鼠神經(jīng)生長因子對危重型小兒手足口病患者體液免疫和細胞因子的影響

陳柏良　　江明榮　　周曙明　　黃循斌　　謝曉彬

1.廣東省深圳市龍華新區(qū)人民醫(yī)院　梅隴鎮(zhèn)社康中心，廣東深圳　518131；2.廣東省深圳市龍崗中心醫(yī)院兒科，廣東深圳　518116；3.廣東省深圳市龍崗中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東深圳　518116

鼠神經(jīng)生長因子對危重型小兒手足口病患者體液免疫和細胞因子的影響

陳柏良1江明榮2周曙明2黃循斌2謝曉彬3

1.廣東省深圳市龍華新區(qū)人民醫(yī)院梅隴鎮(zhèn)社康中心，廣東深圳518131；2.廣東省深圳市龍崗中心醫(yī)院兒科，廣東深圳518116；3.廣東省深圳市龍崗中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東深圳518116

目的探討鼠神經(jīng)生長因子（mNGF）對危重型小兒手足口?。℉FMD）患者體液兔疫和細胞因子的影響。方法選取2014年6月～2015年10月深圳市龍華新區(qū)人民醫(yī)院收治的危重型HFMD患兒88例，按照隨機數(shù)字表法分為觀察組和對照組，每組各44例。對照組給予雙黃連常規(guī)治療，觀察組在對照組的基礎上注射mNGF進行治療。比較治療前后兩組患兒兔疫球蛋白M（IgM）、IgG、IgA，及CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平；比較兩組治療效果及不良反應發(fā)生情況。結果 治療前兩組患兒IgM、IgG、IgA水平比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；治療后兩組患兒血清IgM、IgG、IgA水平顯著升高，且觀察組明顯高于對照組，差異均有高度統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。治療前兩組患兒CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；治療后兩組患兒CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均有所升高，且與本組治療前比較，差異均有高度統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；治療后觀察組各項指標均明顯高于對照組，差異均有高度統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。觀察組總有效率（93.18%）明顯高于對照組（70.45%），差異有高度統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。觀察組2例患兒出現(xiàn)注射部位輕微疼痛，停藥后癥狀自行消失。兩組患兒治療期間肝腎等臟器功能檢查，均未發(fā)現(xiàn)異常。結論mNGF治療危重型HFMD患兒效果顯著，能明顯改善患兒體液兔疫功能和細胞因子的水平，且不良反應少，值得臨床進一步推廣。

鼠神經(jīng)生長因子；危重型小兒手足口病；體液免疫；細胞因子

［Abstract］Objective To exp1ore the effects of mouse nerve growth factors（mNGF）on humora1 immunity and cytokines in chi1dren with severe hand foot and mouth diseases（HFMD）.Methods From June 2014 to October 2015，88 chi1dren with severe HFMD treated in Longhua New District Peop1e's Hospita1 of Shenzhen were se1ected and divided into observation group and contro1 group according to the random digita1 tab1e method，with 44 cases in each group.The contro1 group were given conventiona1 symptomatic treatment by Shuang Huang Lian Ora1 So1ution，and the observation group were given the injection of mNGF based on the contro1 group.Leve1s of IgM，IgG，IgA，and CD4+，CD8+，CD4+/ CD8+before and after treatment were compared；treatment effects and adverse reactions of the two groups were compared.Results There were no significant differences in IgM，IgG and IgA before treatment between the two groups （P＞0.05），which were significant1y increased after treatment，IgM，IgG and IgA of the observation group after treatment were significant1y higher than those of the contro1 group，the differences were statistica11y significant（P＜0.01）.There were no significant differences in CD4+，CD8+and CD4+/CD8+before treatment between the two groups（P＞0.05），which were significant1y increased after treatment（P＜0.01）；compared with before treatment，the differences were statistica11y significant（P＜0.01）；CD4+，CD8+and CD4+/CD8+of the observationgroupaftertreatmentweresignificant1yhigher than those of the contro1 group，the differences were statistica11y significant（P＜0.01）.The tota1 effective rate of the observation group（93.18%）was significant1y higher than that of the contro1 group（70.45%），the difference was statistica11y significant（P＜0.01）.There were 2 cases with s1ight pain in the injection site in the observation group，and disappearance of symptoms after drug withdrawa1.There was no function abnorma1，such as 1iver，kidney and other organ in the two groups during the treatment.Conclusion The effect of mNGF in the treatment of chi1dren with severe HFMD is remarkab1e，which can obvious1y improve the humora1 immune function and the 1eve1s of cytokines，and with 1ess adverse reactions，it is worthy of further promotion in c1inica1.

［Key words］Mouse nerve growth factors；Severe hand foot and mouth diseases；Humora1 immunity；Cytokines

手足口?。╤and-foot-mouth disease，HFMD）多發(fā)于3歲以下的學齡前兒童，是由腸道病毒所引起的常見急性傳染病，其中以柯薩奇A16型病毒（Cox A16）和腸道71型病毒（EV71）為主［1］。臨床上主要表現(xiàn)為發(fā)熱、口腔潰瘍、手足等部位皮疹、皰疹等，一般情況下7 d可自愈。危重型患兒會出現(xiàn)神經(jīng)源性肺水腫、心肌炎、肺出血、急性遲緩性麻痹、無菌性腦膜炎等并發(fā)癥，病情進展極快，若治療不及時，會危及患兒的生命。目前該病的治療尚沒有標準特效的方法，主要以保護患兒重要臟器、抗病毒、退熱止驚，及降低顱內(nèi)壓等綜合治療為主［2］。鼠神經(jīng)生長因子（mouse nerve growth factors，mNGF）具有促進生長發(fā)育、分化及再生，促進外周和中樞神經(jīng)元復活作用的神經(jīng)營養(yǎng)因子，主要治療各種原因?qū)е碌纳窠?jīng)損傷。本研究采用鼠神經(jīng)生長因子治療危重型小兒HFMD，療效滿意，現(xiàn)將結果報道如下：

1　資料與方法

1.1一般資料

選取2014年6月～2015年10月深圳市龍華新區(qū)人民醫(yī)院（以下簡稱“我院”）收治的危重型HFMD患兒88例，按照隨機數(shù)字表法分為觀察組和對照組，每組各44例。其中觀察組男24例，女20例；年齡4～45個月，平均（2.45±1.32）歲；病程23d～3個月，平均（1.82± 0.61）個月。對照組男23例，女21例；年齡5～48個月，平均（2.70±1.25）歲；病程1～3個月21 d，平均（2.01± 0.77）個月。兩組患兒一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。本研究經(jīng)我院醫(yī)學倫理委員會批準。

1.2診斷標準

參照原衛(wèi)生部《手足口病診療指南》［3］及《實用兒科學》［4］中HFMD診斷標準：①有易驚、嗜睡、精神差等神經(jīng)受累表現(xiàn)。②體溫≥39℃持續(xù)2～7 d。③眼球運動障礙、共濟失調(diào)、眼球震顫、肌陣攣、肢體抖動。④急性遲緩性麻痹，驚厥、無力。⑤體征可見腱反射減弱或消失，腦膜刺激征陽性。

1.3納入與排除標準

納入標準：①符合上述危重型小兒HFMD診斷標準；②年齡4個月～4歲；③患兒家屬簽署研究知情書。排除標準：①合并有心、肝、腎等重要臟器先天性疾病者；②有藥物過敏史者。

1.4治療方法

對照組入院后立即給予雙黃連口服液進行抗病毒治療，雙黃連口服液（規(guī)格：10 mL，生產(chǎn)批號：國藥準字號Z10920053，哈藥集團三精制藥股份有限公司），10 mL/次，3次/d；采用布洛芬混懸液進行退熱治療，布洛芬混懸液（規(guī)格：100 mL，生產(chǎn)批號：國藥準字號H19991011，上海強生制藥），3 mL/次，3次/d。有顱內(nèi)壓增高癥狀者給予20%甘露醇注射液50 mL靜脈滴注，甘露醇注射液（規(guī)格：250 mL，生產(chǎn)批號：國藥準字號H20053865，山東威高藥業(yè)股份有限公司），1次/d，常規(guī)補液以糾正離子紊亂和酸堿平衡等。觀察組在對照組的基礎上給予mNGF（規(guī)格：20 μg，生產(chǎn)批號：國藥準字S20060051，武漢海特生物制藥股份有限公司）肌內(nèi)注射，20 μg/次，1次/d，2周為1個療程。兩組患者均連續(xù)治療2周。

1.5觀察指標

患兒入院1 d內(nèi)及治療后1 d，抽取靜脈血5 mL，置于肝素鈉抗凝管，水平離心機分離血清，3000 r/min離心5 min，留取血清以備用。①采用兔疫比濁法檢測兩組患兒血清細胞因子水平，包括兔疫球蛋白M （IgM）、兔疫球蛋白G（IgG）、兔疫球蛋白A（IgA）②采用流式細胞儀檢測兩組患兒細胞兔疫功能指標（CD3+、CD4+、CD8+）。③觀察不良反應發(fā)生情況。

1.6療效判定

顯效：治療2 d內(nèi)體溫恢復正常，臨床癥狀好轉，恢復進食。有效：治療3 d內(nèi)體溫恢復正常，5 d內(nèi)無流涎現(xiàn)象，癥狀好轉，能正常進食。無效：治療后4 d內(nèi)發(fā)熱繼續(xù)，癥狀無緩解或加重，且有嚴重并發(fā)癥發(fā)生?？傆行?有效+顯效。

1.7統(tǒng)計學方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差（±s）表示，兩組間比較采用t檢驗；等級資料兩組間比較采用秩和檢驗；計數(shù)資料用率表示，組間比較采用X2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結果

2.1兩組患兒體液免疫指標比較情況

治療前兩組患兒血清IgM、IgG、IgA水平比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；治療后兩組患兒血清IgM、IgG、IgA水平均顯著升高，且觀察組水平明顯高于對照組，差異均有高度統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。見表1。

表1　兩組患兒治療前后各項體液免疫指標比較（μg/L，±s）

表1　兩組患兒治療前后各項體液免疫指標比較（μg/L，±s）

組別　IgM治療前　治療后t值P值　t值P值　t值P值IgG治療前　治療后IgA治療前　　治療后觀察組對照組t值P值0.82±0.12 0.79±0.17 0.945 0.345 1.51±0.30 1.33±0.26 2.973 0.003 14.003 11.399 0.000 0.000 4.45±0.25 4.40±0.16 1.105 0.269 9.55±1.09 8.40±0.87 5.407 0.000 29.905 29.652 0.000 0.000 0.83±0.24 0.82±0.21 0.206 0.837 2.87±0.71 1.46±0.28 12.115 0.000 17.849 11.991 0.000 0.000

2.2兩組細胞免疫功能指標比較

治療前兩組患兒CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；治療后兩組患兒CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均有所升高，且與本組治療前比較，差異均有高度統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；治療后觀察組各項指標均明顯高于對照組，差異均有高度統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。見表2。

表2　兩組患兒細胞免疫功能指標比較（±s）

表2　兩組患兒細胞免疫功能指標比較（±s）

組別　CD4+（%）治療前　　治療后t值　P值CD8+（%）治療前　　治療后t值　P值CD4+/CD8+治療前　　治療后　t值　P值觀察組對照組t值P值0.90±0.12 0.95±0.17 1.576 0.115 33.36±4.57 26.38±4.62 7.043 0.000 46.560 36.070 0.000 0.000 14.30±1.95 14.46±1.77 0.398 0.690 26.37±3.84 22.11±3.92 5.091 0.000 18.378 11.663 0.000 0.000 0.86±0.24 0.83±0.15 0.695 0.487 1.59±0.11 1.45±0.64 3.414 0.007 5.660 26.792 0.000 0.000

2.3治療后兩組療效比較

治療后觀察組總有效率明顯高于對照組，差異有高度統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。見表3。

表3　治療后兩組療效比較

2.4兩組不良反應發(fā)生情況

觀察組2例患兒出現(xiàn)注射部位輕微疼痛，均未給予任何特殊處理，停藥后癥狀自行消失。治療期間兩組患兒肝腎等臟器功能檢查，均未發(fā)現(xiàn)異常。

3　討論

mNGF是從小鼠頜下腺中提取出來的細胞生長因子，有2條118個氨基酸態(tài)組成，對神經(jīng)系統(tǒng)中的正常細胞具有良好的營養(yǎng)作用［5-6］。神經(jīng)生長因子是生物活性物質(zhì)之一，能促進合成代謝，增強神經(jīng)遞質(zhì)的活性，維持神經(jīng)細胞的分化及成熟。它既能夠作為逆向營養(yǎng)因子對上一神經(jīng)元產(chǎn)生影響，還能夠通過順軸突對其它遠端靶細胞產(chǎn)生影響。有研究指出［7］，mNGF與人神經(jīng)生長因子具有90%的同源性。另有學者指出［8］，mNGF對于重癥病毒性腦炎患者的臨床癥狀具有顯著的改善效果。多項研究證實［9-10］，mNGF對腦出血及新生兒缺氧缺血性腦病等腦損傷有顯著的修復作用。但是臨床上將mNGF用于危重型小兒HFMD的研究較少，本研究結果顯示，治療后觀察組總有效率（93.18%）明顯高于對照組（70.45%），所以該藥物能夠顯著改善危重型小兒HFMD的臨床癥狀。

細胞因子是由兔疫細胞（TBNK細胞和單核吞噬細胞等）和非兔疫細胞（成纖維細胞、表皮細胞、血管內(nèi)皮細胞等）經(jīng)過刺激而合成，該類因子分泌出的具有廣泛生物活性的小分子多肽和蛋白質(zhì)能夠在細胞間傳遞信號，調(diào)節(jié)兔疫應答，介導炎性反應，參與兔疫細胞的分化、發(fā)育，還可以刺激造血功能，參與修復受損組織等［11］。細胞因子可通過血液到達全身靶器官，但是病毒、細菌等微生物與化學或物理因素對機體的損傷均能夠激發(fā)細胞因子的產(chǎn)生，同時細胞因子可以抑制病毒，殺滅細菌，達到保護機體的作用。細胞因子之間存在連鎖反應，一個因子被激活，會導致細胞因子共同參與機體防御反應，所以細胞因子的級聯(lián)反應在感染性發(fā)病機制中有重要作用［12］。本研究結果顯示，HFMD患兒入院后各項兔疫指標均較低，經(jīng)治療后均有恢復，且觀察組恢復情況明顯優(yōu)于對照組。由此可知，患兒感染腸道病毒后，機體內(nèi)兔疫水平紊亂，各項兔疫球蛋白水平均大幅低于正常水平，病毒無法清除，組織受損。IgM是體液兔疫中生存時間最短、出現(xiàn)最早的兔疫球蛋白，患兒機體會因受病毒影響而發(fā)生兔疫紊亂，兔疫水平下降，進而影響IgM的形成與分泌［13］。IgG為下呼吸道保護性抗體，對細菌感染水平及呼吸道黏膜病毒防御有敏感反應［14］。IgA是肺黏膜、鼻黏膜、氣管黏膜等分泌的抗體，可預防和監(jiān)測呼吸系統(tǒng)局部感染，當呼吸系統(tǒng)遭到感染時，黏膜便無法正常分泌IgA抗體，導致機體兔疫能力下降［15］，患兒HFMD出現(xiàn)的口腔黏膜皮疹就是該原因所致。

目前臨床常通過T細胞亞群測定途徑判斷患者機體細胞兔疫功能。很多學者研究表明［16-17］，T細胞能夠釋放出多種細胞因子，對于機體抗感染及抗病毒的兔疫應答發(fā)揮著重要作用，所以對腸道病毒感染也具兔疫介導作用。CD4+、CD8+對T細胞的兔疫功能均具有調(diào)節(jié)作用，CD4+可刺激抗體產(chǎn)生，調(diào)節(jié)B淋巴細胞的分化功能，而CD8+對抗體的分泌及合成也有明顯抑制作用，同時CD8+還對T細胞增殖具有抑制作用，兩細胞相互協(xié)調(diào)時，機體兔疫應答維持正常水平［18］。CD4+對誘導性T細胞亞群具有輔助作用，其上的細胞抗原受體可以識別抗原肽-Ⅱ類分子復合物，進而參與Th2細胞的激活，所以CD4+又稱Th細胞。CD8+是細胞毒性（Tc）和抑制性（Ts）細胞亞群，對抗原肽-Ⅱ類分子復合物也有識別作用，同時激活細胞毒性T細胞［19］。CD4+/CD8+的比值是機體兔疫內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的重要檢測指標，能夠反映Tc和Th之間的平衡狀態(tài)［20］。本研究中兩組HFMD患兒治療前CD4+、CD8+、CD4+/ CD8+等T細胞亞群水平均低于正常水平，由此可知，HFMD患兒機體兔疫功能下降，T淋巴細胞減少，所以病毒入侵，出現(xiàn)了細胞兔疫功能紊亂。本組患兒均為危重型HFMD，有研究指出［21-22］，隨著患兒病情加重，機體兔疫功能會逐步下降，筆者分析其可能與重癥患兒兔疫應答異常激烈，在恢復疾病及兔疫保護功能的同時，造成兔疫損傷更加嚴重有關。

綜上所述，mNGF能夠顯著增強危重型HFMD患兒體液兔疫和細胞因子的功能和水平，促進疾病轉歸。但是本研究樣本選取有限，且未做長遠分析，結果難兔有不足之處，故臨床尚需進一步探究。

［1］李亮，許可，祁賢，等.兒童手足口病影響因素病例對照研究［J］.中國公共衛(wèi)生，2011，27（1）：16-18.

［2］梁宇峰，楊鎰宇.118例危重癥兒童手足口病的臨床特征分析［J］.中國醫(yī)藥導報，2015，12（29）：59-62.

［3］中華人民共和國衛(wèi)生部.手足口病診療指南［S］.2009.

［4］諸福棠.實用兒科學［J］.8版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2014.

［5］張開放，郭忠衛(wèi)，宋煥瑾.鼠神經(jīng)生長因子對腰椎間盤突出患者術后神經(jīng)恢復的作用［J］.中國康復理論與實踐，2012，18（1）：84-86.

［6］官常榮，朱英標，丁莉，等.鼠神經(jīng)生長因子聯(lián)合α-硫辛酸治療糖尿病周圍神經(jīng)病變的臨床觀察［J］.中國臨床藥理學雜志，2014，30（10）：892-894，900.

［7］楊丕堅，李舒敏，呂以培，等.鼠神經(jīng)生長因子治療糖尿病痛性神經(jīng)病變療效觀察［J］.中華實用診斷與治療雜志，2013，27（6）：589-591.

［8］方雅秀，譚燕，侯樂.鼠神經(jīng)生長因子治療病毒性腦炎的療效［J］.實用醫(yī)學雜志，2013，29（11）：1837-1838.

［9］Saban R.Angiogenic factors，b1adder neurop1asticity and interstitia1 cystitis-new pathobio1ogica1 insights［J］.Trans1 Andro1 Uro1，2015，4（5）：555-562.

［10］黃體秀，張紅.鼠神經(jīng)生長因子治療新生兒缺氧缺血性腦病的臨床療效及神經(jīng)保護作用［J］.河北醫(yī)學，2014，20 （12）：1956-1958.

［11］Chen A，Oak1ey AE，Monteiro M.Mu1tip1ex ana1yte assays to characterize different dementias：brain inf1ammatory cytokines in poststroke and other dementias［J］. Neurobio1 Aging，2016，16（38）：56-67.

［12］袁仙麗，李明才，李燕，等.白細胞介素-38及其相關細胞因子在炎癥中的作用［J］.中國細胞生物學學報，2013，35（8）：1232-1237.

［13］郝麗，鄭成中.新生兒感染T淋巴細胞亞群及細胞因子變化分析［J］.臨床兒科雜志，2014，32（9）：825-828.

［14］彭慶明，余響霖，賀麗梅，等.手足口病合并腦炎患兒兔疫球蛋白和補體的變化及其臨床意義［J］.中國當代醫(yī)藥，2014，21（29）：185-186.

［15］馮海紅.反復呼吸道感染與血清IgA含量及兔疫功能變化分析［J］.中國當代醫(yī)藥，2015，22（5）：30-31，34.

［16］Bhattacharya P，Ghosh S，Ejazi SA.Induction of IL-10 and TGFβ from CD4+CD25+FoxP3+T ce11s corre1ates with parasite 1oad in Indian Ka1a-azar patients infected with 1eishmania donovani［J］.PLoS Neg1 Trop Dis，2016，10 （2）：e0004422.

［17］杜伯雨，白璐，沈巖，等.腸道病毒EV71感染對T細胞兔疫功能影響的研究［J］.醫(yī)學研究雜志，2010，39（8）：50-53.

［18］吳姍姍，姜擁軍，張子寧，等.HIV感染后CD8+T細胞表面NK相關受體表達的變化［J］.兔疫學雜志，2011，27 （10）：866-870，874.

［19］何以豐，狄文.癌相關CD8+記憶T細胞在過繼兔疫治療中的應用［J］.中國腫瘤生物治療雜志，2012，19（2）：116-121.

［20］馬強，劉正娟.CD4+、CD8+T細胞檢測對傳染性單核細胞增多癥的臨床意義［J］.大連醫(yī)科大學學報，2011，33 （1）：51-54.

［21］王繼杰，易小蓮.兒童重癥手足口病52例［J］.中國醫(yī)藥導報，2014，11（8）：66-69.

［22］杜潘艷，趙軍.EV71感染手足口病患兒兔疫功能臨床分析［J］.中國婦幼保健，2012，27（11）：1713-1715.

Effects of mouse nerve growth factors on humoral immunity and cytokines in children with severe hand foot and mouth diseases

CHEN Bailiang1JIANG Mingrong2ZHOU Shuming2HUANG Xunbin2XIE Xiaobin3
1.Longhua New District Peop1e's Hospita1 of Shenzhen Mei1ong Town Community Center，Guangdong Province，Shenzhen518131，China；2.Department of Pediatrics，Longgang Centra1 Hospita1 of Shenzhen，Guangdong Province，Shenzhen518116，China；3.Department of Obstetrics and Gyneco1ogy，Longgang Centra1 Hospita1 of Shenzhen，Guangdong Province，Shenzhen518116，China

R725.1

A

1673-7210（2016）04（c）-0121-04

廣東省深圳市龍崗區(qū)科技計劃醫(yī)療衛(wèi)生項目（YS2013120）。

2016-01-10本文編輯：任 念）