Tfh/Treg/Breg細(xì)胞與習(xí)慣性流產(chǎn)患者免疫紊亂的關(guān)系

石教啟　　伍昌林　　朱　亦　　張繼華　　黨鑫堂　　周雪敏　　佘吉佳

1.湖北省陽新縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北陽新　435200；2.廣東省深圳市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東深圳　518035

Tfh/Treg/Breg細(xì)胞與習(xí)慣性流產(chǎn)患者免疫紊亂的關(guān)系

石教啟1伍昌林2▲朱亦2張繼華1黨鑫堂2周雪敏2佘吉佳2

1.湖北省陽新縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北陽新435200；2.廣東省深圳市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東深圳518035

目的探討CD4+CXCR5+T（Tfh）、CD4+CD25+FoxP3+T（Treg）及CD1d（hi）CD5+CD19+B（Breg）細(xì)胞與習(xí)慣性流產(chǎn)（HA）患者兔疫紊亂的關(guān)系。方法從2014年5月～2015年9月在廣東省深圳市第二人民醫(yī)院產(chǎn)檢確診的孕婦中，隨機(jī)選擇30例流產(chǎn)次數(shù)≥2次的女性作為HA病例組，同時(shí)選擇30例正常懷孕生產(chǎn)的女性作為對(duì)照組。分別采集兩組孕婦懷孕期間外周血，分離外周血單核細(xì)胞（PBMC），采用流式細(xì)胞術(shù)檢測Tfh/Treg/Breg細(xì)胞數(shù)量及比例；采用酶聯(lián)兔疫吸附試驗(yàn)測定血清中白細(xì)胞介素-21（IL-21）、白細(xì)胞介素-10（IL-10）、轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）的水平，及IL-21/IL-10、IL-21/TGF-β1比值變化，并分析IL-21/IL-10、IL-21/TGF-β1比值變化與流產(chǎn)次數(shù)的相關(guān)性。結(jié)果與對(duì)照組比較，HA病例組Tfh/Th、Tfh/Treg、Tfh/Breg細(xì)胞比值均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而Treg/Th、Breg/B細(xì)胞的比值均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與對(duì)照組比較，HA病例組IL-21升高（P＜0.05），而IL-10、TGF-β1均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），IL-21/IL-10、IL-21/TGF-β1比值均升高（P＜0.05）。Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，IL-21/IL-10、IL-21/TGF-β1比值變化與HA病例組流產(chǎn)次數(shù)呈正相關(guān)（（r=0.786、0.694，均P＜0.05））。結(jié)論Tfh/Treg/Breg細(xì)胞及相關(guān)因子IL-21/IL-10、IL-21/TGF-β1比值變化可能與HA患者兔疫紊亂機(jī)制相關(guān)。

習(xí)慣性流產(chǎn)；Tfh/Treg/Breg細(xì)胞；IL-21/IL-10；IL-21/TGF-β1

［Abstract］Objective To exp1ore the re1ation between CD4+CXCR5+T（Tfh），CD4+CD25+FoxP3+T（Treg），CD1d（hi）CD5+CD19+B（Breg）subsets and the immune disorder of patients with habitua1 abortion（HA）.Methods From May 2014 to September 2015，30 pregnant women with two times or more abortion in the Second Peop1e's Hospita1 of Shenzhen City were random1y se1ected as HA case group，and 30 cases of norma1 pregnancy women were random1y se1ected as contro1 group.The periphera1 b1ood in two groups were co11ected during pregnancy.The Tfh，Treg and Breg subsets of the periphera1 b1ood of pregnant women in the two groups were ana1yzed by f1ow cytometry with immunof1uorescent staining. The 1eve1s of the periphera1 b1ood IL-21，IL-10 and TGF-β1were detected by ELISA assays，the re1ation between the ratios of the IL-21/IL-10，IL-21/TGF-β1and the abortion times were ana1yzed.Results Compared with the contro1 group，ratios of Tfh/Th，Tfh/Treg and Tfh/Breg were increased in HA case group，the difference was statistica11y significant（P＜0.05），and the ratios of Treg/Th，Breg/B ce11s were decreased，the differences were statistica11y significant（P＜0.05）.Compared with the contro1 group，IL-21 1eve1 was increased in HA case group（P＜0.05），but 1eve1s of IL-10 and TGF-β1were decreased，the differences were statistica1 significance（P＜0.05）.The ratios of IL-21/IL-10，IL-21/TGF-β1were increased（P＜0.05）.Besides，the Spearman corre1ation ana1ysis showed that，there was positive corre1ation between the ratio of IL-21/IL-10，IL-21/TGF-β1and the number of abortions in HA case group（r=0.786，0.694，a11 P＜0.05）.Conclusion The changes of Tfh/Treg/Breg in periphera1 b1ood and IL-21/IL-10，IL-21/TGF-β1ratios may re1ated to the immune disorder of patients with HA.

［Key words］Habitua1 abortion；Tfh/Treg/Breg ce11；IL-21/IL-10；IL-21/TGF-β1

習(xí)慣性流產(chǎn)（habitua1 abortion，HA）是自然流產(chǎn)連續(xù)發(fā)生2～3次甚至更多，且每次流產(chǎn)均集中在同一個(gè)妊娠月份，懷孕周數(shù)不足20周的情況下妊娠中止，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，可能與兔疫性因素、感染性因素、內(nèi)分泌性因素和解剖因素等有關(guān)。近年研究發(fā)現(xiàn)HA的發(fā)生發(fā)展與CD4+Th17及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）的分化狀態(tài)有關(guān)［1-3］，但Tfh/Treg/Breg（濾泡輔助性T細(xì)胞/Treg/調(diào)節(jié)性B細(xì)胞）的兔疫平衡在HA患者中的作用尚不明確。本研究將分離HA病例及正常孕婦外周血單個(gè)核細(xì)胞，采用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）測定Tfh/Treg/Breg細(xì)胞的表達(dá)；酶聯(lián)兔疫吸附試驗(yàn)（ELISA）分析HA及正常孕婦血清中相應(yīng)的細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-21（IL-21）、白細(xì)胞介素-10（IL-10）、轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）的水平，及IL-21/IL-10、IL-21/TGF-β1比值變化，探討Tfh/Treg/Breg細(xì)胞在HA患者兔疫紊亂中的作用，為HA的臨床診斷與治療提供新思路。

1　資料與方法

1.1一般資料

研究對(duì)象的納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)過B超檢查確定的懷孕女性，其中HA患者為自然流產(chǎn)2次或2次以上的女性，健康對(duì)照組為懷孕后并正常生產(chǎn)的女性。排除經(jīng)檢查排除了其他相關(guān)的自身兔疫性疾病。從2014年5月～2015年9月廣東省深圳市第二人民醫(yī)院門診與住院部檢查的孕婦中，隨機(jī)選擇了30例懷孕后并正常生產(chǎn)的女性作為健康對(duì)照組，年齡26～45歲，中位年齡30歲；隨機(jī)選擇30例自然流產(chǎn)2次及2次以上女性作為HA病例組，年齡23～44歲，中位年齡29歲，均符合HA的診斷標(biāo)準(zhǔn)［3］。兩組一般資料比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)廣東省深圳市第二人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，參與研究者均知情同意。

1.2試劑與儀器

流式細(xì)胞儀（美國，BD公司），酶標(biāo)儀（中國，匯松MB-580），IL-21、HA10、TGF-β1的ELISA試劑盒（美國，R&D公司）。FITC標(biāo)記抗人-FoxP3、PercP標(biāo)記抗人-CD4、FITC標(biāo)記抗人-CD25 mAb、FITC標(biāo)記抗人-CXCR5的單克隆抗體及它們對(duì)照的同型對(duì)照抗體（美國，Mi1tenyibiotec公司）；檢測Breg需要的PECD1d、FITC-CD5、PerCP-CD19抗體及同型對(duì)照IgG1-FITC、IgG1-PE、IgG1-PerCP抗體（美國，BD公司）。

1.3檢測方法

1.3.1外周血單核細(xì)胞的分離 根據(jù)密度梯度離心法，由Fico11細(xì)胞分離液分離外周血單核細(xì)胞（PBMC），PBS與全血按1∶1比例稀釋后，在常溫下，以2000 r/min離心15 min，PBS洗滌細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×109/L，供流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞亞群，同時(shí)收集上清供細(xì)胞因子檢測。

1.3.2流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血Tfh、Treg、Breg細(xì)胞比例 ①外周血Tfh細(xì)胞的檢測：取兩支試管，分別為實(shí)驗(yàn)管和同型對(duì)照管，其中一支分別加入PercP標(biāo)記的抗人CD4 mAb與FITC標(biāo)記的抗人CXCR5 mAb 各10 μL，混勻，同時(shí)設(shè)立同型對(duì)照，避光放置30 min，洗滌2次，重懸細(xì)胞后上機(jī)檢測。②外周血Treg的檢測：另取兩支試管，其中一支加入FITC標(biāo)記的抗人FoxP3抗體、PercP標(biāo)記的抗人CD4 mAb和FITC標(biāo)記的抗人IL-25 mAb各10 μL，同樣對(duì)照管加入同型對(duì)照抗體，避光30 min后，洗滌2次，重懸細(xì)胞后上機(jī)檢測。③分別取4支試管，取上述淋巴細(xì)胞分層液分離單個(gè)核細(xì)胞，PBS洗2次，計(jì)數(shù)，各取106個(gè)單個(gè)核細(xì)胞，第一支試管同型對(duì)照，加入IgG1-FITC、IgG1-PE、IgG1-PerCP抗體分別5 μL；第二支試管加入PerCP-CD19抗體5 μL；第三支試管加入FITC-CD5、PerCP-CD19抗體各5 μL；第四支試管加入PE-CD1d、FITC-CD5、PerCP-CD19抗體各5 μL；將標(biāo)本與抗體充分混勻后，室溫避光孵育1 h。離心后棄上清，用PBS洗2遍，上流式細(xì)胞儀檢測，相關(guān)檢測結(jié)果運(yùn)用軟件分析比較。

1.3.3HA患者外周血IL-21、IL-10、TGF-β1的檢測按照ELISA試劑盒提供的說明書進(jìn)行。取已收集凍存的血清，溶解處理后每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品均設(shè)復(fù)孔檢測，酶標(biāo)儀在520 nm波長處讀取OD值，由標(biāo)準(zhǔn)品在配套軟件上自動(dòng)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并獲得各個(gè)待測樣本上清中細(xì)胞因子IL-21、IL-10、TGF-β1含量。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用X2檢驗(yàn)，兩變量間的相關(guān)性用Spearman相關(guān)分析法，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1兩組外周血細(xì)胞Tfh/Treg/Breg細(xì)胞亞群的比較

經(jīng)過流式細(xì)胞儀測定結(jié)果顯示：HA病例組患者外周血中CD4+T細(xì)胞中Tfh/Th的比例升高，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；Treg/Th、Breg/B ce11的比例降低，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而Tfh/Treg、Tfh/Breg細(xì)胞的比值升高，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1　兩組外周血細(xì)胞Tfh/Treg/Breg細(xì)胞亞群的比較（%，±s）

表1　兩組外周血細(xì)胞Tfh/Treg/Breg細(xì)胞亞群的比較（%，±s）

注：HA：習(xí)慣性流產(chǎn)；Tfh：濾泡輔助性T細(xì)胞；Treg：調(diào)節(jié)性T細(xì)胞；Breg：調(diào)節(jié)性B細(xì)胞

對(duì)照組HA病例組t值P值30 30 11.43±1.22 22.63±2.51 16.09 ＜0.05 4.27±1.32 2.10±0.29 8.37 ＜0.05 2.70±0.28 1.10±0.22 7.60 ＜0.05 2.67±0.92 10.78±8.66 5.10 ＜0.05 7.10±4.41 16.10±6.29 8.78 ＜0.05組別　　例數(shù)　Tfh/Th　Treg/Th　Breg/B ce11　Tfh/Treg　Tfh/Breg

2.2兩組外周血細(xì)胞因子IL-21、IL-10、TGF-β1水平比較

ELISA法測得HA病例組PBMC上清中IL-21、IL-10、TGF-β1水平，與對(duì)照組比較，IL-21水平明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而IL-10、TGF-β1的水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2　兩組外周血細(xì)胞因子IL-21、IL-10、TGF-β1水平比較（pg/mL，±s）

注：HA：習(xí)慣性流產(chǎn)；IL-21：白細(xì)胞介素-21；IL-10：白細(xì)胞介素-10；TGF-β1：轉(zhuǎn)化生長因子-β1

對(duì)照組HA病例組t值P值30 30 51.39±13.95 74.85±18.26 3.23 ＜0.05 43.14±11.26 26.54±8.71 4.87 ＜0.05 254.13±45.16 126.35±13.62 6.94 ＜0.05組別　　例數(shù)　IL-21　IL-10　TGF-β1

2.3兩組外周血IL-21/IL-10、IL-21/TGF-β1比值比較

與對(duì)照組比較，HA病例組外周血中IL-21/IL-10、IL-21/TGF-β1比值升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；流產(chǎn)次數(shù)＞3次的HA病例組IL-21/IL-10、IL-21/ TGF-β1比值顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而流產(chǎn)次數(shù)2～3次的HA病例組IL-21/IL-10、IL-21/TGF-β1比值低于流產(chǎn)次數(shù)＞3次的HA病例組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表3　兩組外周血IL-21/IL-10、IL-21/TGF-β1比值比較（pg/mL，±s）

表3　兩組外周血IL-21/IL-10、IL-21/TGF-β1比值比較（pg/mL，±s）

注：與對(duì)照比較，*P＜0.05；與流產(chǎn)次數(shù)2～3次的HA病例組比較，#P＜0.05；IL-21：白細(xì)胞介素-21；IL-10：白細(xì)胞介素-10；TGF-β1：轉(zhuǎn)化生長因子-β1

對(duì)照組HA病例組流產(chǎn)次數(shù)2～3次流產(chǎn)次數(shù)＞3次30 30 17 13 1.19±1.23 2.82±2.09*1.76±1.08*3.15±1.76*#0.20±0.31 0.59±1.34*0.38±0.87*0.84±0.92*#組別　　例數(shù)　IL-21/IL-10　IL-21/TGF-β1

2.4IL-21/IL-10、IL-21/TGF-β1比值與流產(chǎn)次數(shù)的相關(guān)性分析

Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，IL-21/IL-10、IL-21/TGF-β1比值與HA患者的流產(chǎn)次數(shù)呈正相關(guān)（r=0.786、0.694，均P＜0.05）。

3　討論

HA是指連續(xù)自然流產(chǎn)3次及3次以上的患者，近年常用復(fù)發(fā)性流產(chǎn)取代HA，改為2次及2次以上的自然流產(chǎn)。近年研究發(fā)現(xiàn)HA的發(fā)生發(fā)展與機(jī)體兔疫功能狀態(tài)密切相關(guān)，而CD4+T細(xì)胞在機(jī)體自身兔疫平衡中發(fā)揮重要作用，效應(yīng)T細(xì)胞與Treg的失衡可能與一些自身兔疫病的發(fā)生相關(guān)。HA是一種由自身兔疫抗體引起的多因素參與的疾病，已證實(shí)HA患者外周血Th17細(xì)胞功能亢進(jìn)，而Treg細(xì)胞分化低下，在體內(nèi)存在針對(duì)自身抗原的自身抗體，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜［4-7］。但有關(guān)CD4+效應(yīng)Tfh細(xì)胞與Treg、Breg在HA體內(nèi)變化研究較少，且Tfh/Treg/Breg細(xì)胞平衡狀態(tài)尚不明確。

近年研究表明，濾泡輔助性T細(xì)胞 （T fo11icu1ar he1per ce11s，Tfh）是一群CD4+效應(yīng)性T細(xì)胞亞群，在兔疫應(yīng)答中輔助B細(xì)胞產(chǎn)生抗體［8-10］，主要通過IL-21發(fā)揮作用，表型為CD4+CXCR5+；在小鼠模型中，阻斷Tfh應(yīng)效分子IL-21等，可導(dǎo)致自身抗體下降［11-13］，表明Tfh細(xì)胞異常可能與自身兔疫性疾病的發(fā)病密切相關(guān)。Treg是一類抑制體內(nèi)自身兔疫反應(yīng)性的CD4+Treg，其表型主要為FoxP3+CD4+CD25+，與其兔疫調(diào)節(jié)功能密切相關(guān)的因子為IL-10等，其異常表達(dá)可導(dǎo)致自身兔疫性疾病發(fā)生［8］。那么效應(yīng)Tfh細(xì)胞與調(diào)節(jié)性Treg細(xì)胞的平衡可能與自身兔疫病的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。HA患者發(fā)生機(jī)制復(fù)雜，而Tfh細(xì)胞可輔助B細(xì)胞產(chǎn)生高親和力自身抗體，而Treg細(xì)胞則可抑制自身抗體的產(chǎn)生，本研究推測Tfh/Treg細(xì)胞平衡可能參與介導(dǎo)了HA自身抗體的產(chǎn)生及其兔疫機(jī)制［9-10］。近年來研究發(fā)現(xiàn)，表型為CD1d（hi）CD5+CD19+的Breg是一種新型的具有負(fù)向調(diào)節(jié)功能的B細(xì)胞，其數(shù)量和功能的異常也可能是自身兔疫病發(fā)生的重要機(jī)制［14-16］。調(diào)節(jié)性Breg可通過抑制自身反應(yīng)性Th細(xì)胞而抑制自身兔疫反應(yīng)，也可以通過抑制細(xì)胞毒性T細(xì)胞活性來減弱對(duì)自身成分的細(xì)胞毒作用［17-19］。但是，Breg細(xì)胞在HA患者發(fā)病機(jī)制中的作用不明確，它可能與Treg細(xì)胞一起共同參與HA的發(fā)病機(jī)制。

本研究通過檢測HA病例組外周血Tfh/Treg/Breg細(xì)胞平衡及其相關(guān)效應(yīng)分子，分析Tfh/Treg/Breg細(xì)胞兔疫平衡在HA發(fā)生發(fā)展中的作用，探討Tfh/Treg/ Breg細(xì)胞平衡與HA患者流產(chǎn)次數(shù)間的關(guān)系，為HA的臨床診斷與治療提供新的思路［20］。本研究通過流式細(xì)胞術(shù)檢測HA病例組和對(duì)照組外周血Tfh/Treg/Breg細(xì)胞水平，ELISA檢測血清中IL-21、IL-10、TGF-β1水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HA病例組外周血中Tfh水平高于對(duì)照組，而調(diào)節(jié)性Treg/Breg的水平降低；HA病例組血清中IL-21水平高于對(duì)照組，IL-10/TGF-β1水平低于對(duì)照組，且IL-21/IL-10、IL-21/TGF-β1比值高于對(duì)照組，流產(chǎn)次數(shù)大于3次的HA病例組IL-21/IL-10、IL-21/TGF-β1比值高于流產(chǎn)次數(shù)2～3次的HA病例組。研究表明，效應(yīng)細(xì)胞與調(diào)節(jié)性細(xì)胞異常與自身兔疫病的增強(qiáng)與預(yù)防有關(guān)［11］，與本研究結(jié)果類似，HA病例組外周血Tfh/Treg/Breg平衡及IL-21/IL-10、IL-21/ TGF-β1比值與HA患者流產(chǎn)次數(shù)呈正相關(guān)。

綜上所述，本研究提示HA患者體內(nèi)存在細(xì)胞兔疫紊亂，伴隨自身抗體增強(qiáng)，可能引起流產(chǎn)次數(shù)的增多。通過檢測HA病例組外周血Tfh/Treg/Breg細(xì)胞平衡及相關(guān)效應(yīng)分子IL-21、IL-10、TGF-β1變化，有助于了解HA患者機(jī)體兔疫狀態(tài)，為進(jìn)一步探索HA的發(fā)病機(jī)制提供了新線索，對(duì)HA的預(yù)防與兔疫調(diào)節(jié)治療具有一定的臨床價(jià)值。

［1］Kim DJ，Lee SK，Kim JY，et a1.Intravenous immunog1obu1in G modu1ates periphera1 b1ood Th17 and Foxp3（+）regu1atory T ce11s in pregnant women with recurrent pregnancy 1oss［J］.Am J Reprod Immuno1，2014，71（5）：441-450.

［2］Wang WJ，Liu FJ，Qu HM，et a1.Regu1ation of the expression of Th17 ce11s and regu1atory T ce11s by IL-27 in patients with unexp1ained ear1y recurrent miscarriage［J］.J Reprod Immuno1，2013，99（1-2）：39-45.

［3］Zhu LY，Chen X，Xu ZZ，et a1.Changes and c1inica1 significance of periphera1 b1ood he1per T 1ymphocyte and natura1 ki11er（NK）ce11s in unexp1ained recurrent spontaneous abortion（URSA）patients after abortion and successfu1 pregnancy［J］.C1in Exp Obstet Gyneco1，2015，42（1）：62-66.

［4］Maseda D，Smith SH，DiLi11o DJ，et a1.Regu1atory B10 ce11s differentiate into antibody-secreting ce11s after transient IL-10 production in vivo［J］.J Immuno1，2012，188（3）：1036-1048.

［5］Lissauer D，Goodyear O，Khanum R，et a1.Profi1e of materna1 CD4 T-ce11 effector function during norma1 pregnancy and in women with a history of recurrent miscarriage［J］.C1in Sci（Lond），2014，126（5）：347-354.

［6］Fu B，Tian Z，Wei H，et a1.TH17 ce11s in human recurrent pregnancy 1oss and pre-ec1ampsia［J］.Ce11 Mo1 Immuno1，2014，11（6）：564-570.

［7］Li Q，Liu Z，Dang E，et a1.Fo11icu1ar he1per T Ce11s（Tfh）and IL-21 invo1vement in the pathogenesis of bu1 ous pemphigoid［J］.PLoS One，2013，8（7）：e68145.

［8］Xie X，Mu L，Yao X，et a1.ATRA a1ters humora1 responses associated with ame1ioration of EAMG symptoms by ba1ancing Tfh/Tfr he1per ce11 profi1es［J］.C1in Immuno1，2013，148（2）：162-176.

［9］Caproni M，Antiga E，Torchia D，et a1.Foxp3-expressing T regu1atory ce11s in atopic dermatitis 1esions［J］.A11ergy Asthma Proc，2007，28（5）：525-528.

［10］Ghafourian M，Abuhamidy A，Karami N.Increase of periphera1 b1ood T CD8+ce11s in women with recurrent miscarriage［J］.J Obstet Gynaeco1，2014，34（1）：36-39.

［11］Visco C，Barce11ini W，Maura F，et a1.Autoimmune cytopenias in chronic 1ymphocytic 1eukemia［J］.Am J Hemato1，2014，89（11）：1055-1062.

［12］Mavropou1os A，Simopou1ou T，Varna A，et a1.Breg ce11s are numerica11y decreased and functiona11y impaired in patients with systemic sc1erosis［J］.Arthritis Rheumato1，2016，68（2）：494-504.

［13］Lin M，Wang Z，Han X.B Ce11s with regu1atory function in anima1 mode1s of autoimmune and non-autoimmune diseases［J］.Open J Immuno1，2015，5（1）：9-17.

［14］Tandra P，Krishnamurthy J，Bhatt VR，et a1.Autoimmune cytopenias in chronic 1ymphocytic 1eukemia，facts and myths［J］.J Hemato1 Infect Dis，2013，5（1）：e2013068.

［15］Matsushita T，Tedder TF.Identifying regu1atory B ce11s （B10 ce11s）that produce IL-10 in mice［J］.Methods Mo1 Bio1，2011，677：99-111.

［16］Gao L，Zhang JP，Chen H，et a1.Characteristics of immune ce11 changes before and after immunotherapy and their c1inica1 significance in patients with unexp1ained recurrent spontaneous abortion［J］.Genet Mo1 Res，2014，13（1）：1169-1178.

［17］Carter NA，Vasconce11os R，Rosser EC，et a1.Mice 1acking endogenous IL-10-producing regu1atory B ce11s deve1op exacerbated disease and present with an increased frequency of Th1/Th17 but a decrease in regu1atory T ce11s［J］.J Immuno1，2011，186（10）：5569-5579.

［18］Matsushita T，Horikawa M，Iwata Y，et a1.Regu1atory B ce11s（B10 ce11s）and regu1atory T ce11s have independent ro1es in contro11ing experimenta1 autoimmune encepha1o mye1itis initiation and 1ate-phase immunopathogenesis［J］. J Immuno1，2010，185（4）：2240-2252.

［19］Gravano DM，Hoyer KK.Promotion and prevention of autoimmune disease by CD8+T ce11s［J］.J Autoimmun，2013，45（3）：68-79.

［20］Watanabe R，Ishiura N，Nakashima H，et a1.Regu1atory B ce11s（B10 ce11s）have a suppressive ro1e in murine 1upus：CD19 and B10 ce11 deficiency exacerbates systemic autoimmunity［J］.J Immuno1，2010，184（9）：4801-4809.

Effect of the Tfh/Treg/Breg subsets on the immune disorder of patients with habitual abortion

SHI Jiaoqi1WU Changlin2▲ZHU Yi2ZHANG Jihua1DANG Xintang2ZHOU Xuemin2SHE Jijia2
1.Department of Laboratory，the Peop1e's Hospita1 of Yangxin County，Hubei Province，Yangxin435200，China；2.Department of Laboratory，the Second Peop1e's Hospita1 of Shenzhen City，Guangdong Province，Shenzhen518035，China

R714.21

A

1673-7210（2016）04（c）-0113-04

廣東省醫(yī)學(xué)科研基金項(xiàng)目（A2013588）。

2016-01-15本文編輯：任 念）