一清膠囊抗炎作用實(shí)驗(yàn)研究

徐雄良，劉　浪，劉小均，岳　韻，張啟余，柯　瀟，鄭　強(qiáng)

(成都康弘藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司國(guó)家企業(yè)技術(shù)中心，成都

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一清膠囊抗炎作用實(shí)驗(yàn)研究

徐雄良，劉浪，劉小均，岳韻，張啟余，柯瀟，鄭強(qiáng)*

(成都康弘藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司國(guó)家企業(yè)技術(shù)中心，成都

610036)

摘要：目的研究一清膠囊的抗炎作用，為其臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。方法采用二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳腫脹、角叉菜膠誘導(dǎo)大鼠足腫脹，評(píng)價(jià)其抗炎作用。結(jié)果一清膠囊高(29.3 g·kg-1)、低(3.7 g·kg-1)劑量組均可顯著減輕二甲苯致小鼠耳腫脹(P<0.05)；高(11.7 g·kg-1)、中(5.9 g·kg-1)、低(2.9 g·kg-1)劑量組均可顯著抑制角叉菜膠致大鼠足腫脹(P<0.01)，其作用在致炎后1和3 h表現(xiàn)明顯，且高劑量組在致炎后6 h內(nèi)的作用強(qiáng)于醋酸潑尼松組。結(jié)論一清膠囊具有較好的抗炎作用。

關(guān)鍵詞：一清膠囊；抗炎；二甲苯；角叉菜膠

一清膠囊由大黃、黃連和黃芩3味藥組成[1]，收載于《中國(guó)藥典》2015年版一部，具有清熱瀉火解毒、化瘀涼血止血的功效；臨床上廣泛用于治療熱毒證，如火毒血熱所致的身熱煩躁、目赤口瘡、咽喉牙齦腫痛和大便秘結(jié)；咽炎、扁桃體炎和牙齦炎見(jiàn)上述證候者。

研究表明，大黃中的大黃素、大黃酸和黃芩中的黃芩苷及黃連中的小檗堿均具有抑制炎癥因子的作用[2]。為了進(jìn)一步研究一清膠囊的抗炎作用，本文采用二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳腫脹和角叉菜膠誘導(dǎo)大鼠足腫脹的方法制造急性非特異性炎癥模型和免疫性炎癥模型，評(píng)價(jià)其抗炎作用，為臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1儀器與材料

1.1儀器足趾容積測(cè)量?jī)x(PV-200型，成都泰盟科技有限公司)。

1.2試藥一清膠囊(成都康弘制藥有限公司，批號(hào)120514，規(guī)格0.5 g/粒，每克膠囊內(nèi)容物相當(dāng)于原生藥7.32 g；臨用前用質(zhì)量濃度為10 g·L-1的阿拉伯膠配成所需混懸液備用)；醋酸潑尼松片(浙江仙琚制藥股份有限公司，批號(hào)120479，規(guī)格5 mg/片，臨用前用質(zhì)量濃度為10 g·L-1的阿拉伯膠配成所需混懸液備用)；二甲苯(成都市科龍化工試劑廠，批號(hào)20080801)；角叉菜膠(Sigma公司，批號(hào)81K1556，規(guī)格25 g/瓶)。1.3動(dòng)物SPF級(jí)雄性昆明種小鼠，體質(zhì)量20±2 g，飼養(yǎng)于SPF級(jí)環(huán)境中，動(dòng)物使用許可證號(hào)：SCXK(川)2008-19。雄性SD大鼠，體質(zhì)量175±25 g，飼養(yǎng)于SPF級(jí)環(huán)境中，動(dòng)物使用許可證號(hào)：SCXK(川)2008-19。均由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供。

2方法

2.1對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹模型的影響取體質(zhì)量為20±2 g的雄性小鼠50只，隨機(jī)分為5組，即模型組、一清膠囊高、中、低3個(gè)劑量組(29.3，7.3和3.7 g·kg-1)和醋酸潑尼松組(10 mg·kg-1)，按照0.02 mL·g-1等容積灌胃給藥，每日 2次，連續(xù)5 d，模型組則給予等體積質(zhì)量濃度為10 g·L-1的阿拉伯膠溶液。末次給藥40 min后，在各組小鼠左耳均勻涂布二甲苯，0.05 mL/只，造模后30 min處死小鼠，用直徑為8 mm的打孔器取下左右耳片，稱定質(zhì)量，以左右耳片質(zhì)量差作為腫脹度(mg)，計(jì)算腫脹抑制率(%)[3-4]。

2.2對(duì)角叉菜膠致大鼠足腫脹模型的影響取體質(zhì)量為175±25 g的雄性SD大鼠50只，隨機(jī)均分為5組，即模型組、一清膠囊高、中、低3個(gè)劑量組(11.7，5.9和2.9 g·kg-1)和醋酸潑尼松組(10 mg·kg-1)，按照0.01 mL·g-1等容積灌胃給藥，每日2次，連續(xù)5 d，模型組則給予相同體積質(zhì)量濃度為10 g·L-1的阿拉伯膠溶液。末次給藥30 min后在大鼠左足皮下注射質(zhì)量濃度為10 g·L-1的角叉菜膠溶液，0.1 mL/只，用足趾容積測(cè)量?jī)x測(cè)量致炎前及致炎后1，2，3，4，5和6 h時(shí)大鼠的左足體積(mL)，將大鼠致炎后體積與致炎前體積相減計(jì)算大鼠的足腫脹度(mL)，計(jì)算腫脹率(%)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析[3，5]。

3結(jié)果

3.1對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹模型的影響二甲苯造模后30 min處死小鼠，用直徑為8 mm的打孔器取下左右耳片，稱定質(zhì)量，以左右耳片質(zhì)量差作為腫脹度(mg)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果一清膠囊高(29.3 g·kg-1)、低(3.7 g·kg-1)劑量組均可顯著減輕二甲苯致小鼠耳腫脹(P<0.05)，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與模型組相比，一清膠囊中劑量組(7.3 g·kg-1)差異雖無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但其腫脹度仍小于模型組;與醋酸潑尼松組比較，一清膠囊高、中、低劑量組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1一清膠囊對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹模型的影響

Tab.1 The effect of Yiqing Capsules on the ear swelling induced by xylene in mice

±s，n=10)

注：與模型組比較*P<0.05，**P<0.01；與對(duì)照組比較#P<0.05，# #P<0.01;-表示無(wú)該項(xiàng)指標(biāo)。

3.2對(duì)角叉菜膠致大鼠足腫脹模型的影響以致炎前及致炎后足體積的變化值計(jì)算大鼠的足腫脹度(mL)，以腫脹率(%)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果一清膠囊高(11.7 g·kg-1)、中(5.9 g·kg-1)、低(2.9 g·kg-1)3個(gè)劑量組均可抑制角叉菜膠致大鼠足腫脹(P<0.05)，其作用在致炎后1和3 h表現(xiàn)明顯(P<0.01)，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與醋酸潑尼松組比較，一清膠囊高劑量組(11.7 g·kg-1)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，表明一清膠囊高劑量組有較強(qiáng)的抗炎作用。從腫脹率(%)可知，一清膠囊高劑量組在致炎后6 h內(nèi)的作用甚至強(qiáng)于醋酸潑尼松組，且抗炎作用也較持久，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2一清膠囊對(duì)角叉菜膠致大鼠足腫脹的影響

Tab.2 The effect of Yiqing Capsules on the paw swelling caused by carrageenan in rat

±s，n=10)

注：與模型組比較*P<0.05，**P<0.01；與對(duì)照組比較#P<0.05，# #P<0.01;-表示無(wú)該項(xiàng)指標(biāo)。

4討論

炎癥是具有血管系統(tǒng)的活體組織對(duì)損傷因子所發(fā)生的防御反應(yīng)。在炎癥反應(yīng)過(guò)程中，受傷組織及血液可產(chǎn)生并釋放具有致炎作用的細(xì)胞因子、炎性介質(zhì)和趨化因子等多種化學(xué)活性物質(zhì)，從而引起局部紅、腫、熱、痛等臨床表現(xiàn)。PGE2、TNF-α和IL-1β是重要的炎癥細(xì)胞因子，可促進(jìn)炎癥反應(yīng)和組織損傷，釋放出多種炎癥介質(zhì)，引起炎癥反應(yīng)。

鄧翀[6]、賴先榮等[7]研究結(jié)果表明，一清膠囊藥效物質(zhì)基礎(chǔ)主要來(lái)源于方中大黃、黃芩和黃連的主要有效成分，如大黃中的蒽醌衍生物(大黃酸、大黃素、大黃素甲醚、大黃酚和蘆薈大黃素等)，黃芩中的黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素和黃芩新素等，以及黃連中的小檗堿等。羅蘭等[8]利用UPLC-ESI-MS-MS與FTIR技術(shù)對(duì)一清膠囊化學(xué)成分進(jìn)行了分析，鑒定出的12個(gè)化合物中有5個(gè)化合物(蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚、大黃素和大黃素甲醚)來(lái)自于大黃，3個(gè)化合物(黃芩苷、漢黃芩苷和漢黃芩素)來(lái)自于黃芩，4個(gè)化合物(表小檗堿、黃連堿、巴馬汀和鹽酸小檗堿)來(lái)自于黃連，且10批一清膠囊樣品紅外光譜的吸收曲線基本無(wú)區(qū)別，特征明顯，幾乎所有峰都可以重現(xiàn)。

大黃能顯著改善急性危重癥患者的全身炎癥反應(yīng)綜合征，大黃水提物能明顯降低小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的增加，不同程度地減輕大鼠足跖腫脹，明顯抑制二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹[9]。大黃中的大黃素對(duì)炎癥早期的滲出、毛細(xì)血管通透性的增加和白細(xì)胞游走等具有較好的對(duì)抗作用，有明顯抑制急性炎癥反應(yīng)的作用[10]。進(jìn)一步證明了以大黃水提物為主要組分的一清膠囊具有較好的抗炎作用。

黃芩能顯著影響白細(xì)胞的多種功能，對(duì)過(guò)敏性炎癥滲出有一定的抑制作用[11]，其超聲提取物和回流提取物適宜劑量(75 mg·kg-1)對(duì)急性炎癥均有顯著的抑制作用[12]，黃芩中黃酮類化合物對(duì)多種炎癥介質(zhì)有抑制作用[13]。吳再旺等[14]實(shí)驗(yàn)研究表明，10個(gè)不同產(chǎn)區(qū)的黃芩均有抑制小鼠耳腫脹作用，黃芩苷、千層紙素、A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷和黃芩素均具有抑制與炎癥相關(guān)的IL-1β轉(zhuǎn)化酶的作用[15]。黃芩提取物通過(guò)抑制淋巴細(xì)胞功能和炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生而發(fā)揮抗炎作用。黃芩和黃連是清胃黃連丸發(fā)揮抗炎藥效的重要物質(zhì)基礎(chǔ)，研究結(jié)果表明，清胃黃連丸可以顯著抑制醋酸致小鼠毛細(xì)血管通透性增高，抑制蛋清所引起的大鼠足腫脹和二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹[16]。

黃連水煎液對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹和對(duì)醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增加均有一定的抑制作用[17]。黃連中的小檗堿能顯著降低炎性組織中PGE2的含量，具有明顯的抗炎作用[18]。

根據(jù)文獻(xiàn)[19-21]報(bào)道，每粒(0.5 g)一清膠囊中黃芩苷的含量為28.32～36.99 mg，小檗堿的含量為7.53～12.50 mg，漢黃芩苷的含量為1.06～4.36 mg，來(lái)自于大黃5個(gè)組分的總含量為1.83～2.62 mg。因此，一清膠囊的抗炎物質(zhì)基礎(chǔ)均來(lái)源于方中大黃、黃芩和黃連的主要有效成分。

另外，一清膠囊的抗炎作用機(jī)制之一可能與抑制炎癥介質(zhì)NO參與炎癥反應(yīng)過(guò)程有關(guān)。體外抗炎實(shí)驗(yàn)[8]表明，一清膠囊在1～100 μmol·L-1范圍內(nèi)能顯著降低細(xì)胞上清液中NO的含量，且具有一定的劑量依賴性。

總之，一清膠囊方中的3味中藥均具有較好的抗炎作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，一清膠囊對(duì)二甲苯誘發(fā)的小鼠耳腫脹及角叉菜膠誘發(fā)的大鼠足腫脹具有明顯的抑制作用，且呈一定的量效關(guān)系，其抗炎作用機(jī)制可能與降低TNF-α，IL-1β和PGE2的表達(dá)以及細(xì)胞上清液中NO的含量有關(guān)，以上研究結(jié)果與其清熱解毒的功效相關(guān)，為一清膠囊的臨床應(yīng)用提供了藥效學(xué)基礎(chǔ)。

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作者簡(jiǎn)介：徐雄良，男，博士

*通信作者：鄭強(qiáng)，男，博士

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2016.04.020

中圖分類號(hào)：R965

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1004-2407(2016)04-0392-03

(收稿日期：2015-11-30)

Anti-inflammatory effects of Yiqing Capsules

XU Xiongliang，LIU Lang，LIU Xiaojun，YUE Yun，ZHANG Qiyu，KE Xiao，ZHENG Qiang*

(National-recognized Enterprise Technology Center，Chengdu Kanghong Pharmaceuticals Group Limited Company，Chengdu 610036，China)

Abstract:Objective To evaluate the pharmacodynamics of Yiqing Capsules related to anti-inflammatory effect，and to provide the scientific evidence for its clinical application. Methods Anti-inflammatory effects were studied by xylene induced ear swelling in mice and paw swelling caused by carrageenan in rat.Results Yiqing Capsules at high and low dose groups(29.3 and 3.7 g·kg-1) could apparently restrain the ear swelling induced by xylene in mice(P<0.05)； Yiqing Capsules at various dose groups(11.7，5.9 and 2.9 g·kg-1) could restrain the rat paw swelling induced by carrageenan(P<0.01) and appeared obviously after 1 and 3 h.Yiqing Capsules at high dose group could restrain the rat paw swelling induced by carrageenan stronger than prednisone acetate dose group within 6 h.Conclusion Yiqing Capsules could eliminate toxins effect.

Key words：Yiqing Capsules；anti-inflammatory；xylene；carrageenan