西妥昔單抗聯(lián)合FOLFOX4對老年結腸癌患者組織PTEN及P13K表達的影響

虞義建，虞玲燕，王雙珠

(1.浙江省臺州醫(yī)院 病理科，浙江 臺州 317000；2.浙江省臺州醫(yī)院 急診科，浙江 臺州 317000)

西妥昔單抗聯(lián)合FOLFOX4對老年結腸癌患者組織PTEN及P13K表達的影響

虞義建1Δ，虞玲燕2，王雙珠1

(1.浙江省臺州醫(yī)院 病理科，浙江 臺州 317000；2.浙江省臺州醫(yī)院 急診科，浙江 臺州 317000)

目的 探討西妥昔單抗聯(lián)合FOLFOX4化療方案對老年結腸癌患者組織抑癌基因PTEN及P13K表達的影響。方法 選取2013年10月～2015年7月浙江省臺州醫(yī)院收治的結腸癌老年患者62例，按治療方法不同分組，對照組(n=27)采用單純FOLFOX4方案化療，研究組(n=35)在FOLFOX4化療方案基礎上給予西妥昔單抗治療，療程均為4個周期，對比2組間臨床療效，治療前后采用免疫組化測定病理組織PTEN及P13K表達狀況。結果 研究組有效率(51.4%)與對照組有效率(44.4%)，研究組疾病控制率(80.0%)與對照組疾病控制率(62.9%)比較差異均無統(tǒng)計學意義(χ2=0.298，P=0.585；χ2=2.223，P=0.136)。在組織PTEN及P13K表達上，研究組治療后PTEN陽性率顯著高于對照組(82.86%vs. 59.26%,P<0.05)，治療后P13K陽性率顯著低于對照組(37.14%vs. 62.96%,P<0.05)。結論 采用西妥昔單抗聯(lián)合FOLFOX4化療方案治療老年結腸癌能提高組織PTEN表達，降低P13K表達，效果顯著。

西妥昔單抗；FOLFOX4；老年；結腸癌；PTEN；P13K

結腸癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤,具有較高的死亡率[1]，現(xiàn)階段FOLFOX4化療方案是晚期結腸癌的標準治療方案之一,但由于腫瘤耐藥性及化療相關的嚴重不良反應常導致治療失敗[2]。研究表明表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)的表達程度與西妥昔單抗的近期療效有一定相關性[3]。有報道顯示P13K/Akt是其中比較重要的一條信號傳導途徑,該通路與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關[4]。目前國內(nèi)對于西妥昔單抗聯(lián)合FOLFOX4對老年結腸癌抑癌基因PTEN及P13K表達的研究仍然相對較少，本次研究探討西妥昔單抗聯(lián)合FOLFOX4對老年結腸癌患者組織PTEN及P13K表達的影響，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年10月～2015年7月來浙江省臺州醫(yī)院治療的結腸癌老年患者62例，經(jīng)病理組織學檢查確診，排除存在肝腎功能、心電圖異常，存在化療禁忌癥患者，按治療方法不同進行分組，對照組27例采用FOLFOX4方案化療，男15例，女12例，年齡69～82歲，平均年齡(73.1±6.8)歲，病理分類高分化腺癌10例，中分化腺癌12例，低分化腺癌3例，粘液腺癌2例；研究組35例在FOLFOX4化療方案基礎上給予西妥昔單抗，男20例，女15例，年齡68～84歲，平均年齡(72.9±6.5)歲，病理分類高分化腺癌13例，中分化腺癌17例，低分化腺癌3例，粘液腺癌2例，2組一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義。

1.2 方法

1.2.1 治療方法：對照組采用FOLFOX4方案：靜脈滴注奧沙利鉑(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，國藥準字號：H20000337)85 mg/m2，2 h，d1；靜脈滴注亞葉酸鈣(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，H32022391)200 mg/m2，2 h，d1-d2；靜脈注射氟尿嘧啶(上海旭東海普藥業(yè)有限公司，國藥準字號：H31020593)400 mg/m2，d1-d2；持續(xù)靜脈滴注5-Fu 600 mg/m2，22 h，d1-d2；每14 d重復1次，為1個周期，連續(xù)治療4個周期。研究組在FOLFOX4化療方案基礎上給予西妥昔單抗(德國默克制藥廠，批準文號：S20050095)治療，給藥前30 min肌注鹽酸異丙嗪(上海禾豐制藥有限公司，國藥準字號：H31021490)25 mg，靜脈推注地塞米松(廣州白云山天心制藥股份有限公司，國藥準字號：H44022091)5 mg，首次靜脈滴注西妥昔單抗400 mg/m2，時間2 h，隨后降為每周250 mg/m2，時間1 h。

1.2.2 免疫組化檢測方法：準備：取出石蠟包埋組織，加4%聚甲醛磷酸鹽緩沖液內(nèi)固定；切片：石蠟包埋組織切片2張，標記P13K(A)、PTEN(B)，每片4 μm；脫蠟水化：二甲苯Ⅰ、Ⅱ浸泡15 min，無水乙醇、95%乙醇、70%乙醇中浸泡3 min，流水沖洗5 min。放入PBS液中，放在震蕩儀上震蕩2 min/次×3；高壓修復抗原：取適量EDTA(pH9.0)抗原修復液、檸檬酸鹽緩沖液(pH6.0)高壓鍋加熱，2、3 min后取出切片；置于PBS液，震蕩儀上震蕩2 min/次×3；擦去PBS液，滴加第一抗體(P13K、PTEN)，室溫下孵育15 min，PBS液中置于震蕩儀上震蕩3 min/次×3；擦去PBS液，滴加MaxVision TMHRP-Polymeranti -Rabbit IHC，室溫下孵育15min，PBS液中置于震蕩儀上震蕩3 min/次×3；擦去PBS液，滴加新配制的DAB ingrain agent，混勻后加至切片，37 ℃反應10～30 min后觀察顯色情況；反復沖洗3次，蘇木素復染，脫水、透明、樹脂膠封片，顯微鏡下觀察記錄顯色情況。

1.2.3 觀測指標：

① 臨床療效：完全緩解(CR)為所有目標病灶消失并持續(xù)>1個月；部分緩解(PR)為腫瘤病灶長徑總和縮小≥35%，并持續(xù)>1個月；穩(wěn)定(SD)為腫瘤病灶長徑總和縮小未達PR，有增大而未達PD；進展(PD)為腫瘤病灶長徑總和增大≥20%或存在新發(fā)病灶。有效率=完全緩解率+部分緩解率，疾病控制率=完全緩解率+部分緩解率+穩(wěn)定率。

② PTEN及P13K表達：采用免疫組化測定治療前后病理組織：PTEN、P13K免疫組化染色結果=陽性細胞百分比+著色強度，積分0～3分為-，積分3～5分為+，積分5～9分為++，積分9～12分為+++。陽性細胞百分比計分：陽性細胞百分比0為0分，陽性細胞百分比<25%為1分，陽性細胞百分比25%～50%為2分，陽性細胞百分比50%～75%為3分，陽性細胞百分比>75%計為4分；著色強度：著色強度無著色為0分，著色強度黃色為1分，著色強度棕黃色為2分，著色強度黃褐色為3分。

2 結果

2.1 2組患者治療后臨床效果分析 研究組有效率(51.4%)與對照組有效率(44.4%)，研究組疾病控制率(80.0%)與對照組疾病控制率(62.9%)比較差異均無統(tǒng)計學意義(χ2=0.298，P=0.585；χ2=2.223，P=0.136)。見表1。

表1 2組患者治療后臨床效果分析[n(%)]

2.2 2組患者治療前后組織PTEN及P13K表達狀況分析 細胞膜或細胞質存在黃色或黃棕色顆粒為PTEN陽性，細胞質中存在黃棕色顆粒為P13K陽性，見圖1。

圖1 結腸腺癌細胞中PTEN與P13K免疫組化結果(×100)Fig.1 Immunohistochemical results of PTEN and P13K in colon cancer cells(×100)

治療前，對照組PTEN陽性率(51.85%)與研究組比較PTEN陽性率(54.29%)比較差異無統(tǒng)計學意義，治療后研究組PTEN陽性率(82.86%)高于對照組PTEN陽性率(62.96%)(χ2=4.265，P<0.05)。

治療前，對照組P13K陽性率(70.37%)與研究組P13K陽性率(71.43%)比較差異無統(tǒng)計學意義，治療后研究組P13K陽性率(37.14%)顯著低于對照組P13K陽性率(62.96%)(χ2=4.069，P<0.05)。見表3。

表2 2組患者治療前后組織PTEN表達狀況比較

#P<0.05，與對照組治療后比較，compared with control group post-treatment

表3 2組患者治療前后組織P13K表達狀況比較

#P<0.05，與對照組治療后比較，compared with control group post-treatment

3 討論

結腸癌是常見的惡性腫瘤之一,在我國的發(fā)病率呈逐年上升趨勢[5],嚴重威脅人類生命與健康。許多結腸癌患者出現(xiàn)明顯癥狀時，往往已進入晚期，且容易發(fā)生轉移，從而失去了手術機會[6]。化療是治療結腸癌主要治療手段之一，可延長患者生存時間。FOLFOX4化療方案存在腫瘤耐藥性及化療相關的嚴重不良反應，化療結果不良。近年來，單克隆抗體與化療藥物的聯(lián)合使用提高了結腸癌的治療效果，西妥昔單抗(cetuximab) 作用靶點為表皮生長因子受體(EGFR)，能逆轉腫瘤細胞對細胞毒類藥物的抗藥性而達到抑制腫瘤進展的目的[7]。隨著對腫瘤發(fā)病機制的進一步認識，與腫瘤細胞增殖分化等有關信號傳導通路被報道，PTEN/P13K/AKT信號轉導通路是其中之一，以該通路為靶點治療腫瘤的小分子特異性抑制劑正成為熱點研究之一。國內(nèi)尚缺乏西妥昔單抗聯(lián)合FOLFOX方案 對抑制PTEN/P13K/AKT信號轉導通路的依據(jù)，大規(guī)模臨床研究數(shù)據(jù)顯示，cetuximab聯(lián)合化療用于KRAS野生型mCRC患者的一線治療已得到廣泛認可[8]。隨著對腫瘤分子靶向治療研究深入，靶向治療藥物具有毒性低、靶向性好、效能高等特點，在改善晚期患者生活質量及控制腫瘤進展方面表現(xiàn)出獨特優(yōu)勢。本次研究發(fā)現(xiàn)不論在療效及疾病控制率上，雖然在統(tǒng)計學上無差異，但兩者合用均高于單純化療，說明西妥昔單抗聯(lián)合FOLFOX4化療方案近期療效明顯，其對結直腸癌細胞株具有明顯的抑制作用，可有效抑制腫瘤細胞生長。

研究發(fā)現(xiàn)在結直腸癌發(fā)生、發(fā)展過程中,可能由于PTEN蛋白的低表達或失表達不能有效抑制ERK磷酸化,使細胞發(fā)生癌變,并促進癌變細胞的浸潤、轉移[9]。各種外界刺激可通過細胞內(nèi)的多種受體激活P13K，激活后的第二信使與下游Akt結合，不僅能導致Akt從細胞質到細胞膜轉位，還可促使其構象發(fā)生改變，激活AKT，通過磷酸化作用激活或抑制其下游靶蛋白參與調(diào)節(jié)細胞的生長、增殖等多種生命活動。研究發(fā)現(xiàn)PTEN在結腸癌中的缺失表達有可能激活了P13K信號傳導通路，兩者共同參與了結腸癌的發(fā)生[10]，為結腸癌的個體化治療提供依據(jù)。在組織PTEN及P13K表達上，研究組治療后PTEN陽性率顯著高于對照組，治療后P13K陽性率顯著低于對照組(P<0.05)，說明西妥昔單抗聯(lián)合FOLFOX4化療方案治療老年結腸癌能降低P13K表達，提高PTEN表達，可能與西妥昔單抗對PTEN/P13K/AKT信號通路具有靶向作用有關。

本次研究發(fā)現(xiàn)采用西妥昔單抗聯(lián)合FOLFOX4化療方案治療老年結腸癌能提高組織PTEN表達，降低P13K表達，效果顯著。西妥昔單抗是腫瘤分子靶向治療的最新研究成果之一，其對直腸癌患者的個體化治療意義重大。本次由于人數(shù)及時間限制，對于西妥昔單抗通過何種機制對PTEN/P13K/AKT信號通路起到靶向作用尚不清楚，需要進一步研究。

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(編校：王儼儼)

Effect of cetuximab combined with FOLFOX4 on expressions of PTEN and P13K in colon cancer tissue of elderly patients

YU Yi-jian1Δ, YU Ling-yan2, WANG Shuang-zhu1

(1.Department of Pathology, Taizhou Hospital of Zhejiang Province, Taizhou 317000, China; 2. Department of Emergency,Taizhou Hospital of Zhejiang Province, Taizhou 317000, China)

ObjectiveTo investigate the effect of cetuximab combined with FOLFOX4 chemotherapy on expressions of cancer suppressor gene PTEN and P13K in colon cancer tissue of elderly patients.Methods62 cases of elderly patients with colon cancer from October 2013 to July 2015 in our hospital were selected and divided into two groups according to the different therapy. The control group (n=27)

pure FOLFOX4 chemotherapy and treatment group(n=35)received cetuximab on the basis of FOLFOX4 chemotherapy, with a consecutive treatment of 4 courses. The clinical curative effect and expressions of PTEN and P13K in colon cancer tissue were compared between two groups.ResultsThere were no significant difference in effective rate and disease control rate between treatment group and control group (51.4% vs. 44.4%,χ2=0.298,P=0.585; 80.0%vs. 62.9%,χ2=2.223,P=0.136 ). After treatment, the cells positive rate of PTEN in treatment group was higher than that in control group post-treatment (82.86%vs. 59.26%,P<0.05), and the cells positive rate of P13K in treatment group was lower than that in control group (37.14%vs. 62.96%,P<0.05).ConclusionCetuximab combined FOLFOX4 chemotherapy regimen could increase expression of PTEN and reduce P13K expression, which effect is remarkable in the treatment of elderly colon cancer.

cetuximab; FOLFOX4; elderly;colon cancer; PTEN; P13K

浙江省自然科學基金(LY13H160024)

虞義建，通信作者，男，本科，主治醫(yī)師，研究方向：腫瘤病理，E-mail：poyisb@163.com。

R735.3+5

A

10.3969/j.issn.1005-1678.2016.04.50