結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)(T-SPOT.TB)應(yīng)用于結(jié)核診斷的臨床意義

范偉光，孟　娟，蘇苗苗，張文娟，王　浩

(保定市傳染病醫(yī)院 1.檢驗(yàn)科:2.皮膚科，河北 保定071000)

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結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)(T-SPOT.TB)應(yīng)用于結(jié)核診斷的臨床意義

范偉光1，孟娟2，蘇苗苗1，張文娟1，王浩1

(保定市傳染病醫(yī)院 1.檢驗(yàn)科:2.皮膚科，河北 保定071000)

由結(jié)核分枝桿菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)感染所引發(fā)的結(jié)核病是全球人民都必須重視的疾病。根據(jù)相關(guān)數(shù)據(jù)，全世界有將近三分之一 的人感染了結(jié)核分枝桿菌，并且每年大約有兩百萬(wàn)人死于結(jié)核[1]。早在2000年，國(guó)家衛(wèi)生部第4次結(jié)核流行病學(xué)調(diào)查中顯示，我國(guó)全年齡組結(jié)核分枝桿菌(MTB)感染率已達(dá)到44.5%,全國(guó)大約有5.5億人次感染了該菌，感染率高于全球人口感染率約1/3水平[2]。結(jié)核病是能治愈的，特別是早期進(jìn)行治療可明顯降低病死率。近期，一種結(jié)核桿菌輔助診斷的新實(shí)驗(yàn)方法——結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)(T-SPOT.TB)進(jìn)如人們的視野。本研究擬對(duì)所有測(cè)試者，進(jìn)行T-SPOT.TB試驗(yàn),同時(shí)進(jìn)行結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)(TST)、結(jié)核抗體檢測(cè)、痰菌涂片、細(xì)菌培養(yǎng)等，以探討T-SPOT.TB 對(duì)結(jié)核病的臨床診治的優(yōu)越性。

1材料與方法

1.1研究對(duì)象所有150例實(shí)驗(yàn)組病例均選自2014年6月至2015年3月在保定市傳染病醫(yī)院住院、門(mén)診的結(jié)核患者。其中男82例，女68例，平均年齡為(35.75±16.23)歲，所有入選本研究的病例患者治療時(shí)間均小于1周，經(jīng)臨床或細(xì)菌學(xué)檢查確診[3]。其中肺結(jié)核患者115例，肺外結(jié)核患者35例。健康對(duì)照組45例為排除結(jié)核病的健康體檢者，男25例，女20例，平均年齡為(33.01±12.54)歲。

1.2試劑和儀器主要試劑：結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)試劑盒(免疫斑點(diǎn)法)(T-SPOT.TB)購(gòu)自上海復(fù)星長(zhǎng)征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司；卡介苗純蛋白衍生物(BCG-PPD)針劑購(gòu)自成都生物制品研究所有限責(zé)任公司；結(jié)核分枝桿菌IgG抗體檢測(cè)試劑盒購(gòu)自南京大淵生物技術(shù)工程有限公司。主要儀器： HFsafe-1500 CLASS Ⅱ TYPE B2生物安全柜、PBT X2蛋白芯片閱讀儀、VersaTREK細(xì)菌培養(yǎng)系統(tǒng)等。

1.3檢測(cè)方法所有試驗(yàn)均嚴(yán)格按照試劑盒操作規(guī)程執(zhí)行。

1.4統(tǒng)計(jì)處理應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料用百分率(%)，采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05判定有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1各組間T-SPOT.TB 陽(yáng)性率比較見(jiàn)表1。結(jié)果顯示，肺結(jié)核組、肺外結(jié)核組、正常對(duì)照組T-SPOT.TB的陽(yáng)性率分別為86.1%、80.0%、6.7%。肺結(jié)核組和肺外結(jié)核組T-SPOT.TB的陽(yáng)性率均顯著高于正常對(duì)照組T-SPOT.TB的陽(yáng)性率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=199.336,P<0.01)；而肺結(jié)核組和肺外結(jié)核組T-SPOT.TB的陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.413,P>0.05)。

表1　各組間T-SPOT.TB陽(yáng)性率的比較分析

注：*χ2=199.336,P<0.01，△χ2=0.413,P>0.05

2.2不同結(jié)核診斷試驗(yàn)方法比較見(jiàn)表2。對(duì)方法的敏感性、特異性和Youden指數(shù)進(jìn)行比較。結(jié)果顯示T-SPOT.TB檢測(cè)的敏感性顯著高于TST、痰菌涂片、細(xì)菌培養(yǎng)、結(jié)核抗體的敏感性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=179.030,P<0.01)；T-SPOT.TB檢測(cè)特異性與TST、結(jié)核抗體比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.342,P>0.05)；T-SPOT.TB檢測(cè)的Youden指數(shù)為78.0，高于TST、痰菌涂片、細(xì)菌培養(yǎng)、結(jié)核抗體，說(shuō)明T-SPOT.TB的準(zhǔn)確度比其他幾種方法更可靠。

表2　　　　T-SPOT.TB與其他結(jié)核診斷試驗(yàn)的敏感性、特異性等指標(biāo)的比較

2討論

近年來(lái)，中國(guó)地區(qū)結(jié)核病發(fā)病上升趨勢(shì)十分明顯，已嚴(yán)重影響我國(guó)人民生活質(zhì)量和健康保健。潛伏感染者和結(jié)核患者早發(fā)現(xiàn)，是控制結(jié)核病傳染源，切斷結(jié)核病傳播途徑的關(guān)鍵?，F(xiàn)有實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展的項(xiàng)目有TST、痰菌涂片、細(xì)菌培養(yǎng)、結(jié)核抗體檢測(cè)、組織病理學(xué)檢查等。TST是目前各個(gè)衛(wèi)生行業(yè)都在廣泛應(yīng)用的判斷結(jié)核病的免疫學(xué)試驗(yàn)方法，TST強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)則表示體內(nèi)受到濃厚結(jié)核菌感染，患病機(jī)會(huì)多，是診斷結(jié)核病特異指征[4]。其優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單，成本低廉，但是TST也存在有假陽(yáng)性或假陰性的可能。比如既往有卡介苗(B C G)接種史或者有非結(jié)核分枝桿菌感染均可導(dǎo)致TST出現(xiàn)假陽(yáng)性，或者免疫系統(tǒng)功能不全和細(xì)胞免疫功能低下等情況，又可導(dǎo)致TST出現(xiàn)假陰性。痰菌涂片抗酸染色陽(yáng)性對(duì)診斷肺結(jié)核有比較重要的臨床意義，該方法技術(shù)要求低，不需特殊儀器設(shè)備，但是非常容易漏檢，需要連續(xù)多次進(jìn)行鏡檢，并且該方法敏感性過(guò)低，不能區(qū)分死菌和活菌，即使沒(méi)有發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌也不能說(shuō)明沒(méi)有感染結(jié)核；細(xì)菌培養(yǎng)法是對(duì)結(jié)核分枝桿菌進(jìn)行鑒定的十分準(zhǔn)確的試驗(yàn)方法，可進(jìn)一步進(jìn)行菌種鑒定和藥敏試驗(yàn)，但是檢測(cè)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，敏感性過(guò)低，即使應(yīng)用目前較先進(jìn)的全自動(dòng)細(xì)菌液體培養(yǎng)基的方法，檢測(cè)時(shí)間也需要1-2周，對(duì)結(jié)核病早期的診斷和隨后的治療有一定影響。結(jié)核抗體檢測(cè)的特異性、敏感性也都較低，目前只作為快速診斷結(jié)核病的初篩實(shí)驗(yàn)室方法。

T-SPOT.TB是應(yīng)用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法(ELISPOT)方法對(duì)全血中的致敏T細(xì)胞二次接受特異性抗原刺激后釋放γ-干擾素的作相應(yīng)的定量檢測(cè)。據(jù)相關(guān)實(shí)驗(yàn)表明，CD8 T細(xì)胞也能分泌IFN-γ[5]。所以IFN-γ的水平能夠被用來(lái)當(dāng)作診斷結(jié)核菌感染的重要指標(biāo)[6]。T-SPOT.TB挑選了兩種早期分泌蛋白都來(lái)自RD1區(qū)編碼?？乖謩e為培養(yǎng)濾過(guò)蛋白-10(CFP-10)與早期抗原靶-6(ESAT-6)，T淋巴細(xì)胞被兩種抗原刺激分泌出特異性的細(xì)胞因子IFN-γ，由于CFP-10、ESAT-6只存在于結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群中，而在所有BCG和大多數(shù)非致病性分枝桿菌(NTM)中都缺失[7]，因此T-SPOT.TB可提高診斷結(jié)核分枝桿菌感染的特異性。其檢測(cè)的敏感性也優(yōu)于細(xì)菌培養(yǎng)法。

本研究顯示肺結(jié)核組、肺外結(jié)核組、正常對(duì)照組T-SPOT.TB的陽(yáng)性率分別為86.1%、80.0%、6.7%。肺結(jié)核組和肺外結(jié)核組T-SPOT.TB的陽(yáng)性率均顯著高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=199.336,P<0.01)，說(shuō)明T-SPOT.TB有較高的敏感性；而肺結(jié)核組和肺外結(jié)核組T-SPOT.TB的陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.413,P>0.05)，說(shuō)明T-SPOT.TB在肺外結(jié)核的診斷也具有一定優(yōu)勢(shì)。T-SPOT.TB檢測(cè)的敏感性顯著高于TST、痰菌涂片、細(xì)菌培養(yǎng)、結(jié)核抗體的敏感性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=179.030,P<0.01)；T-SPOT.TB檢測(cè)的特異性也很高，為93.3%。T-SPOT.TB檢測(cè)的Youden指數(shù)為78.0，遠(yuǎn)高于TST、痰菌涂片、細(xì)菌培養(yǎng)、結(jié)核抗體，說(shuō)明T-SPOT.TB的準(zhǔn)確度比其他幾種方法更可靠。

綜上所述，結(jié)核病明確診斷需要將臨床表現(xiàn)、影像學(xué)與病原免疫學(xué)檢查、組織病理學(xué)和對(duì)抗癆藥治療反應(yīng)等結(jié)合起來(lái)進(jìn)行評(píng)估。結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)聯(lián)合多種實(shí)驗(yàn)室方法檢測(cè)結(jié)核，能有效提高結(jié)核診斷的準(zhǔn)確率，是現(xiàn)有實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)核疾病應(yīng)用價(jià)值較高的方法。

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文章編號(hào)：1007-4287(2016)06-1013-02

(收稿日期：2015-07-25)