• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    銅綠假單胞菌產(chǎn)生耐藥性的機(jī)制

    2016-07-24 17:37:10孟鑫尚德靜
    中國(guó)生化藥物雜志 2016年12期
    關(guān)鍵詞:外膜外排內(nèi)酰胺酶

    孟鑫,尚德靜

    (遼寧師范大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院,遼寧 大連 116081)

    銅綠假單胞菌產(chǎn)生耐藥性的機(jī)制

    孟鑫,尚德靜Δ

    (遼寧師范大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院,遼寧 大連 116081)

    銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa,P.aeruginosa)與其它革蘭氏陰性菌相比,其外膜滲透性低,并且多種耐藥機(jī)制協(xié)同作用,更容易表現(xiàn)出對(duì)大多數(shù)抗生素極低的易感性,從而加入了“超級(jí)細(xì)菌”的行列。最近使用突變體庫(kù)篩選,微陣列技術(shù)和突變頻率分析已經(jīng)證實(shí)在體內(nèi)生長(zhǎng)條件或復(fù)雜的適應(yīng)條件下(如biofilm生長(zhǎng)或群體遷移),抗生素本身也能夠誘發(fā)非常大的基因團(tuán)簇突變從而導(dǎo)致耐藥性以及新的適應(yīng)性抗性。

    銅綠假單胞菌 耐藥性 適應(yīng)性抗性

    自臨床引入抗生素并濫用抗生素以來(lái),細(xì)菌具有越來(lái)越復(fù)雜的耐藥性,導(dǎo)致“超級(jí)細(xì)菌”的出現(xiàn)和擴(kuò)散,幾乎對(duì)市場(chǎng)上所有可用的抗菌藥物都有一定的抗性。銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa,P.aeruginosa)是革蘭氏陰性細(xì)菌,可以廣泛感染動(dòng)植物宿主[1],常見的醫(yī)院感染中有10~15%是由其引起的[2],主要引起了囊性纖維化(cystic fibrosis,CF)患者的慢性肺部感染[3-4]。此外,P.aeruginosa是呼吸機(jī)相關(guān)性肺炎(ventilator associated pneumonia,VAP)最常見的致病菌之一[5-6],P.aeruginosa引起的肺炎,常常導(dǎo)致急性肺損傷和繼發(fā)性膿毒癥,造成高死亡率[7-11]。

    與其他病原體相比,P.aeruginosa對(duì)多種抗生素(包括氨基糖苷類,氟喹諾酮類和β-內(nèi)酰胺類)顯示出較強(qiáng)的內(nèi)源性抗性。例如:對(duì)羧芐青霉素的內(nèi)源性抗性使得大多數(shù)β-內(nèi)酰胺類(包括美羅培南而非亞胺培南)抗生素的最小抑菌濃度(minimum inhibitory concentration,MIC)增加4~8倍;對(duì)非β-內(nèi)酰胺抗生素如喹諾酮,甲氧芐氨嘧啶,四環(huán)素和氯霉素也有一定的內(nèi)源性抗性。這種內(nèi)源性抗性主要源于其極低的外膜滲透性或外排系統(tǒng)被激活產(chǎn)生的去抑制作用。P.aeruginosa外膜中存在大量無(wú)效的成孔蛋白,限制了抗生素分子穿入細(xì)胞的速度[12],使得次級(jí)適應(yīng)性抗性機(jī)制能更有效地運(yùn)行,如增加外排功能和酶對(duì)抗生素的修飾。

    這些內(nèi)在機(jī)制是P.aeruginosa遺傳組成的一部分,可以通過(guò)突變來(lái)穩(wěn)定或增強(qiáng),有些突變影響耐藥性基因的表達(dá)及產(chǎn)物的活性從而導(dǎo)致MIC變大,使許多常見的抗生素對(duì)P.aeruginosa沒有效果,其他突變可能輕微地增加耐藥性,使P.aeruginosa在大多數(shù)抗生素作用下的易感性逐漸降低,此外,一些菌株還可以通過(guò)水平轉(zhuǎn)移(即菌株之間)抗性基因決定簇增加耐藥性。

    除了內(nèi)源性抗性這種比較傳統(tǒng)的耐藥機(jī)制,近年來(lái)發(fā)現(xiàn)P.aeruginosa對(duì)不斷變化的環(huán)境條件和脅迫有很強(qiáng)的適應(yīng)性,也可以引起對(duì)抗生素的適應(yīng)性抗性,如接觸抗生素,改變培養(yǎng)基條件或改變生長(zhǎng)狀態(tài)等[13],這種適應(yīng)性抗性的現(xiàn)象早就報(bào)道過(guò),然而,最近才研究其對(duì)臨床問題的廣泛適用性。

    雖然抗生素對(duì)多數(shù)由P.aeruginosa引起的感染有效,但是其仍可以通過(guò)多種方式產(chǎn)生耐藥性,導(dǎo)致耐藥率不斷增加,加之其內(nèi)源的高耐藥性,使得開發(fā)新的藥物非常具有挑戰(zhàn)性。為此,了解P.aeruginosa產(chǎn)生耐藥性的機(jī)制是非常重要的,本文描述了有關(guān)P.aeruginosa耐藥機(jī)制的最新發(fā)現(xiàn),并分析抗生素在臨床治療的相關(guān)現(xiàn)象。

    1 內(nèi)源性耐藥

    P.aeruginosa對(duì)大多數(shù)的抗生素,如青霉素G、氨基青霉素,第一代和第二代頭孢菌素等β-內(nèi)酰胺類藥物具有天然耐藥性,與其他革蘭氏陰性細(xì)菌相比,野生型的P.aeruginosa的外膜滲透性低(比大腸桿菌的滲透性低12~100倍),使其對(duì)抗生素具有極低的易感性。革蘭氏陰性細(xì)菌的外膜是抵制抗生素入侵的選擇性屏障[12],常常被比作分子篩,大多數(shù)親水性分子通過(guò)細(xì)菌細(xì)胞外膜上通道蛋白的水分子擴(kuò)散進(jìn)入細(xì)菌,所以擴(kuò)散效率與抗生素分子的體積大小有關(guān)。P.aeruginosa細(xì)胞外膜中成孔蛋白F(Outer membrane channel proteins F,OprF)數(shù)量較少,所形成的大的通道數(shù)量少,因此其對(duì)抗生素分子的進(jìn)入具有很大的限制,而其它形成小體積通道的成孔蛋白如外膜通道蛋白D(Outer membrane channel proteins D,OprD)和外膜通道蛋白B(Outer membrane channel proteins B,OprB)僅允許小體積的抗生素分子通過(guò),還有些特異性成孔蛋白如OprD,允許碳青霉烯類抗生素?cái)z入;某些陽(yáng)離子抗菌肽可以通過(guò)自我促進(jìn)方式橫過(guò)疏水的雙分子外膜。雖然低外膜滲透性影響了藥物大幅度攝取,但親水分子可以在幾秒鐘內(nèi)橫跨外膜,達(dá)到內(nèi)外平衡,說(shuō)明P.aeruginosa除了具有高內(nèi)源耐藥性,可能還有其它耐藥機(jī)制,如適應(yīng)性機(jī)制:外排泵被誘導(dǎo)表達(dá),引起藥物加速外排;抗性結(jié)瘤細(xì)胞分裂(resistant nodule cell division,RND)系統(tǒng)MexAB-OprM和MexXY-OprM的表達(dá),以及AmpC(一種由P.aeruginosa的染色體或質(zhì)粒介導(dǎo)產(chǎn)生的一類β-內(nèi)酰胺酶,屬β-內(nèi)酰胺酶Ambler分子結(jié)構(gòu)分類法中的C類)β-內(nèi)酰胺酶的產(chǎn)生也有助于降低抗生素跨外膜流動(dòng)[14]。

    此外,生物膜(biological film,biofilm)本身就具有抵制抗生素的能力。最近的研究提出了biofilm的抗性作用的幾種方式:第一,biofilm基質(zhì)可以充當(dāng)擴(kuò)散性滲透的屏障,阻止抗生素到達(dá)其靶位;第二,biofilm內(nèi)的微環(huán)境使細(xì)菌生長(zhǎng)緩慢,例如還原氧區(qū);第三,biofilm內(nèi)的細(xì)菌亞群似乎分化為持久性細(xì)菌,大大降低了對(duì)抗生素的易感性;最后,biofilm內(nèi)存在幾種特異性調(diào)節(jié)的抗性基因。

    最近,通過(guò)對(duì)導(dǎo)致抗生素敏感性增加的突變體的突變體庫(kù)篩選研究[15-19],提出了P.aeruginosa對(duì)抗生素內(nèi)源性抗藥的幾種新機(jī)制。即來(lái)自不同功能類的幾十個(gè)基因可參與突變,并且這種突變形成了基因團(tuán)簇的一部分。例如,突變株在許多基因中可以影響DNA的復(fù)制、重組及修復(fù),從而顯示對(duì)環(huán)丙沙星敏感性增加。有趣的是,細(xì)胞分裂基因ftsK中的突變對(duì)環(huán)丙沙星和β-內(nèi)酰胺也有抗性作用[16-18]。同樣地,參與藻酸鹽合成的基因突變對(duì)β-內(nèi)酰胺亞胺培南的易感性增加[20]。

    目前,在用亞抑制或致死濃度抗生素治療的微陣列實(shí)驗(yàn)中觀察到失調(diào)基因和耐藥性基因之間的重疊,這表明P.aeruginosa適應(yīng)性地激活防御機(jī)制以抵御抗生素的抑制作用。這些研究共同證明了P.aeruginosa的高耐藥性是幾種同時(shí)作用的機(jī)制最終作用的結(jié)果,其潛在的機(jī)制可能會(huì)在臨床結(jié)果中發(fā)揮重要作用。

    2 獲得性耐藥

    2.1 不同菌株間的水平轉(zhuǎn)移(horizontal transfer) 除內(nèi)源的高耐藥性之外,P.aeruginosa還可通過(guò)部分可遺傳性狀增加耐藥性[21]。獲得性耐藥的兩種類型包括遺傳元件的水平轉(zhuǎn)移和突變性。DNA元件(包括質(zhì)粒,轉(zhuǎn)座子,整合子,原噬菌體等)可以攜帶并且能夠通過(guò)接合、轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)的方式獲得抗生素抗性基因,從而增加抗生素抗性,甚至由于質(zhì)粒包含多個(gè)抗性盒而具有多藥耐藥性[22]。這種水平轉(zhuǎn)移主要增強(qiáng)了P.aeruginosa對(duì)氨基糖苷類和β-內(nèi)酰胺類的抗性,對(duì)其它幾類抗生素也有一定影響,例如:可移動(dòng)遺傳元件上的氨基糖苷修飾酶滅活氨基糖苷類,導(dǎo)致氨基糖苷類的各種化學(xué)修飾,同時(shí)引起30S核糖體亞基(氨基糖苷類的主要靶標(biāo))親和力降低[22]。一些P.aeruginosa菌株除了有AmpC β-內(nèi)酰胺酶外,還獲得了編碼新的β-內(nèi)酰胺酶的質(zhì)粒[23,從而對(duì)青霉素和頭孢菌素產(chǎn)生耐藥性,因此,P.aeruginosa對(duì)β-內(nèi)酰胺抗生素獲得性耐藥的主要機(jī)制是β-內(nèi)酰胺酶的產(chǎn)物對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素有抗性。目前,令人關(guān)注的是質(zhì)粒介導(dǎo)的廣譜β-內(nèi)酰胺酶(extended-spectrum β-lactamases,ESBLS)的增殖和金屬-β-內(nèi)酰胺酶(metal-beta-lactamase,MBL)對(duì)碳青霉烯類的滅活。

    2.2 突變性 獲得性耐藥的第二種形式是突變。細(xì)菌在脅迫條件下存活的關(guān)鍵機(jī)制之一是自發(fā)突變[16],對(duì)付某個(gè)單一抗生素的自發(fā)突變頻率是10-6至10-9。但在DNA損傷劑的存在下或在biofilm的生長(zhǎng)期間,突變率可以進(jìn)一步增加[25-30],例如:當(dāng)細(xì)菌與亞抑制濃度的環(huán)丙沙星預(yù)孵育時(shí),美羅培南的突變頻率增加了十倍;在biofilm生長(zhǎng)期間,抗氧化酶下調(diào)導(dǎo)致DNA損傷增加,被biofilm包被的細(xì)菌對(duì)環(huán)丙沙星抗性的突變頻率與浮游細(xì)胞相比增加了100倍以上,另外biofilm包被的細(xì)菌在休眠細(xì)胞持續(xù)發(fā)育等因素影響下對(duì)抗生素抗性增加1000倍;此外,抗生素抗性分離株的出現(xiàn)主要與DNA錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)中的突變相關(guān),由于錯(cuò)配修復(fù)基因mutS,mutL和DNA氧化修復(fù)系統(tǒng)基因mutT和mutY中的突變引發(fā)了超強(qiáng)突變體,通常在CF患者中發(fā)現(xiàn),它們通過(guò)增加β-內(nèi)酰胺酶和MexCD-OprJ外排泵的表達(dá)量增強(qiáng)抗生素抗性[31-33]。相關(guān)的研究還揭示了P.aeruginosa外膜蛋白OprD中含有亞胺培南結(jié)合點(diǎn)的環(huán)2和環(huán)3中的任何突變都能引起構(gòu)象變化導(dǎo)致碳青霉烯抗性。

    P.aeruginosa一旦發(fā)生“突破”突變,能導(dǎo)致外排泵過(guò)度表達(dá),抗生素?cái)z取減少,β-內(nèi)酰胺酶超量合成以及抗生素靶點(diǎn)改變,使抗生素失效[34]。P.aeruginosa臨床分離株中編碼MexR阻遏蛋白的染色體基因發(fā)生突變(即mexR突變),促進(jìn)mexA-mexB-oprM操縱子轉(zhuǎn)錄,使MexA-MexB-OprM過(guò)量表達(dá)從而對(duì)美羅培南易感性降低[35]。另外,由于mexZ突變,MexXY-OprM過(guò)表達(dá)導(dǎo)致P.aeruginosa臨床菌株對(duì)氨基糖苷,氟喹諾酮和頭孢吡肟產(chǎn)生抗性;特異性孔蛋白OprD中的突變降低了抗生素亞胺培南的攝取,因此導(dǎo)致臨床抗性;而mexT或mexS(nfxC)中的突變降低OprD表達(dá)以及促進(jìn)外排泵MexEF-OprN表達(dá)導(dǎo)致亞胺培南和多種抗生素抗性;P.aeruginosa中ampD突變性失活引起AmpC β-內(nèi)酰胺酶部分去阻遏表達(dá),使P.aeruginosa對(duì)第三代頭孢菌素有獲得性抗性;目標(biāo)酶的突變也可導(dǎo)致臨床意義上的抗性[36],例如gyrA和gyrB(回旋酶)以及parC和parE(拓?fù)洚悩?gòu)酶IV)的突變降低對(duì)氟喹諾酮結(jié)合親和力,進(jìn)而導(dǎo)致臨床抗性。

    最近使用Harvard文庫(kù)[37]篩選P.aeruginosaPA14研究表明在大多數(shù)條件下許多額外的突變可以導(dǎo)致耐藥性適度地增加(2倍),并且這種增加在臨床中很容易被遺漏。文獻(xiàn)中已經(jīng)提出低水平的抗性可以逐步演變?yōu)楦咚降目剐訹38],在galU(中央中間代謝),nuoG(能量代謝),mexZ(轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)子)或rplY(適應(yīng))中的單個(gè)突變只表現(xiàn)出對(duì)妥布霉素抗性增加兩倍,但是四重突變體對(duì)其抗性增加16倍[39],因此,引起MIC中度變化的幾種突變的積累可隨時(shí)間推移導(dǎo)致抗性逐步增加,最終導(dǎo)致高水平抗性。

    3 適應(yīng)性耐藥

    基因組時(shí)代的到來(lái)為更廣泛地理解適應(yīng)性耐藥的復(fù)雜現(xiàn)象提供了條件。目前了解到許多誘發(fā)因素能夠誘導(dǎo)細(xì)菌的適應(yīng)性耐藥,如抗生素,殺蟲劑,多胺,pH,厭氧生物,陽(yáng)離子和碳源,細(xì)菌biofilm形成和群體遷移等[13],這些誘發(fā)因素通過(guò)調(diào)節(jié)許多基因的表達(dá)從而對(duì)外排泵、細(xì)胞膜和酶產(chǎn)生影響。

    環(huán)境因素和亞抑制濃度的抗生素使得P.aeruginosa基因表達(dá)模式發(fā)生變化,這種變化讓細(xì)菌可以抵制隨后暴露在致死濃度下的抗生素環(huán)境。適應(yīng)性耐藥是可逆的,一旦去除誘導(dǎo)因子或條件,細(xì)菌就恢復(fù)到野生型的易感性,這也解釋了為什么在治療P.aeruginosa引起的感染病,體外效果好的抗生素在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)沒效果的原因[40]。此外,亞抑制濃度的氨基-輔酶通過(guò)氨基糖苷反應(yīng)調(diào)節(jié)劑(amino sugar response regulator,ARR)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)水平的次級(jí)中間體分子-環(huán)二GMP (cyclic-di-GMP )增強(qiáng)biofilm形成,亞MIC水平的抗生素通過(guò)抗生素靶基因中突變的積累促進(jìn)P.aeruginosa對(duì)CF患者肺環(huán)境的適應(yīng),最終以biofilm的形式在惡劣環(huán)境中生存[41]。

    聚陽(yáng)離子抗生素如氨基糖苷類,多粘菌素和陽(yáng)離子抗菌肽可以與P.aeruginosa外膜上的主要成分脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)相互作用,通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性取代LPS上的二價(jià)陽(yáng)離子而結(jié)合到LPS上,引起局部破壞,然后利用這些分子的兩親性特點(diǎn)通過(guò)自我促進(jìn)方式穿過(guò)細(xì)菌外膜細(xì)胞膜[42]。arnBCADTEF操縱子通過(guò)向LPS的脂質(zhì)A中添加4-氨基-阿拉伯糖,可以阻斷這種自我促進(jìn)的攝取,進(jìn)而導(dǎo)致耐藥性。對(duì)多粘菌素和陽(yáng)離子抗菌肽的適應(yīng)性耐藥可以由低濃度的二價(jià)陽(yáng)離子(Mg2+和Ca2+)誘導(dǎo)使兩個(gè)雙組分調(diào)節(jié)系統(tǒng)PhoPQ和PmrAB活化,隨后誘導(dǎo)arn操縱子。最近發(fā)現(xiàn)一個(gè)新的雙組分調(diào)節(jié)系統(tǒng)ParRS,證明在治療假單胞菌藥物多粘菌素和某些抗菌肽存在的情況下介導(dǎo)了arn操縱子的上調(diào),引起適應(yīng)性耐藥[43]。

    另一種適應(yīng)性耐藥機(jī)制是亞抑制濃度抗生素暴露而導(dǎo)致編碼外排泵基因的過(guò)表達(dá)。一般來(lái)說(shuō),與腸桿菌科細(xì)菌相比,P.aeruginosa臨床分離株對(duì)大多數(shù)抗生素更不敏感。研究發(fā)現(xiàn)某些細(xì)菌蛋白質(zhì)(OprM、OprJ、OprN)具有底物特異性,充當(dāng)了活性外排系統(tǒng)的組分,因此,P.aeruginosa內(nèi)源性耐藥水平在很大程度上由低膜滲透性和抗生素外排之間的相互作用決定[23]。例如,氨基糖苷類誘導(dǎo)MexXY外排泵過(guò)表達(dá),引起某些調(diào)節(jié)變化,使抗生素更快速地被泵出,并且細(xì)菌變得適應(yīng)性更強(qiáng)。Kohler等人[45]還報(bào)道了由于P.aeruginosa突變體nfxC過(guò)表達(dá),外排操縱子mexE-mexF-oprN對(duì)喹諾酮,氯霉素和曲美他汀產(chǎn)生抗性,同時(shí)nfxC突變體還降低了OprD外膜蛋白的表達(dá),因此其還顯示對(duì)碳青霉烯的交叉抗性。此外,肝泵常常介導(dǎo)多藥耐藥性。

    在biofilm中生長(zhǎng)的細(xì)菌也觀察到外排泵上調(diào)和其他耐藥機(jī)制,biofilm是在上皮和醫(yī)療裝置的表面上形成微生物聚集體的一種形式。和浮游細(xì)胞相比,在群體環(huán)境中生長(zhǎng)的細(xì)菌細(xì)胞表現(xiàn)出不同的轉(zhuǎn)錄組,并且對(duì)許多不同的抗生素有耐藥性[46-48]。耐藥性表現(xiàn)在幾個(gè)方面[49]:首先,基因組基因團(tuán)簇的研究證實(shí)許多基因的普遍失調(diào)(通過(guò)幾種機(jī)制,包括群體感應(yīng))能引起外排泵、酶、各種調(diào)節(jié)器及產(chǎn)物的表達(dá)上調(diào),從而引發(fā)耐藥性。其次,biofilm內(nèi)細(xì)菌在不同區(qū)域獲得的營(yíng)養(yǎng)成分不同,導(dǎo)致其代謝活性有差異,其中生長(zhǎng)在外層中的細(xì)胞代謝活躍,生長(zhǎng)在內(nèi)部的細(xì)胞生長(zhǎng)更慢,一些抗生素僅作用于生長(zhǎng)旺盛的細(xì)胞(例如大多數(shù)β-內(nèi)酰胺和氨基糖苷類),而多粘菌素優(yōu)先殺死活力差的細(xì)菌,所以對(duì)生長(zhǎng)在生物膜的不同區(qū)域的細(xì)菌都有影響。還有研究認(rèn)為[50],P.aeruginosa的部分耐藥性歸因于biofilm中的細(xì)胞的缺氧生長(zhǎng)模式,發(fā)生在厭氧固定相或非生長(zhǎng)狀態(tài)的細(xì)胞,易對(duì)抗生素產(chǎn)生抗性,而在biofilm內(nèi)生長(zhǎng)旺盛的細(xì)胞因?yàn)樯L(zhǎng)環(huán)境中有氧并且處于生長(zhǎng)狀態(tài),多對(duì)抗生素易感。雖然細(xì)胞外基質(zhì)已被建議作為抗生素滲透的屏障,但它也可能有濃縮細(xì)胞外酶的作用,例如,在細(xì)菌表面附近分泌β-內(nèi)酰胺酶。眾所周知,和浮游細(xì)胞相比,biofilm更具有持久性,可以容易地經(jīng)受住應(yīng)激條件(例如抗生素壓力)而緩慢生長(zhǎng)或不增殖。關(guān)于P.aeruginosa中持久性細(xì)胞發(fā)育的機(jī)制鮮為人知; 然而,已知spoT,relA,dksA,rpoS,dinG,spuC,algR和pilH突變可以影響持久性,這些基因可能是藥物克服P.aeruginosa持久性問題和減少耐藥性發(fā)展的良好靶標(biāo)。

    適應(yīng)性抗性也可能具有長(zhǎng)期后果。如果細(xì)胞沒有完全根除,一旦停止治療就可以觀察到細(xì)菌再生長(zhǎng)[51]。

    4 討論與展望

    P.aeruginosa可以在某些不復(fù)雜的感染中以相當(dāng)有效的方式被根除。但在慢性CF患者感染中,P.aeruginosa形成biofilm和群體遷移的生活方式,對(duì)廣譜抗生素具有高度耐藥性,即使當(dāng)對(duì)患者施用組合療法時(shí),也非常難以治療,并且P.aeruginosa對(duì)目前可獲得的抗生素的耐藥性每年都在增加。由于這些原因,迫切需要發(fā)現(xiàn)更有效的藥物和新的治療策略以對(duì)抗由該超級(jí)細(xì)菌引起的感染。因?yàn)榭股氐牟划?dāng)使用有助于適應(yīng)性增強(qiáng),從而耐藥性逐步甚至突破性上升。一旦出現(xiàn)突破性耐藥性,能被有效治療的機(jī)會(huì)大大降低,所以在臨床環(huán)境中施用的最佳抗生素劑量需要確定。目前出現(xiàn)的多藥耐藥P.aeruginosa菌株,還沒有有效的抗生素用于治療,并且這些多藥耐藥性菌株可能會(huì)變得更常見。

    進(jìn)一步的研究希望開發(fā)全新的、更有效的抗菌劑或出臺(tái)新的策略,可以最大限度地減少耐藥問題。此外,抗生素在體外和體內(nèi)效率可能存在差異,需要進(jìn)行更多的體內(nèi)研究,以重新評(píng)估某些抗生素的體內(nèi)效率,這將有助于改善抗生素在人體感染中的使用。

    [1] Rahme LG,Stevens EJ, Wolfort SF,et al.Common virulence factors for bacterial pathogenicity inplants and animals[J].Science,1995,268(5219):1899-1902.

    [2] Blanc DS,Petignat C,Janin B,Bille J,et al.Frequency and molecular diversity of Pseudomonas aeruginosa upon admission and during hospitalization:a prospective epidemiologic study[J].Clin Microbiol Infect,1998,4(5):242-247.

    [3] Lyczak J B, Cannon C L, Pier G B.Establishment of pseudomonas aeruginosa infection:lessons from a versatile opportunist[J].Microbes Infect,2000,2(9):1051-1060.

    [4] Rowe SM.Cystic fibrosis[J].N Engl J Med,2005,352(19),1992-2001.

    [5] Ramirez-Estrada S,Borgatta B,Rello J.Pseudomonas aeruginosa ventilator-assoc iated pneumonia management[J].Infect Drug Resist,2016,9(1):7-18.

    [6] Kollef MH,Chastre J,Fagon JY,et al.Global prospective epidemiologic and surveillance study of ventilator-associated pneumonia due to Pseudomonas aeruginosa[J]. Crit Care Med,2014,42(10),2178-2187.

    [7] Roy-Burman A,Savel RH,Racine S, et al.Type III protein secretion is associated with death in lower respiratory and systemic Pseudomonas aeruginosa infections[J].J Infect Dis,2001,183(12):1767-1774.

    [8] Hauser AR,Cobb E,Bodi M, et al.Type III protein secretion is associated with poor clinical outcomes in patients with ventilator-associated pneumonia caused by Pseudomonas aeruginosa[J].Crit Care Med,2002,30(3):521-528.

    [9] Wong-Beringer A,Wiener-Kronish J,Lynch S,et al.Comparison of type III secretion system virulence among fluoroquinolone-susceptible and-resistant clinical isolates of Pseudomonas aeruginosa.Clin.Microbiol[J].Infect,2008,14(4):330-336.

    [10] El-Solh AA,Hattemer A,Hauser AR,et al.Clinical outcomes of type III Pseudomonas aeruginosa bacteremia[J].Crit Care Med,2012,40(4):1157-1163.

    [11] Sullivan E,Bensman J,Lou M,et al.Risk of developing pneumonia is enhanced by the combined traits of fluoroquinolone resistance and type III secretion virulence in respiratory isolates of Pseudomonas aeruginosa[J].Crit Care Med,2014,42(1):48-56.

    [12] Nicas TI,Hancock REW.Pseudomonas aeruginosa outer membrane permeability:isolation of a porin protein F-deficient mutant[J].J.Bacteriol,1983,153(1):281-285.

    [13] Fernández L,Breidenstein EBM,Hancock REW.Creeping baselines and adaptive resistance to antibiotics.Drug Resist[J].2011,14(1):1-21.

    [14] Masuda N,Gotoh N,Ishii C,et al.Interplay between chromosomal b-lactamase and the MexAB-OprM efflux system in intrinsic resistance to β-lactams in Pseudomonas aeruginosa.Antimicrob[J].Agents Chemother,1999,43(2):400-402.

    [15] Fajardo A,Martínez-Martín N,Mercadillo M,et al.The neglected intrinsic resistome of bacterial pathogens[J].PLoS One,2008,3(2):e1619.

    [16] Alvarez-Ortega C,Wiegand I,Olivares J,et al.Genetic determinants involved in the susceptibility of Pseudomona aeruginosa to b-lactam antibiotics[J].Antimicrob Agents Chemother,2010,54(10):4159-4167.

    [17] Breidenstein EBM,Khaira BK,Wiegand I,et al.Complex ciprofloxacin resistome revealed by screening a Pseudomonas aeruginosa mutant library for altered susceptibility. Antimicrob[J].Agents Chemother,2008,52(12):4486-4491.

    [18] D?tsch A,Becker T,Pommerenke C,et al.Genomewide identiflcation of genetic determinants of antimicrobial drug resistance in Pseudomonas aeruginosa[J].Antimicrob Agents Chemother,2009,53(6):2522-2531.

    [19] Schurek KN,Marr AK,Taylor PK,et al.Novel genetic determinant of low-level aminoglycoside resistance in Pseudomonas aeruginosa[J].Antimicrob Agents Chemother,2008,52(12):4213-4219.

    [20] Germoni LAP,Bremer PJ,Lamont IL.The effect of alginate lyase on the gentamicin resistance of Pseudomonas aeruginosa in Mucoid Biofilms[J].J Appl Microbiol,2016,121(1):126-35.

    [21] Curiao T,Marchi E,Grandgirard D,et al.Multiple adaptive routes of Salmonella enterica Typhimurium to biocide and antibiotic exposure[J].BMC Genomics.2016,17(1):491.

    [22] Vakulenko SB,Mobashery S.Versatility of aminoglycosides and prospects for their future[J].Clin Microbiol Rev,2003,16(3):430-450.

    [23] Sacha P,Wieczorek P,Hauschild T,et al.Metallo-beta-lactamases of Pseudomonas aeruginosa-a novel mechanism resistance to beta-lactam antibiotics[J].Folia Histochem Cytobiol,2008,46(2):137-142.

    [24] Kenna DT,Doherty CJ,Foweraker J,et al.Hypermutability in environmental Pseudomonas aeruginosa and in populations causing pulmonary infection in individuals with cystic fibrosis[J].Microbiology,2007,153(6):1852-1859.

    [25] Tanimoto K,Tomita H,Fujimoto S,et al.Fluoroquinolone enhances the mutation frequency for meropenem-selected carbapenem resistance in Pseudomonas aeruginosa,but use of the high-potency drug doripenem inhibits mutant formation[J].Antimicrob Agents Chemother,2008,52(10):3795-3800.

    [26] Driffield K,Miller K,Bostock J M,et al.Increased mutability of Pseudomonas aeruginosa in biofilms[J].J Antimicrob Chemother,2008,61(5):1053-1056.

    [27] Costerton JW.Cystic fibrosis pathogenesis and the role of biofilms in persistent infection[J].Trends Microbiol,2001,9(2):50-52.

    [28] Anderson GG,O’Toole GA.Innate and induced resistance mechanisms of bacterial biofilms[J].Curr Top Microbiol Immunol,2008,322(1):85-105.

    [29] Bagge N,Schuster M,Hentzer M,et al.Pseudomonas aeruginosa biofilms exposed to imipenem exhibit changes in global gene expression and beta-lactamase and alginate production[J].Antimicrob Agents Chemother,2004,48(4):1175-1187.

    [30] Vettoretti L,Plesiat P,Muller C,et al.Efflux unbalance in Pseudomonas aeruginosa isolates from cystic fibrosis patients[J].Antimicrob Agents Chemother,2009,53(5):1987-1997.

    [31] Wiegand I,Marr AK,Breidenstein EB,et al.Mutator genes giving rise to decreased antibiotic susceptibility in Pseudomonas aeruginosa[J].Antimicrob Agents Chemother,2008,52(10):3810-3813.

    [32] Ferroni A,Guillemot D,Moumile K,et al.Effect of mutator P. aeruginosa on antibiotic resistance acquisition and respiratory function in cystic fibrosis[J].Pediatr Pulmonol.2009,44(8):820-825.

    [33] Mandsberg LF,Ciofu O,Kirkby N,et al.Antibiotic resistance in Pseudomonas aeruginosa strains with increased mutation frequency due to inactivation of the DNA oxidative repair system[J].Antimicrob Agents Chemother,2009,53(6):2483-2491.

    [34] Saito K,Yoneyama H,Nakae T.nalB-type mutations causing the overexpression of the MexA-MexB-OprM efflux pump are located in the mexR gene of the Pseudomonas aeruginosa chromosome[J].FEMS Microbiol Lett,1999,179(1):67-72.

    [35] ckland HG,Davenport PW,Lilley KS, et al.Mutation of nfxB causes global changes in the physiology and metabolism of Pseudomonas aeruginosa[J].J Proteome Res,2010,9(6):2957-2967.

    [36] Hooper DC.Emerging mechanisms of fiuoroquinolone resistance[J].Emerg Infect Dis,2001,7(2):337-341.

    [37] Liberati NT,Urbach JM,Miyata S,et al.An ordered,nonredundant library of Pseudomonas aeruginosa strain PA14 transposon insertion mutants[J].Proc Natl Acad Sci USA, 2006,103(8):2833-2838.

    [38] Fernández L,Breidenstein E B M,Hancock R E W.Creeping baselines and adaptive resistance to antibiotics[J].Drug Resist Updates,2011,14(1):1-21.

    [39] El’Garch F,Jeannot K,Hocquet D,et al.Cumulative effects of several nonenzymatic mechanisms on the resistance of Pseudomonas aeruginosa to aminoglycosides[J].Antimicrob Agents Chemother,2007,51(3):1016-1021.

    [40] Fick RB,Stillwell PC.Controversies in the management of pulmonary disease due to cystic ?brosis[J].Chest,1989,95(6):1319-1327.

    [41] Hoffman LR,D’Argenio DA,MacCoss MJ,et al.Aminoglycoside antibiotics induce bacterial biofilm formation[J].Nature,2005,436(7054):1171-1175.

    [42] Hancock REW.Resistance mechanisms in Pseudomonas aeruginosa and other nonfermentative Gram-negative bacteria[J].Clin.Infect Dis,1998,27 (Suppl 1):S93-S99.

    [43] Fernández L,Gooderham W J,Bains M,et al.Adaptive resistance to the ‘last hope’ antibiotics polymyxin B and colistin in Pseudomonas aeruginosa is mediated by the novel two-component regulatory system ParR-ParS[J].Antimicrob Agents Chemother,2010,54(8):3372-3382.

    [44] Livermore DM.Of Pseudomonas,porins,pumps and carbapenems[J].J Antimicrob Chemother,2001,47(3):247-250.

    [45] Kohler T,Epp SF,Curty LK,et al.Characterization of MexT,the regulator of the MexE-MexF-OprN multidrug efflux system of Pseudomonas aeruginosa[J].J Bacteriol,1999,181(20):6300-6305.

    [46] Costerton JW,Stewart PS,Greenberg EP.Bacterial biofilms:a common cause of persistent infections[J].Science,1999,284(5418):1318-1322.

    [47] O’Toole GA,Kolter R.Flagellar and twitching motility are necessary for Pseudomonas aeruginosa biofilms development[J].Mol Microbiol,1998,30(2):295-304.

    [48] Whiteley M,Bangera MG,Bumgarner RE,et al.Gene expression in Pseudomonas aeruginosa biofilms[J].Nature,2001,413(6858):860-864.

    [49] 李建華,宋豐貴.細(xì)菌生物膜形成與細(xì)菌耐藥機(jī)制研究進(jìn)展[J].中國(guó)新藥與臨床雜志,2008,27(1):70-74.

    [50] Borriello G,Werner E,Roe F,et al.Oxygen limitation contributes to antibiotic tolerance of Pseudomonas aeruginosa in biofilms[J].Antimicrob,2004,48(7):2659-2664.

    [51] Gjermansen M,Johansen HK,et al.Tolerance to the antimicrobial peptide colistin in Pseudomonas aeruginosa biofilms is linked to metabolically active cells and depends on the pmr and mexAB-oprM genes[J].Mol Microbiol,2008,68(1):223-240.

    (編校:師維康)

    Mechanism of drug resistance ofPseudomonasaeruginosa

    MENG Xin, SHANG De-jingΔ

    (Faculty of Life Science, Liaoning Normal University, Dalian 116081, China)

    Pseudomonasaeruginosaexhibits an inherently reduced susceptibility to most antibiotics compared with most other Gram-negative bacterial species because its low outer membrane permeability and the multiple ways in whichP.aeruginosacan become drug-resistant.Pseudomonasaeruginosahas joined the “super bacteria”. Recent researches, using mutant library screening, microarray technology, and mutation frequency analysis have demonstrated that antibiotics themselves can induce very large groups of genes in vivo growth conditions or complex adaptation conditions (for example, biofilm growth or swarming motility), resulting in resistance as well as new forms of adaptive resistance.

    Pseudomonasaeruginosa; resistance; adaptive resistance

    10.3969/j.issn.1005-1678.2016.12.058

    孟鑫,女,碩士在讀,研究方向:分子遺傳學(xué),E-mail:1317302082@qq.com;尚德靜,通信作者,女,博士,教授,博士生導(dǎo)師,研究方向:生物化學(xué)與分子生物學(xué),E-mail:djshang@lnnu.edu.cn。

    R453.2

    A

    猜你喜歡
    外膜外排內(nèi)酰胺酶
    tolC基因?qū)Υ竽c埃希菌膜完整性及中藥單體抗菌活性的影響
    產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶大腸桿菌研究現(xiàn)狀
    房間隔造口術(shù)聯(lián)合體外膜肺治療急性呼吸窘迫綜合征的大動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究
    膠東國(guó)際機(jī)場(chǎng)1、4號(hào)外排渠開挖支護(hù)方案研究
    心大靜脈消融外膜起源的特發(fā)性室性心律失常的心電圖的特征
    外排體促進(jìn)骨再生的研究進(jìn)展
    三排式吻合器中的雙吻合釘推進(jìn)器對(duì)
    β-內(nèi)酰胺酶抑制劑合劑的最新研究進(jìn)展
    產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶大腸埃希菌的臨床分布及耐藥性分析
    移植血管外膜早期NADPH氧化酶激活和新生血管形成
    免费在线观看黄色视频的| 搡老乐熟女国产| 午夜福利视频精品| 激情视频va一区二区三区| 欧美精品高潮呻吟av久久| 亚洲成av片中文字幕在线观看| a级毛片在线看网站| 国产单亲对白刺激| 色综合婷婷激情| 不卡一级毛片| 99re6热这里在线精品视频| 亚洲精华国产精华精| 成年女人毛片免费观看观看9 | 91九色精品人成在线观看| 亚洲成人免费电影在线观看| 国产91精品成人一区二区三区 | 国产一区二区三区视频了| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 十分钟在线观看高清视频www| 国精品久久久久久国模美| 成人特级黄色片久久久久久久 | 日本vs欧美在线观看视频| xxxhd国产人妻xxx| 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲男人天堂网一区| 一级,二级,三级黄色视频| 婷婷丁香在线五月| 国产精品久久久久久精品电影小说| 精品亚洲成国产av| 色94色欧美一区二区| 69精品国产乱码久久久| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 中文字幕人妻熟女乱码| 午夜福利视频精品| 免费黄频网站在线观看国产| 久久中文字幕一级| 成人三级做爰电影| av电影中文网址| 91字幕亚洲| 久久久久精品人妻al黑| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产精品电影一区二区三区 | 国产精品二区激情视频| 午夜精品久久久久久毛片777| 两个人看的免费小视频| 动漫黄色视频在线观看| 欧美日本中文国产一区发布| 久久这里只有精品19| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产精品久久久久久精品古装| 亚洲视频免费观看视频| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 美女主播在线视频| 精品熟女少妇八av免费久了| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 在线av久久热| 国产成人免费无遮挡视频| svipshipincom国产片| 欧美一级毛片孕妇| 国产精品偷伦视频观看了| av片东京热男人的天堂| 国产精品欧美亚洲77777| 在线播放国产精品三级| 色尼玛亚洲综合影院| 亚洲精品av麻豆狂野| 丝袜在线中文字幕| 久久久久精品人妻al黑| 国产国语露脸激情在线看| 丁香六月欧美| 丁香欧美五月| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 免费看十八禁软件| 国产av精品麻豆| 大香蕉久久网| 另类亚洲欧美激情| 精品人妻在线不人妻| 久久天堂一区二区三区四区| 99re6热这里在线精品视频| 老汉色av国产亚洲站长工具| 黄色视频,在线免费观看| 人成视频在线观看免费观看| 精品熟女少妇八av免费久了| av网站在线播放免费| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 男女床上黄色一级片免费看| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 大香蕉久久成人网| 久久九九热精品免费| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 欧美变态另类bdsm刘玥| 91精品三级在线观看| 欧美日韩视频精品一区| 热re99久久国产66热| av国产精品久久久久影院| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 午夜激情av网站| 激情视频va一区二区三区| 国产av一区二区精品久久| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 色视频在线一区二区三区| 国产精品久久久久久精品古装| 国产一区二区三区综合在线观看| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 中文字幕精品免费在线观看视频| 一区二区日韩欧美中文字幕| 日本av免费视频播放| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 午夜老司机福利片| 男男h啪啪无遮挡| 国产精品影院久久| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 久久国产精品大桥未久av| 亚洲人成伊人成综合网2020| 美女国产高潮福利片在线看| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 成人18禁在线播放| 欧美+亚洲+日韩+国产| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 99久久精品国产亚洲精品| 热99国产精品久久久久久7| av欧美777| 1024视频免费在线观看| 国产精品电影一区二区三区 | 亚洲九九香蕉| 制服人妻中文乱码| 悠悠久久av| 午夜福利免费观看在线| 狂野欧美激情性xxxx| 日韩免费高清中文字幕av| 免费在线观看影片大全网站| 纯流量卡能插随身wifi吗| 精品人妻1区二区| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 黄色视频在线播放观看不卡| 91成人精品电影| 亚洲国产精品一区二区三区在线| svipshipincom国产片| 另类精品久久| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 精品人妻熟女毛片av久久网站| 国产极品粉嫩免费观看在线| 美女国产高潮福利片在线看| 国产一区二区三区综合在线观看| 日韩中文字幕视频在线看片| 精品国产亚洲在线| 天堂中文最新版在线下载| 亚洲欧洲日产国产| 91字幕亚洲| 国产亚洲精品久久久久5区| 欧美另类亚洲清纯唯美| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 免费观看av网站的网址| 黑人欧美特级aaaaaa片| 丁香欧美五月| 精品熟女少妇八av免费久了| 老司机在亚洲福利影院| 亚洲中文av在线| 欧美黄色淫秽网站| 国产精品1区2区在线观看. | 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 久久精品亚洲av国产电影网| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 国产精品影院久久| 中亚洲国语对白在线视频| 国产成人av激情在线播放| 久久精品国产a三级三级三级| 99国产精品一区二区蜜桃av | 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 99国产精品一区二区蜜桃av | 老司机靠b影院| 国产男女超爽视频在线观看| 中文字幕最新亚洲高清| 涩涩av久久男人的天堂| 男女免费视频国产| 精品高清国产在线一区| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 精品欧美一区二区三区在线| 午夜精品国产一区二区电影| 亚洲精华国产精华精| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 午夜福利视频在线观看免费| 欧美精品一区二区免费开放| 在线播放国产精品三级| 真人做人爱边吃奶动态| 99国产精品一区二区三区| 黄色成人免费大全| 精品亚洲成国产av| 亚洲,欧美精品.| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 一区在线观看完整版| 午夜91福利影院| 少妇被粗大的猛进出69影院| 亚洲伊人久久精品综合| 日韩中文字幕欧美一区二区| 大型av网站在线播放| 最近最新中文字幕大全电影3 | 少妇被粗大的猛进出69影院| 最新在线观看一区二区三区| 婷婷成人精品国产| 免费观看av网站的网址| 国产1区2区3区精品| 成年动漫av网址| 一区在线观看完整版| 国产精品熟女久久久久浪| 国产精品二区激情视频| 亚洲国产中文字幕在线视频| 嫩草影视91久久| 国产成人精品久久二区二区91| 久久99热这里只频精品6学生| 波多野结衣av一区二区av| 一边摸一边抽搐一进一小说 | 精品亚洲乱码少妇综合久久| 香蕉国产在线看| 欧美性长视频在线观看| 国产三级黄色录像| 久久ye,这里只有精品| 91字幕亚洲| 久久精品91无色码中文字幕| 午夜福利影视在线免费观看| 大香蕉久久网| 国产一区二区 视频在线| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 免费观看a级毛片全部| 视频区图区小说| 久久国产精品影院| 中文字幕人妻丝袜制服| 多毛熟女@视频| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 又大又爽又粗| 一本大道久久a久久精品| 十八禁网站免费在线| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 欧美日韩亚洲高清精品| 男女边摸边吃奶| 午夜日韩欧美国产| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 久久久国产一区二区| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 中亚洲国语对白在线视频| 亚洲欧美一区二区三区久久| 捣出白浆h1v1| av网站在线播放免费| 亚洲全国av大片| 久久久久国内视频| 色婷婷久久久亚洲欧美| av有码第一页| 国产精品一区二区免费欧美| 99re在线观看精品视频| aaaaa片日本免费| 动漫黄色视频在线观看| 久久精品成人免费网站| 99国产精品一区二区三区| 成年人免费黄色播放视频| 国产精品欧美亚洲77777| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 一进一出抽搐动态| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 国产精品二区激情视频| 伦理电影免费视频| 国产在线观看jvid| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 亚洲欧美激情在线| 最近最新免费中文字幕在线| 美女国产高潮福利片在线看| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产成人免费无遮挡视频| 国产欧美日韩一区二区三| 成年女人毛片免费观看观看9 | 精品视频人人做人人爽| 国产成人欧美在线观看 | 国产午夜精品久久久久久| 黄色丝袜av网址大全| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 99热国产这里只有精品6| 一二三四在线观看免费中文在| 成在线人永久免费视频| 丁香六月欧美| 国产欧美亚洲国产| 久久久久久久久免费视频了| 久久久精品免费免费高清| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 久久久精品区二区三区| 黄片大片在线免费观看| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 看免费av毛片| 亚洲男人天堂网一区| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 涩涩av久久男人的天堂| 日本vs欧美在线观看视频| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 欧美日韩视频精品一区| 欧美日韩黄片免| 1024视频免费在线观看| 九色亚洲精品在线播放| 满18在线观看网站| www日本在线高清视频| 色94色欧美一区二区| 久久久久久久久免费视频了| 欧美黄色片欧美黄色片| 黑人欧美特级aaaaaa片| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 国产一区二区 视频在线| 日韩欧美一区视频在线观看| 久久久久国产一级毛片高清牌| 亚洲伊人色综图| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 日韩欧美免费精品| 99九九在线精品视频| 十八禁网站网址无遮挡| 一级毛片女人18水好多| 午夜福利,免费看| 在线播放国产精品三级| 少妇被粗大的猛进出69影院| 国产片内射在线| 日韩精品免费视频一区二区三区| 日韩中文字幕视频在线看片| 天天影视国产精品| 极品人妻少妇av视频| 成人av一区二区三区在线看| 99精品久久久久人妻精品| 亚洲欧美激情在线| 国产精品偷伦视频观看了| 久久国产精品影院| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国产精品亚洲一级av第二区| 久久精品成人免费网站| 亚洲熟女毛片儿| 色精品久久人妻99蜜桃| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 久久人人97超碰香蕉20202| 男人操女人黄网站| 老熟妇仑乱视频hdxx| 一区在线观看完整版| 在线观看www视频免费| a级毛片在线看网站| 国产精品久久久久久精品电影小说| 日本a在线网址| 中文字幕精品免费在线观看视频| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 高清欧美精品videossex| 国产成人精品在线电影| 搡老熟女国产l中国老女人| 国产三级黄色录像| 精品卡一卡二卡四卡免费| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 岛国毛片在线播放| 国产1区2区3区精品| 大香蕉久久网| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 免费高清在线观看日韩| 美国免费a级毛片| 久久精品人人爽人人爽视色| 热re99久久国产66热| 90打野战视频偷拍视频| 9191精品国产免费久久| 黑丝袜美女国产一区| 99九九在线精品视频| 国产男女超爽视频在线观看| 亚洲专区字幕在线| 一夜夜www| 热re99久久国产66热| 国产主播在线观看一区二区| 99热国产这里只有精品6| 精品国内亚洲2022精品成人 | 一级毛片电影观看| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 国产在线免费精品| e午夜精品久久久久久久| 日韩一区二区三区影片| 久久人妻熟女aⅴ| 国产成人av激情在线播放| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 中文欧美无线码| 高清欧美精品videossex| 亚洲熟妇熟女久久| 亚洲国产中文字幕在线视频| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 日韩大码丰满熟妇| 无限看片的www在线观看| 捣出白浆h1v1| 国产精品 欧美亚洲| 亚洲精品在线观看二区| 大香蕉久久成人网| 老司机亚洲免费影院| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 搡老乐熟女国产| 免费少妇av软件| 亚洲天堂av无毛| 日韩中文字幕欧美一区二区| 国产欧美亚洲国产| 精品午夜福利视频在线观看一区 | 少妇精品久久久久久久| 久久亚洲真实| 亚洲成人手机| 亚洲久久久国产精品| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 亚洲 国产 在线| 黄片大片在线免费观看| 老司机亚洲免费影院| 国产精品.久久久| 91大片在线观看| 男女无遮挡免费网站观看| 最黄视频免费看| 在线观看66精品国产| 男女之事视频高清在线观看| 亚洲色图综合在线观看| 久久中文看片网| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 波多野结衣一区麻豆| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 色婷婷av一区二区三区视频| 国产日韩欧美在线精品| 2018国产大陆天天弄谢| 亚洲第一av免费看| 免费观看a级毛片全部| 水蜜桃什么品种好| 黑丝袜美女国产一区| 午夜免费鲁丝| 少妇被粗大的猛进出69影院| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 老司机午夜十八禁免费视频| 少妇 在线观看| 久久99一区二区三区| 午夜91福利影院| 美女高潮到喷水免费观看| 亚洲情色 制服丝袜| 国产精品久久久人人做人人爽| 国产单亲对白刺激| 亚洲伊人色综图| 欧美日韩成人在线一区二区| 国产日韩欧美亚洲二区| 久久这里只有精品19| 国产成人系列免费观看| 黄色丝袜av网址大全| www.999成人在线观看| 免费在线观看日本一区| 免费高清在线观看日韩| 下体分泌物呈黄色| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 成人国产一区最新在线观看| 在线av久久热| 热99久久久久精品小说推荐| 亚洲精品av麻豆狂野| 叶爱在线成人免费视频播放| 国产精品一区二区精品视频观看| 男人操女人黄网站| 色在线成人网| 久久久久精品国产欧美久久久| 精品乱码久久久久久99久播| 亚洲中文日韩欧美视频| 69av精品久久久久久 | 极品人妻少妇av视频| 日本欧美视频一区| 伦理电影免费视频| 成人免费观看视频高清| www日本在线高清视频| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 男人舔女人的私密视频| 成年女人毛片免费观看观看9 | videosex国产| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 免费看十八禁软件| 成人国产一区最新在线观看| av网站在线播放免费| 日韩欧美三级三区| 成人精品一区二区免费| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 国产极品粉嫩免费观看在线| 欧美在线黄色| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 少妇 在线观看| 99精品久久久久人妻精品| 丝瓜视频免费看黄片| 一级片'在线观看视频| 欧美午夜高清在线| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 黄频高清免费视频| 国产亚洲一区二区精品| 久久这里只有精品19| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 国产一区二区三区综合在线观看| 欧美日韩视频精品一区| 午夜视频精品福利| 国产成人欧美在线观看 | 99riav亚洲国产免费| 男人舔女人的私密视频| 国产亚洲欧美精品永久| 欧美日本中文国产一区发布| 热99国产精品久久久久久7| 嫁个100分男人电影在线观看| 三上悠亚av全集在线观看| 久久久久国产一级毛片高清牌| a级片在线免费高清观看视频| 日日夜夜操网爽| av有码第一页| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 91成人精品电影| 亚洲精品国产色婷婷电影| 在线天堂中文资源库| 成人永久免费在线观看视频 | 久久精品国产a三级三级三级| 午夜久久久在线观看| 国产欧美亚洲国产| 国产精品久久久久久精品电影小说| 国产欧美日韩一区二区精品| 国产日韩欧美在线精品| 日本av手机在线免费观看| 俄罗斯特黄特色一大片| 亚洲熟女毛片儿| 日本vs欧美在线观看视频| 少妇被粗大的猛进出69影院| 色播在线永久视频| a级毛片在线看网站| 久久婷婷成人综合色麻豆| 少妇的丰满在线观看| 宅男免费午夜| 午夜福利影视在线免费观看| 国产精品偷伦视频观看了| 国产野战对白在线观看| 正在播放国产对白刺激| 久久国产精品大桥未久av| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 久久天堂一区二区三区四区| 91精品国产国语对白视频| 亚洲一码二码三码区别大吗| 久久久久久人人人人人| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 国产在线免费精品| av免费在线观看网站| 黄色片一级片一级黄色片| 亚洲国产看品久久| 久久国产亚洲av麻豆专区| a级毛片在线看网站| 老熟女久久久| 一级毛片电影观看| 国产亚洲欧美在线一区二区| 国产亚洲精品一区二区www | 精品久久蜜臀av无| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 热99国产精品久久久久久7| 免费观看a级毛片全部| 久久狼人影院| 精品高清国产在线一区| 久久久久国内视频| 无遮挡黄片免费观看| 午夜免费鲁丝| 亚洲黑人精品在线| 狠狠精品人妻久久久久久综合| √禁漫天堂资源中文www| av有码第一页| 亚洲五月色婷婷综合| 女人精品久久久久毛片| 亚洲,欧美精品.| 老司机深夜福利视频在线观看| 波多野结衣一区麻豆| avwww免费| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 久久人人97超碰香蕉20202| av一本久久久久| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 在线观看66精品国产| 女人精品久久久久毛片| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 热99国产精品久久久久久7| 在线观看免费午夜福利视频| 人妻 亚洲 视频| 91九色精品人成在线观看| 欧美成狂野欧美在线观看| 国产又色又爽无遮挡免费看| 精品高清国产在线一区| 免费人妻精品一区二区三区视频| 丁香欧美五月| 91精品国产国语对白视频| 亚洲av国产av综合av卡| 欧美精品高潮呻吟av久久| 一级毛片精品| 精品福利永久在线观看| 999精品在线视频| 午夜成年电影在线免费观看| 99国产综合亚洲精品| 国产成人欧美| 美女扒开内裤让男人捅视频| 老司机影院毛片| 高清欧美精品videossex| 久久亚洲真实| 国产精品免费视频内射| 亚洲一区二区三区欧美精品| 丁香六月欧美| 国产免费现黄频在线看| 中文字幕精品免费在线观看视频| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 国产免费av片在线观看野外av| 亚洲专区字幕在线| 99热国产这里只有精品6| 18禁国产床啪视频网站| 女性被躁到高潮视频| 国产麻豆69| www.999成人在线观看| 国产精品99久久99久久久不卡| 亚洲免费av在线视频| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产精品亚洲一级av第二区| 亚洲国产欧美在线一区| 国产一区二区三区在线臀色熟女 |