HM43葡萄球菌乳膠凝集試劑在金黃色葡萄球菌檢測(cè)中的作用

□ 孟 宇 廣東省佛山市質(zhì)量計(jì)量檢測(cè)中心

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HM43葡萄球菌乳膠凝集試劑在金黃色葡萄球菌檢測(cè)中的作用

□ 孟 宇 廣東省佛山市質(zhì)量計(jì)量檢測(cè)中心

目的：通過實(shí)驗(yàn)比對(duì)，研究HM43葡萄球菌乳膠凝集試劑在食品中金黃色葡萄球菌檢測(cè)中的作用與地位，提供參考，方便檢驗(yàn)工作者在的食品中金金黃色葡萄球菌檢測(cè)中選擇適當(dāng)?shù)姆椒?，提高檢測(cè)效率，確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。

概念說明

HM43葡萄球菌乳膠凝集，是金黃色葡萄球菌檢測(cè)發(fā)展中產(chǎn)生的新的檢測(cè)方法。

血漿凝固酶試驗(yàn)是《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)》（GB 4789.10-2010）中，金黃色葡萄球菌檢測(cè)的確證實(shí)驗(yàn)。

VITEK? 2 Compact系統(tǒng)專用于細(xì)菌和酵母菌鑒定和重要臨床細(xì)菌的藥敏試驗(yàn)，是當(dāng)前細(xì)菌生化鑒定最權(quán)威的儀器。

實(shí)驗(yàn)過程

樣品：本次實(shí)驗(yàn)樣品來源于同一批次的熟肉制品，共51個(gè)樣品。

方法：該實(shí)驗(yàn)中所有樣品的增菌，平板分離在同一實(shí)驗(yàn)室內(nèi)完全相同的條件下，由相同人員按《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)》（GB 4789.10-201 0）規(guī)定的檢驗(yàn)方法進(jìn)行。

樣品的處理：稱取25 g樣品至盛有225 m L 7 .5%氯化鈉肉湯的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1～2 min.

增菌：將上述樣品勻液于36℃±1℃培養(yǎng)18～24 h。金黃色葡萄球菌在7.5%氯化鈉肉湯中呈混濁生長(zhǎng)。

分離培養(yǎng)：將上述培養(yǎng)物，分別劃線接種到5%的血平板，血平板36℃±1℃培養(yǎng)18～24 h。金黃色葡萄球菌在血平板上，形成菌落較大，圓形、光滑凸起、濕潤(rùn)、金黃色（有時(shí)為白色），菌落周圍可見完全透明溶血圈。挑取上述菌落進(jìn)行HM43葡萄球菌乳膠凝集試驗(yàn)，血漿凝固酶試驗(yàn)，VITEK? 2 Compact檢測(cè)。

鑒定：選取1～2個(gè)金黃色葡萄球菌的典型可疑菌落，先用HM43葡萄球菌乳膠凝集做初步篩選，共有32個(gè)樣品金黃色葡萄球菌檢測(cè)呈陽性結(jié)果，對(duì)初步篩選呈陽性的樣品，再做血漿凝固酶試驗(yàn)，同時(shí)做VITEK? 2 Compact上機(jī)檢測(cè)得到的檢測(cè)結(jié)果見表1。

結(jié)果分析

在32個(gè)HM43葡萄球菌乳膠凝集初步篩選呈陽性的樣品中：血漿凝固酶陽性確證的比率為：7/32=21. 87%；HM43葡萄球菌乳膠凝集假陽性比率為：1-21.87%=78.13%；VITEK? 2 Co mpact陽性確證的比率為：6/32=18. 75%；血漿凝固酶確證陽性和VITEK? 2 Compact陽性確證的相似度為：6/7=85.71%，這兩種方法的檢測(cè)結(jié)果高度相似，檢測(cè)結(jié)果基本相同，可以推斷結(jié)果是可靠的。

《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn)總則》中規(guī)定，相同細(xì)菌用不同方法檢測(cè)得到不同結(jié)果時(shí)，以國(guó)標(biāo)方法的檢測(cè)結(jié)果為準(zhǔn)。

結(jié)論

HM43 葡萄球菌乳膠凝集在食品中金黃色葡萄球菌的檢測(cè)中，雖然操作簡(jiǎn)單、方便、快速，但是假陽性結(jié)果偏高，金黃色葡萄球菌的確證率低，同時(shí)也沒有被納入國(guó)標(biāo)方法，在檢測(cè)中只能起初步篩選的作用，金黃色葡萄球菌最終的確證，還要依靠血漿凝固酶試驗(yàn)或者VITEK? 2 Compact生化鑒定。

表1 VITEK? 2 Compact上機(jī)檢測(cè)結(jié)果

討論

HM43葡萄球菌乳膠凝集在食品中金黃色葡萄球菌的檢測(cè)中，高假陽性結(jié)果的原因分析。

凝集原理

因?yàn)槿槟z顆粒表面包被有纖維蛋白原（與凝固酶相結(jié)合）和免疫球蛋白（與A蛋白相結(jié)合）。與金黃色葡萄球菌懸液混合后，乳膠顆?？裳杆倌?。缺少凝固酶/A蛋白的葡萄球菌不會(huì)發(fā)生明顯凝集。

凝集原理可以得出的結(jié)論

（1）如果菌落不純，可能造成假陽性結(jié)果。

（2）如果培養(yǎng)超過30小時(shí)后，細(xì)菌老化也可能形成陽性結(jié)果。

（3）葡萄球菌的粗糙菌株可引起假陽性結(jié)果。

（4）纖維狀凝集可能為假陽性結(jié)果

（5）有些酵母菌株可能引起假陽性凝集結(jié)果。