滇龍膽地上部分資源綜合利用的化學(xué)研究

黃福榮

[摘 要]目的：通過(guò)現(xiàn)代化的研究手段，對(duì)滇龍膽地上部分的化學(xué)成分進(jìn)行測(cè)定，為綜合利用滇龍膽地上部分資源，擴(kuò)大藥用部位提供依據(jù)。方法：利用色譜、光譜等方法對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行研究并進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。結(jié)論：得到6個(gè)單體化合物，其中3個(gè)分別為龍膽苦苷、β-谷甾醇、熊果酸，剩余3個(gè)有待鑒定。

[關(guān)鍵詞]滇龍膽；龍膽苦苷

[中圖分類號(hào)]R282 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

龍膽來(lái)源于龍膽科植物條葉龍膽Gentiana manshurica Kitag.、龍膽G.scabra Bge.、三花龍膽G.triflora Pall.、堅(jiān)龍膽G.Rigescens Franch.的干燥根及根莖。為多年生草本，高30-60厘米；根黃白色，繩索狀，長(zhǎng)20厘米以上。莖直立，粗壯，常帶紫褐色，粗糙。葉對(duì)生，卵形或卵狀披針形，長(zhǎng)3-7厘米，寬1-2厘米，有3-5條脈，急尖或漸尖，無(wú)柄，邊緣及下面主脈粗糙?；ù厣o端或葉腋；苞片披針形，與花萼近等長(zhǎng)；花萼鐘狀，長(zhǎng)2.5-3厘米，裂片條狀披針形，與萼筒近等長(zhǎng)；花冠筒狀鐘形，藍(lán)紫色，長(zhǎng)4-5厘米，裂片卵形，尖，褶三角形，稀二齒裂；雄蕊5，花絲基部有寬翅；花柱短，柱頭2裂。蒴果矩圓形，有柄；種子條形，邊緣有翅。分布于朝鮮，蘇聯(lián)，日本，及我國(guó)黑龍江、吉林、遼寧、浙江等地。生草甸、灌叢或林緣。根入藥，能去肝膽火。前三種主產(chǎn)于東北地區(qū)，藥材俗稱關(guān)龍膽，是全國(guó)范圍內(nèi)的主流品種；后一種主產(chǎn)于云南，藥材俗稱堅(jiān)龍膽、滇龍膽，是西南和華南地區(qū)的主流品種，生于海拔1100-3000m的山地、草地、灌叢中、林下及山谷，分布于湖南、廣西、貴州、四川、云南等地。龍膽草為龍膽科龍膽屬植物。又名龍膽（《本經(jīng)》），陵游（《本經(jīng)》），草龍膽（《本草圖經(jīng)》），苦龍膽草、地膽草（《滇南本草》），膽草（《藥品化義》），山龍膽（《浙江中藥手冊(cè)》），四葉膽（《廣西中獸醫(yī)藥植》），水龍膽（《江蘇植藥志》）。根及根莖入藥。味苦，性寒。歸肝、膽經(jīng)。有清熱燥濕，瀉肝膽實(shí)火的作用。主治高血壓，頭暈耳鳴，膽囊炎、急性傳染性肝炎、陰部濕癢、濕熱黃疸、瘡癤癰腫，口苦和驚風(fēng)等癥，為保肝利膽之良藥。

龍膽最早記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，記其：“龍膽，一名陵游。味苦澀，主骨間寒熱，驚癇邪氣，續(xù)傷疤，定五臟，殺蠱毒。久服益智不忘，輕身耐老”。后世歷代本草也均收載本品。在中醫(yī)藥應(yīng)用中，龍膽味苦性寒，能清熱燥濕，瀉肝膽火。以龍膽為主要藥物的經(jīng)典方劑有龍膽瀉肝湯、瀉青丸、當(dāng)歸龍薈丸等。而在國(guó)外植物藥應(yīng)用中，龍膽也是常用品種，主要用作苦味健胃劑[4]。龍膽根莖呈不規(guī)則的塊狀，長(zhǎng)1～3cm，直徑0.3～1cm；表面暗灰棕色或深棕色，上端有莖痕或殘留莖基，周圍和下端著生多數(shù)細(xì)長(zhǎng)的根。根圓柱形，略扭曲，長(zhǎng)10～20cm，直徑0.2～0.5cm；表面淡黃色或黃棕色，上部多有顯著的橫皺紋，下部較細(xì)，有縱皺紋及支根痕。質(zhì)脆，易折斷，斷面略平坦，皮部黃白色或淡黃棕色，木部色較淺，呈點(diǎn)狀環(huán)列。氣微，味甚苦。堅(jiān)龍膽 表面無(wú)橫皺紋，外皮膜質(zhì)，易脫落，木部黃白色，易與皮部分離。

現(xiàn)代化學(xué)成分研究顯示，滇龍膽根含裂環(huán)烯醚萜甙類苦味成份：龍服苦甙，當(dāng)藥苦甙，當(dāng)藥甙，痕量苦龍膽酯甙，痕量苦當(dāng)藥酯甙；苦甙總含量5.10%，龍膽苦甙含量5.01%。地上部分含龍膽堿，秦艽堿乙（gentianidine），秦艽堿丙（gentianal），β-谷甾醇（β-sitosterol）。但對(duì)滇龍膽地上部分至今尚無(wú)化學(xué)成分研究的報(bào)道。龍膽瀉肝湯是龍膽在臨床上應(yīng)用最為廣泛，瀉肝膽實(shí)火和清利肝經(jīng)濕熱。隨著臨床研究的深入，應(yīng)用面不斷地?cái)U(kuò)大，主要的有以下幾個(gè)方面：治療肝膽疾病、高血壓、急性腎盂腎炎、病毒性角膜炎、皮膚病、急性咽炎、慢性支氣管炎、上呼吸道感染、結(jié)膜炎等。

目前尚作為廢棄物的滇龍膽地上部分，若能開(kāi)發(fā)利用，將會(huì)使龍膽藥物資源更為充分的利用。滇龍膽資源主要分布云南中部及中南部的丘陵山區(qū)，人工種植的發(fā)展也集中在該地區(qū)，其地上部分資源的綜合利用，不僅提高龍膽種植產(chǎn)業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益，還能在一定程度上緩解龍膽的資源緊張態(tài)勢(shì)。

1 儀器與材料

材料：硅膠G和薄層層析板為青島海洋化工廠產(chǎn)品；Sephadex LH-20凝膠。

常用試劑：環(huán)己烷、乙酸乙酯、氯仿、丙酮、甲醇。

滇龍膽地上部分藥材于2015年8月采集于云南省境內(nèi)，經(jīng)云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院藥用植物研究所張金渝副研究員鑒定。

2 提取與分離

2.1 提取

取638.4g干燥的滇龍膽地上部分藥材，粉碎成粗粉，用95%乙醇回流提取，減壓回收，得到浸膏102.2g，將其懸浮于水中，用乙酸乙酯和正丁醇分別萃取，回收溶劑得到正丁醇部分39g（Fr-A）、乙酸乙酯部分36g（Fr-B）、水層棄去。

2.2 分離

Fr-A（正丁醇萃取部分）用甲醇溶解，硅膠G（45g）拌樣，經(jīng)硅膠柱色譜分離，用氯仿-甲醇（20：1至3：1）進(jìn)行梯度洗脫，收集流份（500ml/份），將洗脫液減壓回收，用TLC檢查，合并色點(diǎn)相同的流份，得到2個(gè)部分（Ⅰ、Ⅱ、）。

其中，Ⅰ部分靜置后析出白色粉末用甲醇-丙酮反復(fù)重結(jié)晶，經(jīng)TLC檢查為一純品，標(biāo)記為化合物Fr-A-1（986mg）。Ⅱ部分回收溶劑，約重3.4g，經(jīng)反復(fù)凝膠柱層析后，在收集液（18-29瓶）中有黃白色粉末析出，用甲醇反復(fù)重結(jié)晶后，得到一純品，標(biāo)記為化合物Fr-A-2（235mg）；在收集液（39-62瓶）中析出黃色顆粒狀結(jié)晶，TLC檢查發(fā)現(xiàn)含有少量的雜質(zhì)，將粉末用甲醇溶解后過(guò)凝膠柱色譜，重結(jié)晶后得到一純品，標(biāo)記為化合物Fr-A-3（121mg）。

Fr-B（乙酸乙酯部分）用乙酸乙酯溶解，硅膠G（40g）拌樣，室溫?fù)]干后經(jīng)硅膠柱色譜分離，用環(huán)己烷-乙酸乙酯（0：100-100：0）梯度洗脫，收集流份（250ml/份），將洗脫液減壓回收，用TLC檢查，合并色點(diǎn)相同的流份，得3個(gè)部分（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）。

其中，Ⅰ部分為白色蠟狀固體，經(jīng)TLC初步檢查為一純品，標(biāo)記為化合物Fr-B-3（88mg）；Ⅱ流份靜置后析出無(wú)色針狀結(jié)晶，濾出后TLC檢查為一純品，標(biāo)記為化合物Fr-B-1（45mg）；Ⅲ流分靜置后析出白色粉末，濾出后TLC檢查為一純品，標(biāo)記為化合物Fr-B-2（23mg）。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

從滇龍膽地上部分中，用各種色譜方法分離純化，共得到6個(gè)單體化合物，即化合物Fr-A-1（986mg）、Fr-A-2（235mg）、Fr-A-3（121mg）、Fr-B-1（45mg）、Fr-B-2（23mg）、Fr-B-3（88mg）。

化合物Fr-A-1：經(jīng)TLC檢查和龍膽苦苷對(duì)照品Rf值、顯色現(xiàn)象一致，鑒定為龍膽苦苷，如：圖-1。

化合物Fr-B-1：經(jīng)TLC分析和β-谷甾醇對(duì)照品的Rf值、顯色現(xiàn)象一致，鑒定為β-谷甾醇，如：圖-2。

化合物Fr-B-2：經(jīng)TLC分析和熊果酸對(duì)照品Rf值、顯色現(xiàn)象一致，鑒定為熊果酸，如：圖-3。

化合物Fr-A-2、化合物Fr-A-3、化合物Fr-B-3的結(jié)構(gòu)鑒定工作尚待進(jìn)行。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典2005年版（一部）[M].北京化學(xué)工業(yè)出版社，2005.

[2] 國(guó)家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì).中華本草[M].上海科學(xué)技術(shù)出版社，1999.

[3] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典2005年版（一部）[M].北京化學(xué)工業(yè)出版社，2005.

[4] 謝觀.中國(guó)醫(yī)學(xué)大辭典第四冊(cè)[M].北京：中國(guó)書(shū)店出版社，1988.