D-異苯環(huán)戊胺對(duì)小鼠急性毒性和一般行為活動(dòng)及自主活動(dòng)的影響實(shí)驗(yàn)

李宗河， 王日方彤， 陳小平， 李艷友

(1.成都大學(xué) 四川抗菌素工業(yè)研究所抗生素研究與再評(píng)價(jià)四川重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 四川 成都　610052；2.北京嘉事聯(lián)博醫(yī)藥科技有限公司， 北京　100076)

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D-異苯環(huán)戊胺對(duì)小鼠急性毒性和一般行為活動(dòng)及自主活動(dòng)的影響實(shí)驗(yàn)

李宗河1， 王日方彤1， 陳小平2， 李艷友2

(1.成都大學(xué) 四川抗菌素工業(yè)研究所抗生素研究與再評(píng)價(jià)四川重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 四川 成都610052；2.北京嘉事聯(lián)博醫(yī)藥科技有限公司， 北京100076)

摘要：目的：觀察D-異苯環(huán)戊胺單次灌胃給藥對(duì)小鼠的急性毒性和一般性無(wú)活動(dòng)、自主活動(dòng)的影響.方法：通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物灌胃單次給予0.5 g·kg-1、0.8 g·kg-1、1.4 g·kg-1和2.4 g·kg-1劑量的D-苯異環(huán)戊胺后，觀察給藥后產(chǎn)生的急性毒性反應(yīng)情況；分別給小鼠單次灌胃20 mg·kg-1、90 mg·kg-1和400 mg·kg-1的D-異苯環(huán)戊胺后，觀察對(duì)小鼠一般行為活動(dòng)和自主活動(dòng)的影響.結(jié)果：急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，D-異苯環(huán)戊胺小鼠灌胃單次給藥在劑量0.5 g.kg-1、0.8 g·kg-1、1.4 g·kg-1和2.4 g·kg-1時(shí)呈劑量—效應(yīng)關(guān)系，其最大無(wú)毒性反應(yīng)劑量接近0.5 g·kg-1，最大耐受量為1.4 g·kg-1，最低致死劑量為2.4 g·kg-1；各劑量D-異苯環(huán)戊胺單次灌胃給藥均未見(jiàn)對(duì)小鼠一般行為活動(dòng)和自主活動(dòng)有明顯影響.結(jié)論：D-異苯環(huán)戊胺單次灌胃給藥對(duì)小鼠最大耐受量為1.4 g·kg-1，最低致死劑量為2.4 g·kg-1，無(wú)嚴(yán)重急性毒性反應(yīng)，該化合物無(wú)嚴(yán)重急性中毒的風(fēng)險(xiǎn)；單次灌胃給藥20 mg·kg-1、90 mg·kg-1和400 mg·kg-1的D-異苯環(huán)戊胺對(duì)小鼠一般行為活動(dòng)和自主活動(dòng)沒(méi)有明顯影響.

關(guān)鍵詞：D-異苯環(huán)戊胺；一般行為；自主活動(dòng)

0引言

肥胖已成為一種全球性的威脅人類(lèi)健康的流行病，且肥胖患者較正常人更易罹患冠心病、高血壓、高脂血癥、糖尿病、腦血管意外等，特別是內(nèi)臟脂肪堆積常伴隨胰島素抵抗或II型糖尿病、高尿酸血癥等所謂的代謝綜合征發(fā)生[1]，全球每年因此而死亡的人數(shù)大概有 300 萬(wàn)，世界衛(wèi)生組織將肥胖認(rèn)定為全球成人最大的慢性疾病[2-3].西布曲明是一種減肥輔助治療藥物，2010年10月SFDA綜合國(guó)內(nèi)外監(jiān)測(cè)和研究資料的評(píng)估結(jié)果以及國(guó)內(nèi)臨床專(zhuān)家的意見(jiàn)，認(rèn)為西布曲明可能會(huì)造成嚴(yán)重心血管風(fēng)險(xiǎn)，減肥治療的風(fēng)險(xiǎn)大于效益，建議治療肥胖的患者與醫(yī)生商討可替代的藥物.D-異苯環(huán)戊胺是通過(guò)對(duì)雙脫甲基西布曲明結(jié)構(gòu)上的游離氨基進(jìn)行氨基酸?；男揎椂@得的新化合物，通過(guò)動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)，證明D-異苯環(huán)戊胺對(duì)肥胖模型大鼠均有不同程度的減肥作用，臟器系統(tǒng)解剖觀察未見(jiàn)異常，其作用甚至優(yōu)于西布曲明[4].研究還發(fā)現(xiàn)，D-異苯環(huán)戊胺可降低大鼠體脂質(zhì)量、減小脂肪細(xì)胞直徑、增加脂肪細(xì)胞個(gè)數(shù)，同時(shí)能顯著降低肥胖大鼠的血糖、血脂水平，改善肥胖大鼠的代謝紊亂狀況[5].為確保D-異苯環(huán)戊胺使用的安全性，本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了D-異苯環(huán)戊胺對(duì)小鼠急性毒性和一般行為活動(dòng)及自主活動(dòng)的影響的研究，擬為D-異苯環(huán)戊胺的臨床研究提供安全依據(jù).

1材料

1.1藥物與試劑

D-異苯環(huán)戊胺，由北京嘉事聯(lián)博醫(yī)藥科技有限公司生產(chǎn)提供，用滅菌蒸餾水配制成所需濃度.

1.2動(dòng)物

昆明種(KM)小鼠，體質(zhì)量18～22 g，SPF級(jí)，實(shí)驗(yàn)中選擇檢疫合格的動(dòng)物，雌雄各半，購(gòu)于上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司(許可證號(hào)：SCXK(滬)2007-0005)，飼養(yǎng)于中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)安全性評(píng)價(jià)研究中心屏障系統(tǒng)內(nèi).飼料為鼠全價(jià)顆粒飼料，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司生產(chǎn)(生產(chǎn)許可證號(hào)，滬飼審(2008)04002)，符合GB14924.3-2001標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)鈷60照射滅菌后使用；飲用水為高壓蒸汽滅菌的自來(lái)水，參照國(guó)標(biāo)GB/T14925-94和GB5749-85， 每6個(gè)月檢測(cè)一次，由第三方進(jìn)行，檢測(cè)結(jié)果符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn).

1.3儀器

ZIL-2型程控自主活動(dòng)箱，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所生產(chǎn).

2方法

本實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照《化學(xué)藥物一般藥理學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則》要求進(jìn)行設(shè)計(jì)實(shí)施.

2.1灌胃D-異苯環(huán)戊胺對(duì)小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)

將檢疫合格小鼠隨機(jī)分5組：溶媒對(duì)照組、D-異苯環(huán)戊胺低、中、高、較高4個(gè)劑量組，每組10只，雌雄各半，D-異苯環(huán)戊胺低、中、高、較高劑量組，分別給小鼠灌胃給予0.5 g·kg-1、0.8 g·kg-1、1.4 g·kg-1和2.4 g·kg-1的配制液，溶媒對(duì)照組給予等容積蒸餾水.給藥后進(jìn)行籠旁觀察和記錄，連續(xù)2周，每天觀察至少2次，每周稱(chēng)量體質(zhì)量2次.觀察結(jié)束后對(duì)動(dòng)物進(jìn)行系統(tǒng)解剖觀察.

2.2灌胃D-異苯環(huán)戊胺對(duì)小鼠一般行為活動(dòng)影響

參照文獻(xiàn)[6-7]中的相關(guān)方法，將檢疫合格的小鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為4組：溶媒對(duì)照組與D-異苯環(huán)戊胺低、中、高3個(gè)劑量組，每組10只，雌雄各半，D-異苯環(huán)戊胺低、中、高劑量動(dòng)物組分別單次灌胃給予20 mg·kg-1、90 mg·kg-1、400 mg·kg-1的配制液，溶媒對(duì)照組給予等容積蒸餾水，給藥后即刻觀察動(dòng)物的一般行為表現(xiàn)、姿勢(shì)、步態(tài)、有無(wú)流涎、肌顫等變化，觀察至給藥結(jié)束后24 h.

2.3灌胃D-異苯環(huán)戊胺對(duì)小鼠自法活動(dòng)影響

參照文獻(xiàn)[6-7]中的相關(guān)方法，將檢疫合格的小鼠按體質(zhì)量分層隨機(jī)分為5組：溶媒對(duì)照組和D-異苯環(huán)戊胺低、中、高3個(gè)劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組，每組12只，雌雄各半，D-異苯環(huán)戊胺低、中、高劑量組動(dòng)物分別灌胃給予20 mg·kg-1、90 mg·kg-1、400 mg·kg-1的配制液，陽(yáng)性對(duì)照艾司唑侖劑量為5 mg·kg-1，溶媒對(duì)照組給予等容積蒸餾水，給藥1 h后進(jìn)行試驗(yàn).根據(jù)平行對(duì)照的原則，每次從不同組里按順序取1只小鼠放入獨(dú)立的自主活動(dòng)箱內(nèi)，待其適應(yīng)5 min后開(kāi)始記錄10 min內(nèi)各箱內(nèi)小鼠活動(dòng)數(shù).

2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3結(jié)果

3.1灌胃D-異苯環(huán)戊胺對(duì)小鼠一般行為活動(dòng)影響

實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：1.4 g·kg-1和2.4 g·kg-1劑量組動(dòng)物給藥后1 h后出現(xiàn)興奮竄跳現(xiàn)象，3 h左右出現(xiàn)困乏嗜睡現(xiàn)象，2.4 g·kg-1劑量組1只雄性動(dòng)物死亡，24 h后恢復(fù)正?；顒?dòng)；各組存活小鼠體重增長(zhǎng)變化沒(méi)有明顯差異，經(jīng)大體解剖未發(fā)現(xiàn)組織器官有明顯異常.具體體質(zhì)量變化見(jiàn)表1、表2.

表1　D-異苯環(huán)戊胺灌胃小鼠單次給藥毒性試驗(yàn)雌性動(dòng)物給藥后體質(zhì)量統(tǒng)計(jì)表±s)

表2　D-異苯環(huán)戊胺灌胃小鼠單次給藥毒性試驗(yàn)

3.2灌胃D-異苯環(huán)戊胺對(duì)小鼠一般行為活動(dòng)影響

實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：在對(duì)小鼠灌胃20 mg·kg-1、90 mg·kg-1和400 mg·kg-1的D-異苯環(huán)戊胺和等體積的蒸餾水后至給藥后240 min，觀察小鼠的一般行為表現(xiàn)、姿勢(shì)、步態(tài)等變化，未見(jiàn)D-異苯環(huán)戊胺對(duì)小鼠有主要藥效學(xué)以外的一般行為活動(dòng)的影響.

3.3灌胃D-異苯環(huán)戊胺對(duì)小鼠自主活動(dòng)影響

實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：在對(duì)小鼠灌胃給予20 mg·kg-1、90 mg·kg-1、400 mg·kg-1的D-異苯環(huán)戊胺后，90 mg·kg-1和400 mg·kg-1組小鼠自主活動(dòng)次數(shù)有減少趨勢(shì)，但與溶媒對(duì)照組比較P>0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.檢測(cè)結(jié)果詳見(jiàn)表3.

表3　灌胃D-異苯環(huán)戊胺對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響±s)

注：**表示與溶媒對(duì)照組比較，P<0.01.

4討論

在過(guò)去的幾十年里，絕大多數(shù)減肥藥物上市后由于嚴(yán)重的不良反應(yīng)而相繼撤出市場(chǎng)[8]，時(shí)隔13年之后，美國(guó)FDA于2012年6月批準(zhǔn)了由Arena 制藥有限公司和衛(wèi)材公司合作開(kāi)發(fā)的鹽酸勞卡色林片劑(lorcaserin hydrochloride/Belvig)，用作飲食和運(yùn)動(dòng)療法的輔助用藥，長(zhǎng)期管理成人肥胖(體質(zhì)指數(shù)≥30 kg/m2)或至少有1種與體重相關(guān)共患疾病如高血壓、高脂血癥、2型糖尿病或中心型肥胖的超重(體質(zhì)指數(shù)≥27 kg/m2)患者的體質(zhì)量.鹽酸勞卡色林屬選擇性5-羥色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)受體亞型5-HT2C受體激動(dòng)劑，能經(jīng)特異性地刺激腦中的5-HT2C受體而促使產(chǎn)生飽腹感和降低食欲效應(yīng)[9].有報(bào)道指出：鹽酸勞卡色林在臨床試驗(yàn)中用于治療不患有2型糖尿病的肥胖或超重患者的最常見(jiàn)不良反應(yīng)是頭痛、頭暈、疲乏、惡心、口干和便秘；用于治療患有2型糖尿病的肥胖或超重患者的最常見(jiàn)不良反應(yīng)是低血糖癥、頭痛、腰痛、咳嗽和疲乏[10].

D-異苯環(huán)戊胺是經(jīng)西布曲明通過(guò)去甲基和經(jīng)氨基修飾改構(gòu)的新化合物，西布曲明在動(dòng)物體內(nèi)迅速代謝為活性代謝物M1和M2，M1和M2的藥理作用是對(duì)NA和5-HT再攝取的抑制作用[11]，體外實(shí)驗(yàn)顯示，M2可以增強(qiáng)胰島素對(duì)肌肉細(xì)胞攝取葡萄糖的促進(jìn)作用[12].Coletta等[13]研究發(fā)現(xiàn)，M2可降低小鼠血糖，呈劑量依賴(lài)性，M2干預(yù)的小鼠其肌肉對(duì)葡萄糖的攝取能力也顯著增強(qiáng).本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：灌胃D-異苯環(huán)戊胺對(duì)小鼠最大耐受量為1.4 g·kg-1，最低致死劑量為2.4 g·kg-1，LD50明顯大于2000 mg·kg-1，無(wú)嚴(yán)重急性毒性反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)；灌胃20 mg·kg-1、90 mg·kg-1和400 mg·kg-1的D-異苯環(huán)戊胺，對(duì)小鼠一般行為活動(dòng)和自主活動(dòng)沒(méi)有明顯影響，其中劑量400 mg·kg-1相當(dāng)于藥效學(xué)等效劑量的40倍，臨床擬用劑量的190.5倍.相關(guān)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，同類(lèi)上市藥物鹽酸勞卡色林屬選擇性5-羥色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)受體亞型5-HT2C受體激動(dòng)劑，臨床常見(jiàn)不良反應(yīng)有低血糖癥、疲乏等.所以，在D-異苯環(huán)戊胺的其他試驗(yàn)研究和臨床應(yīng)用中需關(guān)注這些方面的影響和不良反應(yīng).

在減肥藥的開(kāi)發(fā)中，科研人員需要更細(xì)致地搞清導(dǎo)致肥胖的機(jī)理和藥物作用的靶向[14]，結(jié)合D-異苯環(huán)戊胺的藥效和毒性作用的進(jìn)一步研究，希望其能成為毒副作用小、減肥效果好的新減肥藥物，彌補(bǔ)國(guó)產(chǎn)減肥藥空缺.

參考文獻(xiàn)：

[1]Calle E E,Rodriguez C,Walker-Thurmond K,et al.Overweight,obesity,andmortalityfromcancerinaprospectivelystudiedcohortofU.S.adults[J].N Engl Med,2003，348(17):1625-1638.

[2]Khaodhiar L，Cummings S，Apovian C M．Treatingdiabetesandprediabetesbyfocusingonobesitymanagement[J]．Curr Diabetes Rep,2009,9(5):348-354．

[3]Tziomalos K，Dimitroula H V，Katsiki N，et al．Effectsoflifestylemeasures，antiobesityagents，andbariatricsurgeryonserologicalmarkersofinflammationinobesepatients[J]．Mediators Inflamm，2010;2010:364957．

[4]丁浩，溫守明，趙書(shū)強(qiáng)，等．苯基環(huán)丁基酰胺衍生物及其光學(xué)異構(gòu)體、制備方法和用途：CN200810103525[P].2008-04-01.

[5]李娟，何海霞，周遠(yuǎn)大，等．D-異苯環(huán)戊胺對(duì)營(yíng)養(yǎng)性肥胖模型大鼠的減肥作用研究[J].中國(guó)藥房,2010,(21)29:2738.

[6]徐叔云，卞如濂，陳修．藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2001:.

[7]呂秋軍.新藥藥理學(xué)研究方法[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2007.

[8]Astrup A.Drugmanagementofobesity-efficacyversussafety[J]. N Engl J Med，2010，363(3)：288-290.

[9]Smith S R,Prosser W A,Donahue D J,et al.Lorcaserin(APD356),aselective5-HT2Cagonist,reducesbodyweightinobesemenandwomen[J].Obesity，2009,17(3):494-503.

[10]馬培奇.抗肥胖藥物研究進(jìn)展[J].上海醫(yī)藥,2013，34(5):52-55.

[11]Heal D J，Aspley S，Prow M R，et al．Sibutramine:anovelanti-obesitydrug．Areviewofthepharmacologicalevidencetodifferentiateitfromd-amphetamineandd-fenfluramine[J]．Int J Obes Relat Metab Disord，1998，22(Sup.1):18-28．

[12]Bailey C J，Turner S L，Bates S H，et al．Sibutraminemetabolitesincreaseglucosetransportbyculturedratmusclecells[J]．Int J Obes Relat Metab Disord，2001，25(4):478-485．

[13]Coletta D K，Bates S H，Jones R B，et al．ThesibutraminemetaboliteM2improvesmuscleglucoseuptakeandreduceshepaticglucoseoutput:preliminarydata[J]．Diab Vasc Dis Res，2006，3(3):186-188．

[14]王進(jìn).減肥藥開(kāi)發(fā)成“燙手山芋”[J].中國(guó)處方藥,2010，10(103):12.

Experiments on Effects of D-iso-phenylcyclopentylamine on Mice Acute Toxity,and Their General and Spontaneous Activities

LIZonghe1,WANGFangtong1,CHENXiaoping2,LIYanyou2

(1.Antibiotics Research and Re-evaluation Key Laboratory of Sichuan Province,Sichuan Industrial Institute of Antibiotics, Chengdu University, Chengdu 610052, China;2.Beijing Cachet Biomedical Co., Ltd., Beijing 100076, China)

Abstract：The paper is going to observe the effects of D-iso-phenylcyclopentylamine(D-IPCPA) on mice's acute toxicity,and their general and spontaneous activities.The acute toxicity reaction of mice was observed after being given single intragastric administration with different doses(0.5,0.8,1.4 and 2.4 g·kg-1) of D-IPCPA.Then,mice were given single intragastric administration with different doses(20,90,400 mg·kg-1) of D-IPCPA,after which their general and spontaneous activities were observed.The results show that D-IPCPA demonstrates dose-dependent relationship at the dose of 0.5,0.8,1.4 and 2.4 g·kg-1.The largest non-toxic reaction dose is close to 0.5 g·kg-1.The maximum tolerance dose and minimum lethal dose is 1.4 and 2.4 g·kg-1.D-IPCPA has no significant influence on mice's general and spontaneous activities.The conclusion drawn from experiments is that the maximum tolerance dose and minimum lethal dose is 1.4 and 2.4 g·kg-1respectively.There are no acute toxicity effects of D-IPCPA on mice.The compound demonstrates no risk of acute toxicity.D-IPCPA has no significant influence on mice general and spontaneous activities when mice are given intragastric administration at the dose of 20,90 and 400 mg·kg-1.

Key words：D-iso-phenylcyclopentylamine;general activities;spontaneous activities

文章編號(hào)：1004-5422(2016)02-0116-04

收稿日期：2016-04-16.

基金項(xiàng)目：成都大學(xué)校青年基金項(xiàng)目(2015XJZ29).

作者簡(jiǎn)介：李宗河(1980 — )， 男， 碩士， 助理研究員， 從事抗腫瘤藥效試驗(yàn)與新藥安全性評(píng)價(jià)研究.

中圖分類(lèi)號(hào)：R965

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A