三種方法檢查判斷血尿來源的比較研究

楊麥貴，楊　錚，楊　陽，岳　波，鄭善鑾，饒國洲，何　娟，樊愛琳，郝曉柯

(第四軍醫(yī)大學(xué)：1.西京醫(yī)院 全軍臨床檢驗醫(yī)學(xué)研究所；2.學(xué)員旅研究生大隊；3.西京醫(yī)院 全軍整形外科研究所及252醫(yī)院；4.西京醫(yī)院 耳鼻咽喉頭頸外科 陜西 西安710032;西安交通大學(xué) 口腔醫(yī)院口腔醫(yī)學(xué)研究中心，陜西 西安710004)

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三種方法檢查判斷血尿來源的比較研究

楊麥貴1*，楊錚2，楊陽3，岳波4，鄭善鑾1，饒國洲5，何娟1，樊愛琳1，郝曉柯1*

(第四軍醫(yī)大學(xué)：1.西京醫(yī)院 全軍臨床檢驗醫(yī)學(xué)研究所；2.學(xué)員旅研究生大隊；3.西京醫(yī)院 全軍整形外科研究所及252醫(yī)院；4.西京醫(yī)院 耳鼻咽喉頭頸外科 陜西 西安710032;西安交通大學(xué) 口腔醫(yī)院口腔醫(yī)學(xué)研究中心，陜西 西安710004)

摘要：目的探討三種檢測方法判斷血尿來源的比較研究。方法采用顯微鏡檢查紅細胞形態(tài)變異率、免疫熒光染色和紅細胞電泳，分別對318例經(jīng)臨床及病理確診的血尿來源患者，進行檢測比較。結(jié)果確診的208例腎源性血尿紅細胞形態(tài)學(xué)檢查總符合率為69.2%(208/144)；Ig免疫熒光符合率為98.1%(208/204)；紅細胞電泳時間符合率為97.6%(208/203)，免疫熒光和電泳法符合率明顯高于紅細胞形態(tài)學(xué)有顯著性差異(P<0.01),免疫熒光與電泳法無明顯差異(P>0.05)。三種方法對110例非腎源性血尿檢測陰性符合率分別為97.3%(110/107)；98.2%(110/108)；97.3%(110/107)，紅細胞形態(tài)學(xué)法明顯高于免疫熒光和電泳法具有顯著性差異(P<0.01)。結(jié)論腎源性血尿紅細胞被免疫球蛋白(Ig)包裹，表面電荷降低，使Ig免疫熒光和紅細胞電泳法對診斷腎源性血尿較特異準確，紅細胞形態(tài)學(xué)雖較差，但易開展適于各級醫(yī)療單位，對非腎源性血尿診斷率優(yōu)于免疫熒光和電泳法。

關(guān)鍵詞：血尿-來源；紅細胞；形態(tài)學(xué)；免疫熒光；電泳-時間

(Chin J Lab Diagn,2016,20:0963)

血尿是泌尿系統(tǒng)疾病的主要臨床表現(xiàn)之一，鑒別血尿的來源為腎源性血尿還是非腎源性血尿?qū)εR床診斷和治療有著非常重要的價值。檢測尿中紅細胞形態(tài)已成為鑒別腎源性血尿與非腎源性血尿的一種常規(guī)診斷方法[1]。但這種方法因尿液紅細胞形態(tài)可受尿液滲透壓、pH值、離子比等而影響效果[2,3]。我們對泌尿系統(tǒng)疾病引起的血尿進行顯微鏡尿中紅細胞形態(tài)、免疫熒光染色分析及尿紅細胞電泳時間測定，研究探討在血尿的來源鑒別診斷腎源性血尿與非腎源性血尿的優(yōu)劣價值。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1標(biāo)本來自第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院住院及門診就診患者，其主要特征是血尿(肉眼或鏡下血尿)，共318例，其中經(jīng)臨床及病理確診腎源性血尿208例，男性112例，女性96例，年齡58-65(平均61±2)歲。非腎源性血尿患者110例，男性60例，女性50例，年齡56-65(平均60±2)歲。

1.1.2試劑及儀器熒光標(biāo)記兔抗人IgA、IgG、IgE、IgM抗體，丹麥DAKO公司產(chǎn)，使用前按說明書作1∶10倍稀釋。丙酮(分析純)，西安化學(xué)試劑公司產(chǎn)。BX51顯微鏡影像系統(tǒng)，日本奧林巴斯公司產(chǎn)。WJY-IV型紅細胞電泳儀，江蘇無錫微機檢測儀器有限公司產(chǎn)。TDL-40C型離心機，上海安亭科學(xué)儀器公司產(chǎn)。尿沉渣專用塑料管，江蘇康捷醫(yī)療器械有限公司產(chǎn)。

1.2方法

1.2.1紅細胞形態(tài)顯微鏡異常率的分析囑患者留取新鮮中段晨尿10ml于有刻度的專用塑料管中，置離心機1 500r/min，離心5min，棄上清9.0ml，余底層1.0ml，分別檢查紅細胞異常率，紅細胞免疫熒光及電泳時間。紅細胞形態(tài)學(xué)檢查參照文獻[4]，按全國統(tǒng)一標(biāo)準將紅細胞分為正常形態(tài)和異常形態(tài)。正常紅細胞為雙凹圓盤狀的紅細胞，異形為影形、皺縮形、棘形和小球形等紅細胞，每份標(biāo)本計數(shù)200個細胞，異形紅細胞>80%為腎源性血尿，<50%為非腎源性血尿。

1.2.2紅細胞免疫熒光檢查參照文獻[1]取上述尿液200μL生理鹽水洗滌離心后取尿沉渣涂片4張，自然晾干丙酮固定10min后染色，先用pH6.0磷酸鹽緩沖液洗滌1次，在分別滴加熒光抗體IgA、IgG、IgE、IgM于4張尿沉渣涂片的薄膜上，放入濕盒37℃孵育40min，然后用pH6.0磷酸鹽緩沖液洗滌3次滴加甘油緩沖液，熒光顯微鏡下檢測。結(jié)果判定，根據(jù)紅細胞Ig著色的百分率，>90%強陽性，為腎小球性腎炎；60%-80%陽性，為腎性血尿；30%-60%弱陽性，為混合性血尿。只要標(biāo)本中任何一種抗體顯色即為熒光染色陽性。

1.2.3尿紅細胞電泳時間檢測將尿液紅細胞制成4 000-30 000個/ml濃度，然后裝入特制的圓形細管中，再把此管放入紅細胞電泳槽內(nèi)，并用瓊脂管作架橋與電極相連接，調(diào)節(jié)工作電壓為40伏特，溫度為25℃，觀察每一標(biāo)本中的10個紅細胞往返165μm距離所需時間[移動時間：秒(S)]每份標(biāo)本重復(fù)兩次取平均值。紅細胞形態(tài)異常率>80%,電泳時間平均值為9.0±0.4S，正常均一性紅細胞電泳時間平均值為14.0±0.4S。

2結(jié)果

2.1腎源性血尿紅細胞形態(tài)學(xué)、免疫熒光抗體染色及尿紅細胞電泳時間檢查結(jié)果比較

208例腎源性血尿，Ig免疫熒光紅細胞染色，顯微鏡紅細胞形態(tài)及電泳時間分析。臨床及穿刺病例確診符合率分別為98.1%(208/204)、69.2%(208/144)和紅細胞電泳時間97.6%(208/203)(見表1)。

表1　腎源性血尿紅細胞形態(tài)學(xué)、免疫熒光染色及電泳時間結(jié)果比較

注：異常紅細胞>80%為腎性血尿；<50%為非腎性血尿

2.2非腎源性血尿紅細胞形態(tài)學(xué)、免疫熒光抗體染色及尿紅細胞電泳時間檢查結(jié)果比較

110例非腎源性血尿，Ig免疫熒光紅細胞染色，顯微鏡紅細胞形態(tài)及電泳時間分析與臨床及穿刺病例確診陰性符合率分別為98.2%(110/108)、97.3%(110/107)和紅細胞電泳時間97.3%(110/107)(見表2)。

2.3統(tǒng)計學(xué)分析

以上數(shù)據(jù)經(jīng)卡方檢驗，尿紅細胞Ig免疫熒光染色、紅細胞電泳時間與顯微鏡紅細胞形態(tài)分析異形率鑒別腎源性血尿有顯著性差異(P<0.01)，紅細胞免疫熒光染色與電泳時間差異不明顯(P>0.05)。紅細胞形態(tài)分析鑒別非腎源性血尿優(yōu)于免疫熒光染色和電泳。

3討論

血尿是泌尿系統(tǒng)疾病病理改變的臨床常見反應(yīng)的一種重要表現(xiàn)，其病因可分為腎內(nèi)或腎外因素，引起的病因很多，常見急、慢性腎小球腎炎、IgA腎炎、腎腫瘤、泌尿系統(tǒng)感染、腎結(jié)石、膀胱腫瘤、膀胱結(jié)石等。目前診斷血尿的來源多用于光學(xué)顯微鏡檢查尿沉渣紅細胞形態(tài)，根據(jù)尿中紅細胞大小、棘形、皺縮鋸齒、影形、半月形、顆粒形紅細胞等變形紅細胞異常率及類型在兩種以上≥80%診斷為腎源性血尿，<50%為非腎源性血尿。方法簡單方便，經(jīng)濟省時，易普及適宜各級醫(yī)療單位開展，但影響因素較多，主要是尿液pH、滲透壓、介質(zhì)張力、代謝產(chǎn)物的脂肪酸、溶血磷脂酰膽堿、膽酸、細菌及白帶污染等的作用影響[4]，所以要求受檢者留取清晨中段的新鮮尿液。

表2　非腎源性血尿紅細胞形態(tài)學(xué)、免疫熒光染色及電泳時間結(jié)果比較

注：異常紅細胞>80%為腎性血尿；<50%為非腎性血尿

免疫復(fù)合物是引起腎臟損害的常見原因，尿液紅細胞表面包裹Ig分子的機理還尚不清楚。Abrass等[5]報道，腎源性血尿中紅細胞表面包有Tamm-Horsfall蛋白，主要于Henle襻升支形成。Ig分子在此附于紅細胞表面的可能性較大，因血液在此流動較慢，是Ig有足夠時間與紅細胞接觸黏附于紅細胞膜上。用Ig免疫熒光抗體尿紅細胞染色，對腎源性血尿定位診斷具有重要價值，不受尿內(nèi)物質(zhì)的影響，較特異。

紅細胞表面帶有負電荷，F(xiàn)eehally[6]發(fā)現(xiàn)腎源性血尿紅細胞表面的電荷降低，在直流電場中作定向泳動，在固定的距離內(nèi)以泳動時間的長短表示紅細胞表面電荷的多少診斷腎性和非腎性血尿的來源。腎源性血尿紅細胞電泳時間縮短，表明其紅細胞表面的電荷量減少，可能原因是紅細胞通過腎小球基底膜時受擠壓及膜表面電荷的影響導(dǎo)致紅細胞表面電荷的丟失，其二是由于腎小管內(nèi)連續(xù)性的滲透壓改變，在紅細胞通過時導(dǎo)致細胞內(nèi)離子的遷移，紅細胞縮小及介質(zhì)張力等而改變了細胞表面的電荷量[7,8]，非腎源性血尿紅細胞沒有受到上述因素的作用，均為正常紅細胞表面電荷量較多，所以電泳時間就較長。

綜上三種檢測血尿紅細胞來源的方法，與臨床及病理診斷確診的血尿病例符合率顯微鏡紅細胞形態(tài)學(xué)為69.2%，Ig免疫熒光染色為98.1%，紅細胞電泳時間為97.6%，紅細胞形態(tài)學(xué)雖差于免疫熒光和電泳時間法，但此方法簡便快速，經(jīng)濟省時，易于開展適用于各級醫(yī)療單位，雖然后兩種方法較特異、科學(xué)準確性較高，但需要特異的免疫抗體試劑，專用儀器設(shè)備，尿樣要前處理，繁瑣耗時，不宜普遍開展，形態(tài)學(xué)還是目前診斷血尿來源的首選方法，在難以確定血尿來源時可采用免疫熒光或電泳檢測診斷，這樣較為科學(xué)而理想的為臨床提供可靠的診斷依據(jù)。

參考文獻：

[1]丁振若，蘇明權(quán)，樊愛琳，等.尿液紅細胞免疫熒光染色鑒別血尿性質(zhì)的研究分析[J].國外醫(yī)學(xué)·臨床生物化學(xué)與檢驗學(xué)分冊，2002，23(1):10.

[2]SchramekP,SchusterFX,GeorgopoulosM,etal.Valueofurinaryerythrocytemorphologyinassessmentofsymptomlessmicrohaematuia[J].Lancet,1989,2(8675):1316.

[3]MetzMDSchiphorstPP,GoRI.TheanalysisoferythrocytemorphologicCharacteristicsinurineusingahematologicflowcytometerandmicroscopicmethods[J].AmJClinPath,1991,95(2):257.

[4]劉成玉，羅春麗.臨床檢驗基礎(chǔ)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，第5版，2012，165.

[5]AbrassCK,LairdCW.Tamm-HorsfallProteinCoatlngoffreecellsinurine[J].AmJKidneyDis,1987,9(1):44.

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[7]菖光午.尿紅細胞分類的臨床應(yīng)用及機理探討[J].中華醫(yī)學(xué)檢驗雜志，1987，10(2):85.

[8]林撥.電鏡法觀察尿紅細胞[J].中華腎臟病雜志，1986，2(3):246.

*通訊作者；并列第一作者：楊錚

文章編號：1007-4287(2016)06-0963-03

中圖分類號：R446.12

文獻標(biāo)識碼：A

作者簡介：楊麥貴(1954-),男，主任技師，主要從事檢驗醫(yī)學(xué)研究。

(收稿日期：2015-03-04)

Acomparativestudyofthreemethodsofexaminationtodeterminethesourceofhematuria

YANG Mai-gui1，YANG Zheng2,YANG Yang3，et al.

(Fourth Military Medical University: 1.Clinical Laboratory,Xijing Hospital,Institute of Medicine;2.Participants Brigade Graduate Brigade;3.Institute of Plastic Surgery of PLA Xijing Hospital And 252 Hospital;4.Department of Otolaryngology Head and Neck Surgery,Xijing Hospital ,Shanxi Xi'an 710032;5.Research Center of Stomatological Hospital of xi’an Jiaotong University,xi’an 710004,China)

Abstract:ObjectiveDiscussion comparative study to determine the source of the three detection methods hematuria.MethodsMicroscopic examination of the use of red blood cell morphology mutation rate,immunofluorescence staining and erythrocyte electrophoresis,respectively,318 cases diagnosed by clinical and pathological origin of hematuria patients were detected compare.ResultsConfirmed 208 cases of renal hematuria RBC morphology total coincidence rate 69.2% (208/144);Ig immunofluorescence coincidence was 98.1%(208/204);erythrocyte electrophoresis time the rate was 97.6% (208/203),immunofluorescence and electrophoresis was significantly higher red blood cell morphology consistent with a significant difference(P<0.01),no significant difference immunofluorescence and electrophoresis(P>0.05).Three methods of 110 cases of non-compliance with renal hematuria negative detection rates were 97.3% (110/107);98.2%(110/108);97.3%(110/107),significantly higher red blood cell morphology law immunofluorescence and electrophoresis was a significant difference(P<0.01).ConclusionRBC renal hematuria is an immunoglobulin (Ig) parcels,the surface charge reduced,so Ig immunofluorescence and erythrocyte electrophoresis method for the diagnosis of renal hematuria more specific and accurate,though less red blood cell morphology,but easy to carry suitable for all levels medical units,for non-renal hematuria diagnostic yield than immunofluorescence and electrophoresis.

Key words:Hematuria-Source;Red blood cell;Morphology;Immunofluorescence;Electrophoresis-Time