(tài)性位點以及單倍型和高血壓相關(guān)。本研究前期研究發(fā)現(xiàn)hANP基因C-664G 變異與蒙古族原發(fā)性高血壓無明顯相關(guān)性〔14〕。本研究未發(fā)現(xiàn)NPPA基因rs5063和蒙古族、漢族原發(fā)性高血壓相關(guān)，也未發(fā)現(xiàn)NPPB基因rs198389和蒙古族、漢族原發(fā)性高血壓相關(guān)。預(yù)證實NPPA、NPPB基因在原發(fā)性高血壓發(fā)生發(fā)展中的作用，還需要增加樣本量在其他的種族人群中進(jìn)行進(jìn)一步的驗證。

4參考文獻(xiàn)

1Lewington S，Clarke R，Qizilbash N，etal.Prospective Studies Collaboration.Prospective Studies Collaboration.Age-specific relevance of usual blood pressure to vascular mortality：a meta-analysis of individual data for one million adults in 61 prospective studies〔J〕.Lancet，2002;360(9349)：1903-13.

2Kishimoto I，Tokudome T，Nakao K，etal.Natriuretic peptide system：an overview of studies using genetically engineered animal models〔J〕.FEBS J,2011;278(11)：1830-41.

3Francine ZM，Anna EC，Yee HJ，etal.Meta-analysis of genome-wide gene expression differences in onset and maintenance phases of genetic hypertension〔J〕.Hypertension，2010;56(2)：319-24.

4John SW，Krege JH，Oliver PM，etal.Genetic decreases in atrial natriuretic peptide and salt-sensitive hypertension〔J〕.Science，1995;267(5198)：679-81.

5Cataliotti A，Tonne JM，Bellavia D，etal.Long-term cardiac pro-B-type natriuretic peptide gene delivery prevents the development of hypertensive heart disease in spontaneously hypertensive rats〔J〕.Circulation，2011;123(12)：1297-305.

6David Conen，Suzanne Cheng，Lori LSteiner，etal.Association of 77 polymorphisms in 52 candidate genes with blood pressure progression and incident hypertension：The Women′s Genome Health Study〔J〕.J Hypertens，2009;27(3)：476-83.

7Niu W.The relationship between natriuretic peptide precursor a gene T2238C polymorphism and hypertension：a meta-analysis〔J〕.Int J Hypertens,2011;653698-706.

8Kotoko Kosuge，Masayoshi Soma，Tomohiro Nakayama，etal.A novel variable number of tandem repeat of the natriuretic peptide precursor B gene′s 5′-flanking region is associated with essential hypertension among Japanese females〔J〕.Int J Med Sci，2007;4(3)：146-52.

9Yumiko Hiura，Yasuharu Tabara，Yoshihiro Kokubo，etal.A genome-wide association study of hypertension-related phenotypes in a Japanese population〔J〕.Circ J，2010;74(11)：2353- 9.

10常桂娟，李南方，李濤，等.新疆哈薩克族心鈉素基因C-664G 變異與原發(fā)性高血壓的相關(guān)性〔J〕.臨床心血管病雜志，2006;22(10)：590-3.

11何玲玲，徐新娟，梁曉慧，等.新疆哈薩克族ANP基因T1766C多態(tài)性與原發(fā)性高血壓的關(guān)聯(lián)性〔J〕.新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2007;29(9)：967-9.

12李南方，張艷敏，李濤，等.新疆哈薩克族原發(fā)性高血壓與心鈉素基因T2238C多態(tài)性的關(guān)系〔J〕.臨床心血管病雜志，2005;21(9)：513-5.

13Liu Y，Li S，Chen X，etal.Association of natriuretic peptide receptor-C gene with ischemic stroke and hypertension in Chinese Han population〔J〕.Clin Exp Hypertens,2012;34(7)：504-9.

14趙平，張永平，趙美.內(nèi)蒙古地區(qū)蒙古族原發(fā)性高血壓與人類心鈉素基因的相關(guān)性〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2011;31(19)：3681-3.

〔2014-09-15修回〕

(編輯安冉冉/曹夢園)

基金項目：中國科學(xué)院“西部之光”人才培養(yǎng)計劃項目(2012)；內(nèi)蒙古自治區(qū)科技計劃資助項目(2013)

通訊作者：趙平(1973-)，男，副主任醫(yī)師，碩士，主要從事高血壓、冠心病發(fā)病機(jī)制的研究。

〔中圖分類號〕R394.5

〔文獻(xiàn)標(biāo)識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)12-2882-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.12.025

1內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院心內(nèi)科

2內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)病理生理學(xué)教研室

第一作者：常培葉(1975-)，女，博士，副教授，主要從事內(nèi)蒙古地區(qū)少數(shù)民族生活習(xí)慣和易感基因的研究。